Extracellular vesicles from human cardiac progenitor cells inhibit cardiomyocyte apoptosis and improve cardiac function after myocardial infarction.

AIMS: Recent evidence suggests that cardiac progenitor cells (CPCs) may improve cardiac function after injury. The underlying mechanisms are indirect, but their mediators remain unidentified. Exosomes and other secreted membrane vesicles, hereafter collectively referred to as extracellular vesicles (EVs), act as paracrine signalling mediators. Here, we report that EVs secreted by human CPCs are crucial cardioprotective agents. METHODS AND RESULTS: CPCs were derived from atrial appendage explants from patients who underwent heart valve surgery. CPC-conditioned medium (CM) inhibited apoptosis in mouse HL-1 cardiomyocytic cells, while enhancing tube formation in human umbilical vein endothelial cells. These effects were abrogated by depleting CM of EVs. They were reproduced by EVs secreted by CPCs, but not by those secreted by human dermal fibroblasts. Transmission electron microscopy and nanoparticle tracking analysis showed most EVs to be 30-90 nm in diameter, the size of exosomes, although smaller and larger vesicles were also present. MicroRNAs most highly enriched in EVs secreted by CPCs compared with fibroblasts included miR-210, miR-132, and miR-146a-3p. miR-210 down-regulated its known targets, ephrin A3 and PTP1b, inhibiting apoptosis in cardiomyocytic cells. miR-132 down-regulated its target, RasGAP-p120, enhancing tube formation in endothelial cells. Infarcted hearts injected with EVs from CPCs, but not from fibroblasts, exhibited less cardiomyocyte apoptosis, enhanced angiogenesis, and improved LV ejection fraction (0.8 ± 6.8 vs. -21.3 ± 4.5%; P < 0.05) compared with those injected with control medium. CONCLUSION: EVs are the active component of the paracrine secretion by human CPCs. As a cell-free approach, EVs could circumvent many of the limitations of cell transplantation.

Phenotypic and functional analysis of human fetal liver hematopoietic stem cells in culture.

Steady-state hematopoiesis and hematopoietic transplantation rely on the unique potential of stem cells to undergo both self-renewal and multilineage differentiation. Fetal liver (FL) represents a promising alternative source of hematopoietic stem cells (HSCs), but limited by the total cell number obtained in a typical harvest. We reported that human FL nonobese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) repopulating cells (SRCs) could be expanded under simple stroma-free culture conditions. Here, we sought to further characterize FL HSC/SRCs phenotypically and functionally before and following culture. Unexpanded or cultured FL cell suspensions were separated into various subpopulations. These were tested for long-term culture potential and for in vivo repopulating function following transplantation into NOD/SCID mice. We found that upon culture of human FL cells, a tight association between classical stem cell phenotypes, such as CD34(+) /CD38(-) and/or side population, and NOD/SCID repopulating function was lost, as observed with other sources. Although SRC activity before and following culture consistently correlated with the presence of a CD34(+) cell population, we provide evidence that, contrary to umbilical cord blood and adult sources, stem cells present in both CD34(+) and CD34(-) FL populations can sustain long-term hematopoietic cultures. Furthermore, upon additional culture, CD34-depleted cell suspensions, devoid of SRCs, regenerated a population of CD34(+) cells possessing SRC function. Our studies suggest that compared to neonatal and adult sources, the phenotypical characteristics of putative human FL HSCs may be less strictly defined, and reinforce the accumulated evidence that human FL represents a unique, valuable alternative and highly proliferative source of HSCs for clinical applications.

Prospective assessment of trocar-specific morbidity in laparoscopy.

BACKGROUND: The purpose of the present study was to challenge the hypothetical advantage of single port laparoscopy (SPL) over conventional laparoscopy by measuring prospectively the morbidity specifically related to conventional trocar sites (TS). METHODS: From November 2010 to December 2011, 300 patients undergoing various laparoscopic procedures were enrolled. Patient, surgery, and trocar characteristics were recorded. We evaluated at three time points (in-hospital and at 1 and 6 months postoperatively) specifically for each TS, pain (Visual Analog Scale), morbidity (infection, hematoma, hernia), and cosmesis (Patient Scar Assessment Score; PSAS). Patients designated their "worst TS," and a composite endpoint "bad TS" was defined to include any adverse outcome at a TS. RESULTS: We analyzed 1,074 TS. Follow-up was >90 %. Pain scores of >3/10 at 1 and 6 months postoperatively, were reported by 3 and 1 % of patients at the 5 mm TS and by 9 and 1 % at the larger TS, respectively (5 mm TS vs larger TS; p = 0.001). Pain was significantly lower for TS located in the lower abdomen than for the upper abdomen or the umbilicus (p = 0.001). The overall complication rate was <1 % and significantly lower for the 5 mm TS (hematoma p = 0.046; infection p = 0.0001). No hernia was found. The overall PSAS score was low and significantly lower for the 5 mm TS (p = 0.0001). Significant predictors of "bad TS" were larger TS (p = 0.001), umbilical position (p = 0.0001), emergency surgery (p = 0.0001), accidental trocar exit (p = 0.022), fascia closure (p = 0.006), and specimen extraction site (p = 0.0001). CONCLUSIONS: Specific trocar morbidity is low and almost negligible for 5 mm trocars. The umbilicus appears to be an unfavorable TS.

mTORC2 is an important signaling intermediary in VEGF-mediated endothelial cell proliferation, survival and migration

Objective: The vascular endothelial growth factor (VEGF) is a prominent¦contributor of tumor angiogenesis. VEGF induces endothelial cell migration,¦proliferation and survival, which are critical steps for the development of new¦blood vessels, through the activation of the Mek/Erk and PI3K/Akt signaling¦pathways. Recent findings have demonstrated that mTORC2 regulates Akt and¦Erk in endothelial cells. The role of mTORC2 in VEGF-mediated endothelial¦cell responses has however not been characterized.¦Methods: We used human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). The¦effects of VEGF on the Mek/Erk and PI3K/Akt pathway were analyzed by¦Western blot. Inhibition of mTORC2 was achieved using small interfering¦RNAs to rictor. Cell proliferation rate was assessed by BrdU incorporation and¦immunocytofluorescence. Apoptosis rate was determined by ELISA as well as¦propidium iodine staining and FACS analysis. Migration of endothelial cells¦was evaluated using a modified Boyden chamber assay.¦Results:Wefound thatVEGF activatesmTORC2 in endothelial cells. Indeed,¦treatment of endothelial cells with VEGF increases Akt phosphorylation, a¦downstream effector of mTORC2. We have further determined the role¦of mTORC2 in VEGF signaling by knocking down rictor, a component¦of mTORC2. We observed that VEGF failed to activate Akt and Erk in¦endothelial cells transfected with rictor siRNA. To next analyze the functional¦significance of mTORC2 inhibition on VEGF-mediated endothelial cell¦responses we performed proliferation, survival and migration assays. We found¦that VEGF failed to induce endothelial cell proliferation, survival and migration¦in endothelial cell lacking mTORC2 activity.¦Conclusion: These results show that mTORC2 is an important signaling¦intermediary in VEGF-induced endothelial cell responses and thus represents¦an interesting target to block VEGF-induced angiogenesis.

Regulatory Mechanisms involved in Th2 Cell Differentiation. A Proteomics Approach.

Th2-solujen erilaistumista ohjaavat säätelyverkostot ja niiden tutkiminen proteomiikan avulla Astma ja allergiat ovat laajalle levinneitä ja vakavia sairauksia, joista kärsivät miljoonat ihmiset ympäri maailmaa. Koe-eläimillä tehdyt tutkimukset osoittavat, että interleukiini-4 (IL-4) on tärkeä allergisen astman ja allergioiden kehittymiselle ja kroonistumiselle. Se ohjaa T-auttajasolujen (Th-solujen) kehittymistä Th2-tyypin soluiksi, joilla on merkittävä rooli näiden tautien puhkeamisessa. Th2-solut tuottavat myös itse IL-4:ä, joka edesauttaa taudin seuraavien vaiheiden kehittymistä. Erityisesti STAT6-proteiini, joka aktivoituu IL-4-stimulaation seurauksena, on tarpeen Th2- vasteen syntymiselle ja kroonistumiselle antigeenin aiheuttamassa keuhkoputkien astmaattisessa tulehduksessa. Väitöskirjatyöni tarkoituksena oli käyttää kaksidimensionaaliseen elektroforeesiin (2- DE) perustuvaa proteomiikkaa ja massaspektrometriaa uusien Th2-solujen erilaistumista säätelevien proteiinien tunnistamiseksi. Erilaistumattomat Th-solut eristettiin vastasyntyneen napaverestä tai hiiren pernasta. Solut aktivoitiin Tsolureseptorin ja ns. ko-stimulatoristen reseptorien kautta ja erilaistettiin joko Th1- tai Th2-suuntaan vastaavasti erilaistavien IL-12- ja IL-4-sytokiinien avulla. Ensimmäisessä tutkimuksessa in vitro -erilaistettujen Th1- ja Th2-solujen proteomeja verrattiin keskenään proteiinien ilmenemisessä tai proteiinimodifikaatioissa olevien erojen tunnistamiseksi. Kaksi muuta päätutkimusta keskittyivät IL-4:n aiheuttamaan proteiinitason säätelyyn ensimmäisen vuorokauden aikana T-soluaktivaation jälkeen. Näistä ensimmäisessä IL-4:n aiheuttamia eroja tunnistettiin aktivoiduista ihmisen Thsoluista. IL-4:n todettiin säätelevän useita proteiineja kaspaasien välittämissä signalointiteissä sekä lisäävän T-solujen elävyyttä ja aktivoitumista. Toisessa tutkimuksessa STAT6-poistogeenisten hiirien lymfosyyttien proteomia verrattiin villityypin kontrollisoluihin T-soluaktivaation ja IL-4-stimulaation jälkeen. Näissä tutkimuksissa karakterisoitiin useita uusia IL-4:n ja STAT6:n kohdeproteiineja ja löydettiin uusia säätelyverkostoja. Tutkimustulokset ovat johtaneet uusiin Th2-erilaistumismekanismeja koskeviin hypoteeseihin.

Weaver syndrome and EZH2 mutations: Clarifying the clinical phenotype.

Weaver syndrome, first described in 1974, is characterized by tall stature, a typical facial appearance, and variable intellectual disability. In 2011, mutations in the histone methyltransferase, EZH2, were shown to cause Weaver syndrome. To date, we have identified 48 individuals with EZH2 mutations. The mutations were primarily missense mutations occurring throughout the gene, with some clustering in the SET domain (12/48). Truncating mutations were uncommon (4/48) and only identified in the final exon, after the SET domain. Through analyses of clinical data and facial photographs of EZH2 mutation-positive individuals, we have shown that the facial features can be subtle and the clinical diagnosis of Weaver syndrome is thus challenging, especially in older individuals. However, tall stature is very common, reported in >90% of affected individuals. Intellectual disability is also common, present in ~80%, but is highly variable and frequently mild. Additional clinical features which may help in stratifying individuals to EZH2 mutation testing include camptodactyly, soft, doughy skin, umbilical hernia, and a low, hoarse cry. Considerable phenotypic overlap between Sotos and Weaver syndromes is also evident. The identification of an EZH2 mutation can therefore provide an objective means of confirming a subtle presentation of Weaver syndrome and/or distinguishing Weaver and Sotos syndromes. As mutation testing becomes increasingly accessible and larger numbers of EZH2 mutation-positive individuals are identified, knowledge of the clinical spectrum and prognostic implications of EZH2 mutations should improve.

Influência do sistema de condução no microclima, na produtividade e na qualidade de cachos da videira 'Niagara Rosada', em Jundiaí-SP

Este trabalho teve por finalidade comparar as características microclimáticas dos sistemas de condução em espaldeira e manjedoura e avaliar seus efeitos na produtividade e na qualidade dos cachos da videira 'Niagara Rosada'. O experimento foi realizado em área experimental do Instituto Agronômico de Campinas, localizada em Jundiaí (SP), em vinhedos de 'Niagara Rosada' enxertada sobre IAC-766, com espaçamento 2x1m. Avaliaram-se dois sistemas de condução: espaldeira com cordão esporonado único e manjedoura com cordão esporonado duplo. Foram feitas medições de radiação solar transmitida e temperatura do ar e do cacho, durante o ano de 2005, e avaliações de produção, número de cachos, massa dos cachos, número de ramos, índice de área foliar e teor de sólidos solúveis, durante os anos agrícolas 2004-2005 e 2005-2006. O sistema de condução de manjedoura proporcionou aumento significativo no comprimento do cordão esporonado, número de ramos e esporões por planta, índice de área foliar, número de cachos por planta, massa fresca dos cachos e produtividade. Comparando com o sistema de espaldeira, a manjedoura proporcionou um aumento de produção de 75% na média das safras avaliadas. Não foi observada alteração da temperatura à altura do cacho, havendo, no entanto, redução da insolação sobre os cachos no final do período de maturação. Em relação aos teores de sólidos solúveis totais, não se observou diferença estatística entre os tratamentos.

Uso da poda seca e da poda verde para obtenção de duas safras por ciclo vegetativo em três cultivares de videira

Foram avaliadas épocas de poda seca e de poda verde visando ao alcance de duas safras por ciclo vegetativo nas videiras 'Niagara Branca', 'Niagara Rosada' e 'Concord', cultivadas em sistema de espaldeira. O experimento foi realizado na Estação Experimental da UFRG, em Eldorado do Sul - RS, na safra de 2007/2008. As plantas foram submetidas aos seguintes tratamentos: T1 (poda seca em 20-07-07 e poda verde em 15-11-07), T2 (poda seca em 20-07-07 e poda verde em 17-12-07); T3 (poda seca em 22-08-07 e poda verde em 15-11-07), e T4 (poda seca em 22-08-07 e poda verde em 17-12-07), sendo a poda de inverno feita em cordão esporonado, e a poda verde, mediante desponte do sarmento a partir da quarta gema acima do último cacho. Avaliaram-se a produção por planta, a massa dos cachos, os sólidos solúveis totais (SST), a acidez total titulável (ATT), a relação SST/ATT, o potencial da água na folha e a relação folha:fruto, de ambas as safras. Os resultados demonstraram que a execução de uma poda seca associada a uma poda verde permitiu obter duas safras de uva por ciclo vegetativo em 'Niagara Branca', Niagara Rosada e 'Concord', sendo mais eficiente quando a poda seca foi realizada em agosto, associada à poda verde em novembro. A 'Niagara Branca' apresentou maior potencial para produzir uma segunda colheita, comparativamente à 'Niagara Rosada' e 'Concord'. Os frutos oriundos da poda verde apresentaram menor valor de SST, maior ATT e menor relação SST/ATT em relação aos obtidos na safra normal.

Composição de bagas de 'Niágara Rosada' e 'Folha-de-Figo' relacionadas ao sistema de condução

RESUMO Este trabalho teve como objetivo avaliar a influência do sistema de condução na qualidade de bagas de uvas 'Niágara Rosada' e 'Folha-de-Figo' cultivadas em Caldas-MG. Foram avaliados a produção por planta, o diâmetro, a massa, o teor de potássio e a temperatura das bagas, pH, teor de sólidos solúveis, açúcares redutores, acidez total e ácidos orgânicos do mosto, compostos fenólicos nas cascas e sementes, e antocianinas. As plantas foram conduzidas em espaldeira, lira, latada ou cordão simples, e os frutos, avaliados nas safras de 2006 e 2007. As videiras de 'Niágara Rosada' cultivadas em latada e 'Folha-de-Figo' em lira apresentaram produção significativamente superior aos demais sistemas de condução. Em todos os casos, as bagas apresentaram temperatura inferior à ambiente, indicando sombreamento completo ou parcial dos cachos. No sistema latada, houve menor acúmulo de sólidos solúveis e açúcares redutores nas duas cultivares. Estes resultados preliminares indicam que a composição das bagas foi pouco influenciada pelo sistema de condução.

Evolução da maturação e características físico-químicas e produtivas das videiras 'BRS Carmem' e 'Isabel'

O trabalho teve como objetivo avaliar a evolução da maturação e as características físico-químicas e produtivas das uvas 'BRS Carmem' (Vitis labrusca) e 'Isabel' (V. labrusca) enxertadas sobre o porta-enxerto 'IAC 766 Campinas', para a elaboração de suco, no norte do Paraná. As videiras foram conduzidas em espaldeira vertical, em cordão bilateral, no espaçamento de 1,5 x 2,5m. Foram avaliadas semanalmente as características químicas das bagas de 20 plantas representativas de cada cultivar, como teor de sólidos solúveis totais (SST), acidez titulável (AT), índice de maturação (SST/AT) e pH, a partir do início da maturação até a colheita. A evolução da maturação das duas cultivares foi comparada por meio da análise de regressão. No momento da colheita, foram avaliadas a massa e o comprimento dos cachos, a massa e o diâmetro das bagas, e o número de cachos por planta. Foram também estimadas a produção (kg.planta-1) e a produtividade (t.ha-1) das cultivares. A uva 'Isabel' apresentou teor de SST e relação SST/AT (15,3ºBrix e 19,2) superior à 'BRS Carmem' (13,7ºBrix e 15,7). No entanto, para AT e pH não houve diferença significativa entre as cultivares. Para a massa e o comprimento dos cachos, a 'BRS Carmem' (0,09 kg e 15,0 cm) apresentou maiores médias em relação à videira 'Isabel' (0,06 kg e 10,9 cm), não sendo observadas diferenças significativas entre as cultivares em relação às características produtivas. As videiras 'BRS Carmem' e 'Isabel' apresentam matéria-prima adequada para a elaboração de suco, quando produzidas na região norte do Paraná.

Fenologia, exigência térmica e produtividade de videiras 'Niagara Branca', 'Niagara Rosada 'e 'Concord' submetidas a duas safras por ciclo vegetativo

Este trabalho objetivou avaliar a fenologia, a demanda térmica e a produtividade das cvs. Niagara Branca, Niagara Rosada e Concord submetidas a uma poda seca no inverno e a uma poda verde no final da primavera, visando à obtenção de duas safras de uva por ciclo vegetativo. O experimento foi conduzido em vinhedo pertencente à Estação Experimental Agronômica de Eldorado do Sul-RS, na safra de 2007/2008. As plantas foram submetidas a duas épocas de poda de inverno (22-07-07 e 20-08-07), em cordão esporonado, e duas épocas de poda verde (15-11-07 e 17-12-07), mediante desponte do sarmento a partir da quarta gema acima do último cacho. Os subperíodos fenológicos considerados da videira foram: vegetativo, compreendendo da poda à brotação e da brotação à floração; e reprodutivo, abrangendo da floração à colheita. Os respectivos intervalos tiveram um acompanhamento com base no acúmulo de graus-dia. A produção por planta, sólidos solúveis totais e acidez total titulável foram avaliados em ambas as safras. As cultivares necessitaram aproximadamente de 1.500 graus-dia para completar seu ciclo, tanto na primeira como na segunda safra. A poda de inverno antecipada aumentou a duração do ciclo fenológico das plantas comparativamente à poda de agosto, devido ao aumento do subperíodo poda/floração nas videiras podadas precocemente. A antecipação da poda de inverno antecipou a colheita da primeira safra, possibilitando obter uvas precoces com maior valorização de mercado. A duração do ciclo fenológico da segunda safra foi menor se comparada à primeira safra, devido às temperaturas mais elevadas decorridas no desenvolvimento das plantas submetidas à poda verde. A produtividade da segunda safra foi maior quando a poda seca foi realizada em agosto, associada à poda verde em novembro. Nas plantas submetidas à poda verde, obteve-se uma segunda colheita em meados de março/abril, oferecendo vantagens econômicas ao viticultor e ampliando a disponibilidade da fruta ao consumidor.

Cdk5 controls lymphatic vessel development and function by phosphorylation of Foxc2.

The lymphatic system maintains tissue fluid balance, and dysfunction of lymphatic vessels and valves causes human lymphedema syndromes. Yet, our knowledge of the molecular mechanisms underlying lymphatic vessel development is still limited. Here, we show that cyclin-dependent kinase 5 (Cdk5) is an essential regulator of lymphatic vessel development. Endothelial-specific Cdk5 knockdown causes congenital lymphatic dysfunction and lymphedema due to defective lymphatic vessel patterning and valve formation. We identify the transcription factor Foxc2 as a key substrate of Cdk5 in the lymphatic vasculature, mechanistically linking Cdk5 to lymphatic development and valve morphogenesis. Collectively, our findings show that Cdk5-Foxc2 interaction represents a critical regulator of lymphatic vessel development and the transcriptional network underlying lymphatic vascular remodeling.

Doença de Mondor: achados mamográficos e ultra-sonográficos

A doença de Mondor da mama é uma tromboflebite superficial da mama que se apresenta como um cordão fibroso e espessado na região subcutânea da mama. É uma enfermidade rara, benigna e autolimitada que apresenta dor e retração da pele no nível do vaso afetado. Neste trabalho relatamos dois casos mostrando os achados mamográficos (caso 1) e ultra-sonográficos (caso 2) típicos desta anomalia.

Aspectos ultra-sonográficos da trombose da veia porta

A trombose da veia porta pode estar associada a várias alterações, como a presença de tumores (por exemplo: hepatocarcinoma, doença metastática hepática e carcinoma do pâncreas), pancreatite, hepatite, septicemia, trauma, esplenectomia, derivações porto-cava, estados de hipercoagulabilidade (por exemplo: gravidez), em neonatos (por exemplo: onfalite e cateterização da veia umbilical) e desidratação aguda. Os autores discutem, neste artigo, os aspectos ultra-sonográficos da trombose de veia porta e alguns aspectos de relevância clínica.

Obstrução intestinal pós-gastroplastia redutora pela técnica de higa para tratamento da obesidade mórbida: aspectos por imagem

OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi descrever os principais aspectos radiológicos encontrados nas obstruções intestinais pós-operatórias em pacientes submetidos a derivação gastrintestinal em Y de Roux pela técnica de Higa. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram estudados 10 pacientes com obstrução intestinal no pós-operatório de gastroplastia redutora, examinados entre novembro de 2001 e abril de 2006. Os casos foram obtidos em sete instituições hospitalares distintas. RESULTADOS: Nos 10 pacientes, a obstrução ocorreu em alça de delgado, sendo cinco por hérnia interna, três por brida, um por hérnia umbilical e um por intussuscepção gástrica. Em quatro pacientes a obstrução ocorreu precocemente (até o sétimo dia de pós-operatório) e em seis aconteceu tardiamente (entre o terceiro mês e cinco anos de pós-operatório). CONCLUSÃO: Todos os casos de obstrução intestinal ocorreram ao nível do intestino delgado. A hérnia interna foi a causa mais freqüente, seguida de brida. Outras causas foram hérnia umbilical e intussuscepção gástrica.