Estudos citogenéticos de mutações na transformação de neoplasias benignas em malignas do sistema musculoesquelético

O câncer tem sido alvo de incessantes pesquisas sobre sua etiologia, desenvolvimento, progresso e tratamentos. Sua importância no campo científico se dá pela sua alta taxa de mortalidade e morbidade. O fato de que seja uma doença genética, que pode ter interferência ambiental e dietética, está cada vez mais elucidado, porém ainda existem muitos mecanismos a serem desvendados. As neoplasias ósseas, benignas ou malignas, e processos inflamatórios ósseos acometem desde crianças até adultos e idosos, podendo causar danos físicos, incapacidade motora e até a morte. Portanto, presumir o potencial de transformação maligna das lesões benignas, agressividade tumoral, capacidade de invasão tecidual, probabilidade de recidiva, propensão ao desenvolvimento de metástases e resposta ao tratamento, é um valioso expediente na escolha da proposta terapêutica. Estudos genéticos e citogenéticos têm ajudado a aumentar o entendimento sobre a carcinogênese, progressão tumoral, prognósticos e diagnósticos. Portanto, este estudo teve como objetivo detectar mutações e marcadores cromossômicos consistentes e recorrentes na transformação de tumores benignos em malignos no sistema musculoesquelético, através de análises com citogenética clássica, e relacionar estes achados com o prognóstico e diagnóstico dos pacientes. Dentre os casos coletados e analisados citogeneticamente, foram selecionados três casos de lesões ósseas benignas e três lesões ósseas malignas tidas como a progressão tumoral dos respectivos casos benignos, para discussão e relato de caso. Os achados citogenéticos relataram consistentes alterações numéricas e estruturais clonais em regiões cromossômicas com genes importantes envolvidos na progressão tumoral. Pode-se citar a perda da região contendo o gene TP53, supressor tumoral, tanto em lesões benignas como em maligna, como um dos achados mais relevantes neste estudo. Dessa forma, os resultados ...

Busca de parceiros físicos da proteína CRABP2, utilizando o sistema de duplo-híbrido em Saccharomyces cerevisae

A metilação de ilhas CpG em regiões regulatórias de vários genes tem sido descrita como um processo importante no silenciamento de genes supressores de tumor e diretamente envolvida no processo de carcinogênese de uma série de tumores. O estudo desses genes afetados pela metilação em tumores visa à procura de marcadores moleculares para o diagnóstico, prognóstico e tratamento de tumores, e também a caracterização do seu papel no processo biológico do câncer. O nosso grupo de pesquisa participou de um Projeto Temático que visa a identificação de genes metilados em tumores de cabeça e pescoço (processo 03/09497-3) e foi então proposta a utilização do sistema de duplo-híbrido de levedura como ferramenta no início da análise funcional destes genes. Dessa maneira, utilizando como isca o gene CRABP2 identificado como diferencialmente metilado em câncer de cabeça e pescoço, foi realizado o rastreamento de duplo-híbrido para a identificação de interações físicas proteína-proteína. Foram rastreados aproximadamente 2,1x105 transformantes neste sistema, dos quais 550 foram inicialmente positivos para His+. Desses, 182 transformantes confirmaram a marca His+ e foram testados para -galactosidase. Em seguida, 19 foram selecionados para passar pela etapa do “plasmid linkage”. Após esse teste, 9 clones confirmaram a ligação dos marcadores His+ e β-gal+ com a presença do plasmídeo LEU2 . Assim, após o sequenciamento dos insertos contidos nos clones identificados, ciclina D3 (CCND3), alfa-macroglobulina 2 (A2M) (2 clones), canal aniônico dependente de voltagem 2 (VDAC2), tubulina alfa 1 (TUBA1), tubulina alfa 2 (TUBA2), tubulina beta (TUBB), fator de ligação ao “enhancer” do gene interleucina 2 (ILF2) e desoxi-hipusina sintase (DHPS) emergiram como ligantes de CRABP2

Geração de vacinas antitumorais de células dendríticas humanas sensibilizadas com RNA de células tumorais pré-tratadas com agentes antineoplásicos

O câncer colorretal (CCR) é a terceira causa mais comum de câncer no mundo em ambos os sexos e a segunda causa em países desenvolvidos. Seu tratamento convencional é baseado na cirurgia associada à radioterapia e à quimioterapia em dose máxima tolerável, para tentativa de eliminação massiva das células tumorais. Tal abordagem, no entanto, pode causar efeitos colaterais importantes, entre eles as alterações hematopoiéticas e a supressão da resposta imune. As vacinas de células dendríticas mostram-se como opção terapêutica promissora para muitos tipos de câncer, havendo diferentes protocolos de preparação e sensibilização dessas células para dirigir a resposta antitumoral específica. Alguns agentes antineoplásicos em doses ultrabaixas mostraram modular positivamente as células dendríticas (DCs) e, na célula tumoral, promover alterações na transcrição de vários genes imunologicamente relevantes. Considerando que, em estudos prévios, tais mudanças transcricionais resultaram em aumento de imunogenicidade das células tumorais, hipotetizamos que o RNA das células pré-tratadas deve ser mais eficiente do que o RNA das células originais para preparação de vacinas de células dendríticas. Assim, objetivamos avaliar se o tratamento de células do tumor de cólon humano (HT-29) com PAC ou 5-FU/LEUCO torna seu RNA mais eficiente para preparação dessas vacinas. Para essa investigação, DCs humanas geradas a partir de monócitos de sangue periférico foram transfectadas com RNA total das células tumorais pré-tratadas e, a seguir, testadas quanto à capacidade de apresentação de antígenos e indução de células T citolíticas específicas. Apesar da baixa viabilidade celular pós eletroporação, os resultados obtidos sugerem que o tratamento de células tumorais com concentrações não tóxicas de 5-FU ou PAC promove alteração de expressão... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Avaliação da adição da Lactobacillus acidophilus CRL 1014 e Enterococcus faecium CRL 183 sobre a microbiota intestinal em Simulador do Ecossistema Microbiano Humano (SEMH)

Os micro-organismos probióticos são utilizados em vários produtos alimentícios ou em suplementos alimentares. Simuladores intestinais representam uma opção de realização de estudos com a microbiota intestinal. O simulador do ecossistema microbiano humano (SEMH) consiste em uma sucessão de cinco reatores conectados que representam as diferentes partes do trato gastrointestinal humano com seus respectivos valores de pH, tempo de residência e capacidade volumétrica. O SEMH foi utilizado para estudar o efeito do Enterococcus faecium CRL 183 e do Lactobacillus acidophilus CRL 1014 sobre a microbiota intestinal nativa. Inicialmente, o inóculo preparado com fezes humanas foi introduzido nos três reatores, responsáveis por simular o cólon ascendente, transverso e descendente. Após duas semanas de estabilização foi adicionado, diariamente, durante quatro semanas, E. faecium CRL 183 e L. acidophilus CRL 1014 contendo 108 UFC/mL nos três compartimentos que simulam o cólon ascendente, transverso e descendente. Após as quatro semanas de tratamento o sistema permaneceu durante duas semanas sem adição de probióticos. Durante todo o experimento, foi realizado semanalmente a composição da microbiota intestinal baseada na enumeração de bactérias aeróbias e anaeróbias totais, Enterococcus spp., Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., Enterobactérias e Clostridium spp. Semanalmente, também, foram realizadas análises de ácidos graxos de cadeia curta (acetato, butirato e propionato) e amônia. Através da análise microbiológica observou-se alterações significativas na composição da microbiota do SEMH no decorrer do período do experimento. Alterações significativas também foram observadas na concentração de amônia e de AGCC, podendo assim observar a influência da inoculação de probióticos na microbiota nativa e os metabólitos produzidos por ela

Proliferação e Morte Celular (Apoptose) avaliadas em ratos Lewis após tratamento com mistura de praguicidas em baixas doses

The use of pesticides in Brazil has intensified over the years. And since 2009 it was ranked as the largest market for pesticides worldwide. The consequential diffuse contamination of the environment is therefore due to the increasing number of chemicals of different classes, origins and modes of action. Little is known about the action of pesticides on human health in situations of co-exposure. Possible toxic effects are not restricted to agricultural and industrial workers, but also the general population that may be exposed continuously to its residues in food and water. Although these pesticides are mostly present in the environment at low doses, it must be considered that possible cumulative or synergistic effects may occur when there are concurrent or sustained exposure for two or more of these agents, which can lead to late manifestation of subclinical damages, sometimes irreversible. Thus, the specific objective of this study was to assess the effect of carcinogenesis promotion of a mixture of pesticides at low doses and analyze the phenomena of cell proliferation and apoptosis in rat liver. A total of 50 male Lewis rats was separated into 5 groups for 8 weeks in a medium term hepatocarcinogenesis model. The three different classes of pesticides (dieldrin, dicofol, endosulfan, dichlorvos and permethrin), whose residues were detected by ANVISA during the period from 2001 to 2005 in tomatoes cultures, were added to the feed of rats initiated to hepatocarcinogenesis with diethylnitrosamine (DEN- 200mg/kg ip). We used two different mixtures, one with no toxic effects at doses (MEX1) referring to the NOEL (no-observed-effect level) and another at doses LOEL / LEL / LOAEL (Lowest-observed-effect level / Lowest-effect level / Lowest -observed-adverse-effect level), to the installation of adverse effects (MEX2), derived from chronic studies. All animals ...(Complete abstract click electronic access below)

Influência do SNP T3801C CYP1A1 sobre os níveis de danos oxidativos no DNA de células da mucosa gástrica de pacientes infectados pelo H. Pylori

Helicobacter pylori (H. pylori) is a common gastric pathogen that has infected more than 50% of the population of the world and it has been associated with chronic gastritis, gastric ulcers, duodenal ulcer, and gastric cancer. Although, almost all infected people develop gastritis, there is a variety of clinical outcomes, and only a minority (<1%) of infected individuals develop gastric cancer. There are evidences which suggest that the chronic inflammatory reaction caused by the bacterial infection may be involved in the production of reactive oxygen species or reactive nitrogen species. It may lead to DNA damage, which together with the cellular response could lead to gene mutations, chromosomal aberrations characterizing genomic instability that may represent the early step in gastric carcinogenesis. The extent and severity of gastric mucosal inflammation, as well as the clinical outcome of the infection, depend on a number of factors, including the host genetic susceptibility such SNP T3801 CYP1A1, immune response, age at which the infection was acquired, environmental factors, especially dietary and bacterial virulence factors. Due to the risk of developing gastric cancer in humans infected by H. pylori, we used the Comet Assay to investigate the influence of the SNP T3801C CYP1A1 on levels of oxidative DNA damage in gastric epithelial cells. The study was conducted with biopsies from the gastric antrum and corpus of 103 H. pylori-infected patients and 24 uninfected control patients. Genotype of SNP T3801C CYP1A1 was determined by PCR-RFLP and DNA damage levels were measured in gastric mucosal cells from antrum and corpus by the Comet assay. Levels of DNA damage in gastric mucosa cells from antrum and corpus of H. pylori-infected patients with mild, moderate, severe gastritis, and gastric cancer were significantly higher compared to uninfected normal mucosa cells. However, levels... (Complete abstract click electronic access below)

Avaliação do efeito da gastrectomia na motilidade e no esvaziamento gástrico em ratos por biosusceptometria de corrente alternada

The study of gastrointestinal tract (GIT) functions is necessary due to the increasing number of pathologies associated with it. Directly influencing the quality of life, the gastrointestinal tract provides a number of parameters that, when analyzed, allow us to describe its dysfunctions. Thus, many techniques can be combined to obtain these properties related to the GIT. However, these techniques are often invasive, require surgery, catheter insertion, or to build a temporal model of these functions, require the sacrifice of animals in a series of data collection. The technique used in this study has the advantage of having a low operating cost, being free of ionizing radiation, non-invasive and is known as biosusceptometry AC (BAC), used to evaluate the properties of the GI tract by monitoring the position and concentration of materials magnetically marked. The sensor consists of two pairs of coils, one reference and one for detection. A fixed base line separates the sensing and reference coils, and also functions as support for the instrumentation. It is also important to note that the detection coils are arranged in a first order (subtraction) gradiometric way. The objective of this study was to analyze the effects of gastrectomy in gastric emptying and gastrointestinal transit time of solid food in rats using a BAC system associated with magnetic markers. To realize this study was constructed a dedicated BAC sensor, built to analyze these GIT properties. Data acquisition was obtained by aligning the magnetic sensor with the stomach and colon of the animal at pre-determined intervals. Thus, when approaching the magnetic material of the sensor, the balance created between the two sides of the sensor is broken. This imbalance can be measured, digitized and acquired. Tracer was used as a ration magnetically marked with ferrite... (Complete abstract click electronic access below)

Estudo citogenético em neoplasias e lesões proliferativas ósseas

A busca pela identificação de fatores que possam apontar o diagnóstico, a resposta terapêutica e sobrevida dos pacientes portadores de neoplasias ósseas tem sido incessante. Poderá ser de grande valia na escolha da proposta terapêutica presumir a agressividade tumoral, capacidade de invasão tecidual, propensão ao desenvolvimento de metástases e resposta ao tratamento. As neoplasias ósseas constituem um grupo heterogêneo de tumores, considerando-se os sítios anatômicos e a etiologia. Existe uma grande dificuldade para se estabelecer o prognóstico nestas patologias. Estudos citogenéticos possibilitam um melhor conhecimento antecipado dessas doenças. Embora fatores ambientais e dietéticos contribuam para a etiologia do câncer, as neoplasias se originam de um processo de múltiplos passos envolvendo alterações de genes e seleção clonal da progênie variante. Estas mutações ocorrem em classes de genes reguladores da proliferação celular como os oncogenes, genes supressores de tumor, fatores de crescimento, vias de sinalização e genes de reparo de DNA. Este projeto tem por objetivo detectar e descrever alterações cromossômicas consistentes e recorrentes através da utilização da citogenética clássica e o seu envolvimento no prognóstico em neoplasias ósseas, de pacientes do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP. Os conhecimentos sobre a biologia molecular melhoram o entendimento sobre os múltiplos aspectos da carcinogênese. Entretanto, embora, as perspectivas permaneçam, não houve até agora benefícios significativos em termos de prevenção, diagnóstico tratamento e seguimento dos pacientes com lesões ósseas. Este projeto visa estudos na tentativa de contribuir para um melhor entendimento e, por conseqüência, gerar dados para posteriores empregos em terapias mais eficazes para melhorar as taxas de sobrevida e beneficiar maior número de pacientes com neoplasias ósseas

Avaliação da atividade quimiopreventiva da substância Morelloflavona isolada de Garcinia xanthochymus

Câncer é o nome dado a um conjunto de mais de 100 doenças que têm em comum o crescimento desordenado (maligno) de células que invadem tecidos e órgãos, podendo espalhar-se (metástase) para outras regiões do corpo. Dividindo-se rapidamente, estas células tendem a ser muito agressivas e incontroláveis, determinando a formação de tumores (acúmulo de células cancerosas) ou neoplasias malignas. As causas de câncer são variadas, podendo ser externas ou internas ao organismo, estando inter-relacionadas. As causas externas referem-se ao meio ambiente e aos hábitos ou costumes próprios de uma sociedade. As causas internas são, na maioria das vezes, geneticamente pré-determinadas, e estão ligadas à capacidade do organismo de se defender das agressões externas (Sistema Imunológico ou acúmulo de mutações no DNA). A compreensão dos exatos mecanismos e a tentativa de inativar genes ou impedir as ações tóxicas de substâncias contribuirá para a elucidação de diversos pontos importantes para o entendimento da carcinogênese e, portanto, para novas estratégias de tratamento e de prevenção do câncer. O presente estudo tem como objetivo, avaliar o efeito da substância pura, morelloflavona, isolada da folha de Garcinia xanthochymus, planta típica do Cerrado no Estado de São Paulo, conhecida por sua variada atividade biológica (analgésica, antibacteriana, antioxidante, antiviral e antitumoral) devido aos seus grupos de metabólitos: xantonas, flavonóides, fenóis e acridonas. Assim, foram realizados: o ensaio da Quinona Redutase em paralelo com o ensaio do Violeta Cristal para análise da viabilidade celular em células de hepatocarcinoma murino (Hepa 1c1c7); o ensaio de Sulforrodamina B para análise da viabilidade celular em células de hepatocarcinoma humano (HepG2) e o ensaio do Cometa nos protocolos de genotoxicidade e antigenotoxicidade em células... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Avaliação da expressão proteica de PTEN, MDM2, P53 e AR em lesões proliferativas da próstata canina

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Bidens pilosa L: efeitos protetores na inflamação intestinal

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Efeito protetor in vivo de vacinas de células dendríticas sensibilizadas com RNA de células MC-38 pré-tratadas com agentes antineoplásticos em concentrações efetivas minímas

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Efeitos da dieta enriquecida com frutos das palmeiras Euterpe oleracea Mart. e Mauritia flexuosa L.f. na inflamação intestinal em ratos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Aspectos histopatológicos e expressão de receptores hormonais (AR e ERα) na próstata de ratos expostos ao Di-n-Butil-Ftalato (DBP) desde o período fetal, iniciados pela N-Metil-N-Nitrosuréia (MNU)

Tendo em vista a problemática mundial com relação à degradação dos materiais plásticos e sua dispersão no meio ambiente, e diante de estudo realizado anteriormente onde se observou alterações histopatológicas e bioquímicas na próstata de animais expostos ao DBP (Di-N-Butil-ftalato) no período perinatal, este estudo teve por objetivo avaliar o potencial carcinogênico do DBP administrado desde o período fetal e após iniciação pelo MNU em um modelo de carcinogênese prostática. Ratas prenhes foram divididas em 4 grupos experimentais: 2 tratados: n=16/grupo (TDBP100 e TDBP500) e 2 controles: n=8/grupo (CN e CMNU). O grupo TDBP100 foi exposto ao DBP (100 mg/kg) e o TDBP500 a 500 mg/kg do 15º. dia de gestação (DG15) até a 21º. dia pósnatal (DPN21), enquanto que os animais controle receberam o veículo. Após o desmame, os machos foram separados e os grupos tratados e CMNU receberam dose única de MNU (50 mg/Kg, i.p.) na 6ª. semana pós-natal. Metade dos animais tratados (n=8/grupo) continuaram recebendo o DBP (DBP100+ e DBP500+) após o desmame em doses semanais até o dia do sacrifício (DPN180), enquanto os demais foram mantidos pelo mesmo período sem tratamento (DBP100- e DBP500-).Após a aplicação do MNU, os animais foram submetidos a injeções semanais de Cipionato de Testosterona (promotor) 2mg/aplicação. No dia do sacrifício, o sangue foi coletado, os órgãos reprodutores foram pesados e fragmentos do lobo ventral da próstata foram processados para inclusão em resina e Paraplast para as análises estruturais; e imunocitoquímicas para a detecção de AR e ER. Fragmentos de próstata ventral foram congelados e estocados a -80ºC e após extração das proteínas, estas foram destinadas à reação de Western Blot para avaliar a expressão das mesmas proteínas. Houve diminuição na distância anogenital nos animais DBP500 no DPN1 quando comparado com o grupo controle apontando para o efeito efetivo do DBP ...

Filmes de gelana e pectina reticuladas ionicamente para liberação colônica

O cólon tem sido explorado nas últimas décadas como sítio de liberação de fármacos. A goma gelana e a pectina são polissacarídeos hidrofílicos naturais promissores para a obtenção de sistemas de liberação cólon-específica de fármacos, uma vez que são degradados especificamente por enzimas produzidas pela microbiota deste órgão. Filmes poliméricos apresentam grande aplicação no revestimento de formas farmacêuticas sólidas e podem permitir o controle das taxas de liberação de fármacos e/ou seu direcionamento para um órgão específico. Além disso, modificações químicas como a reticulação iônica podem alterar propriedades físico-químicas como reduzir a hidrofilia do sistema. Neste trabalho foram obtidos e caracterizados filmes de goma gelana e pectina reticuladas ionicamente com cátion trivalente (Al3+). Os efeitos da concentração de polímeros, agente reticulante e plastificante (glicerol) utilizados na preparação das amostras foram avaliados a partir da caracterização das propriedades mecânicas, físicas e químicas dos filmes. A análise macroscópica revelou filmes flexíveis, homogêneos e translúcidos e a análise por microscopia eletrônica de varredura mostrou que a reticulação contribuiu para a formação de filmes com superfícies rugosas. Os baixos valores de transmissão de vapor d'água obtidos indicam a possibilidade de uma importante proteção contra a umidade. A absorção de líquido pH-dependente dos filmes foi demonstrada e a menor absorção de líquido em meio ácido deve garantir uma proteção da forma farmacêutica, quando em contato com o meio gástrico. Os filmes se mostraram bastante mucoadesivos, o que deve favorecer a retenção da forma farmacêutica no sítio alvo e as características mecânicas se mostraram favoráveis para a elaboração de filmes para revestimento de formas farmacêuticas sólidas