1000 resultados para Apoptose Teses
Resumo:
Diabetes is a growing epidemic with devastating human, social and economic impact. It is associated with significant changes in plasma concentrations of lipoproteins. We tested the hypothesis that lipoproteins modulate the function and survival of insulin-secreting cells. We first detected the presence of several receptors that participate in the binding and processing of plasma lipoproteins and confirmed the internalization of fluorescent LDL and HDL particles in insulin-secreting β-cells. Purified human VLDL and LDL particles reduced insulin mRNA levels and β-cell proliferation, and induced a dose-dependent increase in the rate of apoptosis. In mice lacking the LDL receptor, islets showed a dramatic decrease in LDL uptake and were partially resistant to apoptosis caused by LDL. VLDL-induced apoptosis of β-cells involved caspase-3 cleavage and reduction in levels of the c-Jun N-terminal (JNK) Interacting Protein-1 (IB1/JIP-1). In contrast, the pro-apoptotic signaling of lipoproteins was antagonized by HDL particles or by a small peptide inhibitor of JNK. The protective effects of HDL were mediated, in part, by inhibition of caspase-3 cleavage and activation of the protein kinase Akt/PKB. Heart disease is a major cause of morbidity and mortality among patients with diabetes. When heart failure is refractory to medical therapy and cannot be improved by electrical resynchronization, percutaneous angioplasty or coronary graft bypass surgery, heart transplantation remains a "last resort" therapy. Nevertheless, it is limited by the side effects of immunosuppressive drugs and chronic rejection. Localized expression of immunomodulatory genes in the donor organ can create a state of immune privilege within the graft, and was performed in rodent hearts by infecting cells with an adenovirus encoding indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO), the rate-limiting enzyme in the catabolism of tryptophane. Other strategies are based on genetic manipulation of dendritic cells (DCs) with immunosuppressive genes and in vitro exposure of DCs to agents that prevent their maturation by inflammatory cytokines. Finally, we used 5-bromo-2'-deoxyuridine, which is incorporated into DNA and diluted with cell division, to identify long-term label retaining cells in the adult rodent heart. The majority of these cells were positive for the stem cell antigen-1 (Sca-1) and negative for the endothelial precursor marker CD31. They formed cardiospheres in vitro and showed differentiation potential into mesenchymal cell lineages. When cultured in cardiomyogenic differentiation medium, they expressed cardiac-specific genes. Taken together, these data provide evidence of slow-cycling stem cells in the rodent heart. Chronic shortage of donor organs opens the way to cardiac stem cell therapy in humans, although the long way from animal experimentation to routine therapy in patients may still take several years. - Du diabte de type 2 la maladie coronarienne : trois tudes sur les dysfonctions de la cellule scrtrice d'insuline induites par les dyslipidmies, l'immunomodulation dans la transplantation cardiaque, et la thrapie par des cellules souches myocardiques. Le diabte de type 2 a pris les dimensions d'une pidmie, avec des consquences sociales et conomiques dont nous n'avons pas encore pris toute la mesure. La maladie s'accompagne souvent d'une dyslipidmie caractrise par une hypertriglycridmie, des taux abaisss de cholestrol HDL, et des concentrations de cholestrol LDL la limite suprieure de ce qui est considr comme acceptable. L'hypothse la base de cette tude est qu'une modification des taux plasmatiques de lipoprotines pourrait avoir une influence directe sur la cellule β scrtrice d'insuline en modifiant sa fonction, sa dure de vie et son taux de rgnration. Dans un premier temps, nous avons mis en vidence, sur la cellule β, la prsence de plusieurs rcepteurs impliqus dans la captation des lipoprotines. Nous avons confirm la fonctionnalit de ces rcepteurs en suivant l'internalisation de LDL et de HDL marqus. En prsence de VLDL ou de LDL humains, nous avons observ une diminution de la transcription du gne de l'insuline, une prolifration cellulaire rduite, et une augmentation de l'apoptose, toutes fonctions de la dose et du temps d'exposition. L'apoptose induite par les VLDL passe par une activation de la caspase-3 et une rduction du taux de la protine IB1/JIP-1 (Islet Brain1/JNK Interacting Protein 1), dont une mutation est associe une forme monognique de diabte de type 2. Par opposition, les HDL, ainsi que des peptides inhibiteurs de JNK, sont capables de contrer la cascade pro-apoptotique dclenche, respectivement, par les LDL et les VLDL. Ces effets protecteurs comprennent l'inhibition du clivage de la caspase-3 et l'activation de la protine kinase Akt/PKB. En conclusion, les lipoprotines sont des lments cls de la survie de la cellule β, et pourraient contribuer au dysfonctionnement observ dans le pancras endocrine au cours du dveloppement du diabte. La maladie cardiaque, et plus particulirement la maladie coronarienne, est une cause majeure de morbidit et de mortalit chez les patients atteints de diabte. Plusieurs stratgies sont utilises quotidiennement pour pallier les atteintes cardiaques: traitements mdicamenteux, lectromcaniques par resynchronisation lectrique, ou communment appels interventionnels lorsqu'ils font appel l'angioplastie percutane. La revascularisation du myocarde par des pontages coronariens donne galement de trs bons rsultats dans certaines situations. Il existe toutefois des cas o plus aucune de ces approches n'est suffisante. La transplantation cardiaque est alors la thrapie de choix pour un nombre restreint de patients. La thrapie gnique, en permettant l'expression locale de gnes immunomodulateurs dans l'organe greff, permet de diminuer les ractions de rejet inhrentes toute transplantation ( l'exception de celles ralises entre deux jumeaux homozygotes). Nous avons appliqu chez des rongeurs cette stratgie en infectant le coeur greff avec un adnovirus codant pour l'enzyme indoleamine 2,3-dioxygnase (IDO), une enzyme cl dans le catabolisme du tryptophane. Nous avons procd de manire identique in vitro en surexprimant IDO dans les cellules dendritiques, dont le rle est de prsenter les antignes aux lymphocytes Τ du receveur. Des expriences similaires ont t ralises en traitant les cellules dendritiques avec des substances capables de prvenir, en partie du moins, leur maturation par des agents pro-inflammatoires. Finalement, nous avons explor une stratgie utilise couramment en hmatologie, mais qui n'en est encore qu' ses dbuts au niveau cardiaque : la thrapie par des cellules souches. En traitant des rongeurs avec un marqueur qui s'incorpore dans l'ADN nuclaire, le 5-bromo- 2'-deoxyuridine, nous avons identifi une population cellulaire se divisant rarement, positive en grande partie pour l'antigne embryonnaire Sca-1 et ngative pour le marqueur endothlial CD31. En culture, ces cellules forment des cardiosphres et sont capables de se diffrencier dans les principaux types tissulaires msenchymateux. Dans un milieu de differentiation adquat, ces cellules expriment des gnes cardiomyocytaires. En rsum, ces donnes confirment la prsence chez le rongeur d'une population rsidente de prcurseurs myocardiques. En addenda, on trouvera deux publications relatives la cellule β productrice d'insuline. Le premier article dmontre le rle essentiel jou par la complexine dans l'insulino-scrtion, tandis que le second souligne l'importance de la protine IB1/JIP-1 dans la protection contre l'apoptose de la cellule β induite par certaines cytokines.
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Summary : Control of pancreatic -cell mass and function by gluco-incretin hormones: Identification of novel regulatory mechanisms for the treatment of diabetes The -cells of islets of Langerhans secrete insulin to reduce hyperglycemia. The number of pancreatic islet -cells and their capacity to secrete insulin is modulated in normal physiological conditions to respond to the metabolic demand of the organism. A failure of the endocrine pancreas to maintain an adequate insulin secretory capacity due to a reduced -cell number and function underlies the pathogenesis of both type 1 and type 2 diabetes. The molecular mechanisms controlling the glucose competence of mature -cells, i.e., the magnitude of their insulin secretion response to glucose, -cell replication, their differentiation from precursor cells and protection against apoptosis are poorly understood. To investigate these mechanisms, we studied the effects on -cells of the gluco-incretin hormones, glucose-dependent insulinotropic polypeptide (GIP) and glucagon-like peptide-1 (GLP-1) which are secreted by intestinal endocrine cells after food intake. Besides acutely potentiating glucose-stimulated insulin secretion, these hormones induce -cell differentiation from precursor cells, stimulate mature -cell replication, and protect them against apoptosis. Therefore, understanding the molecular basis for gluco-incretin action may lead to the uncovering of novel -cell regulatory events with potential application for the treatment or prevention of diabetes. Islets from mice with inactivation of both GIP and GLP-1 receptor genes (dK0) present a defect in glucose-induced insulin secretion and are more sensitive than control islets to cytokine-induced apoptosis. To search for regulatory genes, that may control both glucose competence and protection against apoptosis, we performed comparative transcriptomic analysis of islets from control and dK0 mice. We found a strong down-regulation of the IGF1 Rexpression in dK0 islets. We demonstrated in both a mouse insulin-secreting cell line and primary islets, that GLP-1 stimulated IGF-1R expression and signaling. Importantly, GLP-1induced IGF-1R-dependent Akt phosphorylation required active secretion, indicating the presence of an autocrine activation mechanism. We further showed that activation of IGF-1R signaling was dependent on the secretion of IGF-2 and IGF-2 expression was regulated by nutrients. Finally, we demonstrated that the IGF-Z/IGF-1R autocrine loop was required for GLP-1 i) to protect -cells against cytokine-induced apoptosis, ii) to enhance their glucose competence and iii) to increase -cell proliferation. Rsum : Contrle de la masse des cellules pancratiques et de leur fonction par les hormones glucoincrtines: Identification de nouveaux mcanismes rgulateurs pour le traitement du diabte Les cellules des lots de Langerhans scrtent l'insuline pour diminuer l'hyperglycmie. Le nombre de cellules et leur capacit scrter l'insuline sont moduls dans les conditions physiologiques normales pour rpondre la demande mtabolique de l'organisme. Un chec du pancras endocrine maintenir sa capacit scrtoire d'insuline d une diminution du nombre et de la fonction des cellules conduit au diabte de type 1 et de type 2. Les mcanismes molculaires contrlant la comptence au glucose des cellules matures, tels que, l'augmentation de la scrtion d'insuline en rponse au glucose, la rplication des cellules , leur diffrentiation partir de cellules prcurseurs et la protection contre l'apoptose sont encore peu connus. Afin d'examiner ces mcanismes, nous avons tudi les effets sur les cellules des hormones gluco-incrtines, glucose-dpendent insulinotropic polypeptide (G1P) et glucagon-like peptide-1 (GLP-1) qui sont scrtes par les cellules endocrines de l'intestin aprs la prise alimentaire. En plus de potentialiser la scrtion d'insuline induite par le glucose, ces hormones induisent la diffrentiation de cellules partir de cellules prcurseurs, stimulent leur prolifration et les protgent contre l'apoptose. Par consquent, comprendre les mcanismes d'action des gluco-incrtines permettrait de dcouvrir de nouveaux processus rgulant les cellules avec d'ventuelles applications dans le traitement ou la prvention du diabte. Les lots de souris ayant une double inactivation des gnes pour les rcepteurs du GIP et du GLP-1 (dK0) prsentent un dfaut de scrtion d'insuline stimule par le glucose et une sensibilit accrue l'apoptose induite par les cytokines. Afin de dterminer les gnes rguls, qui pourraient contrler la fois la comptence au glucose et la protection contre l'apoptose, nous avons effectu une analyse comparative transcriptomique sur des lots de souris contrles et dKO. Nous avons constat une forte diminution de l'expression d'IGF-1R dans les lots dKO. Nous avons dmontr, la fois dans une ligne cellulaire murine scrtant l'insuline et dans lots primaires, que le GLP-1 stimulait l'expression d'IGF-1R et sa voie de signalisation. Par ailleurs, la phosphorylation d'Akt dpendante d'IGF1-R induite parle GLP-1 ncessite une scrtion active, indiquant la prsence d'un mcanisme d'activation autocrine. Nous avons ensuite montr que l'activation de la voie de signalisation d'IGF-1R tait dpendante de la scrtion d'IGF-2, dont l'expression est rgule par les nutriments. Finalement, nous avons dmontr que la boucle autocrine IGF-2/IGF-1R est ncessaire pour le GLP-1 i) pour protger les cellules contre l'apoptose induite par les cytokines, ii) pour amliorer la comptence au glucose et iii) pour augmenter la prolifration des cellules . Rsum tout public : Contrle de la masse des cellules pancratiques et de leur fonction par les hormones gluco-incrtines: Identification de nouveaux mcanismes rgulateurs pour le traitement du diabte Chez les mammifres, la concentration de glucose sanguine (glycmie) est rgule et maintenue une valeur relativement constante d'environ 5 mM. Cette rgulation est principalement contrle par 2 hormones produites par les lots pancratiques de Langerhans: l'insuline scrte par les cellules et le glucagon scrt par les cellules a. A la suite d'un repas, l'augmentation de la glycmie entrane la scrtion d'insuline ce qui permet le stockage du glucose dans le foie, les muscles et le tissu adipeux afin de diminuer le taux de glucose circulant. Lors d'un jene, la diminution de la glycmie permet la scrtion de glucagon favorisant alors la production de glucose par le foie, normalisant ainsi la glycmie. Le nombre de cellules et leur capacit scrtoire s'adaptent aux variations de la demande mtabolique pour assurer une normoglycmie. Une destruction complte ou partielle des cellules conduit respectivement au diabte de type 1 et de type 2. Bien que l'augmentation de la glycmie soit le facteur stimulant de la scrtion d'insuline, des hormones gluco-incrtines, principalement le GLP-1 (glucagon-like peptide-1) et le GIP (glucose-dependent insulinotropic polypeptide) sont libres par l'intestin en rponse aux nutriments (glucose, acides gras) et agissent au niveau des cellules , potentialisant la scrtion d'insuline induite par le glucose, stimulant leur prolifration, induisant la diffrentiation de cellules prcurseurs en cellules matures et les protgent contre la mort cellulaire (apoptose). Afin d'tudier plus en dtail ces mcanismes, nous avons gnr des souris dficientes pour les rcepteurs du GIP et du GLP-l. Les lots pancratiques de ces souris prsentent un dfaut de scrtion d'insuline stimule par le glucose et une sensibilit accrue l'apoptose par rapport aux lots de souris contrles. Nous avons donc cherch les gnes rguls pas ces hormones contrlant la scrtion d'insuline et la protection contre l'apoptose. Nous avons constat une forte diminution de l'expression du rcepteur l'IGF-1 (IGF-1R) dans les lots de souris dficientes pour les rcepteurs des gluco-incrtines. Nous avons dmontr dans un model de cellules en culture et d'lots que le GLP-1 augmentait l'expression d'IGF-1R et la scrtion de son ligand (IGF-2) permettant l'activation de la voie de signalisation. Finalement, nous avons montr que l'activation de la boucle IGF-2/IGF-1R induite par le GLP-1 tait ncessaire pour la protection contre l'apoptose, l'augmentation de la scrtion et la prolifration des cellules .
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Introduction : Les particules de HDL (High Density Lipoprotein) ont des fonctions diverses notamment en raison de leur structure trs htrogne. Tout d'abord, les HDLs assurent le transport du cholestrol de la priphrie vers le foie mais sont galement dotes de nombreuses vertus protectrices. Un grand nombre d'tudes dmontre les mcanismes de protection des HDL sur les cellules endothliales. Sachant que les patients diabtiques ont ses niveaux bas de HDL, le but de cette tude est d'investiguer les mcanismes molculaires de protection sur la cellule beta pancratique. Rsultats : Une tude microarray nous a permis d'obtenir une liste de gnes rguls par le stress, comme la privation de srum, en prsence ou en absence de HDL. Parmi ces gnes, nous nous sommes particulirement intresss un rpresseur de la synthse protique cap -dpendante, 4EBP1. Dans notre tude transcriptomique, les niveaux d'ARNm de 4E-BP1 augmentaient de 30% dans des conditions sans srum alors que les HDLs bloquaient cette lvation. Au niveau protique, les niveaux totaux de 4EBP1 taient augments dans les conditions de stress et cette lvation tait contre par les HDLs. D'autres expriences de transfection ou d'infection de 4E-BP1 ont montrs que cette protine tait capable d'induire l'apoptose dans les cellules beta, imitant ainsi l'effet de la privation de srum. Afin de dterminer le rle direct de 4E-BP1 dans la mort cellulaire, ses niveaux ont t rduits par interfrence ARN. Le niveau de mort cellulaire induit par l'absence de srum tait moins lev dans des cellules taux rduits de 4EBP1 par RNAi que dans des cellules contrle. Conclusion : Ces donnes montrent que les HDL protgent les cellules beta suite diffrents stress et que 4E-BP1 est une des protines pro-apoptotiques inhibes par les HDL. 4E-BP1 est capable d'induire la mort cellulaire dans les cellules bta et cette rponse peut-tre rduite en diminuant l'expression de cette protine. Nos donnes suggrent que 4E-BP1 est une cible potentielle pour le traitement du diabte.
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Reviso de literatura em enfermagem relativa hipertenso arterial na gravidez, entre 1980 a 1999, com o objetivo de identificar as tendncias dessas publicaes. Foram encontradas 58 publicaes nos idiomas ingls, portugus e espanhol, sendo 52 artigos de peridicos e 6 monografias, dissertaes e teses. A maioria dos artigos foi publicada em peridicos de enfermagem (84,6%), predominando os de lngua inglesa (73,1%), redigidos por docentes, com autoria nica. Predominaram os enfoques assistncia de enfermagem (25,9%) e tratamento medicamentoso (25,9%). A partir de 1985, observou-se um incremento nas publicaes, no entanto, ainda so incipientes as publicaes nacionais.
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A REEUSP uma revista trimestral desde 1998, que publica de 11 a 13 artigos por nmero nas diferentes subreas da Enfermagem, na sua maioria sobre ensino, tecnologia em sade, sade do adulto (nas suas diferentes especialidades), sade mental e psiquitrica. O enfoque dos artigos e pesquisas continua a ser hospitalar. Por estar ligada a uma unidade de ensino, apresenta qualidade nas suas publicaes, muitas vezes geradas de teses e dissertaes. Enfrenta o desafio de estimular a publicao de autores de outras instituies, para no se tornar endgena. Nos ltimos 10 anos recebeu e publicou artigos de 18 estados brasileiros e de vrias cidades do interior de So Paulo. Seu projeto grfico tambm foi remodelado para 2003, permitindo maior legibilidade e facilidade na leitura. Aceita permuta com outros peridicos e indexada em vrias Bases de Dados. Recebeu a classificao C internacional pela CAPES.
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O Programa Interunidades de Doutoramento em Enfermagem foi o primeiro a ser criado na Amrica Latina e titulou 290 enfermeiros, at o primeiro semestre de 2004. Este estudo apresenta algumas caractersticas das teses defendidas no programa, focalizando as reas temticas e mtodos de pesquisa utilizados. Foram analisados os resumos de 287 teses, defendidas at o primeiro semestre de 2004. As reas mais investigadas, at o momento foram: Sade da Criana, da Mulher, do Adulto/Idoso e Educao. O mtodo de pesquisa quantitativo predominou at final da dcada de 1980, havendo uma intensa produo de pesquisas no mtodo qualitativo a partir desse perodo. Ainda na primeira dcada do programa, os temas passaram a versar sobre os aspectos que relacionam a prtica da enfermagem aos contextos polticos e sociais, convergindo para o atual eixo paradigmtico do programa: "Bases tericas, filosficas, histricas do saber e da prtica de enfermagem".
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O presente estudo teve como objetivo identificar e analisar a produo do conhecimento na rea de concentrao Administrao de Servios de Enfermagem, no Curso de Mestrado e Doutorado da EEUSP. Trata-se de um estudo exploratrio, descritivo, retrospectivo, pautado na anlise documental. A populao foi constituda por 128 produes cientficas, sendo 102 (79,7%) dissertaes de mestrado e 26 (20,3%) teses de doutorado produzidas no perodo de 1977 a maro de 2004. Esses estudos foram analisados de acordo com o agrupamento dos temas, nas categorias propostas por Castro e Ciampone (2002). Os resultados permitiram visualizar a distribuio da produo por temtica, dcada, mtodo e correntes de pensamento adotadas nesses estudos. Permitiram, tambm, traar consideraes a respeito da trajetria, necessidades e perspectivas das pesquisas em Gerenciamento em Enfermagem no mbito do Programa.
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Aps quase 30 anos de criao da rea de Concentrao Enfermagem Psiquitrica, no Programa de Ps-Graduao da Escola de Enfermagem da USP, importante olhar a produo cientfica gerada para que fundamentem reflexes sobre este ensino. Este estudo descritivo-exploratrio, usou como fonte os registros do Servio de Ps-Graduao, resumos de dissertaes e teses; memorandos e ofcios; os dados coletados foram analisados luz das transformaes ocorridas na estrutura que titulou 60 alunos, dos quais 50 cursaram mestrado e 10 doutorado e que vem reestruturando suas disciplinas, linhas de pesquisa e projetos com o objetivo de atender as avaliaes internas e externas e s diretrizes das agncias de fomento do Pas. A produo cientfica, atualmente, evidncia alinhamento com as diretrizes da Reforma Psiquitrica e tendncia de produzir conhecimentos a partir das prticas concretas dos trabalhadores nos campos da assistncia, a gesto e ensino de Sade Mental.
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A preocupao com programas para capacitar o enfermeiro, para atuar em enfermagem psiquitrica, levou-nos a este estudo, o primeiro da linha de pesquisa "Desenvolvimento do pessoal de enfermagem na rea da psiquiatria e sade mental". O objetivo deste foi fazer uma reflexo sobre os conceitos de educao continuada, em servio e permanente existentes na literatura mais recente sobre o assunto. Para o levantamento bibliogrfico dos conceitos em pauta, utilizamos as bases de dados MEDLINE e LILACS, dissertaes e teses da rea da enfermagem e alguns ttulos clssicos sobre o assunto. Aps anlise dos conceitos e discusso com peritos, conclumos que a denominao educao contnua em servio a que guarda mais consonncia com os autores e peritos consultados e a que mais atende s demandas de conhecimento existentes na rea de assistncia de enfermagem psiquitrica rumo qualidade da assistncia.
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A liderana uma das ferramentas imprescindvel no processo de trabalho do enfermeiro. Este estudo teve como objetivos fazer um levantamento bibliogrfico sobre liderana no contexto da enfermagem e caracterizar tal produo cientfica encontrada, com base nas variveis: ano, local de publicao e categorizao dos temas. Tratou-se de uma reviso de literatura realizada on-line na base de dados LILACS, considerando peridicos, dissertaes e teses disponveis em lngua portuguesa e espanhola, nos ltimos vinte anos. Dos 31 trabalhos selecionados, 17 (54,8%) em revista de enfermagem internacional, 10 artigos (32,2%) foram publicados em peridicos de enfermagem nacional, 3 dissertaes de mestrado (9,8%) e 1 tese de livre-docncia (3,2%), com maior predomnio de divulgao entre 1997 e 1998 (22,6%). Ao categorizar as referncias teve-se: 14 trabalhos (45,2%) sobre estilo de liderana exercido pelos enfermeiros, 15 (48,4%) reflexes sobre liderana e 2 publicaes (6,4%) discorrendo a respeito de liderana e comunicao.
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Objetivando estudar a compreenso sobre doena mental de pacientes e familiares, realizamos um estudo bibliogrfico de publicaes em peridicos nacionais, dissertaes e teses, no perodo de 1993 a 2003. A identificao das fontes foi realizada por meio dos sistemas informatizados de busca Literatura Latino Americano de Cincias da Sade (LILACS) e o Banco de Dados Bibliogrficos da USP Catlogo on-line Global (DEDALUS). Foram selecionados 19 trabalhos e identificados quatro categorias: dificuldade de relacionamento familiar com o doente; preconceito e estigma; explicao orgnica/biolgica para a doena; o medo e a dor da loucura. A maioria dos trabalhos nos mostra que, em relao assistncia, h necessidade de apoio e expanso da rede de sade para atender essa demanda. Acredita-se que o nmero de publicaes seja pequeno diante da importncia do problema, mostrando a necessidade de novas pesquisas.
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Abstract: The human protozoan parasite Leishmania major has been shown to exhibit several morphological and biochemical features characteristic of a programmed cell death (PCD) when differentiating into infectious stages and under a variety of stress conditions. In mammalian cells, the principal effector molecules of PCD or apoptosis are caspases. Although some caspase-like peptidase activity has been reported in dying parasites, no caspase gene is present in the L. major genome. However, a single metacaspase gene is present in L. major whose encoded protein harbors the predicted secondary structure and the catalytic dyad histidine/cysteine described for caspases and other metacaspases identified in plants and yeast. Metacaspases are also present in other protozoan parasites such as Trypanosoma and Plasmodium species and are not present in mammalian cells, which make them a possible drug target for the treatment of the parasitic diseases they cause. The Saccharomyces cerevisiae metacaspase YCA1 has been implicated in the death of aging cells, cells defective in some biological functions, and cells exposed to different environmental stresses. In this study, we evaluated the functional heterologous complementation of a S. cerevisiae ycal null mutant with the L. major metacaspase (LmjMCA} in cell death induced by oxidative stress. We show that LmjMCA is involved in yeast cell death, similar to YCA1, and that this function depends on its catalytic activity. LmjMCA was found to be auto-processed as occurs for caspases, however, LmjMCA did not exhibit any activity with caspase substrates. In contrast, LmjMCA was active towards substrates with arginine in the P1 position, with the activity being abolished following H147A and C202A catalytic site mutations and addition of the arginal inhibitor leupeptin. In order to identify the L. major proteins that may function as substrates, inhibitors, or may bind and recruit LmjMCA, a yeast two-hybrid screening with cDNA libraries from different life cycle stages of the parasite was conducted. Proteins putatively involved in PCD were identified as interacting with LmjMCA, however, the interaction of LmjMCA with proteins involved in other physiological processes such as vesicle transport, suggests that LmjMCA could have additional roles in the different life cycle stages of the parasite. Rsum: Plusieurs caractristiques morphologiques et biochimiques rappelant la mort cellulaire programme ont t identifies dans les stades infectieux et sous des conditions de stress, chez le parasite protozoaire humain, Leishmania major. Dans les cellules de mammifres, les caspases sont les molcules effectrices principales impliques dans la mort cellulaire programme et l'apoptose. Bien qu'une activit caspase ait t retrouve dans des parasites en mon` cellulaire, le gnome de Leishmania ne contient aucun gne qui pourrait coder pour une caspase. la place, on retrouve un gne unique codant pour une mtacaspase. Une prdiction de la structure secondaire de la mtacaspase montre que cette mtacaspase a un domaine catalytique contenant la dyade histidine/cystine prsente dans les caspases et les autres mtacaspases dcrites chez les plantes et la levure. Les mtacaspases sont aussi prsentes dans d'autres parasites protozoaires tels que Trypanosome et Plasmodium, mais ne sont pas prsentes dans les cellules de mammifres, ce qui en fait des cibles intressantes pour le dveloppement de drogue. Dans la levure, Saccharomyces cerevisiae, la mtacaspase YCA1 est implique dans la mort des cellules ges, la mort des cellules dfectueuses dans certaines fonctions biologiques et dans les cellules exposes diffrents stress environnementaux. Dans cette tude, une complmentation htrologue fonctionnelle d'un mutant de la levure dficient en YCA1 par le gne LmjMCA de L. major lors de l'induction de ta mort par stress oxydatif a t value. Nos rsultats montrent que LmjMCA peut remplacer YGA1 dans le programme de mort cellulaire chez la levure et que celte fonction dpend de son activit catalytique. De plus, LmjMCA subit une auto clivage comme les caspases mais n'exhibe aucune spcificit pour les substrats des caspases. Au contraire, LmjMCA est active envers des substrats ayant une arginine en position P1, son activit tant dtruite suite des changements de son domaine catalytique par les mutations H147A et C202A ou suite une inhibition para la leupeptine. Afin d'identifier quels pourraient tre les substrats, les inhibiteurs ou les molcules interagissant avec LmjMCA, nous avons entrepris un criblage double-hybride en utilisant des librairies de d'ADNc provenant de diffrents stades du cycle parasitaire. Plusieurs protines potentiellement impliques dans un programme de mort cellulaire ont t identifies comme interagissant avec LmjMCA. Cependant, l'identification de protines impliques dans le transport vsiculaire suggre aussi que LmjMCA pourrait avoir un rle additionnel dans les diffrents stades du cycle parasitaire. Rsum destin un large public: De nos jours, la leishmaniose est la deuxime plus importante maladie parasitaire aprs la malaria. Malgr les avances accomplies dans les stratgies de contrle, prs de deux millions de nouveaux cas apparaissent chaque anne. Actuellement, la principale stratgie pour faire face ce problme pidmiologique consiste en un traitement pharmacologique des personnes infectes. Pourtant, seule une dizaine de mdicaments, dont la plupart sont toxiques, est disponible pour traiter la leishmaniose et des cas de rsistance mergent dans certains pays endmiques. Il devient donc urgent de mettre au point de nouveaux traitements anti-leishmaniens capables d'liminer le parasite sans effets indsirables sur le patient. Rcemment, des caractristiques morphologiques et biochimiques de la mort cellulaire programme (MCP) semblables au processus de l'apoptose chez les mammifres ont t dcrites dans Leishmania. Cependant, des gnes codant pour des protines similaires celles qui sont impliques dans l'apoptose, comme les caspases, ne se retrouvent pas dans le gnome de Leishmana major. Nanmoins, les espces de Leishmana, aussi bien que d'autres parasites protozoaires responsables des trypanosomiases et de la malaria, possdent des mtacaspases qui sont des protines homologues aux caspases mais qui ne sont pas prsentes chez les mammifres. C'est pourquoi, la caractrisation de la mtacaspase de Leishmania (LmjMCA) ainsi que ses mcanismes d'activation pourrait tre une piste d'investigation intressante dans l'identification de nouvelles cibles thrapeutiques dans les voies de signalisation de la MCP des parasites protozoaires. Dans la levure, Saccharomyces cerevisiae, la mtacaspase YCA1 est implique dans la mort des cellules ges, la mort des cellules dfectueuses dans certaines fonctions biologiques et dans les cellules exposes diffrents stress environnementaux. Dans cette tude, une complmentation htrologue fonctionnelle d'un mutant de la levure dficient en YCA1 par le gne LmjMCA de L major lors de l'induction de la mort par stress oxydatif a t value. Nos rsultats montrent que LmjMCA peut remplacer YCA1 dans le programme de mort cellulaire chez la levure et que cette fonction dpend de son activit catalytique. De plus, LmjMCA subit une auto clivage comme les caspases mais n'exhibe aucune spcificit pour les substrats des caspases. Au contraire, LmjMCA est active envers des substrats ayant une arginine en position P1, son activit tant dtruite suite des changements de son domaine catalytique par les mutations H147A et C202A ou suite une inhibition para la leupeptine. Afin d'identifier quels pourraient tre les substrats, les inhibiteurs ou les molcules interagissant avec LmjMCA, nous avons entrepris un criblage double-hybride en utilisant des librairies de d'ADNe provenant de diffrents stades du cycle parasitaire. Plusieurs protines potentiellement impliques dans un programme de mort cellulaire ont t identifies comme interagissant avec LmjMCA. Cependant, l'identification de protines impliques dans le transport vsiculaire suggre aussi que LmjMCA pourrait avoir un rle additionnel dans les diffrents stades du cycle parasitaire. Resumen destinado al pblico en general: La leishmaniasis es la segunda enfermedad parasitaria ms importante en el mundo actual. Aproximadamente 2 millones de nuevos casos ocurren cada ao a pesar de los avances logrados en el desarrollo de nuevos mtodos de control. El tratamiento farmacolgico de las personas infectadas es actualmente la principal estrategia de control, sin embargo, menos de una decena de medicamentos se encuentran disponibles en el mercado, la mayora de ellos son txicos, y ya empiezan a encontrarse parsitos resistentes en algunos pases endmicos para la leishmaniasis. El desarrollo de nuevos medicamentos capaces de eliminar los parsitos sin producir efectos indeseables en los humanos, es una necesidad inminente. Recientemente, algunas de las caractersticas morfolgicas y bioqumicas de la muerte celular programada (MCP) similares al proceso de la apoptosis en mamferos, han sido descritas en parasitos de Leishmania. Sin embargo, genes que codifiquen protenas similares a aquellas involucradas en la apoptosis, como las caspasas, no se encuentran en el genoma de Leishmania major. AI contrario, las especies de Leishmania, as como de los otros parsitos responsables de la tripanosomiasis y de la malaria, poseen metacaspases, protenas homologas a las caspases pero que no estn presentes en las clulas de mamferos. La caracterizacin de la metacaspasa de L. major y de sus mecanismos de activacin constituye, por lo tanto, un rea de investigacin interesante para la identificacin de nuevos blancos teraputicos en el proceso de MCP de los parsitos protozoarios. En la levadura Saccharomyces cerevisiae, la metacaspasa YCA1 ha sido descrita como implicada en la muerte de clulas envejecidas, clulas defectuosas en algunas funciones biolgicas, y en clulas expuestas a diferentes tipos de estrs ambiental. En el presente estudio se evalu la complementacin heterloga funcional de una levadura mutante deficiente en YCA1 con el gen de metacaspase de L. major (LmjMCA) en la MCP inducida por estrs oxidativo. Nuestros resultados muestran que la LmjMCA puede reemplazarla YCA1 en la MCP de la levadura dependiente de su actividad cataltica y que la LmjMCA se auto-procesa similar a las caspasas. Sin embargo, LmjMCA no reconoce los substratos de caspasas sino substratos con una arginina en ta posicin P1. Dicha actividad enzimtica fue abolida con la induccin de las mutaciones puntuales H147A y C202A en la dada cataltica de LmjMCA y con la adicin de leupeptina, un inhibidor con arginina. Con el fin de identificar protenas que pudieran funcionar como substratos, inhibidores o molculas modificadoras de LmjMCA, se aplic el mtodo de doble-hbrido en levadura con bibliotecas de ADNc provenientes de diferentes estadios del ciclo de vida del parsito. Algunas protenas potencialmente implicadas. en la MCP del parsito fueron identicadas interactuando con LmjMCA. La identificacin de otras protenas involucradas en transporte vesicular sugiere que la LmjMCA podra tener una funcin biolgica adicional en los diferentes estadios del ciclo de vida dei parsito.
Resumo:
Les dacetylases d'histones (HDACs) dactylent non seulement les histones, ce qui a gnralement pour effet d'augmenter la transcription et l'expression gnique, mais galement d'autres protines comme par exemple des protines de choc thermique (HSP90), la tubuline alpha, certains rcepteurs aux strodes ainsi que de nombreux facteurs de transcription (NF-kB p65, Sp1, etc.). Ainsi les HDACs participent au contrle de nombreux processus cellulaires. Les inhibiteurs des HDACs (ou HDACi), de part leur capacit induire la diffrenciation cellulaire et l'apoptose, sont parmi les anti-cancreux les plus prometteurs en cours de dveloppement pour dans le traitement des noplasies solides et hmatologiques. Rcemment, l'activit anti-inflammatoire et immuno- modulatrice des HDACi a t mise en vidence et exploite avec succs pour le traitement de pathologies auto-immunes dans des modles prcliniques. L'effet des HDACi sur la rponse immunitaire inne restant largement inconnu, nous avons entrepris la premire tude d'envergure dans ce domaine. Dans un premier article, nous dmontrons que les HDACi inhibent l'expression de nombreux gnes (rcepteurs aux produits microbiens, cytokines, chimiokines, molcules d'adhsion et co-stimulatrices, facteurs de croissance, etc.) impliqus dans les dfenses antiinfectieuses in vitro. En accord avec ces donnes, les HDACi augmentent la mortalit d'animaux infects dans des modles de pneumonie et de candidose bnignes. De manire congruente, les HDACi protgent les animaux de mortalit induite par choc toxique et septique en inhibant la rponse inflammatoire exubrante qui caractrise ces pathologies (Roger T. et al., Blood 2011). Afin de caractriser plus en dtails l'influence des HDACi sur la rponse immunitaire inne, nous avons galement analys l'impact de deux HDACi, l'acide valproque (VPA) et la trichostatin A (TSA), sur les principaux mcanismes de dfenses antimicrobiennes des macrophages. Dans un second article (Mombelli et al., Journal of Infectious Diseases 2011), nous rapportons que la VPA et la TSA diminuent la capacit des macrophages phagocyter et dtruire les bactries Gram-positives Staphylococcus aureus et Gram-ngatives Escherichia coli. En accord avec ces donnes, les HDACi inhibent l'expression de molcules impliques dans la phagocytose comme les rcepteurs boueurs (Msr 1 et CD14) et de type lectine (Dectin 1), ainsi que les rcepteurs aux opsonines (intgrines). Par ailleurs, les HDACi interfrent avec l'expression de diffrentes sous units de la NADPH oxydase (gp91p"ox, p22 phox, p47 phox, p40 phox, p67 phox et Rac2) et de l'oxyde nitrique (NO) synthtase inductible (iNOS), qui sont responsables de la production de drivs oxygns (ROS) et nitrogns (NO) essentiels la destruction des microorganismes dans le phagolysosome. En rsum, cette tude dcrit des mcanismes par lesquels les HDACi diminuent la capacit d'ingrer et de dtruire les bactries, et ainsi augmentent la susceptibilit aux infections. Globalement, nos donnes indiquent que les HDACi sont de puissants antiinflammatoires qui pourraient favoriser la survenue d'infections chez les patients cancreux traits avec ces drogues, comme semble par ailleurs le suggrer des tudes cliniques rapportes dans la littrature. Nous proposons un suivi clinique infectieux strict chez les patients traits avec ces agents.
Resumo:
Este trabalho objetivou identificar a produo cientfica sobre orientao ao ostomizado, publicada entre 1970 e 2004 e classific-la segundo quantidade, cronologia de publicao, funo exercida pelos autores, procedncia, tipo, assunto, origem e palavras-chave; utilizando a metodologia bibliomtrica. As 27 publicaes foram coletadas no banco de dados DEDALUS, nas bases de dados LILACS, MEDLINE e de uma docente da EEUSP (referncia nacional em ostomia). No total, 19 so nacionais, oito internacionais e escritas principalmente por enfermeiros e estomaterapeutas. Os tipos so: dissertaes, teses, folhetos, livros e artigos. A procedncia dos materiais da academia, laboratorial e hospitalar. A dcada de noventa a que concentra o maior nmero de trabalhos nesta rea temtica. Todos tm como finalidade elevar a auto-estima dos pacientes para faz-los sentir que, mesmo com uma ostomia, eles podem levar uma vida normal. Assim, o estudo mostrou que a enfermeira como educadora de um ostomizado deve conhecer tais publicaes para melhorar a assistncia.
Resumo:
Objetivou-se verificar a clareza na organizao dos sistemas sociais da Teoria de Alcance de Metas. Estudo terico-reflexivo, tendo como referencial para anlise um Modelo de Anlise de Teorias. Desenvolvido nos meses de abril, maio e junho de 2005, sendo analisadas uma Dissertao e duas Teses. Quanto definio operacional dos conceitos, as trs pesquisas definiram adequadamente os conceitos que o Modelo Conceitual aponta. Em relao validade de contedo e construto, foram identificadas lacunas. Em um estudo, por exemplo, os grupos de trabalho nos quais os indivduos estavam inseridos no foram condizentes com o conceito de sistema social apresentado pela Teoria. Dessa forma, os estudos necessitam ainda de ateno quanto utilizao de conceitos apresentados em teorias ou em modelos tericos.
