Estudo clínico, laboratorial e epidemiológico da infecção por Toxoplasma gondii em animais silvestres, bovinos, suínos e comunidades rurais da região de Nhecolândia, Pantanal, Brasil

A toxoplasmose, causada pelo Toxoplasma gondii é uma protozoose que acomete o homem e uma grande variedade de animais de sangue quente e aves. No Brasil, a prevalência pode variar de 20% a 90% dependendo da área estudada, clima, condição socioeconômica e cultural. A infecção se dá através da ingestão de oocistos, que podem ser encontrados no solo, água e alimentos ou através da manipulação e ingestão de carne crua ou mal cozida, além da infecção congênita, apresentando importância em saúde pública. Este trabalho objetivou estudar a ocorrência da infecção por Toxoplasma gondii em animais silvestres, bovinos, suínos, ovinos e comunidade rural da região de Nhecolândia, no Pantanal do Mato Grosso do Sul, utilizando métodos sorológicos (Hemaglutinação Indireta - HAI, Reação de Imunofluorescência Indireta - RIFI, Técnica de aglutinação modificada - MAT) e moleculares (Reação em cadeia pela polimerase \2013 PCR, PCR-RFLP). Foram feitas coletas de amostras de sangue de 73 indivíduos da comunidade rural, de 25 cães, 442 bovinos e 148 porco-monteiros. Observou-se que 47,95% (35/73) das pessoas eram sororreagentes. Destas, apenas um indivíduo sororreagente (2,9%) apresentou lesão ocular presumível da infecção pelo parasito. Nos animais, observou-se a ocorrência de anticorpos anti- T. gondii em 48% dos cães, 30,55% dos bovinos e 1,3% nos porco-monteiros. Relatos de várias partes do mundo têm demonstrado a importância do ciclo silvestre na epidemiologia da infecção por Toxoplasma gondii. No entanto, apesar do papel conhecido de alguns felinos selvagens como hospedeiros definitivos para manutenção e transmissão do parasita para outros predadores carnívoros, pouco se sabe sobre a incidência de Toxoplasma gondii nestes animais Os carnívoros foram capturados em armadilhas contendo iscas e após a contenção química as amostras biológicas (sangue de todos os animais e fezes dos felídeos) foram coletadas e armazenadas para análise posterior. No presente estudo, três espécies de carnívoros foram avaliadas: quati (Nasua nasua), lobinho ou cachorro do mato (Cerdocyon thous) e jaguatirica (Leopardus pardalis). Quarenta e dois roedores (Tricomys) também avaliados tiveram análises de PCR realizada em 42 tecidos (cérebro, pulmão e músculo). Através dos exames sorológicos (Hemaglutinação Indireta, Reação de Imunofluorescência Indireta, Técnica de aglutinação modificada) observou-se a ocorrência da infecção por Toxoplasma gondii em 29,16% (7/24) dos quatis, 47,82% (11/23) em lobinhos e 100% (2/2) nas jaguatiricas. No PCR observou-se positividade em 41,66% (10/24) dos quatis, 47,82 % (11/23) dos lobinhos e em 100% (2/2) das jaguatiricas. Em roedores, observou-se 23,80 % (10/42) de positivos pela PCR. Realizamos a caracterização molecular de amostras sanguíneas dos animais silvestres positivos pela PCR, onde utilizamos 12 marcadores genotípicos (SAG1, SAG2 (5\2019-SAG2 e 3\2019-SAG2), SAG3, GRA6, BTUB, c22-8, c29-2, L358, PK1, novo SAG2, Apico, CS3), onde observou-se a presença de um novo genótipo do parasito, circulando na região de forma homogênea entre as espécies

Toxoplasma gondii antibodies in wild rodents and marsupials from the Atlantic Forest, state of São Paulo, Brazil

Toxoplasma gondii é um protozoário parasita que infecta animais de sangue quente, incluindo seres humanos. Pequenos roedores e marsupiais têm papel importante na epidemiologia do T. gondii, pois são fontes de infecção para os felídeos domésticos e selvagens. Amostras de soro de 151 roedores e 48 marsupiais, capturados na Mata Atlântica, Estado de São Paulo, Sudeste do Brasil, foram analisadas para a pesquisa de anticorpos anti-T. gondii. Os anticorpos foram detectados pelo Teste de Aglutinação Modificada (MAT ≥ 25), com 8,6% (13/151) dos roedores e 10,4% (5/48) dos marsupiais soropositivos, com títulos variando de 25 a 6.400 e de 25 a 3.200, respectivamente, para os roedores e os marsupiais. Três das oito espécies de roedores (Akodon spp., Oligoryzomys nigripes e Rattus norvegicus) e uma das quatro espécies de marsupiais (Didelphis aurita) apresentaram animais positivos. A presença de anticorpos anti-T. gondii foi descrita pela primeira vez no roedor Oligoryzomys nigripes.

Inquérito sorológico para detecção de anticorpos de Toxoplasma gondii em caprinos (Capra hircus) criados nos municípios de Gravataí e Viamão, região da Grande Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil.

A toxoplasmose é uma das enfermidades parasitárias mais difundidas entre as transmissíveis. Novos aspectos parecem justificar o reaparecimento da questão da toxoplasmose, uma vez que ela vem sendo diagnosticada em um número crescente de pacientes com imunossupressão devida a várias causas tais como doenças malignas, transplantes de órgãos e principalmente, a Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). Mais de 50% da população humana mundial acha-se infectada pelo Toxoplasma gondii com variações determinadas por fatores climáticos, sócio-econômicos, tipo de contato com animais, em especial o gato e costumes alimentares relacionados ao consumo de carnes. O T. gondii é um protozoário que infecta praticamente todas as espécies animais. A caprinocultura é uma atividade bastante exercida no Estado, sendo que representa 0,4% de sua atividade pecuária total. O objetivo deste trabalho foi avaliar o papel desempenhado pela espécie caprina na transmissão do T.gondii. A amostragem foi estratificada por idade e gênero. Foram analisadas 360 amostras de soros de caprinos, através da técnica de Hemaglutinaçao Indireta (HAI) e Imunofluorescência Indireta (IFI). Os resultados obtidos pela HAI estimam uma freqüência de 19 % de soro-positividade e pela IFI de 30%, o que representa índices elevados. Em relação a Hemaglutinação Indireta, na variável gênero, foi observada uma freqüência de 20,1% de soropositividade para os machos e 19,3% para as fêmeas, enquanto que na variável idade, os resultados demonstraram freqüências de 16,5% para os indivíduos jovens e 21,1% para os adultos. No que tange à Imunofluorescência Indireta, a variável gênero demonstrou uma freqüência de 14,44% de soropositivos para os machos e 15,56% para as fêmeas. Na variável idade, através desta mesma técnica, observou-se uma freqüência de soropositividade de 13,06% para indivíduos jovens e de 16,94% para indivíduos adultos. Ao compararem-se as duas técnicas os dados obtidos revelam uma associação significativa entre elas, com uma índice de co-positividade para a HAI de 78,6% e de co-negatividade de 81,7%. O índice Kappa utilizado para medir o grau de concordância entre as duas técnicas foi igual a 0,5% que evidencia um grau de concordância moderado entre as técnicas, recomendando, desta forma o uso cauteloso da HAI na espécie caprina. Os dados obtidos nos permitem concluir que os caprinos criados na região estudada podem ser fonte de transmissão de T. gondii.

Proteínas SAG1, SAG2, SAG3 de toxoplasma gondii como perspectivas para o desenvolvimento de protótipo vacinal contra a toxoplasmose

Toxoplasmosis is a zoonosis of worldwide distribution caused by the protozoan Toxoplasma gondii, triggering dangerous complications in immunocompromised patients and pregnant women, as well as having great economic impact for the livestock. So far the control of toxoplasmosis is made primarily by chemotherapy. However, most drugs used routinely have some limitations. In order to control this disease, several research groups, including ours, has been working to develop a medical-veterinary vaccine based on parasite antigens, vectors and protocols of immunization. In this study were implemented and standardized methodologies for amplification and cloning of recombinant immunogens in the system for the development of a prototype vaccine, based on the surface antigens of T. gondii and recombinant adenovirus encoding these antigens. Genes encoding BAG1, GRA2 and SAG1 proteins were amplified. We established a strategy for cloning SAG1, SAG2, SAG3 and TgAMA1- genes in recombinant system. The genes encoding SAG1 and SAG2 were cloned and their sequences showed high similarity with sequences from GenBank. The virtual translation of these proteins showed polymorphisms in the amino acid sequence, which can be correlated with levels of antigenicity. Simultaneously, the adenovirus encoding the SAGs (HAdSAGs) were expanded, purificated and characterizated. Immunization of C57bl/6 mice, using viral supernatant was not enought to elicit immune responses at high levels, being required HAdSAGs titration for future immunizations. Therefore, this study allowed the cloning of the two genes important for the development of a prototype vaccine. Besides, implementations methodologies that permit advancements in the development of a vaccine against toxoplasmosis using adenovirus to express proteins of the parasite

Seroprevalence of and risk factors for Toxoplasma gondii in sheep raised in the Jaboticabal microregion, São Paulo State, Brazil

Seroprevalence of and risk factors for toxoplasmosis in sheep from different properties in the Jaboticabal microregion, São Paulo State, Brazil were determined. Antibodies to Toxoplasma gondii were found in sera of 52.0% of 488 sheep tested by indirect fluorescent antibody test (IFAT >= 64). T gondii seropositivity in sheep was significantly associated with gender of the sheep, pasturing system, contact with cats, and the use of mineral supplements and the type of feed. (C) 2009 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Transplacental transmission of Toxoplasma gondii in reinfected pregnant female canines

Twelve pregnant female canines, naturally infected with Toxoplasma gondii, were reinfected with T. gondii: three (GI) received tachyzoites subcutaneously (1.0 x 107), three (GII) were orally inoculated with oocysts (1.5 x 104), and six (GIII) were kept as a nonreinfected control group. All the reinfected female canines (GI and GII) miscarried or presented fetal death, while only one GIII female presented a stillborn in a litter of four pups (P < 0.01). Fever, lymphoadenopathy, miscarriage, and fetal death were the main clinical alterations observed. The highest serological titers detected through the indirect fluorescence antibody test (IFAT) were 1,024 (GI) and 4,096 (GII). In group III, the titers ranged between 64 and 256. By bioassays in mice, T. gondii was isolated in 17 organs of the reinfected adult canines, in 11 of the control group, and in 20 of the neonates. Positive immunostaining of cysts and/or tachyzoites were observed in 26 canine tissues (14 from GI and GII and ten from GIII). The agent was detected by immunohistochemistry in the encephalon of a neonate and in the spinal cord of a stillborn, thus, confirming that T. gondii infected canine fetuses, provoking miscarriages, even in bitches that presented primoinfection.

Toxoplasma gondii: isolation of tachyzoites rhoptries and incorporation into Iscom

Rhoptries have been isolated from Toxoplasma gondii tachyzoites by subcellular fractionation in isopynic density sucrose gradient. Five bands were observed, and transmission electron microscopy of these indicated that rhoptries were in band 3. This band had a density of 1.17g/cm(3). Fraction 1 had membrane structures of the parasite. Fraction 2 contained membranes and mitochondria (Fig. 1 B). Fraction 4 had mostly conoid structure (Fig. 2B) and fraction 5 showed ghosts. The electrophoretic and Western blotting analysis of the fractions indicated the presence of a number of proteins. Iscoms were constructed from band 3, which contained the rhoptry structures. Iscom showed a only protein incorporated of 55 kDa. Isolation of the parasite organelles has got in this work is necessary to identification, characterization, and function elucidation of the organelle proteins. (C) 2004 Elsevier B.V. All rights reserved.

Use of near-infrared Raman spectroscopy to detect IgG and IgM antibodies against Toxoplasma gondii in serum samples of domestic cats

Near-infrared Raman spectroscopy (NIRS) is a particularly promising technique that is being used in recent years for many biomedical applications. Optical spectroscopy has gained increasing prominence as a tool for quantitative analysis of biological samples, clinical diagnostic, concentration measurements of blood metabolites and therapeutic drugs, and analysis of the chemical composition of human tissues. Toxoplasmosis is an important zoonosis in public health, and domestic cats are the most important transmitters of the disease. This disease can be detected by several serological tests, which usually have a high cost and require a long time. The goal of this work was to investigate a new method to diagnosis Toxoplasma gondii infections using NIRS. In order to confirm antibody detection, 24 cat blood scrum samples were analyzed by the Raman spectra, from which 23 presented positive serology to toxoplasmosis and one was a reference negative serum. Characteristic Raman peaks allowed differentiation between negative and positive sera, confirming the possibility of antibody detection by Raman spectroscopy. These results give the first evidence that this technique can be useful to quantify antibodies in cat sera.

Detection of Toxoplasma gondii oocysts in environmental samples from public schools

The number of Toxoplasma gondii oocysts that can be found in random environmental samples is probably low; in addition, these cysts may be confused with Hammondia spp. and Neospora spp. oocysts. The aim of the present work was to evaluate the presence of T. gondii oocysts in the soil of public elementary schools in the northwest area of the state of São Paulo, Brazil using mouse bioassays. A comparison was made between the different available bioassay techniques, such as squash, histopathology, immunohistochemistry and indirect fluorescent antibody test (IFAT). T. gondii was isolated by bioassay in mice (squash brain samples) from 22.58%(7/31) of the school playgrounds. Immunohistochemistry and IFAT showed positive results in 32.26% (10/31) and 25.80% (8/31) of samples, respectively. The sensitivity and specificity of the immunohistochemistry method were 85.71% and 83.33%, respectively. The IFAT results showed 100% sensitivity and 95.83% specificity. The presence of T. gondii was not detected in histopathological examinations. The results of the present study strongly suggest that T. gondii oocysts are widely distributed in elementary public schools in the region that was evaluated, likely constituting the main contamination source for these children. Educational programs directed at reducing environmental contamination with T. gondii would eventually lower the cost of treating humans for clinical toxoplasmosis. It is also possible to conclude that the use of IFAT in mouse bioassays can be recommended without the need for brain cysts research, which is extremely difficult and laborious. (C) 2010 Elsevier B.V. All rights reserved.

PREVALENCE of SALMONELLA SPP. ANTIBODIES TO TOXOPLASMA GONDII, and NEWCASTLE DISEASE VIRUS IN FERAL PIGEONS (COLUMBA LIVIA) IN THE CITY of JABOTICABAL, BRAZIL

The rock pigeon (Columba livia) may serve as a reservoir for several pathogenic agents that can be transmitted to poultry, wildlife, domesticated pets, and/or humans via excreta, secretions, or dust from feathers. In addition, ingestion of infected pigeons by wild and domestic animals can also transmit these pathogenic agents. The health status of 126 free-living pigeons in an urban area was evaluated by microbiologic culture for Salmonella and serologic testing for the presence of antibodies for Toxoplasma gondii and for Newcastle disease virus (NDV) from 120 and 109 pigeons, respectively. After drawing blood, the birds were euthanized, and fragments of the liver, spleen, lungs, and gonads, and feces were cultured for Salmonella spp. Salmonella spp. was isolated from 10 birds (7.94%), of which 8 were Salmonella typhimurium, one was Salmonella enterica subsp. enterica serotype 4,12 and one was Salmonella enterica subsp. enterica serotype 4,12,i. Six of 109 pigeons (5.50%) were positive for NDV antibodies when using the hemagglutination inhibition test. Toxoplasma gondii antibodies were detected by immunofluorescence in one of 120 sera tested (0.83%). The results indicate that feral rock pigeons were exposed to NDV and T gondii, although the exposure was low. In addition, these birds had Salmonella spp. and could disseminate this pathogen in the environment.

Occurrence of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in cats with outdoor access in São Luís, Maranhão, Brazil

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)