939 resultados para NESTED PCR
Resumo:
本文运用PCR技术,分别从烟草和B. amyloliquefaciens的基因组DNA中扩增出了TA29基因5'区调控顺序、Barnase和Barstar基因,克隆后进行序列分析,表明其核苷酸顺序与文献报道的一致,然后进行了初步的融合基因的构建。另外,凝胶滞后实验表明,水稻花粉(含绒毡层组织)细胞核中某种蛋白因子能够与TA29基因5'区调控顺序发生特异的结合。本文还对TA29基因5'区调控顺序及Barnase和Barstar基因的潜在应用价值和存在的问题进行了讨论。
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本文采用溶菌酶法、CTAB法、微波法及CTAB+微波法等4种方法进行Frankia菌Cp11基因组DNA的提取。结果表明四种方式均可行,但以CTAB法及微波法最为有效。提取方法与REP-PCR带型间关系的研究表明,方法上的差异不会影响到REP-PCR带型的变化。对14株Frankia菌株作REP-PCR分析,并对之进行比较分类,证明REP-PCR方法不但能实现菌株间的差异鉴别,还能有效地进行Frankia菌的分类。这一结果与DNA同源相关性所得的分类结果具有良好的相关性。选用20个随机引物,对分自2个分类接种群的8株Frankia纯培养的总DNA进行随机扩增。其中引物OPW15和OPW16能扩增得到较为稳定的RAPD图谱。扩增产物分子量大都分布在0.5-4Kb之间。从稳定的RAPD扩增图谱看,Frankia菌间存在有丰富的遗传多样性;在选定适当引物情况下,能依据共同带型将Frankia菌化归为同一分类接种群。
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本文应用重复基因外回纹序列rep-PCR方法直接扩增长日山三种不同赤杨和云南不同地区早冬瓜根瘤内的Frankia菌基因,所获得的REP指纹图谱揭示Frankia菌具有丰富的基因多样性。研究结果表明Frankia菌多样性随地域,海拔,坡问不同而变:多样性指数与自然选抒)玉力大小成正相关:自然选择压力是产生和保持Frankia菌基因多样性的重要因子。同时发现Frankia菌基因型与地域有紧密关系:所观察的云南各地区中,感染高黎贡山旱冬瓜的Frankia菌基因多样性最为丰富。推测与高黎贡山旱冬瓜共生的Frankia可能作为种储备库,为其它地区的寄主植物提供了祖先菌株。在对长白山三种赤杨(东北赤杨,西伯利亚赤杨和色赤杨)根瘤内几百游殆菌基因多样性考察过程中发现,Frankia菌基因类型与寄主赤杨种型关系密切。同时海拔对感染东北赤杨的Frankia菌基因多样性也有一定影响。感染西伯利亚赤杨和色赤杨的Frankia菌享有相同的基因型,可能有较近的亲缘关系。