Enhanced viability of corneal epithelial cells for efficient transport/storage using a structurally-modified calcium alginate hydrogel

Aims: Therapeutic limbal epithelial stem cells could be managed more efficiently if clinically validated batches were transported for ‘on-demand’ use. Materials & methods: In this study, corneal epithelial cell viability in calcium alginate hydrogels was examined under cell culture, ambient and chilled conditions for up to 7 days. Results: Cell viability improved as gel internal pore size increased, and was further enhanced with modification of the gel from a mass to a thin disc. Ambient storage conditions were optimal for supporting cell viability in gel discs. Cell viability in gel discs was significantly enhanced with increases in pore size mediated by hydroxyethyl cellulose. Conclusion: Our novel methodology of controlling alginate gel shape and pore size together provides a more practical and economical alternative to established corneal tissue/cell storage methods.

Influence of substrate on corneal epithelial cell viability within ocular surface models

Corneal tissue engineering has improved dramatically over recent years. It is now possible to apply these technological advancements to the development of superior in vitro ocular surface models to reduce animal testing. We aim to show the effect different substrates can have on the viability of expanded corneal epithelial cells and that those which more accurately mimic the stromal surface provide the most protection against toxic assault. Compressed collagen gel as a substrate for the expansion of a human epithelial cell line was compared against two well-known substrates for modeling the ocular surface (polycarbonate membrane and conventional collagen gel). Cells were expanded over 10 days at which point cell stratification, cell number and expression of junctional proteins were assessed by electron microscopy, immunohistochemistry and RT-PCR. The effect of increasing concentrations of sodium lauryl sulphate on epithelial cell viability was quantified by MTT assay. Results showed improvement in terms of stratification, cell number and tight junction expression in human epithelial cells expanded upon either the polycarbonate membrane or compressed collagen gel when compared to a the use of a conventional collagen gel. However, cell viability was significantly higher in cells expanded upon the compressed collagen gel. We conclude that the more naturalistic composition and mechanical properties of compressed collagen gels produces a more robust corneal model.

Cyclodextrin-mediated enhancement of riboflavin solubility and corneal permeability

Cyclodextrins are water-soluble cyclic oligosaccharides consisting of six, seven, and eight α-(1,4)-linked glucopyranose subunits. This study reports the use of different cyclodextrins in eye drop formulations to improve the aqueous solubility and corneal permeability of riboflavin. Riboflavin is a poorly soluble drug with a solubility up to 0.08 mg mL–1 in deionized water. It is used as a drug topically administered to the eye to mediate UV-induced corneal cross-linking in the treatment of keratoconus. Aqueous solutions of β-cyclodextrin (10–30 mg mL–1) can enhance the solubility of riboflavin up to 0.12–0.19 mg mL–1, whereas the higher concentration of α-cyclodextrin (100 mg mL–1) achieved a lower level of enhancement of 0.11 mg mL–1. The other oligosaccharides were found to be inefficient for this purpose. In vitro diffusion experiments performed with fresh and cryopreserved bovine cornea have demonstrated that β-cyclodextrin enhances riboflavin permeability. The mechanism of this enhancement was examined through microscopic histological analysis of the cornea and is discussed in this paper.

Oxidized alginate hydrogels as niche environments for corneal epithelial cells

Chemical and biochemical modification of hydrogels is one strategy to create physiological constructs that maintain cell function. The aim of this study was to apply oxidised alginate hydrogels as a basis for development of a biomimetic niche for limbal epithelial stem cells that may be applied to treating corneal dysfunction. The stem phenotype of bovine limbal epithelial cells (LEC) and the viability of corneal epithelial cells (CEC) were examined in oxidised alginate gels containing collagen IV over a 3-day culture period. Oxidation increased cell viability (P corneal extracellular matrix proteins can influence corneal epithelial cell function in a manner that may impact beneficially on corneal wound healing therapy.

The secretome of alginate-encapsulated limbal epithelial stem cells modulates corneal epithelial cell proliferation

Limbal epithelial stem cells may ameliorate limbal stem cell deficiency through secretion of therapeutic proteins, delivered to the cornea in a controlled manner using hydrogels. In the present study the secretome of alginate-encapsulated limbal epithelial stem cells is investigated. Conditioned medium was generated from limbal epithelial stem cells encapsulated in 1.2% (w/v) calcium alginate gels. Conditioned medium proteins separated by 1-D gel electrophoresis were visualized by silver staining. Proteins of interest including secreted protein acidic and rich in cysteine, profilin-1, and galectin-1 were identified by immunoblotting. The effect of conditioned medium (from alginate-encapsulated limbal epithelial stem cells) on corneal epithelial cell proliferation was quantified and shown to significantly inhibit (Pcorneal epithelial cell proliferation. We conclude that limbal epithelial stem cells encapsulated in alginate gels may regulate corneal epithelialisation through secretion of inhibitory proteins.

The effects of retinoic acid on human corneal stromal keratocytes cultured in vitro under serum-free conditions

Purpose: Retinoic acid (RA) is a metabolite of vitamin A that plays a fundamental role in the development and function of the human eye. The purpose of this study was to investigate the effects of RA on the phenotype of corneal stromal keratocytes maintained in vitro for extended periods under serum-free conditions. Methods: Keratocytes isolated from human corneas were cultured up to 21 days in serum-free media supplemented with RA or DMSO vehicle. The effects of RA and of its removal after treatment on cell proliferation and morphology were evaluated. In addition, the expression of keratocyte markers was quantified at the transcriptional and protein levels by quantitative PCR and immunoblotting or ELISA, respectively. Furthermore, the effects of RA on keratocyte migration were tested using scratch assays. Results: Keratocytes cultured with RA up to 10×10-6 M showed enhanced proliferation and stratification, and reduced mobility. RA also promoted the expression of keratocyte-characteristic proteoglycans such as keratocan, lumican, and decorin, and increased the amounts of collagen type-I in culture while significantly reducing the expression of matrix metalloproteases 1, 3, and 9. RA effects were reversible, and cell phenotype reverted to that of control after removal of RA from media. Conclusions: RA was shown to control the phenotype of human corneal keratocytes cultured in vitro by regulating cell behaviour and extracellular matrix composition. These findings contribute to our understanding of corneal stromal biology in health and disease, and may prove useful in optimizing keratocyte cultures for applications in tissue engineering, cell biology, and medicine.

Enhancement in corneal permeability of riboflavin using calcium sequestering compounds

Ethylenediaminetetraacetic acid, ethylenediamine-N,N′-disuccinic acid and ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N′,N′-tetraacetic acid are polyaminocarboxylic acids that are able to sequester metal ions. Calcium is implicated in maintenance of intercellular matrix, zonula occludens (tight junctions) and zonula adherens of epithelium and endothelium cells. Corneal epithelium is impervious to many aqueous formulations due to it being lipophilic, whereby transcellular drug transit is resisted, whilst tight junctions restrict access via the paracellular route. Research has shown that integrity of tight junctions breaks down through loss of Ca2+ for endothelial and epithelial cells. This study investigates different Ca2+ sequestering compounds and their effect on corneal permeability of riboflavin at physiological pH. Riboflavin is a topically administered ocular drug applied during UV-induced corneal cross-linking for the treatment of keratoconus.

Corneal graft survival after therapeutic keratoplasty for Acanthamoeba keratitis

Purpose: To describe corneal graft survival and visual outcome after therapeutic penetrating keratoplasty in patients with Acanthamoeba keratitis (AK) that is unresponsive to clinical treatment. Methods: Retrospective study. Thirty-two patients with AK who underwent therapeutic penetrating keratoplasty (tPK) from August 1996 to August 2005 were included. Data relating to clinical features, visual acuity, surgical technique, graft survival and complications were collected. Graft survival was evaluated by the Kaplan-Meier method and comparisons were performed using the Log-rank test. Results: Most patients (62.5%) were female. Mean age [+/- standard deviation (SD)] was 35 (+/- 13) years (range 15-68 years). All patients were contact lens wearers. Eighteen patients (56%) presented paralytic mydriasis and glaucoma during the treatment. Thirteen patients (40%) developed glaucoma after surgery; eight of them (61%) required a second PK because of graft failure. Of the 32 keratoplasty eyes, 56.2% presented graft failure at any follow-up point. Forty-five per cent of graft failures occurred before the 12 month follow-up, so 55% remained clear in the first year after surgery. Twelve patients underwent a second PK; seven of them failed and 45% were clear at 1 year. Two patients presented graft recurrence of amoebic infection. There was no significant difference in graft survival when eyes with or without mydriasis were compared (P = 0.40). Eyes with glaucoma presented a significantly shorter graft survival (P = 0.01). Conclusion: Penetrating keratoplasty is a treatment option for eyes that are unresponsive to clinical treatment infections. However, graft survival is poor; postoperative glaucoma is frequent and is associated with shorter graft survival.

Experiência vivida de empreendedoras que buscam financiamento no Banco do Povo

Dissertação apresentada ao Programa de Mestrado em Administração da Universidade Municipal de São Caetano do Sul - USCS

Imagens ecocardiográficas fetais integradas a banco de dados

Este trabalho discorre no escopo de informática médica, no âmbito da Unidade de Cardiologia Fetal do Instituto de Cardiologia - Fundação Universitária de Cardiologia do RS. Sabe-se que a medicina gera um grande volume de dados, sejam eles, textuais, numéricos, gráficos ou mesmo imagens ou sons geradas por equipamentos de ultra-som, tomógrafos computadorizados, ressonância magnética, RX, entre outros. Este trabalho desenvolve a integração das imagens ecocardiográficas fetais ao banco de dados. Atualmente, a tendência observada no desenvolvimento de sistemas de informações é a utilização de banco de dados que sejam capazes de manipular informações completas sobre seus pacientes, tais como: consultas, medicamentos, internações, bem como os laudos de exames com suas respectivas imagens quando estes possuírem. É com base nestas tendências que foram definidos os tópicos relevantes a serem estudados e implementados neste trabalho, integrando os estudos ecocardiográficos fetais com as informações do banco de dados da unidade de cardiologia fetal (UCF). Neste trabalho está apresentado o modelo do banco de dados da UCF. Para esta modelagem foram realizados estudos para aquisição de conhecimento da área e também para compreender as necessidades da unidade Da mesma forma, as imagens ecocardiográficas fetais foram estudadas para que fosse possível serem modeladas junto ao banco de dados. Para esta modelagem foi necessário fazer uma breve revisão dos conceitos utilizados pelo paradigma de orientação a objetos, uma vez que o modelo foi desenvolvido utilizando esta metodologia. As imagens ecocardiográficas fetais receberam grande atenção, uma vez que para elas foram criadas classes distintas. Também para aumentar a funcionalidade foram estudados conceitos de imagem digital, para posterior aplicação sobre as imagens do domínio. Foram realizados estudos sob manipulação de imagens, como modificação do brilho, medidas, filtros e formas de armazenamento. Considerando os formatos de gravação, dois padrões foram contemplados neste trabalho: o utilizado pela placa disponível no instituto denominado DT-IRIS e o DICOM que é um padrão internacional de armazenamento e comunicação de imagens médicas. Por fim, a implementação do protótipo procura demonstrar a viabilidade do modelo proposto, disponibilizando dados textuais, imagens e ainda realizando manipulações sobre estas imagens do domínio.

Fatores da satisfação com o atendimento bancário dispensado aos clientes especiais do Banco do Brasil em Campo Grande - MS

Com a estabilização da economia, as organizações financeiras nacionais, perderam abruptamente os ganhos inflacionários que ocultavam gestões, às vezes temerárias, e ineficiências que solapavam os patrimônios até então tidos como confiáveis e robustos. Para tanto, elas tiveram de reduzir, bruscamente, suas despesas e seus quadros de funcionários, deixando seus clientes à mercê de filas, ou relegados ao eficiente, porém frio atendimento informatizado. A incessante busca da melhoria nos serviços bancários no Brasil tem se mostrado como um dos caminhos mais viáveis para a obtenção de vantagem competitiva duradoura, em um ambiente de constantes mutações e elevada competitividade, agora intensificada com a consistente chegada dos bancos internacionais ao País. As acentuadas mudanças tecnológicas e a volatilidade dos diferenciais mercadológicos têm promovido uma frenética busca em conhecer melhor o perfil, o comportamento, as necessidades e aspirações dos clientes, para disponibilizar produtos e serviços customizados e estabelecer uma relação duradoura com os Levantamentos efetuados pelo Banco Central revelam que os bancos privados mostraram menor produtividade dos recursos humanos, porém possuíam melhor racionalidade nos gastos administrativos e maior grau de prestação de serviços. Como, cada vez mais, a competitividade se dará pela prestação de serviços, os bancos estatais encontram-se em desvantagem competitiva. Agrega-se ao fato, o caráter compulsório para que os bancos estatais realizem toda sorte de recolhimentos, pagamentos ou financiamentos governamentais, fazendo com que suas agências fiquem superlotadas, enquanto seus concorrentes privados podem garimpar e cativar os clientes que mais lhe interessam. Com o advento da estabilização econômica, que minimizou o lucro dos bancos e a ilusão de rentabilidade por parte dos clientes, o setor financeiro tornou-se mais vulnerável a questionamentos e suscetível à insatisfação de seus clientes, antes dissipada pelos ilusórios ganhos. Quando um cliente avalia sua satisfação com um serviço bancário, não dissocia dela os diversos componentes. É a impressão global que domina. O cliente tende a deter-se no elo mais fraco do atendimento e generalizar seus defeitos a todo o serviço. A satisfação dos clientes e a qualidade do atendimento e serviços nunca podem ser considerados definitivos, e sim um processo dinâmico e inacabado. Esta dissertação Prospectou e analisou os fatores da satisfação com o atendimento bancário dispensado aos clientes especiais do Banco do Brasil de Campo Grande, MS, e disponibilizará para a empresa pesquisada a íntegra das informações sobre os fatores da satisfação com o atendimento bancário, materializando elementos de importância crucial para que essa Instituição possa otimizar a vantagem competitiva com o mercado.

Uma Avaliação de abordagens alternativas para armazenar RDF em banco de dados relacional

O Resource Description Framework (RDF) é uma infra-estrutura, que possibilita a codificação, troca e reuso de metadata estruturado. Metadata é dados sobre dados. O termo refere a qualquer dado usado para ajudar a identificação, descrição e localização de recursos eletrônicos na rede. O RDF permite adicionar declarações, sinônimos e palavras que não estão presentes nos recursos, mas que são pertinentes a eles. Uma declaração RDF pode ser desenhada usando diagramas de arcos e nodos, onde os nodos representam os recursos e os arcos representam as propriedades nomeadas. O modelo básico consiste em recursos, propriedades e objetos. Todas as coisas sendo descritas pelas declarações RDF são chamadas de recursos. Um recurso pode ser uma página da Web inteira ou um elemento específico HTML ou XML dentro de um documento fonte. Uma propriedade é um aspecto específico, característica, atributo, ou relação usada para descrever um recurso. O objeto pode ser um outro recurso ou um literal. Estas três partes, juntas, formam uma declaração RDF. O resultado do parser para recursos com metadata RDF, é um conjunto de declarações referentes aquele recurso. A declaração destas propriedades e a semântica correspondente delas estão definidas no contexto do RDF como um RDF schema. Um esquema não só define as propriedades do recurso (por exemplo, título, autor, assunto, tamanho, cor, etc.), mas também pode definir os tipos de recursos sendo descritos (livros, páginas Web, pessoas, companhias, etc.). O RDF schema, provê um sistema básico de tipos necessários para descrever tais elementos e definir as classes de recursos. Assim, os recursos constituindo este sistema de tipos se tornam parte do modelo RDF de qualquer descrição que os usa. A geração de modelos RDF pode ser conseguida através de algoritmos implementados com linguagens de programação tradicionais e podem ser embutidos em páginas HTML, documentos XML e até mesmo em imagens. Com relação a modelos em imagens, servidores Web específicos são usados para simular dois recursos sobre o mesmo URI, servindo ora a imagem ora a descrição RDF. Uma alternativa para armazenar e manipular grande quantidade de declarações RDF é usar a tecnologia de banco de dados relacional. Abordagens para armazenar declarações RDF em banco de dados relacional foram propostas, mas todas elas mantêm modelos diversos de diferentes fontes. Critérios de avaliação como tempo de carga, proliferação de tabelas, espaço, dados mantidos e custo de instruções SQL foram definidos. Duas abordagens apresentaram resultados satisfatórios. Com uma nova abordagem proposta por este trabalho se obteve melhores resultados principalmente no aspecto de consultas. A nova proposta provê mecanismos para que o usuário faça seu próprio modelo relacional e crie suas consultas. O conhecimento necessário pelo usuário se limita em parte aos modelos mantidos e ao esquema RDF.

Gerenciamento do risco de crédito : cálculo do risco de crédito para a carteira de um banco de varejo

O presente trabalho objetivou a realização de um estudo de caso sobre o tema risco de crédito. Avaliou-se o risco de crédito sob dois vetores: o risco esperado e o risco não esperado. Procede-se então a uma revisão dos principais modelos de gestão da carteira de crédito destacando-se suas características, aplicações e limitações. O modelo da autarquia é comparado aos modelos utilizados pelo mercado, os quais são apresentados em grau crescente de complexidade. O modelo de mercado utilizado neste trabalho foi constituído a partir do credit scoring, uma ferramenta estatística de pontuação de créditos derivada da aplicação da técnica estatística denominada Análise Discriminante. Este modelo resultou na boa discriminação dos clientes com necessidades emergenciais de empréstimos (bons clientes) dos clientes com situação financeira precária (maus clientes) possibilitando uma boa prevenção da probabilidade de inadimplência. A partir das classes de risco constituídas foi possível a aplicação da análise de portfolio para o cálculo da perda potencial na carteira. Assim, por meio de um estudo de caso, realizado em uma instituição financeira brasileira foram comparadas as medidas de capital e de risco de crédito estabelecidos pelo Banco Central do Brasil, através das resoluções 2.099/94 e 2.682/99, com as medidas calculadas a partir de um modelo de credit scoring. Essa comparação resultou na avaliação da eficácia da norma quanto à mensuração do risco em carteiras de crédito. Os resultados apontam o conservadorismo da autarquia no cálculo desses saldos, penalizando a instituição financeira analisada ao exigir a constituição de provisão e patrimônio líquido mínimo acima do que seria necessário. O risco calculado a partir do modelo de credit scoring para uma carteira de crédito direto ao consumidor foi cerca de 20% inferior aos montantes calculados pelo Banco Central do Brasil.

Impactos da aprendizagem organizacional nas práticas de auditoria interna : um estudo no Banco do Brasil

Diante de mercados globais, interligados em tempo real, as empresas se vêem diante do desafio de se tornarem mais flexíveis, centrarem-se em suas principais competências e, sobretudo, terem a capacidade de dar respostas rápidas e adequadas às mudanças, em um ambiente onde a tempestividade da resposta pode ditar o sucesso ou o fracasso de uma empresa. Nesse contexto, a auditoria interna, em razão do seu posicionamento estratégico e permeabilidade por toda a organização, pode contribuir mais efetivamente para a melhoria dos processos produtivos e de gestão das organizações, através de uma atuação diferenciada de seus auditores. Por sua vez, a aprendizagem organizacional, entendida como um processo de apropriação e geração de novos conhecimentos, voltado para a construção ou desenvolvimento de novas competências, pode potencializar o valor agregado dos trabalhos de auditoria. Dentro dessa perspectiva, a resolução coletiva de problemas, baseada nas constatações de auditoria, pode tornar-se um veículo eficaz para alavancar o processo de aprendizagem por toda a organização. O presente trabalho procura avaliar os impactos da difusão dos princípios e conceitos de aprendizagem organizacional nas práticas de trabalho dos auditores internos, através de uma estratégia focada na resolução coletiva de problemas, tomando como objeto de pesquisa o processo desenvolvido na área de auditoria interna do Banco do Brasil S.A. A pesquisa, qualitativa na sua essência e orientada pela Grounded Theory (Glaser & Strauss, 1967; Strauss & Corbin, 1990), abrangeu o acompanhamento de 30 eventos desenvolvidos no âmbito da unidade de pesquisa, desembocando em 34 fontes primárias, derivadas de relatos, relatórios, transcrição de vídeos e entrevistas, memorandos, etc. Como resultante, o trabalho apresenta e avalia os principais impactos verificados nas práticas de auditoria interna, bem como nas ações dos indivíduos participantes do processo. O estudo abrange, também, a identificação das principais barreiras para aprendizagem e das competências básicas requeridas para condução de um processo de aprendizagem organizacional dessa natureza.