Xylanolytic complex from Aspergillus giganteus: production and characterization

An Aspergillus giganteus strain was isolated as an excellent producer of xylanase associated with low levels of cellulase. Optimal xylanase production was obtained in liquid VOGEL medium containing xylan as carbon source, pH 6.5 to 7.0, at 25degreesC and. under shaking at 120 rpm during 84h. Among the several carbon sources tested, higher xylanase production was verified in xylan, xylose, sugar-cane bagasse, wheat bran and corn cob cultures, respectively. Optimal conditions for activity determination were 50degreesC and pH 6.0. The xylanolytic complex of A. giganteus showed low thermal stability with T-50 of 2 h, 13 min and I min when it was incubated at 40, 50 and 60degreesC, respectively, and high stability from pH 4.5 to 10.5, with the best interval between 7.0 to 7.5. This broad range of stability in alkali pH indicates a potential applicability in some industrial processes, which require such condition. Xylanolytic activity of A. giganteus was totally inhibited by Hg+2, Cu+2 and SDS at 10 mm. The analysis of the products from the oat spelts xylan hydrolysis through thin-layer chromatography indicated endoxylanase activity, lack of debranching enzymes and P-xylosidase activity in assay conditions.

Purification, characterization and crystallization of Jararacussin-I, a fibrinogen-clotting enzyme isolated from the venom of Bothrops jararacussu

A fibrinogen-clotting enzyme, Jararacussin-I, was purified from the venom of Bothrops jararacussu by a combination of ion exchange chromatography using Resource 15S resin and affinity chromatography using Benzamidine Sepharose 6B resin. Jararacussin-I displays a molecular mass of 28 kDa as estimated by sodium dodecyl sulphate-PAGE and possesses an isoetectric point of 5.0. The coagulant specific activity of the enzyme was determined to be 45.8 NIH U/mg using bovine fibrinogen as the substrate and the esterase specific activity was determined to be 258.7 U/mg. The protease inhibitors, benzamidine and DTT inhibited the esterase specific activity by 72.4 and 69.7%, respectively. The optimal temperature and pH for the degradation of both chains of fibrinogen and esterase specific activity were determined to be 37 degreesC and 7.4-8.0, respectively. The enzyme was inactivated at both 4 and 75 T. Single crystals of Jararacussin-I were obtained and complete three-dimensional X-ray diffraction data was collected at the Brazilian National Synchrotron Source (LNLS) to a resolution of 2.4 Angstrom. (C) 2002 Published by Elsevier B.V. Ltd.

Crystallization and preliminary crystallographic analysis of SMase I, a sphingomyelinase from Loxosceles laeta spider venom

SMase I, a 32 kDa sphingomyelinase found in Loxosceles laeta venom, is responsible for the major pathological effects of spider envenomation. This toxin has been cloned and functionally expressed as a fusion protein containing a 6 x His tag at its N-terminus to yield a 33 kDa protein [Fernandes-Pedrosa et al. (2002), Biochem. Biophys. Res. Commun. 298, 638 - 645]. The recombinant protein possesses all the biological properties ascribed to the whole L. laeta venom, including dermonecrotic and complement-dependent haemolytic activities. Dynamic light-scattering experiments conducted at 291 K demonstrate that the sample possesses a monomodal distribution, with a hydrodynamic radius of 3.57 nm. L. laeta SMase I was crystallized by the hanging-drop vapour-diffusion technique using the sparse-matrix method. Single crystals were obtained using a buffer solution consisting of 0.08 M HEPES and 0.9 M trisodium citrate, which was titrated to pH 7.5 using 0.25 M sodium hydroxide. Complete three-dimensional diffraction data were collected to 1.8 Angstrom at the Laboratorio Nacional de Luz Sincrotron (LNLS, Campinas, Brazil). The crystals belong to the hexagonal system ( space group P6(1) or P6(5)), with unit-cell parameters a = b = 140.6, c = 113.6 Angstrom. A search for heavy-atom derivatives has been initiated and elucidation of the crystal structure is currently in progress.

Roughness of Human Enamel Surface Submitted to Different Prophylaxis Methods

The purpose of this in vitro study was to evaluate alterations in the surface roughness and micromorphology of human enamel submitted to three prophylaxis methods. Sixty-nine caries-free molars with exposed labial surfaces were divided into three groups. Group I was treated with a rotary instrument set at a low speed, rubber clip and a mixture of water and pumice; group II with a rotary instrument set at a low speed, rubber cup and prophylaxis paste Herjos-F (Vigodent S/A Industria e Comercio, Rio de Janeiro, Brazil); and group III with sodium bicarbonate spray Profi II Ceramic (Dabi A dante Indtistrias Medico Odontologicas Ltda, Ribeirao Preto, Brazil). All procedures were performed by the same operator for 10 s, and samples were rinsed and stored in distilled water. Pre and post-treatment surface evaluation was completed using a surface profilometer (Perthometer S8P Marh, Perthen, Germany) in 54 samples. In addition, the other samples were coated with gold and examined in a scanning electron microscope (SEM). The results of this study were statistically analyzed with the paired t-test (Student), the Kruskal-Wallis test and the Dunn (5%) test. The sodium bicarbonate spray led to significantly rougher surfaces than the pumice paste. The use of prophylaxis paste showed no statistically significant difference when compared with the other methods. Based on SEM analysis, the sodium bicarbonate spray presented an irregular surface with granular material and erosions. Based on this study, it can be concluded that there was an increased enamel stuface roughness when teeth were treated with sodium bicarbonate spray when compared with teeth treated with pumice paste.

Avaliação dos níveis séricos de testosterona em pacientes com síndrome da apneia obstrutiva do sono

Homens com síndrome da apneia obstrutiva do sono (SAOS) podem apresentar diminuição dos níveis de testosterona devido à hipóxia. OBJETIVOS: Relacionar os níveis séricos da testosterona, em pacientes com SAOS, com parâmetros clínico-laboratoriais. MATERIAL E MÉTODOS: Foram revisados 103 prontuários de pacientes com SAOS, entre os anos de 2002 e 2009, e coletados os seguintes dados: idade à época da realização da polissonografia, valores do Hematócrito e Hemoglobina, nível sérico da testosterona total, IMC, índice de apneia/hipopneia(IAH) e SatO2. FORMA do ESTUDO: Estudo de casos retrospectivo em corte transversal. RESULTADOS: 79 pacientes (77%) não apresentaram alteração hormonal e 24 (23%) apresentaram níveis séricos inferiores. Dos pacientes com testosterona normal 70% estavam com sobrepeso, enquanto que 63% com testosterona alterada apresentaram obesidade grau I (p<0,05). Os pacientes com testosterona alterada apresentaram as dosagens médias do Ht e da Hb e dos níveis médios do andrógeno significantemente inferiores aos dos pacientes sem alteração androgênica. A média do IMC dos pacientes com alteração hormonal foi significativamente maior que a média daqueles sem alteração. CONCLUSÃO: A relação entre o perfil sérico da testosterona matinal e a obesidade e, em menor grau, a idade, o IAH e a hipóxia, podem ser responsáveis pela supressão central da testosterona nesses pacientes. A queda dos valores hematimétricos pode ser relacionada aos baixos níveis circulantes da testosterona.

Aplicação tardia de glyphosate e estande e desenvolvimento inicial do arroz em sistema de cultivo mínimo

O controle de plantas daninhas na cultura do arroz é ainda um problema, mesmo em cultivo mínimo, em razão do revolvimento do solo na linha de semeadura, que proporciona o reaparecimento de infestantes. Assim, objetivou-se estudar o efeito do atraso da aplicação de glyphosate sobre a formação do estande e o desenvolvimento inicial das plantas de arroz cv. IAC 102 irrigado por inundação. O experimento foi conduzido sob túnel plástico, em caixas d'água de 500 L, contendo NEOSSOLO FLÚVICO Ta Eutrófico. O delineamento experimental foi o de blocos casualizados, com quatro repetições. Os tratamentos consistiram da aplicação de glyphosate: seis horas antes da semeadura do arroz (testemunha); no início da emergência; três dias após a emergência; e seis dias após, sem e com lâmina d'água. A dose do herbicida foi de 1.920 g i.a. ha-1. Para todas as variáveis analisadas houve efeito significativo dos tratamentos; aos 42 dias após a emergência, constatou-se que a testemunha foi estatisticamente superior, na formação do estande, na altura de plantas, no comprimento de raiz e na massa seca das partes aérea e de raiz, aos demais tratamentos em que ocorreram atrasos na aplicação do glyphosate.

Controle de plantas daninhas pelo amicarbazone aplicado na presença de palha de cana-de-açúcar

Considerando que a palha pode alterar a dinâmica e a eficácia dos herbicidas no sistema de cana-crua e complementar a ação destes, o objetivo deste trabalho foi verificar a eficácia do amicarbazone no controle de plantas daninhas presentes em variadas circunstâncias, incluindo a possibilidade de absorção do herbicida diretamente da palha de cana-de-açúcar. Para isso, conduziu-se um experimento em vasos com quatro repetições, em que, além das testemunhas com e sem palha, o amicarbazone foi aplicado em diferentes situações: sobre 5 t ha-1 de palha; sobre o solo posteriormente recoberto com 5 t ha-1 de palha; sobre o solo sem cobertura de palha e com ou sem simulação de distintas quantidades de chuva aplicada antes ou após aplicação do produto. A dose de amicarbazone aplicada foi de 1.400 g ha-1 de ingrediente ativo (i.a.), com consumo de calda equivalente a 200 L ha-1. As plantas daninhas utilizadas foram Brachiaria plantaginea, Brachiaria decumbens, Ipomoea grandifolia e Cyperus rotundus. Avaliaram-se a porcentagem de controle das plantas daninhas aos 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 e 56 DAA, nos tratamentos em que o amicarbazone foi aplicado em pré-emergência, e aos 3, 10, 17, 24, 31 e 38 DAA, quando o herbicida foi aplicado em pós-emergência; a biomassa seca aos 56 ou 38 DAA; e a viabilidade dos tubérculos de C. rotundus, pelo teste de tetrazólio na última avaliação. Verificou-se que, independentemente da planta daninha avaliada, os maiores índices de controle foram alcançados quando o amicarbazone foi aplicado sobre a palha, simulando-se em seguida precipitação correspondente a 2,5 ou 30 mm de chuva, e nos tratamentos em que o herbicida foi aplicado diretamente no solo desnudo ou recoberto com palha. Dessa forma, para I. grandifolia, B. plantaginea e B. decumbens, patamares mais elevados de controle foram alcançados quando o amicarbazone atingiu o solo, tanto aplicado diretamente como quando lixiviado da palha pela chuva simulada após a aplicação. Já para C. rotundus, as maiores porcentagens de controle foram observadas quando o amicarbazone foi aplicado sobre a palha, com simulação de chuva imediatamente após a aplicação, evidenciando que a lixiviação pode ser um processo fundamental para uma apropriada absorção e eficácia do herbicida avaliado.

Associação do herbicida tebuthiuron com a cobertura de palha no controle de plantas daninhas no sistema de cana-crua

O objetivo da presente pesquisa foi verificar a eficácia do herbicida tebuthiuron no controle de plantas daninhas quando associadas à presença de palha de cana-de-açúcar. Para isso, conduziu-se um experimento em condições controladas em casa de vegetação, utilizando-se vasos com quatro repetições, onde, além das testemunhas com e sem palha, o tebuthiuron foi aplicado em diferentes situações: sobre 5 t de palha ha-1; sobre o solo posteriormente recoberto com 5 t de palha ha-1; sobre o solo sem cobertura de palha; e com ou sem simulação de distintas quantidades de chuva aplicada antes ou após a aplicação do produto. A dose de Combine 500 SC (tebuthiuron) aplicada foi de 1.000 g i.a. ha-1, com consumo de calda equivalente a 200 L ha-1. As plantas daninhas presentes no experimento foram Brachiaria plantaginea, Brachiaria decumbens e Ipomoea grandifolia. Avaliou-se a porcentagem de controle das plantas daninhas aos 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 e 56 DAA nos tratamentos em que o tebuthiuron foi aplicado em pré-emergência e aos 3, 10, 17, 24, 31 e 38 DAA, quando o herbicida foi aplicado em pós-emergência; e a biomassa seca aos 56 ou 38 DAA. Verificou-se que, independentemente da planta daninha avaliada, os maiores índices de controle foram alcançados quando o tebuthiuron foi aplicado sobre a palha, simulando-se em seguida precipitação correspondente a 2,5 ou 30 mm de chuva, e nos tratamentos em que o herbicida foi aplicado diretamente no solo desnudo ou recoberto com palha. Dessa forma, para I. grandifolia, B. plantaginea e B. decumbens, os índices mais elevados de controle foram alcançados quando o tebuthiuron atingiu o solo, tanto aplicado diretamente como quando lixiviado da palha pela chuva simulada após a aplicação.

Simulação da dinâmica operacional de uma linha industrial de abate de suínos

Este trabalho teve como objetivo implementar um modelo computacional para simular a dinâmica operacional de uma linha industrial de abate de suínos. O sistema real modelado pertence à empresa Frigorífico Frimesa, sediada no município de Medianeira (PR). O modelo implementado é tipo dinâmico, discreto e estocástico. Este simula 34 operações unitárias e foi estruturado com o uso da linguagem de simulação EXTEND TM. Para validação do modelo foram coletados dados relativos a cinco dias de operação, em que foram abatidos 1.346, 1.630, 1.360, 1.585 e 1.550 suínos, respectivamente. Como parâmetros de comparação entre os dados obtidos a partir do sistema e gerados pelo modelo foram selecionadas as seguintes variáveis: (i) tempo de duração da operação; (ii) tempo de deslocamento da insensibilização até a depiladeira; (iii) tempo deslocamento da insensibilização até a câmara fria; (iv) número de carcaças re-inspecionadas; e (v) número final de carcaças. Na validação do modelo, foi constatado que, para a variável tempo de duração da operação por meio do teste Tukey a 1% de significância, não foram detectadas diferenças estatísticas entre os valores obtidos do sistema real e os gerados pelo modelo. Considerando-se esta e outras análises, foi concluído que o modelo aplica-se à finalidade para a qual foi implementado. Sendo assim, foram realizadas duas análises de sensibilidade. Na primeira, ao alterar o número de suínos a abater de 1 mil para 2 mil, foi determinado que os tempos de duração da operação variariam de 6,20 a 10,10 h, respectivamente. Para a segunda, ao abater 1.340 suínos e alterar a velocidade das nórias de 300 para 600 animais por hora, o tempo de duração da operação passou de 8,10 para 7,40 h, respectivamente.

Clinical research on new drugs (Phase I). Profile of scientific publications: data from the pre-clinical phase and bioethical aspects

OBJETIVO: Traçar o perfil das publicações científicas de fase I e procurar saber se a publicação oferece dados da fase pré-clínica com ênfase nos aspectos bioéticos. MÉTODOS: Foram analisados 61 artigos científicos publicados no ano de 2007, que relatam pesquisas envolvendo seres humanos com novos fármacos, medicamentos ou vacinas em fase I. Foi elaborado um roteiro para coleta de dados, com o qual fosse possível analisar e avaliar os artigos científicos. O roteiro contempla itens referentes à fase pré-clínica (associados à fase clínica) e itens referentes às características da amostra. RESULTADOS: Nos artigos analisados, a maioria das pesquisas foi realizada nos EUA. Devido ao grande número de publicações destinadas às doenças oncológicas a maioria delas foi realizada com voluntários doentes. Quanto às informações sobre a fase pré-clínica presente nas publicações de fase I observamos que são pobres ou inexistentes. Mesmo que os autores julguem a pesquisa fase I como promissora e sugiram estudos futuros de fase II, ao leitor não é possível este mesmo julgamento pela escassez de informações da fase pré-clínica. CONCLUSÃO: O perfil das publicações levanta dados que merecem reflexão e análise para melhor avaliação do que está ocorrendo com as publicações de fase I.

A influência da redução do espaço nasofaringeano na morfologia facial de pré-adolescentes

A redução do espaço nasofaringeano devido à hipertrofia adenoideana leva a adaptações posturais da cabeça, mandíbula, língua e lábios, podendo causar alterações no padrão esquelético facial. Foram coletadas 98 teleradiografias em norma lateral de pré-adolescentes na faixa etária de 7 a 10 anos na Clínica de Ortodontia da F.O. Araraquara, as quais foram selecionadas levando-se em consideração a dimensão da imagem do espaço nasofaringeano (ENF) (correspondente à menor distância do dorso do palato mole à parede faringeana posterior). As radiografias foram divididas em 3 grupos: Grupo I (estreito), ENF entre 1,7 e 5,1mm; Grupo II (médio), ENF entre 5,2 e 7,6mm; Grupo III (amplo), ENF entre 7,7 e 12,9mm. Utilizamos duas medidas angulares e seis medidas lineares para caracterizar a morfologia facial. As médias e o desvio padrão de cada medida efetuada foram obtidas, e por meio de teste de análise de variância (ANOVA), verificou-se diferença não significativa entre os grupos para as variáveis: ANperp, p=0,07; PgNperp, p=0,058, comprimento mandibular, p=0,15, comprimento maxilar, p=0,06, diferença maxilomandibular, p=0,98, eixo facial, p=0,96, altura facial inferior, p=0,84 e significativa na variável plano mandibular (p<0,01). Portanto, a redução do espaço nasofaringeano está associada a alterações no plano mandibular, que apresentou valores maiores com a diminuição do espaço nasofaringeano.

Characterization of an unidentified Sarcocystis falcatula-like parasite from the South American opossum, Didelphis albiventris from Brazil

An unidentified isolate of a Sarcocystis falcatula-like parasite was obtained from the lungs of budgerigars (Melopsittacus undulatus) fed sporocysts from a naturally-infected South American opossum, Didelphis albiventris from Brazil. Four captive budgerigars fed sporocysts from the opossum intestine died of acute sarcocystosis 8, 10, and 12 days after oral inoculation (DAI); one budgerigar was killed 12 DAI when it was lethargic. Schizonts and merozoites found in the lungs of the budgerigars reacted mildly with polyclonal S. falcatula antibody. The parasite was isolated in equine kidney cell cultures inoculated with lung tissue from a budgerigar that was killed 12 DAI. Two budgerigars inoculated subcutaneously with 100,000 culture-derived S. falcatula merozoites developed acute sarcocystosis and S. falcatula-like schizonts were found in their lungs 15 and 16 DAI. Four budgerigars kept as unfed controls in the same environment remained free of Sarcocystis infection. The parasite underwent schizogony in African green monkey kidney cells and bovine turbinate cells. Merozoites divided by endopolygeny, often leaving a residual body. Polymerase chain reaction studies using primers JNB33/JNB54 and Hinf I and Dra I digestion indicated that the isolate was not S. falcatula. Results of this study indicated that the South American opossum, D. albiventris, is a definitive host for yet another S. falcatula-like parasite.

Feeding habit of the Amazon river prawn Macrobrachium amazonicum larvae

To investigate the feeding habit of Macrobrachium amazonicum, three experiments were carried out assessing the stage at which larvae start exogenous feeding, the acceptance of inert food by different larval stages and the ratio between live and inert diet ingested by larvae at each larval stage. In the first experiment, newly hatched larvae were kept in 500-mL beakers and fed from stages I, II or III onward. Larval survival was not affected by the larval stage at which exogenous feeding started, but mean weight gain was lower when food was offered from stage III onward. In the second experiment, 60 larvae from each stage (I to IX) were fasted for 2 h and then fed on inert diet in excess. Only larvae from stage IV onward accepted this inert diet. In the last experiment, newly hatched larvae were stocked in a larviculture tank and fed daily on both Artemia nauplii and inert diet. After 15 min, food content in the digestive tract of individual larvae was analyzed under stereomicroscopy. Larvae in stage I did not feed, while live food was accepted from stage II onward and inert food from stage III onward. Larvae in stages IV, V and VI accepted both foods with no preference, while inert food was predominant in stages VII to IX In conclusion, to feed M amazonicum larvae on Artemia before stage II or on inert diet before stage IV is unnecessary. It increases production costs and may impair water quality. From stages IV to VI, feeding on Artemia and inert diet is probably necessary, while inert diet should be the main food item from stage VII onward. This schedule may optimize feeding management and production costs. (c) 2007 Elsevier B.V. All lights reserved.

Purification and characterization of beta-fructosidase with inulinase activity from Aspergillus niger-245

Aspergillus niger - 245 a strain isolated from soil samples showed good beta -fructosidase activity when inoculated in medium formulated with dahlia extract tubers. The enzyme was purified by precipitation in ammonium sulphate and percolated in DEAE-Sephadex A-50 and CM-cellulose columns, witch showed a single peack in all the purification steps, maintaining the I/S ratio between 0.32 to, 0.39. Optimum pH for inulinase activity (I) was between 4.0 - 4.5 and for invertase activity (S) between 2.5 and 50. The optimum temperature was 60 degrees .C for both activities and no loss in activity was observed when it was maintained at this temperature for 30 min. The K-m value was 1.44 and 5.0 respectively, for I and S and V-m value 10.48 and 30.55 respectively. The I activity was strongly inhibited by Hg2+ and Ag+ and 2 x 10(-3) M of glucose, but not by fructose at the same concentration. The enzyme showed an exo-action mechanism acting on the inulin of different origins. In assay conditions total hydrolysis of all the frutans was obtained although it has shown larger activity on the chicory inulin than that one from artichoke Jerusalem and dahlia, in the first 30 min. The obtained results suggested that the enzyme presented good potential for industrial application in the preparing the fructose syrups.

Purification and characterization of jararassin-I, a thrombin-like enzyme from Bothrops jararaca snake venom

A thrombin-like serine protease, jararassin-I, was isolated from the venom of Bothrops jararaca. The protein was obtained in high yield and purity by a single chromatographic step using the affinity resin Benzamidine-Sepharose CL-6B. SDS-PAGE and dynamic light scattering analyses indicated that the molecular mass of the enzyme was about 30 kD. The enzyme possessed fibrinogenolytic and coagulant activities. The jararassin-I degraded the Bbeta chain of fibrinogen while the Aalpha chain and gammachain were unchanged. Proteases inhibitors, PMSF and benzamidine inhibited the coagulant activity. These results showed jararassin-I is a serine protease similar to coagulating thrombin-like snake venom proteases, but it specifically cleaves Bbeta chain of bovine fibrinogen. Single crystals of enzyme were obtained (0.2 mmx0.2 mmx0.2 mm) and used for X-ray diffraction experiments.