Modulation de la présentation antigénique par le CMH de classe II : utilisation de HLA-DO dans les cellules dendritiques

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

HLA-DO : production de molécules solubles et d'anticorps monoclonaux

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Caractérisation des molécules non-classiques du complexe majeur d'histocompatibilité humain HLA-DM et HLA-DO

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Clinically-relevant threshold of preformed donor-specific anti-HLA antibodies in kidney transplantation.

BACKGROUND: Pretransplant anti-HLA donor-specific antibodies (DSA) are recognized as a risk factor for acute antibody-mediated rejection (AMR) in kidney transplantation. The predictive value of C4d-fixing capability by DSA or of IgG DSA subclasses for acute AMR in the pretransplant setting has been recently studied. In addition DSA strength assessed by mean fluorescence intensity (MFI) may improve risk stratification. We aimed to analyze the relevance of preformed DSA and of DSA MFI values. METHODS: 280 consecutive patients with negative complement-dependent cytotoxicity crossmatches received a kidney transplant between 01/2008 and 03/2014. Sera were screened for the presence of DSA with a solid-phase assays on a Luminex flow analyzer, and the results were correlated with biopsy-proven acute AMR in the first year and survival. RESULTS: Pretransplant anti-HLA antibodies were present in 72 patients (25.7%) and 24 (8.6%) had DSA. There were 46 (16.4%) acute rejection episodes, 32 (11.4%) being cellular and 14 (5.0%) AMR. The incidence of acute AMR was higher in patients with pretransplant DSA (41.7%) than in those without (1.6%) (p<0.001). The median cumulative MFI (cMFI) of the group DSA+/AMR+ was 5680 vs 2208 in DSA+/AMR- (p=0.058). With univariate logistic regression a threshold value of 5280 cMFI was predictive for acute AMR. DSA cMFI's ability to predict AMR was also explored by ROC analysis. AUC was 0.728 and the best threshold was a cMFI of 4340. Importantly pretransplant DSA>5280 cMFI had a detrimental effect on 5-year graft survival. CONCLUSIONS: Preformed DSA cMFI values were clinically-relevant for the prediction of acute AMR and graft survival in kidney transplantation. A threshold of 4300-5300 cMFI was a significant outcome predictor.

Doença enxerto-versus hospedeiro: determinação da expressão de genes e alterações de vias associadas ao sistema imunológico usando metodos da biofísica

O transplante de medula óssea (TMO) é um procedimento terapêutico importante em casos relacionados à pacientes com leucemia ou linfoma. Em decorrência desse processo, uma reação conhecida como doença enxerto-versus-hospedeiro (GVHD) pode ocorrer em pacientes susceptíveis como conseqüência da presença de células imunocompetentes do doador. Entretanto, não existe um modelo para descrever completamente as ações relacionadas ao mecanismo imunológico da GVHD desde a fase que inicializa a doença até a fase efetora. O Objetivo geral deste estudo é a investigação da resposta imunológica considerando-se o sistema HLA (antígenos leucocitários humano) em pacientes que desenvolveram a GVHD em decorrência do TMO. O National Cancer Institute (NCI) – Pathway interaction Database e Reactome foram usados como bases de dados com o objetivo de se estudar a expressão de genes e vias relacionados às Classes I e II do sistema HLA (antígenos leucocitários humano). O estudo considerou a mudança de expressão de genes relacionados às 17 vias do sistema imunológico com potencialidade para se expressar em pacientes que desenvolveram a GVHD associada à TMO. Dados referentes aos transcriptomas foram obtidos utilizando-se a plataforma GPL570 Affymetrix Genoma Humano U133 Plus. A atividade relativa foi usada para determinar as alterações das vias em amostras de GVHD em relação ao controle. As análises foram realizadas utilizando-se o software Via Complex e Bioconductor. Observou-se aumento significativo da expressão de genes ralacionados às vias do sistema imune adaptativo, antígenos associados às Classe I e II do HLA, fosforilação de CD3 e CD247, sinalização dos receptores de células T em CD4+ nativas e ativação de NF-kapa β nas células B. Também observou-se alterações significativas na mudança de expressão dos genes associados às vias relacionadas à super família de moléculas B7:CD28\CTLA-4 quando comparadas ao controle. Isso pode indicar a necessidade de geração de um segundo sinal co-estimulador em GVHD, acionado pelas moléculas dessa super família. O aumento da expressão do gene CD69 nas amostras experimentais caracteriza a ativação celular e, portanto, a sinalização de estímulos em GVHD. Os achados obtidos neste estudo contribuem para melhor elucidar o mecanismo imunopatogênico associado à GVHD. P

Antígenos de Helicobacter pylori en muestras fecales de usuarios con sintomatología sugestiva a gastritis que asisten a la Unidad Comunitaria de Salud Familiar Especializada de Perquin, departamento de Morazán

En la actualidad se reconoce a Helicobacter pylori como un agente patógeno involucrado en el desarrollo de gastritis crónica, úlcera gástrica y carcinoma gástrico. Lo que hace necesario realizar pruebas para detectar la presencia de la bacteria a través de diferentes métodos de laboratorio EL OBJETIVO de la investigación fué Determinar antígenos de Helicobacter pylori en muestras fecales de usuarios con sintomatología sugestiva a gastritis que asisten a la Unidad Comunitaria de Salud Familiar Especializada de Perquín, Departamento de Morazán. METODOLOGÍA de la investigación se caracterizó por ser: Prospectiva, Transversal, Descriptiva y de Laboratorio. Con una población en estudio de 97 usuarios a los cuales se les aplicó una cédula de entrevista para la recopilación de la información. A través de una muestra de heces se determinó la presencia de antígenos de Helicobacter pylori. RESULTADOS: según datos obtenidos, se determinó una positividad a la prueba de antígenos de Helicobacter pylori de 52.4% en la población femenina entre las edades de 15 a 75 años y un 38.2% en la población masculina entre las edades de 15 a 75 años. El síntoma que mayormente se presentó en la población que resultó positiva a la prueba fue dolor en la parte superior del estómago con un 87%. CONCLUSIÓN: Mediante resultados de laboratorio la presencia de antígenos de Helicobacter pylori en heces fue de 47.4% del total de la población. Comprobándose estadísticamente que la presencia de antígenos de Helicobacter pylori en las muestras fecales de usuarios con sintomatología sugestiva a gastritis es menor o igual al 40%.

Detección de antígenos de Helicobacter pylori por el método de prueba rápida en estudiantes de Bachillerato Técnico Vocacional Atención Primaria en Salud del Instituto Nacional de Usulután, municipio y departamento de Usulután

Helicobacter pylori es una bacteria gram negativa capaz de sobrevivir a la acidez gástrica provocando gastritis crónica, úlcera péptica y cáncer gástrico; las técnicas empleadas para la detección de esta bacteria se dividen en invasivas y no invasivas que brindan un diagnóstico confiable a la población en estudio. OBJETIVO: Detectar la presencia de antígenos de Helicobacter pylori por el método de prueba rápida inmunocromatográfica en heces en los estudiantes de Bachillerato Técnico Vocacional Atención Primaria en Salud del Instituto Nacional de Usulután. METODOLOGÍA: El estudio fue: prospectivo, transversal, descriptivo y de laboratorio; la información de la población en estudio se dio a conocer por medio de una cédula de entrevista; la población en estudio estuvo conformada por 167 alumnos que cursan Bachillerato Técnico Vocacional Atención Primaria en Salud del Instituto Nacional de Usulután tanto en jóvenes que presentaron sintomatología como los que no la presentaron, se le tomó una muestra de heces para la detección de antígenos de Helicobacter pylori. RESULTADO: 66 estudiantes de Bachillerato Técnico Vocacional Atención Primaria en Salud del Instituto Nacional de Usulután presentaron pruebas positivas a antígenos de Helicobacter pylori en muestras fecales y 101 resultaron negativos a la prueba. CONCLUSIÓN: la positividad a antígenos de Helicobacter pylory 39.5%, el síntoma más frecuente en los estudiantes fue reflujo gástrico con 63.2%.

Antígenos de Helicobacter pylori en muestras fecales de personas con sintomatología de reflujo gástrico que consultan en la Unidad Comunitaria de Salud Familiar Moncagua, departamento de San Miguel y Hospital Nacional San Pedro, departamento de Usulután

La bacteria Helicobacter pylori es reconocida como el principal agente causal de la gastritis crónica activa, úlcera péptica, reflujo gástrico así como un factor de predisposición del carcinoma gástrico. La detección oportuna de ésta favorece un tratamiento adecuado y evita posibles complicaciones. El Objetivo de la investigación es determinar antígenos de Helicobacter pylori en muestras fecales de personas con sintomatología de reflujo gástrico que consultan en la Unidad Comunitaria de Salud Familiar Moncagua, Departamento de San Miguel y Hospital Nacional San Pedro, Departamento de Usulután. Metodología: El estudio es de tipo prospectivo, transversal, descriptivo y de laboratorio. La población fue de 150 personas y la muestra fue de 133 personas para el Hospital Nacional San Pedro y 17 personas para la Unidad de Salud Moncagua, se realizó prueba cualitativa de antígenos de Helicobacter pylori en muestras fecales, además se administró a las personas una cédula de entrevista con la que se obtuvo información relacionada con el tema. Resultados: De 103 con reflujo gástrico en el Hospital San Pedro de Usulután 50 personas (48.5%) dieron positivos a la prueba de antígenos de Helicobacter pylori en muestras fecales y de 13 personas con este síntoma en la Unidad de Salud Moncagua de San Miguel 2 personas (15.4%) dieron positivos a la prueba. Conclusiones: El 44.8% de las personas que presentan reflujo gástrico resultaron con prueba positiva a antígenos de Helicobacter pylori en muestras fecales, por lo que se recomienda que toda persona que presenta síntoma de reflujo gástrico se realice la prueba de antígenos de Helicobacter pylori para descartar una posible infección por esta bacteria.

Caractérisation de différents mécanismes immunologiques conduisant au dommage glomérulaire chez le greffé rénal avec rejet humoral; les effets des anticorps anti-HLA sur l’expression endothéliale et les niveaux sériques de thrombomoduline chez les patients transplantés

La greffe rénale est le meilleur traitement de l’insuffisance rénale terminale. Par contre, la perte prématurée du greffon est un problème majeur chez les greffés qui est due majoritairement au rejet. La classification de Banff reconnait 2 catégories de rejets : une réaction médiée par les anticorps (ABMR) et/ou une réaction cellulaire (TCMR). L’ABMR est caractérisé par le développement de novo d’anticorps contre le donneur (DSA) en circulation et des dommages histologiques, comme la glomérulopathie du transplant. De novo, les DSA anti-HLA-II sont plus fréquemment associés à la glomérulopathie du transplant que les anti-HLA-I et sont associés à un moins bon pronostic clinique. Toutefois, le mécanisme par lequel les anti-HLA-II sont plus dommageables demeure mal connu. Mon hypothèse est que les anticorps anti-HLA sont suffisants pour perturber l’hémostase de l’endothélium glomérulaire. Plus particulièrement, nous croyons que les anticorps anti-HLA-II, diminuent l’expression de la thrombomoduline (TBM), ce qui pourrait mener aux lésions endothéliales glomérulaires associées à la glomérulopathie du transplant. Pour évaluer cette hypothèse, j’ai utilisé un modèle in vitro d’endothélium glomérulaire humain et du sérum de patients transplantés rénaux. Nous avons observé que l’expression membranaire de la TBM augmentait de manière dosedépendante en présence d‘anti-HLA-I, mais pas anti-HLA-II. Toutefois, lors de la mesure intracellulaire nous avons observé une accumulation cytosolique en réponse à une stimulation par les anti-HLA-II. De plus, nous avons observé une association significative entre la présence de DSA circulants anti-HLA-II dans les patients transplantés rénaux et un faible taux de TBM sérique. Ces résultats indiquent que la liaison des anticorps anti-HLA-I et II produit des effets différents sur l’expression endothéliale de la TBM. Les anticorps anti-HLA-II pourraient être associés à un état prothrombotique qui pourrait expliquer l’occurrence plus élevée de lésions microangiopathiques dans l’allogreffe et la moins bonne condition observée chez les patients ayant ces anticorps.

The effect of the HLA B27 allele on the immune response to acute HCV in HIV infected patients

In mono-infected individuals, the HLA-B27 allele is strongly associated with spontaneous clearance of HCV in association with a strong CD8+ response targeted against a single epitope within the HCV RNA-dependent RNA polymerase (NS5B). We studied variation across the whole HCV genome and T cell responses over time in a rare cohort of HLA-B27+ patients with acute HCV and HIV co-infection, the majority of whom progressed to chronicity. We used next generation sequencing to detect changes within and outwith the immuno-dominant HLA-B27 restricted HCV-specific CD8+ T cell epitope NS5B2841-2849 (ARMILMTHF) during evolving progression of early HCV infection. Within the Acute HCV UK cohort, 10 patients carried the HLA B27 allele. Of these, 3/8 patients (37.5%) with HIV infection and 2/2 (100%) without HIV spontaneously cleared HCV (p=0.44). Sequential samples from nine HLA-B27+ patients (2 with monoinfection and 7 with HIV co-infection) were available for analysis (four spontaneous clearers and five evolving progressors). Mutations identified using NGS were assessed using a replicon genotype 1a system to evaluate viral fitness. Multiple mutations within the HLA-B27 restricted NS5B2841-2849 epitope were associated with progression to chroncity whereas patients who cleared the HCV infection spontaneously had no or only one mutation at this site (p=0.03). A triple NS5B2841-2849 mutant observed during progression to chronicity was associated with restored replication when compared to wild-type virus while single or double mutants were significantly associated with impaired replication (p=0.0495). T cell responses measured in these patients using ELISpot and flow cytometry. HLA-B27+ patients had significantly higher IFN-γ responses than patients who were HLA-B27- (p=0.0014). Those who progressed to chronicity had lower IFN-γ responses than those who cleared HCV (p=0.0011). Mono-infected patients had higher IFN-γ responses compared to co-infected patients (p=0.0015). HIV co-infection is associated with a lower likelihood of spontaneous clearance of HCV in HLA B27+ patients and this is associated with impaired T cell function in this group.

Evaluation of two methods for computational HLA haplotypes inference using a real dataset

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Discrepancies in HLA Typing by PCR-SSOP and SBT Techniques: a case study

Six hundred twenty-one samples from Portugal, the Cabo Verde archipelago, and Guinea-Bissau were typed for HLA-A, HLA-B, and HLADRB1usingthepolymerasechainreaction–sequence-specificoligonucleotide probe (PCR-SSOP) method and the sequence-based typing (SBT) method to characterizeandcomparediscrepanciesbetweenthetwomethods.Fifty-three alleles (4.27% of 1,242 chromosomes typed) identified by the PCR-SSOP method were not concordant with the results obtained using the SBT method. Thirty-four (2.74% of total chromosomes typed) PCR-SSOP mistyping results were discrepancies inside the same allele group and 19 others (1.53% of total chromosomes typed) were relative to nonconcordant results between different groups. PCR-SSOP allele mistyping is the result of interpretation difficulties resulting from less intense, absent, or dubious hybridization patterns. Noncommercial PCR-SSOP procedures are highly exigent on the technicians’ experience and the availability of properly calibrated high-precision equipment.

Polimorfismo do alelo HLA-B27 no desenvolvimento das espondilartropatias

A associação da molécula HLA-B27 com a espondilite anquilosante (AS) e outras espondilartropatias (SpA), permanece como uma das mais fortes verificada entre moléculas HLA e doenças humanas. Desde que foi descrita, em 1973, tem sido alvo de intensa investigação na tentativa de compreender o mecanismo patogénico que lhe está subjacente. Este artigo tem como objectivo fazer uma revisão dos conhecimentos actuais relativos à estrutura e polimorfismo da molécula HLA-B27, bem como descrever os modelos propostos para explicar o seu papel no desenvolvimento das espondilartropatias.