Análise fitoquímica comparativa de flores e folhas de Casearia sylvestris SWARTZ

Casearia sylvestris Swartz (Salicaceae), conhecida como guaçatonga, é uma espécie vegetal distribuída amplamente pela América do Sul, ocorrendo em 22 estados brasileiros. Na medicina popular é utilizada no tratamento de picadas de cobra, úlceras gástricas, como cicatrizante, anti-inflamatório e antisséptico tópico. Extratos de suas folhas demonstraram atividade antiulcerogênica, anti-inflamatória e citotóxica em células tumorais, dentre outras. Diversos metabólitos secundários foram isolados e/ou identificados principalmente de suas folhas, incluindo monoterpenos, sesquiterpenos, diterpenos, compostos fenólicos, etc. Apesar do extenso conhecimento sobre ações farmacológicas e sobre a fitoquímica das folhas, há apenas um trabalho publicado sobre metabólitos secundários de suas flores. Portanto, foi proposto neste trabalho realizar análises cromatográficas e espectrométricas de extratos de folhas e flores de C. sylvestris Swartz com o objetivo de comparar os perfis químicos destes órgãos com ênfase em terpenos. Os extratos produzidos com diferentes solventes (hexano: acetato de etila: isopropanol; hexano e etanol 70 %) de folhas e flores foram obtidos por sonicação com rendimentos variando entre 0,03 e 23,39% (m/m), sendo os maiores rendimentos obtidos com etanol 70 %. Os óleos essenciais de folhas e flores foram obtidos por extração por arraste a vapor d`água e foram analisados por cromatografia em fase gasosa e o componente majoritário apresentado foi o biciclogermacreno, tanto em folhas como em flores; o óleo essencial de flores demonstrou ser mais complexo. Os extratos foram analisados por cromatografia em camada delgada e cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos. Os dados de cromatografia em camada delgada sugerem um perfil químico praticamente idêntico para folhas e flores, o que não foi confirmado pelas análises por cromatografia líquida de alta eficiência que ...

Análise do envolvimento do fator de início de tradução de eucariotos 5A (eIF5A) na translocação de proteínas para o retículo endoplasmático em Saccharomyces cerevisiae

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Atividade antimicrobiana da violaceína em linhagens isoladas de mastite bovina

Violacein is a deeply violet pigment produced by Chromobacterium violaceum, an ubique tropical and subtropical bacterium. This molecule presents many biological activities including antimicrobial, antimycotic, antiviral, antiprotozoal and antitumoral. Important reports pointed to a considerable bactericide activity, which brings an extremely necessary quest. This work evaluated the resistance of some bacterias of interest veterinary. It was obtained significant inhibition activity against Staphylococcus aureus came from bovine mastitis. It was also obtained important synergic relations when violacein and penicillin or cloranphenicol are combined

Seleção de bactérias fenololíticas para tratamento de efluentes de refinarias de petróleo

Os efluentes de indústrias, como refinarias e petroquímicas, frequentemente contém elevadas concentrações de substâncias tóxicas, dentre elas, os compostos fenólicos. Estas substâncias, mesmo em pequenas quantidades, afetam as propriedades organolépticas da água, além de que durante o processo de cloração da água potável, podem ser transformadas em clorofenóis e policlorofenóis, pela reação com o cloro, formando substâncias com características carcinogênicas. Neste sentido, o refino do petróleo produz grande variedade de poluentes cujas propriedades modificam-se em função dos processos utilizados. Os fenóis são compostos tóxicos, com características fungicida e desinfetante, sendo tóxico para a maioria dos microrganismos, além de apresentarem ação de carcinogenicidade, mutagenicidade e serem recalcitrantes, acumulam-se nos corpos receptores, gerando danos à saúde e à vida aquática. No entanto, embora o fenol possua ação bactericida, alguns microrganismos adquiriram a habilidade de se adaptar e utilizar este composto como fonte de carbono e energia. O presente trabalho pretendeu selecionar linhagens bacterianas, a partir do efluente de uma refinaria de petróleo, da região de Paulínia – SP, que sejam capazes de utilizar altos teores de fenóis como fonte de carbono e energia para seu crescimento e desenvolvimento, a fim de serem aplicadas nas estações de tratamento de efluentes industriais, com foco nas refinarias de petróleo. Foram isoladas 3 linhagens a partir das amostras enriquecidas do efluente da refinaria e, após os ensaios, constatou-se que 1 linhagem apresentou resistência à concentração de fenol de 1.000 mg.L-1. Os ensaios de biodegradação e crescimento em fenol como única fonte de carbono, demonstraram que estas linhagens são capazes de biodegradar aproximadamente 20% do fenol disponível no meio, no período de 24 horas. A quantificação do fenol residual foi realizada em...

Avaliação da estabilidade da capacidade de produção de cefamicina C por Streptomyces clavuligerus

Streptomyces clavuligerus é uma importante espécie industrial que produz múltiplos compostos de interesse clínico, destacando-se o antibiótico cefamicina C (CefC) e o ácido clavulânico (AC), um potente inibidor de b-lactamases produzidas por bactérias resistentes a penicilinas e cefalosporinas. Sabe-se que situações limite como subculturas sucessivas, forma inadequada de armazenamento das células, variações bruscas de condições de cultura, podem causar deleções de mais de 25% dos genes de Streptomyces sp que, embora muitas vezes não comprometam a sobrevivência do micro-organismo, acarretam perdas na capacidade produtiva. Neste trabalho, investigou-se a estabilidade da linhagem selvagem S. clavuligerus ATCC 27064 quanto à produção de CefC variando-se condições do inóculo utilizado nos cultivos submersos de obtenção do antibiótico. As fermentações foram realizadas em frascos agitados (28ºC, 260 rpm) e as amostras coletadas em 48 e 72 horas do caldo fermentativo foram analisadas quanto ao pH, biomassa (massa seca a 105ºC por 24 h) e CefC foi determinada por bioensaio de difusão em ágar (bactéria-teste Escherichia coli ESS 2235). Foi selecionado o micro-organismo melhor produtor por meio de screening, e o que apresentou a melhor produção de CefC e os menores desvios com relação à média foi utilizado para preparar novos lotes de células: ampolas de micélios liofilizados e criotubos contendo 108 esporos.mL-1 . Observou-se que a capacidade produtiva foi afetada quando foram utilizadas subculturas do micro-organismo original. A realização do screening mostrou-se eficiente na seleção de colônias superiores em termos de produção volumétrica, sendo recomendada a realização de tal procedimento periodicamente para manutenção de uma linhagem com maior potencial produtivo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Estudo das interações in vivo entre as proteínas teloméricas LaRPA-1 e LaRbp38 usando o sistema do duplo híbrido

A leishmaniose é um conjunto de doenças infecciosas causadas por parasitas do gênero Leishmania, que afligem milhões de pessoas no mundo, tendo a cada ano dois milhões de novos casos e 70 mil mortes. As drogas utilizadas no tratamento das diferentes formas clínicas da doença apresentam alta toxicidade e baixa eficácia, além de apresentarem muitos efeitos colaterais e colaborarem com o aparecimento de parasitas e vetores resistentes. Devido a estas adversidades, o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento desta parasitose é incentivada pela Organização Mundial da Saúde (OMS) e um maior conhecimento sobre a biologia molecular destes protozoários poderá facilitar estas descobertas. Ultimamente, os telômeros, estruturas nucleoproteícas nos terminais dos cromossomos de eucariotos, têm sido alvo intenso de estudos, que visam utilizá-los como alvo terapêutico contra tumores malignos e microrganismos patogênicos. Os telômeros geralmente se apresentam como estruturas dinâmicas onde ocorrem interações entre o DNA e proteínas, resultando na formação do complexo telomérico, que é responsável pela proteção e manutenção dos cromossomos e estabilidade do genoma, caracterizando uma função imprescindível para viabilidade celular. Componentes do complexo telomérico de Leishmania amazonensis foram identificados por ensaios bioquímicos em extratos positivos para a atividade de telomerase. Entre estes componentes identificou-se as proteínas LaRPA-1 (L. amazonensis Replication Protein A-1) e a LaRbp38 (L. amazonensis RNA binding protein) as quais mostraram habilidade de interagir com o DNA telomérico in vitro e in vivo. Mais recentemente, utilizando-se ensaios de imunoprecipitação e de captura por “pull-down” foi demonstrado que estas proteínas fazem parte de um mesmo complexo nos telômeros do parasita. Este trabalho pretende confirmar estas possíveis interações entre as proteínas teloméricas LaRPA-1 e ...

Desenvolvimento de vasos digestores de amostra para microondas doméstico

The application of microwave radiation on the sample preparation has been expanding increasingly in areas involving decomposition by wet and dry roads, fusion, extraction, acceleration of chemical reactions, for example. Currently, the use of microwave ovens for analytical purposes are recognized for having excellent performance for organic and inorganic samples. In the international market there are several kinds of microwaves oven which adapt the varied purposes, however yet with elevated prices which incapacitate your use as routine equipment in laboratory. Thus, many researchers have been choosing for developing own projects of microwaves oven production or to use domestic oven for the laboratory, with or without adaptations. For the evaluation of the proposed method was used in the Kjeldahl methodology for determining total nitrogen in samples of crude protein, using a domestic microwave oven and a digester pot made up in TeflonTM and distillation by steam. Were made to adapt and characterization of a domestic microwave oven, the confeccion vessel digester and the metal support for the vessel. The accuracy of the proposed method was confirmed by comparison of two methods, the standard method for conventional heating and by the proposed method, with heating by microwave radiation through the calculated values of relative standard deviation analysis

Antagonismo de actinobactérias isoladas de Trachymyrmex frente ao fungo parasita Escovopsis

As formigas da tribo Attini mantêm uma associação com actinobactérias encontradas nos biofilmes presentes no integumento desses insetos. Dentre as actinobactérias associadas às formigas Attini, os gêneros Pseudonocardia e Streptomyces são considerados prevalentes. Estudos indicam que essas bactérias auxiliam na defesa do jardim contra patógenos através da secreção de compostos antimicrobianos. Recentemente foi sugerido que tais bactérias podem ser importantes na defesa do próprio inseto, especialmente contra entomopatógenos. Duas teorias principais foram propostas para explicar as interações entre actinobactérias, formigas Attini e o microfungo parasita Escovopsis. Uma delas defende a coevolução entre esses organismos e a outra rejeita a existência da mesma, argumentando que a interação formiga-actinobactéria é uma simbiose aberta. Neste trabalho, avaliamos a interação entre actinobactérias e Escovopsis em experimentos in vitro. Um total de 14 linhagens de actinobactérias, compreendendo 12 de Pseudonocardia, uma de Streptomyces e uma de Actinoplanes, isoladas de Trachymyrmex (um gênero de formiga Attini não cortadeira) foram testadas frente a quatro linhagens de Escovopsis. Os Escovopsis foram isolados tanto de jardins de fungos de formigas Trachymyrmex quanto de cortadeiras de folhas (Acromyrmex e Atta). O crescimento micelial de Escovopsis (em cm²) foi medido na presença e na ausência (controle) das actinobactérias. Os resultados demonstraram que todas as actinobactérias testadas inibiram Escovopsis, mas as taxas de inibição foram variáveis dependendo da linhagem da actinobactéria (p < 0,05). A linhagem de Streptomyces foi a mais efetiva, corroborando dados da literatura que indicam que outros micro-organismos, além de Pseudonocardia, também apresentam ação inibitória frente à Escovopsis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Avaliação de métodos de triagem e de detecção fenotípica de ß-lactamase de espectro ampliado (ESBL)

The catalytic function of extended-spectrum β-lactamases can result in high degrees of bacterial resistance to β-lactamic antimicrobials and in the emergence of ESBL among the members of Enterobacteriaceae family, especially Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli. This occurs due to the dissemination and emergence of new variants of these enzymes caused by the high utilization of antibiotics like broad-spectrum cephalosporins. The ESBL are β-lactamases capable of conferring bacterial resistance to the penicillins, 1st, 2nd and 3rd generation cephalosporins, and aztreonam (but not cephamycins and carbapenems) through the hydrolysis of these antibiotics. In view of this phenomenon, the exact screening and detection of the producers of ESBL are essential for the appropriate selection of the antimicrobial therapy. The purposes of this study were to evaluate the best antimicrobial for the selection of ESBL producers and to determine the best method for the detection of such microorganisms. We evaluated 200 sequential bacterial samples including the species Klebsiella pneumoniae (56.5%), Escherichia coli (34%), Proteus mirabilis (8.5%) and Klebsiella oxytoca (1%), previously characterized as ESBL producers between February and September 2008 in the Laboratory of Microbiology, Botucatu Medical School - UNESP, Botucatu, São Paulo State, Brazil. To select the ESBL-producer bacteria, we used the disks recommended by CLSI 2008, aztreonam (ATM), cefpodoxime (CPD), ceftriaxone (CRO), cefotaxime (CTX) and ceftazidime (CAZ), besides cefepime (FEP). ESBL production was confirmed by three methods: double disk screening, ESBL Etest®, and Vitek® automated system. The disks employed in the double disk screening were: penicillin associated with β-lactamase inhibitor, amoxicillin-clavulanic acid, and two β-lactamic antibiotics, ceftazidime and cefotaxime...(Complete abstract click electronic access below)

Análise da qualidade microbiológica em leite pasteurizado, tipo C, recém pasteurizado e na data de validade

The conservation of raw milk for long periods of time under refrigeration can result in the lost of its quality. This happens because bacterias, capable of developing in low temperatures, as psichrotrophics, in milk, associates with its enzymatic activities, are capable to degradate it. Although the pasteurization of milk sufficiently diminishes the transmission of the illnesses, that generally eliminates such microorganisms, is not a total efficient process because many enzymes produced for such bacterias are termostable, being able to resist the treatment and to remain active, leading to the loss of the quality of milk and its derivatives. The Normative Instruction 51 of 2002 established that milk must be cooled and stored in the production property, what resulted increasing the incidence of such bacteria in population destined milk. In some parts of the world contaminated milk is causing serious risks to the health of the population, assuming great importance in Public Health, mainly in relation to the hygienic-sanitary conditions of the product. ANVISA establishes, thus, maximum bacteriological concentration that must be evidenced before commercializing the product, guaranteeing the quality of milk as proper for consumption. Based on these aspects, the objective of this work is the microbiological analysis of 30 milk samples type C, collected in bakeries of the city Botucatu, in the state of São Paulo. Analysis were made to determinate the most likely number of termotolerants coliforms, as well the number of colony units of psichrotrophics bacterias, the presence of Salmonella and the enumeration of positive Staphylococcus aureus, at the moment of purchase and validity of the products

Produção de biofilme por bastonetes gram negativos isolados de água de hemodiálise

No Brasil, 90% de pacientes com insuficiência renal crônica ou aguda dependem dos procedimentos de hemodiálise para remover produtos de degradação metabólica, excesso de água e de sais minerais do organismo, a fim de restaurar o equilíbrio ácido-base e eletrolítico. Entretanto, o processo de osmose reversa, que visa remover todos os íons da água, também remove o cloro, que exerce efeito bacteriostático sob diversas bactérias autóctones, que passam a se multiplicar na água. Entre os principais grupos dessas bactérias, estão os bastonetes Gram negativos não fermentadores (BGN) e os mais frequentemente associados a bacteremias, em pacientes de hemodiálise são Pseudomonas aeruginosa, Stenotrophomonas maltophilia e Burkholderia cepacia. Essas bactérias podem produzir biofilmes, o que torna sua eliminação do encanamento quase impossível. Assim, o objetivo do trabalho foi a análise de água e do dialisato, da Unidade de Hemodiálise de um Hospital Universitário, na pesquisa dos três BGNs citados. Também foram utilizadas 42 cepas previamente isoladas do mesmo local. Entre as 67 amostras de água, foram isoladas 8 cepas de Pseudomonas aeruginosa e as 50 cepas foram submetidas à pesquisa do gene rpoS, um dos responsáveis pela produção de biofilme. Esse gene foi observado em 20 (40%) cepas, sendo 16 (80%) P. aeruginosa, seguida por 3 (15%) cepas de S. maltophilia e 1 (5%) de B. cepacia. Essas cepas foram submetidas à produção de biofilme a 35ºC (temperatura ótima de crescimento) e a 20ºC (temperatura média da água no encanamento da Unidade de Hemodiálise), em aço inoxidável (material de muitos instrumentos cirúrgicos), PVC (matéria prima da tubulação) e plástico de poliestireno (capacidade de produção de biofilmes em diferentes materiais). Em poliestireno, somente 1 (5%) cepa de P. aeruginosa produziu biofilme a 35ºC e a 20ºC, 2 (10%) cepas foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Diversidade genética em Staphylococcus aureus resistentes à oxacilina em isolados de pacientes pediátricos do Hospital das Clínicas de Botucatu

Staphylococcus aureus é um patógeno ubíquo capaz de causar uma variedade de infecções em humanos. A resistência desse microrganismo a antibióticos como oxacilina e meticilina é um problema sério, de crescimento significativo para a terapêutica antimicrobiana clínica em pacientes acometidos por infecções estafilocócicas. A resistência à meticilina em S. aureus é decorrente da alteração do sítio de ação dos antibióticos β-lactâmicos, os quais agem através da inibição de enzimas que catalisam a síntese da parede celular. Essas enzimas são o sítio de ação das penicilinas, e por isso, passaram a ser chamadas de proteínas ligadoras de penicilinas (PBPs). O gene mecA codifica a PBP2a, que substitui a função das outras PBPs neste patógeno e confere resistência a β-lactâmicos. A PBP2a exibe uma afinidade reduzida pelo anel β-lactâmico e permite que a bactéria continue a sintetizar a parede bacteriana. Este gene faz parte de um elemento genético móvel encontrado em isolados de MRSA, designado cassete cromossômico estafilocócico mec (SCCmec), integrado ao cromossomo de S. aureus. O objetivo do estudo foi a caracterização molecular de 139 isolados de S.aureus provenientes de pacientes pediátricos com bacteremia durante o período de 1991 a 2010. Métodos moleculares foram utilizados para a determinação do perfil genético das amostras, incluindo, identificação do tipo de SCCmec, detecção do gene codificador de leucocidina de panton valentine (PVL) e similaridade clonal em gel de eletroforese em campo pulsado (PFGE). O gene mecA foi detectado em 32 (23%) amostras e houve predomínio do SCCmec IV (68,8%) em relação ao SCCmec III (31,2%). A presença de PVL foi encontrada em 18 amostras (12,9%), todas sensíveis à oxacilina. O clone epidêmico brasileiro, relacionado ao SCCmec tipo III, esteve presente na unidade neonatal do hospital... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Síntese, incorporação e liberação prolongada do tetradecapeptídeo OGP em celulose bacteriana

Este trabalho apresenta o estudo de dois sistemas de liberação prolongada, microemulsão e lipossomas, contendo peptídeo regulatório de fatores de crescimento, “osteogenic growth peptide” OGP, para aplicação em regeneração óssea. A base de adsorção para estes sistemas de liberação foi a celulose bacteriana (CB) produzida pela bactéria Gluconacetobacter xylinus. Foi escolhida devido às suas propriedades físicas e químicas, tais como como alta resistência à corrosão química, bio absorção, biocompatibilidade, porosidade e ainda boa resistência mecânica, o que a torna um biopolímero com grande potencial a ser explorado pela ciência biomédica. Estudos in vitro foram realizados para avaliar o perfil de liberação do peptídeo dos diferentes sistemas de liberação prolongada. O peptídeo OGP foi sintetizado pelo método da fase sólida (estratégia SPFS Fmoc); foi purificado e caracterizado por HPLC, espectrometria de massas e análise de aminoácidos e, em seguida, marcados com 5,6 carboxifluoresceína (CF) para análise por espectroscopia de fluorescência. O peptídeo marcado foi incorporado aos sistemas de liberação no momento do respectivo preparo, foram adsorvidos na CB por um período de 72h, seguido de sua liberação prolongada em sistema fechado de fluxo constante contendo tampão PBS pH 7,4, por um período de 24h. Após a análise da liberação, observou se que o sistema que obteve melhor resultado foi a microemulsão, sendo sua liberação prolongada nas primeiras 6,5 h, liberando 21,5% do valor teórico de peptídeo incorporado, seguido de uma liberação constante a partir desse período. Dessa forma, tem se que a microemulsão pode ser um sistema promissor para liberação prolongada do OGP em processos de regeneração óssea

Transcriptoma da interação de tangerina satsuma (Citrus unshiu) e laranja doce Hamlin (Citrus sinensis) infectadas com Xanthomonas citri subsp. citri, agente causal do cancro cítrico

Pós-graduação em Agronomia (Genética e Melhoramento de Plantas) - FCAV

Caracterização funcional da proteína XAC1201 envolvida na patogenicidade de Xanthomonas citri subsp. citri

Pós-graduação em Agronomia (Genética e Melhoramento de Plantas) - FCAV