Diferenciação in vitro de células-tronco mesenquimais da medula óssea de cães em precursores osteogênicos

O objetivo principal da nossa pesquisa foi avaliar o potencial de diferenciação osteogênica de células-tronco mesenquimais (MSC) obtidas da medula óssea do cão. As MSC foram separadas pelo método Ficoll e cultivadas sob duas condições distintas: DMEM baixa glicose ou DMEM/F12, ambos contendo L-glutamina, 20% de SFB e antibióticos. Marcadores de MSC foram testados, confirmando células CD44+ e CD34- através da citometria de fluxo. Para a diferenciação osteogênica, as células foram submetidas a quatro diferentes condições: Grupo 1, as mesmas condições utilizadas para a cultura de células primárias com os meios DMEM baixa glicose suplementado; Grupo 2, as mesmas condições do Grupo 1, mais os indutores de diferenciação dexametasona, ácido ascórbico e b-glicerolfosfato; Grupo 3, células cultivadas com meios DMEM/F12 suplementado; e Grupo 4, nas mesmas condições que no Grupo 3, mais indutores de diferenciação de dexametasona, ácido ascórbico e b-glicerolfosfato. A diferenciação celular foi confirmada através da coloração com alizarin red e da imunomarcação com o anticorpo SP7/Osterix. Nós observamos através da coloração com alizarin red que o depósito de cálcio foi mais evidente nas células cultivadas em DMEM/F12. Além disso, usando a imunomarcação com o anticorpo SP/7Osterix obtivemos positividade em 1:6 células para o Meio DMEM/F12 comparada com 1:12 para o meio DMEM-baixa glicose. Com base nos nossos resultados concluímos que o meio DMEM/F12 é mais eficiente para a indução da diferenciação de células-tronco mesenquimais caninas em promotores osteogênicos. Este efeito provavelmente ocorre em decorrência da maior quantidade de glicose neste meio, bem como da presença de diversos aminoácidos.

Distinct mitochondrial HSP70 homologues conserved in various Leishmania species suggest novel biological functions

We report the identification of two distinct homologues of the 70-kDa mitochondrial heat shock protein (mtHSP70) from Leishmania chagasi/Leishmania infantum (Lc2.1 and Lc2.2). in Leishmania species, multiple genes encoding Lc2.2 are present whilst single genes encode Lc2.1. Strikingly, genes encoding Lc2.1-like proteins are absent from Trypanosoma species. Lc2.2 is characterized by a poly-glutamine rich C-terminus, absent from Lc2.1 or mtHSP70 homologues outside the trypanosomatids. Lc2.1 displays unique substitutions within its peptide-binding domain which modify amino acids strictly conserved in cytoplasmic and mitochondrial HSP70 proteins alike. Affinity purified antibodies recognize mainly a single protein in extracts from promastigotes/epimastigotes of various Leishmania/Trypanosoma species. Upon differentiation of Leishmania amazonensis into amastigotes a second protein (presumably Lc2.1) is induced and becomes the predominant mtHSP70 homologue expressed. Subcellular localization of these proteins was investigated and ratified a distribution throughout the mitochondrial matrix. Our results imply novel mtHSP70 functions which evolved within the genus Leishmania. (C) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.

Dynamics of glyphosate-induced conformational changes of Mycobacterium tuberculosis 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (EC 2.5.1.19) determined by hydrogen-deuterium exchange and electrospray mass spectrometry

The enzyme 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (EPSPS) catalyzes the reaction between shikimate 3-phosphate and phosphoenolpyruvate to form 5-enolpyruvylshikimate 3-phosphate, an intermediate in the shikimate pathway, which leads to the biosynthesis of aromatic amino acids. EPSPS exists in an open conformation in the absence of substrates and/or inhibitors and in a closed conformation when bound to the substrate and/or inhibitor. In the present report, the H/D exchange properties of EPSPS from Mycobacterium tuberculosis (Mt) were investigated for both enzyme conformations using ESI mass spectrometry and circular dichroism (CD). When the conformational changes identified by H/D exchanges were mapped on the 3-D structure, it was observed that the apoenzyme underwent extensive conformational changes due to glyphosate complexation, characterized by an increase in the content of alpha-helices from 40% to 57%, while the beta-sheet content decreased from 30% to 23%. These results indicate that the enzyme underwent a series of rearrangements of its secondary structure that were accompanied by a large decrease in solvent access to many different regions of the protein. This was attributed to the compaction of 71% of alpha-helices and 57% of beta-sheets as a consequence of glyphosate binding to the enzyme. Apparently, MtEPSPS undergoes a series of inhibitor-induced conformational changes, which seem to have caused synergistic effects in preventing solvent access to the core of molecule, especially in the cleft region. This may be part of the mechanism of inhibition of the enzyme, which is required to prevent the hydration of the substrate binding site and also to induce the cleft closure to avoid entrance of the substrates.

The effect of acidic residues and amphipathicity on the lytic activities of mastoparan peptides studied by fluorescence and CD spectroscopy

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Influência do pH sobre a estabilidade de suspensões de alumina estabilizadas eletroestericamente

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

In vitro evaluation of three different biomaterials as scaffolds for canine mesenchymal stem cells

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Contribuição das projeções oblíquas em mielografias de pequenos animais para a localização de lesões medulares causadas por processo degenerativo do disco intervertebral

Mielografia é uma técnica radiográfica na qual se administra meio de contraste no espaço subaracnóideo para avaliar a medula espinhal. Múltiplas projeções radiográficas fornecem uma exploração circunferencial da medula, auxiliando na localização mais precisa de compressões nesta região. Objetivou-se demonstrar a contribuição das projeções oblíquas, pouco exploradas em exames de mielografia, para a localização de lesões medulares extradurais em cães e gatos causadas por processo degenerativo do disco intervertebral. Foram avaliadas 116 mielografias e observou-se que em 36,2% dos casos as projeções oblíquas foram imprescindíveis para a localização exata das lesões. A associação entre as projeções ventrodorsal e oblíquas se mostraram mais úteis para a localização da lesão do que quando avaliadas isoladamente e as projeções oblíquas esquerda e direita foram igualmente importantes.

Avaliação de porta-enxertos para pepino tipo japonês

A enxertia de pepino híbrido do tipo japonês em aboboreira tem por objetivo principal o manejo de doenças causadas por fungos de solo, consequentemente obter maior produtividade, além de frutos menos cerosos. Neste trabalho estudou-se o comportamento da cultivar Rensei, avaliando-se o desenvolvimento vegetativo das mudas, a produtividade e as características dos frutos das plantas enxertadas em diferentes porta-enxertos, em comparação com as não enxertadas. O trabalho foi realizado sob estufa do tipo túnel alto, com as plantas conduzidas em recipientes plásticos, de julho/96 a julho/97, em Piracicaba - SP. Os tratamentos foram os seguintes: T1 testemunha (planta não-enxertada); T2 enxertia em abóbora Menina Brasileira; T3 enxertia em abóbora híbrida Ikki; T4: enxertia em abóbora-de-moita Novita; T5 enxertia em abóbora híbrida Tetsukabuto; T6 enxertia em abóbora híbrida Kirameki. A porcentagem de pegamento da enxertia só não apresentou valores superiores a 83,3% quando se utilizou abóbora Menina Brasileira. Foram obtidos frutos mais brilhantes e com pouca cerosidade, de interesse comercial, na enxertia em Ikki e Kirameki. Nestes porta-enxertos, seguidos por Tetsukabuto, houve maior produção em peso e número de frutos por planta.

Métodos de formação de mudas de maracujazeiro amarelo

Grande parte do sucesso de uma cultura está em implantá-la com mudas de alta qualidade. O objetivo do estudo foi avaliar métodos de formação de mudas de maracujazeiro amarelo quanto à qualidade das muda formada. Os tratamentos utilizados foram: 1- Mudas formadas em sacolas plásticas, preenchidas com terra adubada e misturada com esterco de curral curtido, com fertirrigação uma vez por semana; 2- Mudas formadas em tubetes de plástico rígido, com substrato à base de casca de pinus e vermiculita, mantidos em bancada e recebendo fertirrigação uma vez por semana; 3- Idêntico ao tratamento 2, utilizando-se bandejas de poliestireno expandido; 4- Idêntico ao tratamento 3, sem fertirrigação, mas com uso de floating a cada dois dias; 5- Idêntico ao tratamento 4, com o uso de floating todo o período. O delineamento experimental foi completamente aleatorizado, com cinco tratamentos e quatro repetições. Na casa de vegetação, cada parcela foi composta por 64 plantas, sendo avaliadas semanalmente em oito plantas por parcela as seguintes variáveis: altura da planta; comprimento da raiz; matéria seca da parte aérea; matéria seca da parte radicular. O restante das mudas foi levado a campo para determinação da percentagem de pegamento e análise do desenvolvimento vegetativo inicial. Neste segundo estágio, cada parcela foi composta por cinco plantas. Sob casa de vegetação, o tratamento 5 apresentou os maiores valores para todas as variáveis, exceto para comprimento de raiz, onde houve superioridade do tratamento 1. em campo, observou-se 100% de pegamento para todos os tratamentos, sendo que o tratamento 5 apresentou as maiores médias para altura de plantas.

Venomous mollusks: the risks of human accidents by conus snails (gastropoda: conidae) in Brazil

Os moluscos do gênero Conus apresentam um aparato venenoso composto de uma rádula quitinosa ligada a glândulas de peçonha, causando envenenamentos humanos graves e mesmo óbitos pela ação neurotóxica indutora do bloqueio de vários receptores e paralisia muscular. Não há casos descritos de envenenamento no país, mas determinadas populações correm risco de acidentes.

Association of two new Coryphasia species (Araneae, Salticidae) with tank-bromeliads in southeastern Brazil: Habitats and patterns of host plant use

Two allopatric species of Coryphasia (Araneae: Salticidae), both described for the first time in this study, have been found associated with Bromeliaceae in distinct phytophysiognomies (e.g., inselbergs, highland forests and restingas) from southeastern Brazil. In this study, we investigated whether these salticids were associated specifically with bromeliads, and whether they used bromeliads of different species and sizes in distinct geographic regions. The Coryphasia species were rarely found outside bromeliads, occupied larger bromeliad species among those available, and were generally more frequent on bromeliads in open areas, such as inselbergs on mountain tops. The two Coophasia species were observed submerging in phytotelmata, possibly as an anti-predatory behavior. The patterns of spatial and microspatial distribution and the submergence behavior of these species were similar to those of other bromeliad-dwelling salticids, which suggests a convergence among spiders that live on bromeliads.

Polyacids self-dissociation model

This work deals with a model to interpret pH measurements of solutions of weak rodlike polyacids, in the absence of added salts or titrating base. The polyacid is modeled as a series of point charges discretely distributod in a straight line with a distance of closest approach for the protons and an average distance between dissociable monomers, projected in the polymer chain axis. Aside from these two geometrical parameters, the dissociation constant for the isolated monomer that describes the proton dissociated monomer interaction forms the basis of the model. The assumption of cylindrical symmetry and the adoption of the cell model lead to a form written in terms of elementary functions for the mean electrostatic potential. Values of pH (related to the proton concentration in a region beyond the influence of the polyacid) as a function of polymer concentration are displayed graphically for some values of the geometrical parameters and of the dissociation, constant. Theoretical predictions of pH values as a function of polymeric concentration are compared with measured values for poly-L-glutamic and polygalacturonic acids, and a good agreement is found. Theoretical values for the dissociation degree in terms of polymeric concentration are shown for the two experimentally investigated systems. These values are in a range appreciably smaller than what is usually studied as a result of titration.

Coil to extended coil transition in polygalacturonic acid: Conductometric titration and monte carlo simulations

The conformational transition from coil to extended coil for polygalacturonic acid has been studied by conductometric titrations and Monte Carlo simulations. The results of conductometric titrations at different polymer concentrations have been analyzed using the model proposed by Manning,1 which describes the conductivity of polyelectrolitic solutions. This experimental approach provides the transport factor and the average distance between charged groups at different degrees of ionization (α). The mean distances between charged groups have been compared with the values obtained by Monte Carlo simulations. In these simulations the polymer chain is modeled as a self-avoiding random walk in a cubic lattice. The monomers interact through the unscreened Coulombic potential. The ratio between the end-to-end distance and the number of ionized beads provides the average distance between charged monomers. The experimental and theoretical values are in good agreement for the whole range of ionization degrees accessed by conductometric titrations. These results suggest that the electrostatic interactions seem to be the major contribution for the coil to extended coil conformational change. The small deviations for α ≤ 0.5 suggests that the stiffness of the chain, associated with local interactions, becomes increasingly significant as the fraction of charged groups is decreased. © 2000 American Chemical Society.

Smoking enhances bone loss in anterior teeth in a Brazilian population: A retrospective cross-sectional study

The aim of the present study was to radiographically evaluate the effect of smoking on bone loss resulting from chronic periodontitis. Periapical radiographs were analyzed of 80 patients with chronic periodontitis (40 current or former smokers and 40 never-smokers) that attended a private periodontal practice. The smokers or former-smokers with a minimum consumption of 10 cigarettes/day for a period of over 10 years were selected. Interproximal radiographic bone loss was considered as the distance between the cementum-enamel junction and the alveolar bone crest. Bone loss for smokers was higher than that observed in never-smokers (p < 0.05) (3.33 ± 1.09 mm and 2.24 ± 0.76 mm; mean ± standard deviation for smokers and non-smokers, respectively). When each region of the mouth was comparatively evaluated, it was observed that the smokers' incisors presented the highest bone loss when compared with the other groups of teeth (p < 0.01). Within the limits of the present investigation it can be concluded that smoking enhances the bone loss resulting from periodontitis and that the incisors are the teeth most affected.

Estrutura térmica identificada por transectos móveis e canal termal do Landsat 7 em cidade tropical

This study aims to examine the thermal structure of the urban climate based on the interpretation of the satellite Landsat 7 (thermal channel) and measures for the area. It identifies how the production of urban climate develops based on an analysis of the structure of space forms and characteristics of land use and constructive materials in the generation of heat islands and their implications in environmental comfort in a tropical climate medium size city at Brazil. To check intra-urban air temperature, measures were carried out in mobile transects in the North-South and East-West routes. Thermal Channel data of Landsat-7, were converted to surface values. The results showed that the pattern of urbanization and characteristics of land use are responsible for the distribution of temperature generating heat islands in downtown and popular densely built neighborhoods. In those cases the highest indexes of social segregation added to higher temperature also provokes elevation in the number of illnesses and morbidity cases, mostly of respiratory diseases.