Synapsin I interacts with c-Src and stimulates its tyrosine kinase activity

Synapsin I is a synaptic vesicle-associated phosphoprotein that has been implicated in the formation of presynaptic specializations and in the regulation of neurotransmitter release. The nonreceptor tyrosine kinase c-Src is enriched on synaptic vesicles, where it accounts for most of the vesicle-associated tyrosine kinase activity. Using overlay, affinity chromatography, and coprecipitation assays, we have now shown that synapsin I is the major binding protein for the Src homology 3 (SH3) domain of c-Src in highly purified synaptic vesicle preparations. The interaction was mediated by the proline-rich domain D of synapsin I and was not significantly affected by stoichiometric phosphorylation of synapsin I at any of the known regulatory sites. The interaction of purified c-Src and synapsin I resulted in a severalfold stimulation of tyrosine kinase activity and was antagonized by the purified c-Src-SH3 domain. Depletion of synapsin I from purified synaptic vesicles resulted in a decrease of endogenous tyrosine kinase activity. Portions of the total cellular pools of synapsin I and Src were coprecipitated from detergent extracts of rat brain synaptosomal fractions using antibodies to either protein species. The interaction between synapsin I and c-Src, as well as the synapsin I-induced stimulation of tyrosine kinase activity, may be physiologically important in signal transduction and in the modulation of the function of axon terminals, both during synaptogenesis and at mature synapses.

Chemotaxis in a lymphocyte cell line transfected with C-C chemokine receptor 2B: Evidence that directed migration is mediated by βγ dimers released by activation of Gαi-coupled receptors

Chemotaxis is mediated by activation of seven-transmembrane domain, G protein-coupled receptors, but the signal transduction pathways leading to chemotaxis are poorly understood. To identify G proteins that signal the directed migration of cells, we stably transfected a lymphocyte cell line (300-19) with G protein-coupled receptors that couple exclusively to Gαq (the m3 muscarinic receptor), Gαi (the κ-opioid receptor), and Gαs (the β-adrenergic receptor), as well as the human thrombin receptor (PAR-1) and the C-C chemokine receptor 2B. Cells expressing receptors that coupled to Gαi, but not to Gαq or Gαs, migrated in response to a concentration gradient of the appropriate agonist. Overexpression of Gα transducin, which binds to and inactivates free Gβγ dimers, completely blocked chemotaxis although having little or no effect on intracellular calcium mobilization or other measures of cell signaling. The identification of Gβγ dimers as a crucial intermediate in the chemotaxis signaling pathway provides further evidence that chemotaxis of mammalian cells has important similarities to polarized responses in yeast. We conclude that chemotaxis is dependent on activation of Gαi and the release of Gβγ dimers, and that Gαi-coupled receptors not traditionally associated with chemotaxis can mediate directed migration when they are expressed in hematopoietic cells.

Induction of topoisomerase I cleavage complexes by 1-β-d-arabinofuranosylcytosine (ara-C) in vitro and in ara-C-treated cells

1-β-d-Arabinofuranosylcytosine (Ara-C) is a nucleoside analog commonly used in the treatment of leukemias. Ara-C inhibits DNA polymerases and can be incorporated into DNA. Its mechanism of cytotoxicity is not fully understood. Using oligonucleotides and purified human topoisomerase I (top1), we found a 4- to 6-fold enhancement of top1 cleavage complexes when ara-C was incorporated at the +1 position (immediately 3′) relative to a unique top1 cleavage site. This enhancement was primarily due to a reversible inhibition of top1-mediated DNA religation. Because ara-C incorporation is known to alter base stacking and sugar puckering at the misincorporation site and at the neighboring base pairs, the observed inhibition of religation at the ara-C site suggests the importance of the alignment of the 5′-hydroxyl end for religation with the phosphate group of the top1 phosphotyrosine bond. This study also demonstrates that ara-C treatment and DNA incorporation trap top1 cleavage complexes in human leukemia cells. Finally, we report that camptothecin-resistant mouse P388/CPT45 cells with no detectable top1 are crossresistant to ara-C, which suggests that top1 poisoning is a potential mechanism for ara-C cytotoxicity.

Microspectroscopic imaging tracks the intracellular processing of a signal transduction protein: fluorescent-labeled protein kinase C beta I.

We have devised a microspectroscopic strategy for assessing the intracellular (re)distribution and the integrity of the primary structure of proteins involved in signal transduction. The purified proteins are fluorescent-labeled in vitro and reintroduced into the living cell. The localization and molecular state of fluorescent-labeled protein kinase C beta I isozyme were assessed by a combination of quantitative confocal laser scanning microscopy, fluorescence lifetime imaging microscopy, and novel determinations of fluorescence resonance energy transfer based on photobleaching digital imaging microscopy. The intensity and fluorescence resonance energy transfer efficiency images demonstrate the rapid nuclear translocation and ensuing fragmentation of protein kinase C beta I in BALB/c3T3 fibroblasts upon phorbol ester stimulation, and suggest distinct, compartmentalized roles for the regulatory and catalytic fragments.

Chiral gold(I) vs chiral silver complexes as catalysts for the enantioselective synthesis of the second generation GSK-hepatitis C virus inhibitor

The synthesis of a GSK 2nd generation inhibitor of the hepatitis C virus, by enantioselective 1,3-dipolar cycloaddition between a leucine derived iminoester and tert-butyl acrylate, was studied. The comparison between silver(I) and gold(I) catalysts in this reaction was established by working with chiral phosphoramidites or with chiral BINAP. The best reaction conditions were used for the total synthesis of the hepatitis C virus inhibitor by a four step procedure affording this product in 99% ee and in 63% overall yield. The origin of the enantioselectivity of the chiral gold(I) catalyst was justified according to DFT calculations, the stabilizing coulombic interaction between the nitrogen atom of the thiazole moiety and one of the gold atoms being crucial.

Els plànols de l’església nova i el plànol geomètric de Santa Pola

La recerca històrica i geogràfi ca a vegades dóna resultats sorprenents. Aquest és el cas de la troballa del Proyecto de Iglesia Parroquial para el pueblo de Santa Pola, en què s’inclou, a més dels plànols originals de la coneguda com a «església rota» (l’actual mercat central), un «Plano Topográfi co de Santa Pola» de gran transcendència per a conéixer els inicis de l’evolució urbana de la localitat, tots signats per Francisco Morell y Gómez el 1863. Primer, tractem el projecte de l’església, analitzem les dades del projecte i els plànols. Després, el més interessant és el plànol topogràfi c inèdit esmentat. Fem una comparació amb el signat el 1863 pel també arquitecte José Ramon Mas y Font. Són iguals? Tenen diferències? Quines són i quina importància tenen? El plànol esdevé un instrument de recerca de primer ordre per a donar resposta a aquestes preguntes.

The little-studied cluster Berkeley 90 I. LS III +46 11: a very massive O3.5 If* + O3.5 If* binary

Context. It appears that most (if not all) massive stars are born in multiple systems. At the same time, the most massive binaries are hard to find owing to their low numbers throughout the Galaxy and the implied large distances and extinctions. Aims. We want to study LS III +46 11, identified in this paper as a very massive binary; another nearby massive system, LS III +46 12; and the surrounding stellar cluster, Berkeley 90. Methods. Most of the data used in this paper are multi-epoch high S/N optical spectra, although we also use Lucky Imaging and archival photometry. The spectra are reduced with dedicated pipelines and processed with our own software, such as a spectroscopic-orbit code, CHORIZOS, and MGB. Results. LS III +46 11 is identified as a new very early O-type spectroscopic binary [O3.5 If* + O3.5 If*] and LS III +46 12 as another early O-type system [O4.5 V((f))]. We measure a 97.2-day period for LS III +46 11 and derive minimum masses of 38.80 ± 0.83 M⊙ and 35.60 ± 0.77 M⊙ for its two stars. We measure the extinction to both stars, estimate the distance, search for optical companions, and study the surrounding cluster. In doing so, a variable extinction is found as well as discrepant results for the distance. We discuss possible explanations and suggest that LS III +46 12 may be a hidden binary system where the companion is currently undetected.

Exposiciones públicas en "Construcción de Estructuras I": nueva propuesta en el Grado de Arquitectura Técnica

Tanto la situación económica en el sector de la construcción como los cambios normativos continuos en la edificación implican el uso de nuevas metodologías para mejorar las competencias de los estudiantes del Grado de Arquitectura Técnica. El objetivo de este trabajo es presentar, analizar y discutir sobre la utilización de talleres constructivos como nueva metodología de enseñanza en la asignatura de Construcción de Estructuras I que complementa y mejora tanto los conocimientos técnicos adquiridos como las habilidades comunicativas de los estudiantes. La metodología contempla el desarrollo de detalles constructivos tridimensionales que son expuestos al público mediante paneles A1 elaborados por grupos de 3/4 personas. Cada trabajo resuelve problemas constructivos de forma global, discutiendo la solución más adecuada y mejorando la crítica de los propios estudiantes. Además, el uso de información on-line así como de aplicaciones web han permitido gestionar distintas tareas durante el proceso, fomentando el empleo de nuevas tecnologías como herramienta complementaria. En conclusión, el uso de estos talleres en el Grado de Arquitectura Técnica estimula una mayor interactividad entre los participantes frente a la clase tradicional, donde la actitud participativa de los grupos y el desarrollo de presentaciones orales disuelven los límites tradicionales de comunicación entre los estudiantes.

Proyecto RE-Sahara: taller cooperativo entre las asignaturas de Proyectos I, Estructuras II y Construcción III de la titulación de Arquitectura

Tras los sustanciales cambios en el plan de estudios actual debido a la futura implantación del nuevo Título de Grado de Arquitectura, es preciso dar cabida a metodologías docentes que potencien las habilidades y competencias específicas del arquitecto al tiempo que respondan a las prestaciones que demanda la sociedad de la Arquitectura. Por ello, se ha propuesto, en distintas asignaturas de la titulación, un taller multidisciplinar que engloba tres de las áreas de conocimiento fundamentales para el desarrollo del alumno de arquitectura como son Proyectos, Estructuras y Construcción. Con ejercicios de este tipo, se pretende contribuir a una mayor coordinación entre estas áreas con el fin de que los estudiantes no perciban la docencia fragmentada en disciplinas estancas. La metodología docente empleada ha consistido en la realización de un trabajo práctico común con un tema de carácter social, con el objetivo de involucrar a los futuros arquitectos en el desarrollo de propuestas reales. Trabajo supervisado mediante correcciones conjuntas con la participación del profesorado de las tres asignaturas de manera coordinada. En conclusión, el alumnado ha mostrado una preferencia mayoritaria por esta metodología docente ya que proporciona una visión conjunta entre asignaturas, englobadas en un único trabajo vinculado a la práctica profesional real.

De les Clarisses al Salvador: migdia i llevant de la Vila d’Elx, arquitectura i urbanisme. Gaspar Jaén i Urbàn, Instituto Alicantino de Cultura, «Juan Gil-Albert», Alicante, 2012, 360 páginas + ilustraciones, ISBN: 978-84-7784-613-0, http://www.ua.es/personal/gaspar.jaen/index.htm

Reseña de Libro publicada en EGA Revista de Expresión Gráfica nº 27

Composición arquitectónica: Historia, Teoría, Crítica y Patrimonio de la Arquitectura

La presente Memoria realiza balance de todas las asignaturas del área de conocimiento Composición Arquitectónica (acCA), una vez que se han implantado los cinco cursos del plan de Grado en Arquitectura (2010) y que este se está sustituyendo por el nuevo Grado en Fundamentos en Arquitectura (2014). Las asignaturas en ambos planes son prácticamente las mismas tanto en contenidos como en posición en los distintos cursos. Esta tarea se efectúa como chequeo de los objetivos trazados hace cinco años cuando se diseñó una nueva estructura docente y un nuevo método de aprendizaje (teórico y práctico) con el fin de adaptar la titulación de Arquitectura al nuevo EEES. De este modo, se repasan, para todas las asignaturas, los contenidos previstos en los descriptores de las Memorias de Grado, así como el modo de impartirlos, el sistema de prácticas, el proceso de evaluación y los resultados obtenidos. Se aprovecha estos años de experiencia para señalar las variaciones introducidas en las materias para ajustarlas a la realidad del tiempo disponible, del número de alumnos, de los avances tecnológicos y del presente social y cultural. Esta Memoria da cuenta de la satisfacción del profesorado y del alumnado, pero también señala sus limitaciones.

Notes on Philippine Mallophaga, I: Species from Ciconiiformes, Anseriformes, Falconiformes, Galliformes, Gruiformes and Charudriiformes [by] K. C. Emerson and Ronald A. Ward.

v.42:no.4(1958)