964 resultados para Mécanisme enzymatique
Synthse totale de la lpadine B : plate-forme pour la dcouverte de nouvelles tranformations chimiques
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Dans ce document, serons dtailles les rsultats de mes travaux de recherche dtudes doctorales. Tout dabord, nous discuterons de la synthse totale de la lpadine B, la plus courte paratre dans la littrature ce jour. Cette synthse, en plus de valoriser la synthse asymtrique de pipridines poly-substitues dveloppe par lquipe du professeur Charette, mettra profit une utilisation originale dune squence de fermeture-ouverture de cycle par la raction de mtathse dalcnes. De plus, nous dtaillerons une brve tude mcanistique de cette dernire nous ayant permis la proposition dun mécanisme peu commun de ce type de squence ractionnel et dont les consquences exprimentales sont impressionnantes. Au cours de cette synthse, nous avons identifi un synthon dune grande valeur synthtique. En effet, ne comportant pas moins que quatre centres chiraux, ce synthon pouvait tre obtenu nantiopure en seulement trois tapes partir de la pyridine. Ainsi, nous avons effectu une analyse structurale de ce synthon et avons envisag une valorisation supplmentaire par une utilisation originale de la fragmentation de Grob. Dans ce contexte, nous avons dvelopp une toute nouvelle synthse de pipridines 2,3,6-trisubstitues hautement rgio- et diastroslective. Afin de pouvoir raliser la prcdente mthodologie, nous avons d tudier la rduction dune amide en prsence de groupements fonctionnels sensibles dans les conditions usuelles. Heureusement, lanne prcdente nous avions dveloppe une raction hautement chimioslective damides tertaires. Cette nouvelle raction, qui a t fondamentalement inspir par une mthodologie du professeur Charette sur lactivation damides, a permis la rduction damides tertiaires en prsence de fonctions telles les ctone, ester, nitrile, poxyde, insaturations, etc. Enfin, lensemble des connaissances acquises au cours de ces projets a permis llaboration dune toute nouvelle stratgie de synthse pour la prparation dindolizidines et quinolizidines. Plus spcifiquement, nous avons dvelopp la premire squence dactivation intramolculaire et daromatization asymtrique de la pyridine. Ceci permet davoir un accs aux squelettes indolizidine et quinolizidine avec des stroslectivits leves, la nature insature de ces derniers laissant galement place une grande flexibilit synthtique. Dans ce contexte, nous allons dtailler une trs courte synthse de trans-indolizidines.
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Les complexes de la famille des ansa-chromocnes sont relativement peu nombreux, mais ils ont tout de mme dmontr des ractivits intressantes comme la possibilit de coordonner une molcule de monoxyde de carbone au centre mtallique sans tre sous pression constante de gaz, ce qui nest pas le cas pour lhomologue chromocne. Lansa-chromocne le plus surprenant est sans doute le Me2Si(C5Me4)2Cr, car il est le seul qui ne comporte pas de ligand autre que celui de type ansa. Cependant, ce compos a t obtenu sans que le mécanisme de la raction ne soit compris et prouv, seul un mécanisme propos a t publi. Au cours de cette tude, le mécanisme propos a tout dabord t infirm grce de nombreuses expriences qui ont men llaboration dun nouveau mécanisme. Par la suite, la ractivit du Me2Si(C5Me4)2Cr a t approfondie en le faisant ragir avec divers ractifs. Aucun produit daddition oxydante na t isol, mais la raction avec lisonitrile forme un complexe asymtrique avec deux isonitriles coordonns. La dtermination du moment magntique du compos Me2Si(C5Me4)2Cr confirme la prsence de deux lectrons non-pairs la temprature de la pice et voque la possibilit dune transition S=2 temprature plus leve. La synthse de nouveaux complexes de type ansachromocne insatur a t tente avec dautres ligands ansa, et la raction avec [C2H4(C9H6)2]Li2 mne un complexe dimrique avec des ligands indnyles ponts.
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Cette thse rapporte ltude des proprits physicochimiques des nanoparticles polymriques et leur impact sur linteraction avec les cellules vivantes. Nous nous sommes tout spcialement attachs tudier leffet des proprits adhsives et mcaniques des nanoparticules sur leur capacit de pntration de la membrane cellulaire. Pour ce faire, nous avons tout dabord utilis des nanoparticules dacide polylactique (PLA) fonctionnalises en surface avec un ligand des slectines E et P. Le greffage du ligand sur la particule sest fait par une nouvelle mthode exprimentale garantissant la prsence du ligand la surface de la particule durant toute sa dure de vie. Cette mthode consiste mlanger un polymre fonctionnalis avec le ligand avec un autre polymre non fonctionnalis. La prsence du ligand la surface des nanoparticules formes partir de ce mlange de polymres a t confirme par analyse ToF SIMS. Nous avons pu prouver que les particules possdant le ligand greff leur surface dmontraient une capacit adhsive suprieure leurs homologues non fonctionnaliss sur des cellules endothliales HUVEC actives par diffrentes drogues. De plus, le captage des particules par les cellules HUVEC est modul par le niveau dexpression des rcepteurs selectine E et P et aussi par la quantit de ligand libre. Ces rsultats montrent clairement que le greffage du ligand confre aux particules des proprits adhsives accrues et spcifiques ce qui permet leur usage postrieure comme vecteur pharmaceutique capable de cibler un rcepteur particulier la surface dune cellule. Nous avons aussi dmontr que linteraction entre les nanoparticules et la membrane cellulaire peut aussi tre contrle aussi bien par les proprits mcaniques de la cellule que de la nanoparticule. Dans une premire tape, nous avons mesur laide de lappareil de forces de surface llasticit de cellules macrophagiques dposes sur diffrents substrats. En contrlant linteraction entre la cellule et le substrat sur lequel elle repose nous avons montr quil tait possible de modifier ii volont les proprits mcaniques cellulaire. Une augmentation de llasticit cellulaire saccompagne dune augmentation systmatique de linternalisation de nanoparticules de PLA non fonctionnalises. Ceci suggre un rle prpondrant des proprits mcaniques du cortex cellulaire dans le captage des nanoparticules de PLA. Dans une seconde tape, nous avons tudi leffet des proprits mcaniques des nanoparticules sur leur capacit de pntration cellulaire. Pour ce faire, nous avons synthtis des particules dhydrogel dont llasticit tait contrle par le degr dagent rticulant inclus dans leur formulation. Le contrle des proprits mcaniques des nanoparticules a t confirm par la mesure du module de Young des particules par microscopie de force atomique. Limpact des proprits mcaniques de ces particules sur leur capacit de pntration dans les cellules vivantes a t tudi sur des cellules macrophagiques de souris. Les rsultats ont montr que la cintique dinternalisation, la quantit de particules internalises et le mécanisme dinternalisation dpendent tous du module de Young des nanoparticules. Aucune diffrence dans le trajet intracellulaire des particules na pu tre observe malgr le fait que diffrentes voies dinternalisation aient t observes. Ce dernier rsultat peut sexpliquer par le fait que les nanoparticules sont internalises par plusieurs voie simultanment ce qui facilite leur accumulation dans les organelles digestives intracellulaires. Un modle simple permettant dexpliquer ces rsultats a t propos et discut.
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Lanalyse spectrale de la frquence cardiaque, de la pression artrielle systolique, de la pression artrielle diastolique ainsi que de la respiration par la transforme de Fourier rapide, est considre comme une technique non invasive pour la dtermination de lactivit du systme nerveux autonome (SNA). Dans une population de sujets normaux volontaires, nous avons obtenu ltat basal, des oscillations de basses frquences (0,05-0,15Hz) relies au systme nerveux sympathique autonome et des oscillations de hautes frquences (0,2Hz) reprsentant sur les intervalles entre chaque ondes R de llectrocardiogramme (RR), larythmie sinusale respiratoire correspondant une activit vagale. Nous avons compar les tests de stimulation du systme nerveux sympathique autonome dclench par le passage de la position de repos (en dcubitus dorsal), la position orthostatique volontaire et le passage de la position de repos la position orthostatique avec la table basculante 60o. Nous avons galement compar un groupe normotendu un groupe hypertendu qui a t soumis au passage du repos lorthostation volontaire et pour lesquels nous avons valu la sensibilit du barorflexe et la rponse sympathique par la mesure des catcholamines circulantes. Dans un groupe de sujets ayant une hypertension artrielle essentielle, nous avons valu leffet de la thrapie hypotensive, par le Trandolapril qui est un Inhibiteur de lenzyme de conversion (IEC) de l`angiotensine. Dans ce groupe hypertendu, nous avons procd, en plus de la stimulation sympathique par lorthostation volontaire, un exercice isomtrique de trois minutes 30 % de la force maximale. Nous avons galement complt notre valuation par la mesure de la densit de rcepteurs 2 adrnergiques sur lymphocytes et par la mesure des indices de contractilit laide de lchocardiographie en M mode. Les rsultats ont montr, dans les groupes normaux volontaires, dans les deux types de stimulation du systme nerveux sympathique par la position orthostatique, une augmentation significative des catcholamines plasmatiques avec une augmentation de la frquence cardiaque et des basses frquences de RR, confirmant ainsi que lon est en tat de stimulation sympathique. On observe en mme temps une diminution significative des hautes frquences de RR, suggrant un retrait vagal lors de cette stimulation. On a observ au test de la table basculante six cas dhypotension orthostatique. On a compar la position orthostatique volontaire entre le groupe de sujets normaux et le groupe de sujets hypertendus. Lanalyse spectrale croise de RR et de la pression artrielle systolique a permis dvaluer dans lhypertension artrielle (HTA), essentielle une sensibilit du barorflexe attnue, accompagne dune ractivit vagale rduite en prsence dune activit et dune ractivit sympathique augmentes suggrant une altration sympathovagale dans lHTA. Dans le groupe de sujets hypertendus traits (Trandolapril 2mg/jour), nous avons identifi un groupe de rpondeurs au traitement par le Trandolapril et un groupe de non rpondeurs ce type de thrapie anti-hypertensive. Le groupe rpondeur avait un profil hyper-adrnergique avec une hyper-ractivit sympathique, une frquence cardiaque et des pressions artrielles diastolique et systolique plus leves au repos. Dans le groupe total trait au Trandolapril, la densit des rcepteurs 2 adrnergiques a doubl, aprs thrapie, alors que la ractivit des basses frquences obtenues lanalyse spectrale a augment. Nous avons montr dans notre tude quun IECA a pu inhiber le mécanisme facilitateur de langII sur les terminaisons nerveuses sympathiques et a permis ainsi de rduire lhyperactivit sympathique et le mécanisme de down regulation des rcepteurs 2 adrnergiques rendant ainsi lexpression de linfluence du SNA post synaptique plus efficace. Dans lensemble de nos protocoles cliniques, par lutilisation de lanalyse spectrale des signaux RR, de la pression artrielle systolique,de la pression artrielle diastolique et de la respiration, nous avons montr que cette technique non invasive permet de dcrire et de mieux comprendre les mécanismes physiologiques, physiopathologiques et pharmacologiques relis au systme nerveux autonome et lhypertension artrielle essentielle.
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Cet article tudie deux contextes franais dans lesquels les voiles musulmans sont devenus hypervisibles: le dbat public qui a men la loi franaise de 2004 interdisant les signes religieux ostensibles dans les coles publiques, et le projet colonial franais de dvoiler les femmes algriennes. Je montre comment le concept de loppression de genre sest naturalis au voile musulman dune telle manire quil justifie les normes de fminits occidentales et cache le mécanisme par lequel les femmes musulmanes sont racialises. Cest ainsi que le voile devient le point de mire dun racisme culturel qui se prsente comme librant les femmes musulmanes, un racisme qui semble poser un dilemme au fminisme.
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En raison de la prmaturit ou de conditions mdicales, un grand nombre de nouveau-ns reoivent de la nutrition parentrale totale (NPT) en priode nonatale. Durant la priode dadministration, limpact mtabolique et les effets nfastes de la NPT et celui de son administration avec des sacs exposs la lumire sont en grande partie connus. Il est admis que des vnements se produisant in utero ou en priode nonatale entranent des modifications mtaboliques chez l'adulte. Mais on ignore si la nutrition parentrale possde des effets long terme. Le but de notre tude est donc dvaluer l'effet d'une courte priode nonatale de NPT sur le mtabolisme nergtique de ladulte. De J3 J7, des cochons d'Inde sont nourris par NPT dont le sac et la tubulure sont exposs ou protgs de la lumire et sont compars des animaux nourris par voie entrale. Aprs J7, les trois groupes sont nourris de la mme faon, par voie entrale exclusivement. Les animaux nourris par NPT montrent une prise pondrale infrieure, un catabolisme plus marqu et des concentrations de substrats nergtiques abaisses (glucose, cholestrol et triglycrides). 3 mois, le foie des groupes NPT montre des concentrations de triglycrides et de cholestrol abaisses et des changements d'activit enzymatique. La photoprotection de la NPT nonatale diminue la prise pondrale et les concentrations de triglycrides et de cholestrol hpatiques. Notre tude est la premire explorer leffet long terme de la NPT nonatale. Elle ouvre la porte des tudes humaines qui permettront, nous lesprons, damliorer la prise en charge des nouveau-ns les plus fragiles et les plus immatures.
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Cette tude a t conue afin dvaluer leffet dun pr-traitement long terme au clcoxib sur la taille dinfarctus suite un infarctus du myocarde. Sachant que le clcoxib est un anti-inflammatoire et que des dommages myocardiques peuvent dcouler des processus inflammatoires, linhibition de linflammation devrait hypothtiquement rduire la taille dun ventuel infarctus. Pour ce faire, un traitement au clcoxib (3 mg/kg/jour i.p.) ou au vhicule (DMSO 50% ; EtOH 15% ; eau distille) a t administr chroniquement pendant 28 jours des rats mles Sprague-Dawley (n=18 par groupe) par pompes osmotiques ALZET. Aprs avoir t anesthsis, les animaux ont t sujets locclusion de lartre coronaire gauche descendante, suivie dune priode de reperfusion de 24 heures. Les rsultats dmontrent que la taille de linfarctus des animaux traits au clcoxib est significativement rduite comparativement celle du groupe tmoin (37,52,5% versus 48,02,6% de la zone risque, p < 0,05). Par la suite, laccumulation de neutrophiles indique une hausse de ces leucocytes pour la zone ischmique, sans toutefois discriminer entre les groupes trait et non-trait, qui contenaient aussi les couches sub-endocardique et sous-picardique. Cependant, aucune diffrence significative est note entre les groupes trait et tmoin au niveau de lexpression de la prostaglandine E2 plasmatique et du facteur de ncrose tumorale alpha. Dun autre ct, lapoptose, dtermine par le ratio de Bax/Bcl2 et par un essai TUNEL est significativement rduite pour la couche sub-endocardique de la zone risque des animaux traits au clcoxib. Enfin, lagrgation plaquettaire, induite ladnosine diphosphate et analyse dans le sang complet, suggre que le clcoxib diminue lagrgation plaquettaire. Cette tude indique alors quun pr-traitement au clcoxib peut rduire la taille dinfarctus par un mécanisme impliquant lapoptose.
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Le dveloppement ainsi que lamlioration des diffrentes techniques de purification sont des dfis importants pour la chimie daujourdhui. Certaines des mthodes actuelles, tel que le greffage dun ractif sur un support solide permettant daccder un produit pur par simple filtration du milieu, comportent toutefois certains inconvnients. En effet, les proprits de solubilit de ces polymres rendent la mise en uvre des ractions plus difficiles. Cest dans ce contexte que le groupe du Pr. Charette a rapport lutilisation de ractifs lis un sel de ttraarylphosphonium (TAP). Ces sels peuvent tre solubiliss dans un solvant tel que le dichloromthane et aisment retirs du milieu ractionnel par prcipitation laide dther dithylique (Chapitre 1). Lun des objectifs de cette thse a donc t li la dcouverte de deux mthodes complmentaires qui, jusqu prsent, sont considres comme des mthodes de choix pour la synthse des sels de TAP fonctionnaliss (Chapitre 2). Lune dentre elles est utilise par Soluphase inc., une entreprise qui commercialise ces sels de TAP. Lefficacit des sels en tant que support dans la synthse de petites molcules a t dmontre lors de la synthse dun produit naturel, la ()-coniine (Chapitre 3). Lisolement des intermdiaires synthtiques instables par simple prcipitation laide dun support de TAP a permis de rendre cette synthse plus efficace que celle dj connue. Dans le deuxime volet de cette thse, plusieurs problmes relis la synthse de drivs cyclopropaniques 1,1-disubstitus ont t tudis. Ces derniers font partie intgrale de plusieurs produits naturels et de mdicaments. Cependant, leur formation par une raction de cyclopropanation dalcnes utilisant des ractifs diazoques possdant deux groupements de type accepteur nest pas tche facile (Chapitre 4). En effet, cette raction souffre dun faible contrle diastroslectif. Par le fait mme, trs peu de mthodologies de synthse ont rapport lutilisation de ce type de ractifs diazoques dans des ractions de cyclopropanation stroslectives. Ltude du mécanisme de la raction de cyclopropanation catalyse au Rh(II) a propos des indices favorisant un modle ayant des prcdents dans la littrature (Chapitre 5). Ces tudes nous ont men la dcouverte de la capacit trans-directrice du groupement amide lors des ractions de cyclopropanation dolfines. Nous avons donc utilis cette proprit afin de rsoudre plusieurs problmes rencontrs dans la littrature. Nous avons montr quelle permet laccs des drivs cyclopropaniques possdant deux groupements carboxyliques gminaux avec des slectivits leves (Chapitre 6). Ces produits taient accessibles que par des squences synthtiques ncessitant plusieurs tapes. De plus, nous avons dmontrs que ces nouveaux drivs cyclopropaniques sont des outils synthtiques fort utiles dans la synthse de produits naturels dintrt biologique. Cette formidable capacit trans-directrice du groupement amide nous a permi de rsoudre le problme de la synthse asymtrique de drivs carboxyliques -cyano cyclopropaniques (Chapitre 7). De plus, ce projet nous a menes la dcouverte de leffet de divers additif achiraux permettant daugmenter la slectivit dans certaines ractions. Cette raction possde une vaste tendue et lutilit de ces nouveaux drivs cyclopropaniques a t dmontre par plusieurs transformations de groupements fonctionnels.
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Le souffle quin est une maladie inflammatoire chronique des petites voies respiratoires, trs frquente chez les chevaux gards lintrieur avec de la paille et du foin moisi et poussireux. Les signes cliniques peuvent tre prvenus par le contrle de lenvironnement et soulags par ladministration de corticostrodes systmiques et inhals. Lobjectif de cette tude tait de dceler les effets secondaires prsents sur des chevaux atteints de souffle traits la fluticasone (Flovent 250 g HFA, 2000 g BID, pendant six mois, et puis 2000 g SID, pendant six autres mois) par le cortisol srique et la prsence dulcres gastriques. Cinq chevaux exempts de maladie respiratoire et onze chevaux atteints du souffle ont t gards lintrieur dune curie avec du foin moisi et de la paille dans le but de provoquer la maladie chez le groupe atteints du souffle. Une fois les chevaux atteints de souffle devenus symptomatique, ils ont t diviss en deux groupes : un premier groupe trait avec de la fluticasone, nourri avec du foin et gard sur une litire de paille, et un deuxime groupe non trait nourrie avec de la moule et gard sur une litire de ripe, pendant six mois. Par la suite, les deux groupes ont t mis au pturage. Le cortisol a t mesur par Immunoessai enzymatique par chimiluminescence (CEIA, Immunolite 1000, Siemmens) les 12e et 10e jours avant et les 7e, 28e, 80e, 160e, 200e, 250e, 290e et 320e jours aprs le dbut du traitement afin de dterminer le degr de suppression du cortisol srique. On a galement fait une suivi de la prsence d`ulcres gastriques l`aide de vido endoscopique. La fluticasone inhale deux fois par jour cause une diminution du cortisol srique les 28e, 80e et 160e jours, mais elle nentrane pas deffets sur le score des ulcres gastriques. Les pellets de luzerne causent quant elles, une augmentation du score des ulcres gastrique chez les animaux exempts de maladie respiratoire.
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L'eugnol (2-methoxy-4-(2-propenyl) phnol), produit driv du clou de girofle (Eugenia aromatica), fut tout dabord utilis en application topique des fins danalgsie dentaire. Il produit galement une anesthsie chirurgicale lorsque administr en immersion chez les poissons. Leugnol agit sur les rcepteurs vanillodes, sensibles la chaleur, aux protons et certaines molcules lipidiques. Ces rcepteurs jouent un rle important dans le mécanisme de linflammation et de lhyperalgsie. Leugnol pourrait galement produire ses effets par antagonisme des rcepteurs glutamaergiques (NMDA) et par son activation des rcepteurs GABAergiques. Considrant que leugnol produit des effets analgsiques et anesthsiques, des tudes de pharmacocintique et de pharmacodynamie furent ralises chez la grenouille (Xenopus laevis), le poisson (Oncorhynchus mykiss) et le rat (Rattus norvegicus). Les rsultats dmontrent que leugnol administr par immersion une dose efficace permet datteindre une anesthsie chirurgicale chez les grenouilles (350 mg/L) et les poissons (75 mg/L). Suite des analyses plasmatiques par LC/MS/MS, la pharmacocintique des grenouilles, des poissons et des rats montre que la drogue est limine et quil pourrait y avoir une recirculation entrohpathique plus importante chez la grenouille et le rat. La longue demi-vie chez le rat suggre aussi une accumulation dans les tissus aprs des administrations rptes. Suite ladministration intraveineuse dune dose de 20 mg/kg chez le rat, leugnol induit une anesthsie chirurgicale pour une trs courte priode de temps variant autour de 167 s. Les rsultats de sensibilit thermique confirment lefficacit de leugnol pour rduire lhyperalgsie induite chez des rats neuropathiques. Leffet pharmacologique de leugnol a dmontr une augmentation progressive constante de lanalgsie sur une priode de cinq jours de traitements journaliers. En conclusion, leugnol possde des proprits analgsiques et anesthsiques chez la grenouille africaine griffes (Xenopus laevis), le poisson (Oncorhynchus mykiss) et le rat (Rattus norvegicus).
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Les scrtines peptidiques de lhormone de croissance (GHRPs) constituent une classe de peptides synthtiques capables de stimuler la scrtion de lhormone de croissance (GH). Cette activit est mdie par leur liaison un rcepteur coupl aux protines G : le rcepteur des scrtines de lhormone de croissance (GHS-R1a), identifi subsquemment comme le rcepteur de la ghrline. La ghrline est un peptide de 28 acides amins scrt principalement par les cellules de la muqueuse de lestomac, qui exerce de nombreux effets priphriques indpendamment de la scrtion de lhormone de croissance. Les effets indpendants de la scrtion de GH incluent, entre autres, des actions sur le contrle de la prise de nourriture, le mtabolisme nergtique, la fonction cardiaque, le systme immunitaire et la prolifration cellulaire. Ltude de la distribution priphrique des sites de liaison des GHRPs nous a permis didentifier un second site, le CD36, un rcepteur scavenger exprim dans plusieurs tissus dont le myocarde, lendothlium de la microvasculature et les monocytes/macrophages. Le CD36 exprim la surface du macrophage joue un rle cl dans linitiation du dveloppement de lathrosclrose par la liaison et linternalisation des lipoprotines de faible densit oxydes (LDLox) dans lespace sous-endothlial de lartre. Lhexarline, un analogue GHRP, a t dvelopp comme agent thrapeutique pour stimuler la scrtion de lhormone de croissance par lhypophyse. Sa proprit de liaison aux rcepteurs GHS-R1a et CD36 situs en priphrie et particulirement sa capacit dinterfrer avec la liaison des LDLox par le CD36 nous ont incit valuer la capacit de lhexarline moduler le mtabolisme lipidique du macrophage. Lobjectif principal de ce projet a t de dterminer les effets de lactivation des rcepteurs CD36 et GHS-R1a, par lhexarline et la ghrline, le ligand endogne du GHS-R1a, sur la physiologie du macrophage et de dterminer son potentiel anti-athrosclrotique. Les rsultats montrent premirement que lhexarline et la ghrline augmentent lexpression des transporteurs ABCA1 et ABCG1, impliqus dans le transport inverse du cholestrol, via un mécanisme contrl par le rcepteur nuclaire PPAR. La rgulation de lactivit transcriptionnelle de PPAR par lactivation des rcepteurs CD36 et GHS-R1a se fait indpendamment de la prsence du domaine de liaison du ligand (LBD) de PPAR et est consquente de changements dans ltat de phosphorylation de PPAR. Une tude plus approfondie de la signalisation rsultant de la liaison de la ghrline sur le GHS-R1a rvle que PPAR est activ par un mécanisme de concertation entre les voies de signalisation Gq/PI3-K/Akt et Fyn/Dok-1/ERK au niveau du macrophage. Le rle de PPAR dans la rgulation du mtabolisme lipidique par lhexarline a t dmontr par lutilisation de macrophages de souris htrozygotes pour le gne de Ppar gamma, qui prsentent une forte diminution de lactivation des gnes de la cascade mtabolique PPAR-LXR-transporteurs ABC en rponse lhexarline. Linjection quotidienne dhexarline un modle de souris prdisposes au dveloppement de lathrosclrose, les souris dficientes en apoE sous une dite riche en cholestrol et en lipides, se traduit galement en une diminution significative de la prsence de lsions athrosclrotiques correspondant une augmentation de lexpression des gnes cibles de PPAR et LXR dans les macrophages pritonaux provenant des animaux traits lhexarline. Lensemble des rsultats obtenus dans cette thse identifie certains nouveaux mécanismes impliqus dans la rgulation de PPAR et du mtabolisme du cholestrol dans le macrophage via les rcepteurs CD36 et GHS-R1a. Ils pourraient servir de cibles thrapeutiques dans une perspective de traitement des maladies cardiovasculaires.
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Limportance respective des lymphocytes T rgulateurs naturels gnrs dans le thymus ou induits en priphrie dans la rgulation immunitaire et la rsolution de linflammation est dsormais bien tablie. Nous avons contribu mettre en vidence une nouvelle voie dinduction de lymphocytes T rgulateurs priphriques partir de cellules T humaines CD4+CD25- naves et mmoires. Nous avons montr que lengagement de la molcule ubiquitaire transmembranaire CD47 sur la cellule T par un anticorps monoclonal ou par le peptide 4N1K (peptide driv du domaine carboxy-terminal de la thrombospondine-1 et spcifique du site de liaison CD47) induisait des lymphocytes T CD4+ rgulateurs exerant une fonction suppressive sur les lymphocytes T effecteurs. Les proprits suppressives induites par la thrombospondine-1 confortent les fonctions anti-inflammatoires de cette protine de la matrice extracellulaire. Linhibition exerce par les lymphocytes T rgulateurs induits dpend du contact intercellulaire entre les cellules T rgulatrices et leurs cibles, et est indpendante du TGF-. Nos rsultats dmontrent galement le rle de CD47 sur le lymphocyte T CD4+ dans la rponse immunitaire spcifique de lantigne in vivo. En effet, les souris BALB/c dficientes pour CD47 prsentent un biais de la scrtion danticorps et de cytokines de type Th1, alors que les souris BALB/c sont dcrites comme exprimant un profil de production de cytokines de type Th2. Nos travaux mettent en vidence le rle de CD47 dans linhibition du dveloppement dune rponse cellulaire et humorale de type Th1 in vivo, confirmant de prcdentes tudes in vitro ralises avec des cellules T CD4+ humaines. Nous prsentons galement le rle inhibiteur de lengagement de CD28 in vitro sur la diffrenciation en cellules Th17 des lymphocytes T CD4+ nafs isols de souris BALB/c. Le mécanisme propos est dpendant de la production de lIL-2 et de lIFN- et indpendant de la prsence de lymphocytes T rgulateurs. Notre tude du rle de deux molcules transmembranaires CD47 et CD28 exprimes sur la cellule T CD4+, contribue une meilleure connaissance des mécanismes impliqus dans la tolrance immunologique, la rsolution de linflammation et la diffrenciation des cellules T "helper" CD4+.
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Le cancer est la principale cause de mortalit au Canada. Les taxanes (e.g. le paclitaxel et le doctaxel (DCTX)) constituent des remdes efficaces contre une srie de tumeurs solides telles que les cancers du sein, du poumon et de lovaire. Par ailleurs, des acides nucliques (e.g. les oligonuclotides antisens (AON) ou les petits ARN interfrents (siRNAs)), capables de supprimer slectivement certains oncognes impliqus dans la carcinognse, sont actuellement tudis pour traiter une large gamme de cancers. Bien que lactivit des taxanes et des acides nucliques soit bien tablie sur des modles humains et/ou animaux, plusieurs aspects physico-chimiques et cliniques restent encore amliorer. Leur solubilit limite (pour les taxanes), leur dgradation rapide dans le sang (pour les acides nucliques), leur limination prcoce, leur absence de slectivit et leur toxicit envers les tissus sains sont les principaux facteurs limitant leur efficacit. Cest pourquoi de nombreux efforts ont port sur llaboration de systmes de vectorisation cibls base de polymres, dans le but de surmonter les problmes associs aux thrapies actuelles. Dans cette thse, deux types de micelles polymres ont t dvelopps pour la vectorisation de DCTX et dacides nucliques. Dune part, des micelles de poly(oxyde dthylne)-bloc-poly(oxyde de butylne/styrne) ont t tudies pour la premire fois pour solubiliser le DCTX et le protger de lhydrolyse. Ces polymres se sont rvls moins toxiques que le surfactant utilis commercialement pour solubiliser le DCTX (i.e. polysorbate 80) et ont permis une libration prolonge du principe actif. Dautre part, deux systmes diffrents de micelles polyioniques (PICM) ont t mis au point pour la vectorisation dacides nucliques. De nouveaux conjugus de poly(thylne glycol) (PEG)-oligonuclotide ont t proposs pour la protection et la libration contrle dAON. Lorsque ces conjugus ont t formuls avec des dendrimres de poly(amidoamine) (PAMAM), des complexes de taille homogne ont t obtenus. Ces PICM ont permis de prolonger la libration de lAON et de le protger efficacement contre la dgradation enzymatique. De plus, des polymres de poly(oxyde dthylne)-bloc-poly(mthacrylate de propyle-co-acide mthacrylique) ont t incorpors afin de confrer des proprits acido-sensibles aux PICM. Dans ces micelles, formes de ce dernier polymre formul avec le dendrimre PAMAM, des oligonuclotides (AON et siRNA) ciblant loncogne Bcl-2 ont t encapsuls. Linternalisation cellulaire fut assure par un fragment danticorps monoclonal (Fab) situ lextrmit de la couronne de PEG. Aprs linternalisation cellulaire et la protonation des units dacide mthacrylique sous leffet de lacidification des endosomes, les micelles se sont affranchies de leur couronne. Elles ont ainsi expos leur cur compos dacide nuclique et de dendrimre PAMAM, qui possde une charge positive et des proprits endosomolytiques. En effet, ces PICM acido-sensibles cibles ont permis daugmenter la biodisponibilit des acides nucliques vectoriss et se sont avres plus efficaces pour silencer loncoprotine Bcl-2 que les micelles non cibles ou que le dendrimre de PAMAM commercial seul. Finalement, les nanovecteurs polymres prsents dans cette thse se rvlent tre des systmes prometteurs pour la vectorisation des anticancreux et des acides nucliques.
Resumo:
Lendothline-1 (ET-1) est un peptide vasoactif extrmement puissant qui possde une forte activit mitognique dans les cellules du muscle lisse vasculaire (VSMCs). Il a t dmontr que lET-1 est implique dans plusieurs maladies cardio-vasculaires, comme lathrosclrose, l'hypertension, la restnose aprs l'angioplastie, linsuffisance cardiaque et l'arythmie. LET-1 exerce ses effets via plusieurs voies de signalisation qui incluent le Ca2+, les protines kinases actives par les mitognes (MAPKs) y compris les kinases rgules par les signaux extracellulaires (ERK1/2) et la voie de la phosphatidylinositol 3-kinase (PI-3K)/protein kinase B (PKB). Plusieurs tudes ont dmontr que les drivs ractifs de l'oxygne (ROS) peuvent jouer un rle important dans la signalisation dERK1/2 et de PKB induite par plusieurs facteurs de croissance et hormones. Nous avons prcdemment montr que l'ET-1 produit des ROS qui agissent comme mdiateur de la signalisation cellulaire induite par lET-1. Le peroxyde dhydrogne (H2O2), une molcule qui appartient la famille des ROS, peut activer les voies de la MAPK et de la PKB dans les VSMCs. Par ailleurs, nos rsultats suggrent galement que le Ca2+ et la calmoduline (CaM) sont essentiels pour la phosphorylation dERK1/2, de p38 et de PKB induite par le H2O2 dans les VSMCs. La Ca2+/CaM-dependent protein kinases II (CaMKII) est une srine/thronine protine kinase multifonctionnelle active par le Ca2+/CaM. Il a t montr que la CaMKII est implique dans les voies de signalisation induite par le H2O2 dans les cellules endothliales. Cependant, le rle de la CaMKII dans la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de la proline-rich tyrosine kinase 2 (Pyk2) induite par lET-1 et le H2O2, de mme que son rle dans leffet hypertrophique et prolifratif de lET-1 dans les VSMCs demeure inexplor. Le monoxyde dazote (NO) est une molcule vasoactive implique dans la rgulation de plusieurs rponses hormonales. Le NO peut moduler la signalisation contrlant la croissance cellulaire induite par plusieurs agonistes do son rle protecteur dans le systme vasculaire. Des tudes ont montr que le NO peut inhiber la voie de Ras/Raf/ERK1/2 et la voie de PKB induite par le facteur de croissance endothlial (EGF) et langiotensine II (Ang II). Beaucoup dautres travaux ont mis en vidence un cross-talk entre les voies de signalisation actives par lET-1 et le NO. La capacit du NO inhiber la signalisation intracellulaire induite par lET-1 dans les VSMCs demeure inconnue. Le travail prsent dans cette thse vise dterminer le rle du systme Ca2+-CaM-CaMKII dans la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 induite par lET-1 et le H2O2 ainsi que son rle dans la croissance et la prolifration cellulaire induites par lET-1 dans les VSMCs. Nous avons galement test le rle du NO dans la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 ainsi que la synthse protique induite par lET-1. Dans la premire partie de notre tude, nous avons examin le rle de la CaMKII dans la phosphorylation dERK1/2 et de PKB induite par lET-1 dans les VSMCs en utilisant trois approches diffrentes i.e. l'usage d'inhibiteurs pharmacologiques, un peptide auto-inhibiteur de la CaMKII (CaMKII AIP) et la technique de siRNA. Nous avons dmontr que la CaMKII est implique dans la phosphorylation dERK1/2 et de PKB induite par lET-1 dans les VSMCs. Des tudes prcdentes ont montr laide dinhibiteurs pharmacologiques comme le KN-93 que l'Ang II et les agents induisant une augmentation de la concentration en Ca2+ intracellulaire comme lionomycine, provoquent la phosphorylation dERK1/2 via la CaM dans les VSMCs. Cependant, en utilisant diffrentes approches, nos tudes ont montr pour la premire fois une implication de la CaMKII dans la phosphorylation dERK1/2 et de PKB induite par lET-1 dans les VSMCs. Nous avons galement rapport pour la premire fois, un rle crucial de la CaMKII dans la pathophysiologie vasculaire associe lET-1 puisque lactivation de la CaMKII joue un rle important dans lhypertrophie et la croissance cellulaire. Dans la deuxime partie, la lumire des tudes prcdentes qui montraient que les ROS agissent comme mdiateurs de la signalisation induite par lET-1 dans les VSMCs, nous avons examin si la CaMKII est galement implique dans lactivation des voies dERK1/2 et de PKB induite par le H2O2. En utilisant des approches pharmacologiques et molculaires, nous avons montr, comme pour lET-1, que la CaMKII joue un rle critique en amont de la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 induite par le H2O2. Nous avons prcdemment montr que la transactivation du rcepteur de type I de linsulin-like growth factor (IGF-1R) est ncessaire lactivation de PKB induite par le H2O2. Pour cette raison, nous avons examin l'effet de l'inhibition de la CaMKII par linhibiteur pharmacologique ou par le knock-down de la CaMKII sur la phosphorylation dIGF-1R induite par le H2O2. Les rsultats dmontrent que la CaMKII joue un rle critique en amont de la phosphorylation dERK1/2, de PKB et dIGF-1R induite par le H2O2. Dans la troisime partie de notre tude, nous avons galement examin le mécanisme molculaire par lequel le NO exerce ses effets anti-mitogniques et anti-hypertrophiques dans la signalisation induite par lET-1. En testant l'effet de deux diffrents donneurs de NO (S-nitroso-N-acetylpenicillamine (SNAP), sodium nitroprusside (SNP)) et un inhibiteur de NO synthase, le N (G)-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) dans la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 induite par lET-1, nous avons observ que le NO a un effet inhibiteur sur la signalisation induite par lET-1 dans les VSMCs. Par ailleurs, le 8-Br-GMPc, un analogue du GMPc, a un effet similaire celui des deux donneurs du NO, tandis que loxadiazole quinoxaline (ODQ), un inhibiteur de la guanylate cyclase soluble, inverse l'effet inhibiteur du NO. Nous concluons que le NO diminue la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 induite par lET-1 dune manire dpendante du GMPc. Le NO inhibe aussi les effets hypertrophiques de lET-1 puisque le traitement avec le SNAP diminue la synthse des protines induite par lET-1. En rsum, les tudes prsentes dans cette thse dmontrent que lET-1 et le H2O2 sont des activateurs de la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 dans les VSMCs et que la CaMKII savre ncessaire pour ce processus, en agissant en amont de lactivation de IGF-1R induite par le H2O2 dans les VSMCs. Elles montrent galement que le NO inhibe la phosphorylation dERK1/2, de PKB et de Pyk2 induite par lET-1. Enfin, nos travaux suggrent aussi que lactivation de la CaMKII stimule la synthse des protines et de lADN induites par lET-1 alors que le NO inhibe la synthse des protines induite par ET-1. Mots cls: Endothline ; Peroxyde d'hydrogne ; CaMKII ; Monoxyde dazote ; Systme vasculaire ; PKB; ERK1/2; IGF-1R; Hypertrophie.
Resumo:
Le maintien de la stabilit du gnome est essentiel pour la propagation de linformation gntique et pour la croissance et la survie des cellules. Tous les organismes possdent des systmes de prvention des dommages et des rarrangements de lADN et nos connaissances sur ces processus dcoulent principalement de ltude des gnomes bactriens et nuclaires. Comparativement peu de choses sont connues sur les systmes de protection des gnomes dorganelles. Cette tude rvle limportance des protines liant lADN simple-brin de la famille Whirly dans le maintien de la stabilit du gnome des organelles de plantes. Nous rapportons que les Whirlies sont requis pour la stabilit du gnome plastidique chez Arabidopsis thaliana et Zea mays. Labsence des Whirlies plastidiques favorise une accumulation de molcules rearranges produites par recombinaison non-homologue mdie par des rgions de microhomologie. Ce mécanisme est similaire au microhomology-mediated break-induced replication (MMBIR) retrouv chez les bactries, la levure et lhumain. Nous montrons galement que les organelles de plantes peuvent rparer les bris double-brin en utilisant une voie semblable au MMBIR. La dltion de diffrents membres de la famille Whirly entrane une accumulation importante de rarrangements dans le gnome des organelles suite linduction de bris double-brin. Ces rsultats indiquent que les Whirlies sont aussi importants pour la rparation fidle des gnomes dorganelles. En se basant sur des donnes biologiques et structurales, nous proposons un modle o les Whirlies modulent la disponibilit de lADN simple-brin, rgulant ainsi le choix des voies de rparation et permettant le maintien de la stabilit du gnome des organelles. Les divers aspects de ce modle seront tests au cours dexpriences futures ce qui mnera une meilleure comprhension du maintien de la stabilit du gnome des organelles.
