Ação da IL-18 sobre a expressão do receptor dectina-1 e produção de citocinas por monócitos humanos desafiados com diferentes cepas de Paracoccidioides brasiliensis

Estudos têm demonstrado que o reconhecimento inicial de microrganismos é mediado por receptores celulares expressos em células da imunidade inata denominados receptores de reconhecimento de padrões (PRRs). Assim, a interação entre moléculas de superfície dos patógenos e receptores homólogos presentes na membrana celular de monócitos, modula a fagocitose, a ativação da célula e conseqüentemente a produção de citocinas. Trabalhos têm demonstrado a importância da estimulação de receptores toll-like 2 e 4 (TLR2 e TLR4), receptores de manose (MR) e dectina-1 de monócitos, tanto em infecções bacterianas como fúngicas, culminando com indução de produção de várias citocinas. A IL-18 é uma citocina indutora de IFN-g e possui uma ação extremamente importante, por ser capaz de promover tanto uma resposta do tipo Th1 ou Th2, dependendo do contexto de estimulação e do microambiente de citocinas. Em trabalho recente demonstramos que a IL-18 possui uma ação importante sobre o aumento da expressão de MR em monócitos humanos, e o reconhecimento do Paracoccidioides brasiliensis via esse receptor causaria aumento do crescimento fúngico no interior da célula. Dessa forma, os objetivos do presente projeto foram: 1) Avaliar a ação da IL- 18 sobre a expressão do receptor dectina-1 por monócitos humanos desafiados in vitro com diferentes cepas do P. brasiliensis; b) Avaliar a participação da dectina-1 na indução da produção de IL-18, TNF-a e IL-10 por monócitos desafiados in vitro com diferentes cepas do P. brasiliensis. Assim, monócitos de indivíduos normais tratados in vitro com IL-18 foram desafiados com diferentes de cepas do P. brasiliensis, e a expressão do receptor dectina-1 foi avaliada pela técnica de citometria de fluxo. A dosagem de IL-18, TNF-a e IL-10 no sobrenadante de cultura de monócitos desafiados com P. brasiliensis foi realizada utilizando a técnica de ELISA . Os resultados mostraram que a ...

Efeito de Leucotrienos sobre a atividade fungicida de monócitos humanos contra o Paracoccidioides brasiliensis

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Alterações comportamentais em Geophagus brasiliensis submetidos a ação do herbicida glifosato

Os herbicidas a base de glifosato, como a formulação comercial Roundup®, tem sido amplamente utilizado para o controle de ervas daninhas na agricultura brasileira. O uso desses herbicidas podem resultar no rompimento do equilíbrio ecológico, podendo causar danos a organismos não- alvo, como os peixes. Para testar se o glifosato altera comportamento de peixes, utilizamos o Geophagus brasiliensis, nativo de várias regiões do Brasil, espécie territorialista e que se utiliza de confrontos agonísticos para estabelecer hierarquia de dominância. Neste estudo, encontramos o valor da concentração letal capaz de promover a morte de 50% da população em 96 horas (CL₅₀,₉₆h= 1,8 mgL⁻1). No entanto, nos testes de interações agonísticas foi utilizado uma dosagem subletal de 0,72 mgL⁻1, afim de avaliar possíveis alterações na agressividade de Geophagus brasiliensis. Testamos o efeito de glifosato em um grupo experimental, e um grupo controle com peixes que não foram expostos ao herbicida glifosato. Um etograma foi elaborado para quantificar as interações agonísticas. Ao comparar os dois tratamentos, foi possível observar um aumento no número de interações agonísticas no grupo exposto ao glifosato em relação ao grupo controle. No pareamento entre peixes tratados versus peixes não tratados, a média de interações foi maior para o peixe não tratado (controle) e a latência para os confrontos desse grupo foi menor, indicando que a exposição ao herbicida Roundup®promove, possivelmente, alterações físicas e/ou químicas nos animais e esses sinalizam de alguma forma para o seu oponente

Efeito da opsonização de células leveduriformes de Paracoccidioides brasiliensis com soro humano sobre a atividade fungicida de monócitos

Monócitos e macrófagos são células da imunidade inata que desempenham importante papel na defesa contra infecções fúngicas, através do reconhecimento dos fungos, ativação e desenvolvimento de atividade fungicida. A função das células fagocitárias depende do seu estado de ativação, induzido principalmente pelo ambiente de citocinas, presentes durante a interação com o microrganismo. O presente projeto teve por objetivo avaliar o efeito da opsonização de células leveduriformes de Paracoccidioides brasiliensis com soro humano sobre a produção de peróxido de hidrogênio (H2O2) e atividade fungicida de monócitos humanos, estimulados ou não com Interferon-gama (IFN-γ), contra P. brasiliensis. Monócitos de sangue periférico, obtidos de indivíduos saudáveis, foram cultivados na ausência ou presença de IFN-γ por 24h a 37oC. A seguir, essas células foram desafiadas com a amostra Pb18 de P. brasiliensis por 60 min para determinação da produção de H2O2 e por 4h para a avaliação da atividade fungicida nas proporções fungomonócito de 1:50. A suspensão fúngica foi previamente incubada por 30 min a 37oC na ausência de soro (SS) ou na presença de pool de soro humano normal, inativado (SI) por aquecimento a 56oC ou soro humano fresco (SF) não submetido à inativação do sistema complemento, nas concentrações de 5%, 10%, 20% e 30% em meio de cultura RPMI. A atividade fungicida de monócitos contra a amostra Pb18 foi avaliada por plaqueamento dessas co-culturas em meio de cultivo BHIágar e determinação da recuperação de fungos viáveis após 14 dias de incubação a 36oC. A produção de H2O2 por monócitos foi determinada através da técnica de redução do vermelho de fenol. Os resultados mostraram que a adição de SF ou SI em diferentes concentrações a culturas de P. brasiliensis não interfere com a viabilidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Adesão de Paracoccidioides brasiliensis e outros fungos anemófilos a teias de aranhas: implicações para a identificação de nichos microbianos no ambiente

The dimorphic pathogenic fungus, Paracoccidioides brasiliensis (Pb), is the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), the most important systemic mycosis in Latin America. While the yeast phase can be isolated from patients affected by paracoccidioidomycosis, dogs and naturally infected armadillos; several elements related to the ecology of the saprophytic phase of the pathogen, which is responsible for the production of infective propagules, are poorly understood, hampering the adoption of preventive measures. The demonstration of the high incidence of Pb infection in the 9- banded armadillo, Dasypus novemcinctus, has opened new perspectives for the identification of the pathogen’s habitat. At the opening of the armadillos’ burrows, spider webs are commonly found. The objective of this study was to evaluate the presence of Pb in spider webs samples related to the habitat of armadillos. Spider web samples were collected at Lageado Farm, Botucatu/SP and prepared for microscopic, molecular and mycological analyses. Microscopic analysis showed that different fungi were closely attached to spider web samples. Nested-PCR reaction showed positive amplification for Pb in 4 samples, with identity confirmed by amplicon sequencing. Fungal colonies also included members of Aspergillus, Blastobotrys, Penicillium, Candida, and Sporothrix genera, which are related to opportunistic disease and primary infections of great medical importance. In vitro adhesion tests of mycelia and yeast form of Pb to the spider webs were also performed, in order to analyze the possible physical attraction between fungal cells and the spider web protein network. The results showed a clear adherence of fungal particles to spider webs. In the current literature, there are no studies reporting adhesive properties of microorganisms to spider webs... (Complete abstract click electronic access below)

Ocorrência, morfometria e crescimento relativo da raia treme-treme Narcine brasiliensis (Olfers, 1831) (Elasmobranchii: Narcinidae) no litoral do Estado de São Paulo

Raias da espécie Narcine brasiliensis são frequentemente encontradas em regiões de substrato arenoso e lodoso localizadas entre o sudeste do Brasil e norte da Argentina, entretanto, há poucos estudos sobre seu ciclo de vida, assim como aspectos de sua distribuição e abundância. Verificar suas medidas corporais torna-se crucial para tais estudos, principalmente quando estes estão relacionados ao crescimento, maturação, comprimento máximo e estrutura populacional de elasmobrânquios. O presente estudo teve como objetivo analisar a ocorrência, a morfometria e o crescimento relativo da espécie no litoral do estado de São Paulo. Sendo assim, foram tomadas e avaliadas 46 medidas morfométricas corporais. Para verificar se havia diferenças significativas das proporções corpóreas entre machos e fêmeas, foi aplicado o teste “t de Student” e o teste de “Wilcoxon Rank”, conforme a distribuição da normalidade dos dados. Para avaliar a relação entre os caracteres morfométricos durante o crescimento dos indivíduos, foram ajustadas regressões lineares entre o logaritmo do comprimento total e o logaritmo de cada uma das variáveis, estimando-se o coeficiente alométrico (b); sendo b=1 (isometria), b>1 (alometria positiva) e b<1 (alometria negativa). Por último, foi verificado se havia diferença significativa do coeficiente alométrico (b) entre machos e fêmeas por meio de uma análise de covariância. A amostra analisada foi composta por 72 fêmeas de 237 a 470 mm e 33 machos de 236 a 380 mm. Os indivíduos foram capturados em substrato arenoso, sendo que não estiveram presentes indivíduos neonatos provavelmente pelo local de captura e seletividade da rede. Diferenças significativas foram encontradas na comparação das proporções corpóreas de machos e fêmeas, exceto para a região do espiráculo. As regressões lineares das variáveis logaritmizadas mostraram presença de isometria em 39,5%, alometria positiva em ...

Avaliação do envolvimento do receptor dectina-1 na atividade fungicida e na produção de metabólitos do oxigênio por neutrófilos e monócitos humanos desafiados com Paracoccidioides brasiliensis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Análise funcional da proteína 14-3-3 de Paracoccidioides brasiliensis e prospecção de alvos terapêuticos inibidores da interação de P. brasiliensis à pneumócitos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Identificação de Neutrophil Extracellular Traps em lesões tegumentares de pacientes com Paracoccidiodomicose e análise da formação de NETs in vitro por neutrófilos humanos desafiados com Paracoccidioides brasiliensis

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry for Differentiation of the Dimorphic Fungal Species Paracoccidioides brasiliensis and Paracoccidioides lutzii

Isolates of Paracoccidioides brasiliensis and Paracoccidioides lutzii, previously characterized by molecular techniques, were identified for the first time by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). All isolates were correctly identified, with log score values of >2.0. Thus, MALDI-TOF MS is a new tool for differentiating species of the genus Paracoccidioides.

Paracoccidioides brasiliensis interferes on dendritic cells maturation by inhibiting PGE(2) production

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

The identity of two obscure names of Violaceae from the Flora Brasiliensis context: nomenclatural novelties within Hybanthus communis

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

A comparison of mucosal surface area and villous histology in small intestines of the brazilian free-tailed bat (Tadarida brasiliensis) and the mouse (Mus musculus)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Influence of the Paracoccidioides brasiliensis 14-3-3 and gp43 proteins on the induction of apoptosis in A549 epithelial cells

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

De novo transcriptome assembly for a non-model species, the blood-sucking bug Triatoma brasiliensis, a vector of Chagas disease

High throughput sequencing (HTS) provides new research opportunities for work on non-model organisms, such as differential expression studies between populations exposed to different environmental conditions. However, such transcriptomic studies first require the production of a reference assembly. The choice of sampling procedure, sequencing strategy and assembly workflow is crucial. To develop a reliable reference transcriptome for Triatoma brasiliensis, the major Chagas disease vector in Northeastern Brazil, different de novo assembly protocols were generated using various datasets and software. Both 454 and Illumina sequencing technologies were applied on RNA extracted from antennae and mouthparts from single or pooled individuals. The 454 library yielded 278 Mb. Fifteen Illumina libraries were constructed and yielded nearly 360 million RNA-seq single reads and 46 million RNA-seq paired-end reads for nearly 45 Gb. For the 454 reads, we used three assemblers, Newbler, CAP3 and/or MIRA and for the Illumina reads, the Trinity assembler. Ten assembly workflows were compared using these programs separately or in combination. To compare the assemblies obtained, quantitative and qualitative criteria were used, including contig length, N50, contig number and the percentage of chimeric contigs. Completeness of the assemblies was estimated using the CEGMA pipeline. The best assembly (57,657 contigs, completeness of 80 %, < 1 % chimeric contigs) was a hybrid assembly leading to recommend the use of (1) a single individual with large representation of biological tissues, (2) merging both long reads and short paired-end Illumina reads, (3) several assemblers in order to combine the specific advantages of each.