MLCK-A, an unconventional myosin light chain kinase from Dictyostelium, is activated by a cGMP-dependent pathway

Dictyostelium myosin II is activated by phosphorylation of its regulatory light chain by myosin light chain kinase A (MLCK-A), an unconventional MLCK that is not regulated by Ca2+/calmodulin. MLCK-A is activated by autophosphorylation of threonine-289 outside of the catalytic domain and by phosphorylation of threonine-166 in the activation loop by an unidentified kinase, but the signals controlling these phosphorylations are unknown. Treatment of cells with Con A results in quantitative phosphorylation of the regulatory light chain by MLCK-A, providing an opportunity to study MLCK-A’s activation mechanism. MLCK-A does not alter its cellular location upon treatment of cells with Con A, nor does it localize to the myosin-rich caps that form after treatment. However, MLCK-A activity rapidly increases 2- to 13-fold when Dictyostelium cells are exposed to Con A. This activation can occur in the absence of MLCK-A autophosphorylation. cGMP is a promising candidate for an intracellular messenger mediating Con A-triggered MLCK-A activation, as addition of cGMP to fresh Dictyostelium lysates increases MLCK-A activity 3- to 12-fold. The specific activity of MLCK-A in cGMP-treated lysates is 210-fold higher than that of recombinant MLCK-A, which is fully autophosphorylated, but lacks threonine-166 phosphorylation. Purified MLCK-A is not directly activated by cGMP, indicating that additional cellular factors, perhaps a kinase that phosphorylates threonine-166, are involved.

M Phase Phosphoprotein 10 Is a Human U3 Small Nucleolar Ribonucleoprotein Component

We have previously developed a novel technique for isolation of cDNAs encoding M phase phosphoproteins (MPPs). In the work described herein, we further characterize MPP10, one of 10 novel proteins that we identified, with regard to its potential nucleolar function. We show that by cell fractionation, almost all MPP10 was found in isolated nucleoli. By immunofluorescence, MPP10 colocalized with nucleolar fibrillarin and other known nucleolar proteins in interphase cells but was not detected in the coiled bodies stained for either fibrillarin or p80 coilin, a protein found only in the coiled body. When nucleoli were separated into fibrillar and granular domains by treatment with actinomycin D, almost all the MPP10 was found in the fibrillar caps, which contain proteins involved in rRNA processing. In early to middle M phase of the cell cycle, MPP10 colocalized with fibrillarin to chromosome surfaces. At telophase, MPP10 was found in cellular structures that resembled nucleolus-derived bodies and prenucleolar bodies. Some of these bodies lacked fibrillarin, a previously described component of nucleolus-derived bodies and prenucleolar bodies, however, and the bulk of MPP10 arrived at the nucleolus later than fibrillarin. To further examine the properties of MPP10, we immunoprecipitated it from cell sonicates. The resulting precipitates contained U3 small nucleolar RNA (snoRNA) but no significant amounts of other box C/D snoRNAs. This association of MPP10 with U3 snoRNA was stable to 400 mM salt and suggested that MPP10 is a component of the human U3 small nucleolar ribonucleoprotein.

The interaction of Arp2/3 complex with actin: Nucleation, high affinity pointed end capping, and formation of branching networks of filaments

The Arp2/3 complex is a stable assembly of seven protein subunits including two actin-related proteins (Arp2 and Arp3) and five novel proteins. Previous work showed that this complex binds to the sides of actin filaments and is concentrated at the leading edges of motile cells. Here, we show that Arp2/3 complex purified from Acanthamoeba caps the pointed ends of actin filaments with high affinity. Arp2/3 complex inhibits both monomer addition and dissociation at the pointed ends of actin filaments with apparent nanomolar affinity and increases the critical concentration for polymerization at the pointed end from 0.6 to 1.0 μM. The high affinity of Arp2/3 complex for pointed ends and its abundance in amoebae suggest that in vivo all actin filament pointed ends are capped by Arp2/3 complex. Arp2/3 complex also nucleates formation of actin filaments that elongate only from their barbed ends. From kinetic analysis, the nucleation mechanism appears to involve stabilization of polymerization intermediates (probably actin dimers). In electron micrographs of quick-frozen, deep-etched samples, we see Arp2/3 bound to sides and pointed ends of actin filaments and examples of Arp2/3 complex attaching pointed ends of filaments to sides of other filaments. In these cases, the angle of attachment is a remarkably constant 70 ± 7°. From these in vitro biochemical properties, we propose a model for how Arp2/3 complex controls the assembly of a branching network of actin filaments at the leading edge of motile cells.

Ice-core evidence of abrupt climate changes

Ice-core records show that climate changes in the past have been large, rapid, and synchronous over broad areas extending into low latitudes, with less variability over historical times. These ice-core records come from high mountain glaciers and the polar regions, including small ice caps and the large ice sheets of Greenland and Antarctica.

An experimental system for analyzing response to a morphogen gradient.

A recently described experimental system for analyzing the mode of action of a morphogen gradient involves the in situ hybridization of sectioned tissue constructs. In these constructs, a source of activin signaling induces the transcription of several mesodermal genes in blastula animal caps, according to the position of cells in a concentration gradient. New experiments show that activin-loaded beads emit a signal for only 2 hr and that the same cell can be induced to express different genes. We determine the position in the gradient and the time after the start of activin signaling at which early genes, including Mix1, Xpo, Xwnt8, Xchd, and Xlim1, are activated, relative to the previously tested genes Xbra and Xgsc.

Matrilysin is expressed by lipid-laden macrophages at sites of potential rupture in atherosclerotic lesions and localizes to areas of versican deposition, a proteoglycan substrate for the enzyme.

Certain matrix metalloproteinases (MMP) are expressed within the fibrous areas surrounding acellular lipid cores of atherosclerotic plaques, suggesting that these proteinases degrade matrix proteins within these areas and weaken the structural integrity of the lesion. We report that matrilysin and macrophage metalloelastase, two broad-acting MMPs, were expressed in human atherosclerotic lesions in carotid endarterectomy samples (n = 18) but were not expressed in normal arteries (n = 7). In situ hybridization and immunohistochemistry revealed prominent expression of matrilysin in cells confined to the border between acellular lipid cores and overlying fibrous areas, a distribution distinct from other MMPs found in similar lesions. Metalloelastase was expressed in these same border areas. Matrilysin was present in lipid-laden macrophages, identified by staining with anti-CD-68 antibody. Furthermore, endarterectomy tissue in organ culture released matrilysin. Staining for versican demonstrated that this vascular proteoglycan was present at sites of matrilysin expression. Biochemical studies showed that matrilysin degraded versican much more efficiently than other MMPs present in atherosclerotic lesions. Our findings suggest that matrilysin, specifically expressed in atherosclerotic lesions, could cleave structural proteoglycans and other matrix components, potentially leading to separation of caps and shoulders from lipid cores.

A novel homeobox gene PV.1 mediates induction of ventral mesoderm in Xenopus embryos.

The formation of ventral mesoderm has been traditionally viewed as a result of a lack of dorsal signaling and therefore assumed to be a default state of mesodermal development. The discovery that bone morphogenetic protein 4 (BMP4) can induce ventral mesoderm led to the suggestion that the induction of the ventral mesoderm requires a different signaling pathway than the induction of the dorsal mesoderm. However, the individual components of this pathway remained largely unknown. Here we report the identification of a novel Xenopus homeobox gene PV.1 (posterior-ventral 1) that is capable of mediating induction of ventral mesoderm. This gene is activated in blastula stage Xenopus embryos, its expression peaks during gastrulation and declines rapidly after neurulation is complete. PV.1 is expressed in the ventral marginal zone of blastulae and later in the posterior ventral area of gastrulae and neurulae. PV.1 is inducible in uncommited ectoderm by the ventralizing growth factor BMP4 and counteracts the dorsalizing effects of the dominant negative BMP4 receptor. Overexpression of PV.1 yields ventralized tadpoles and rescues embryos partially dorsalized by LiCl treatment. In animal caps, PV.1 ventralizes induction by activin and inhibits expression of dorsal specific genes. All of these effects mimic those previously reported for BMP4. These observations suggest that PV.1 is a critical component in the formation of ventral mesoderm and possibly mediates the effects of BMP4.

Targeted gene correction of episomal DNA in mammalian cells mediated by a chimeric RNA.DNA oligonucleotide.

An experimental strategy to facilitate correction of single-base mutations of episomal targets in mammalian cells has been developed. The method utilizes a chimeric oligonucleotide composed of a contiguous stretch of RNA and DNA residues in a duplex conformation with double hairpin caps on the ends. The RNA/DNA sequence is designed to align with the sequence of the mutant locus and to contain the desired nucleotide change. Activity of the chimeric molecule in targeted correction was tested in a model system in which the aim was to correct a point mutation in the gene encoding the human liver/bone/kidney alkaline phosphatase. When the chimeric molecule was introduced into cells containing the mutant gene on an extrachromosomal plasmid, correction of the point mutation was accomplished with a frequency approaching 30%. These results extend the usefulness of the oligonucleotide-based gene targeting approaches by increasing specific targeting frequency. This strategy should enable the design of antiviral agents.

Competition between noggin and bone morphogenetic protein 4 activities may regulate dorsalization during Xenopus development.

Bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) induces ventral mesoderm but represses dorsal mesoderm formation in Xenopus embryos. We show that BMP-4 inhibits two signaling pathways regulating dorsal mesoderm formation, the induction of dorsal mesoderm (Spemann organizer) and the dorsalization of ventral mesoderm. Ectopic expression of BMP-4 RNA reduces goosecoid and forkhead-1 transcription in whole embryos and in activin-treated animal cap explants. Embryos and animal caps overexpressing BMP-4 transcribe high levels of genes expressed in ventral mesoderm (Xbra, Xwnt-8, Xpo, Mix.1, XMyoD). The Spemann organizer is ventralized in these embryos; abnormally high levels of Xwnt-8 mRNA and low levels of goosecoid mRNA are detected in the organizer. In addition, the organizer loses the ability to dorsalize neighboring ventral marginal zone to muscle. Overexpression of BMP-4 in ventral mesoderm inhibits its response to dorsalization signals. Ventral marginal zone explants ectopically expressing BMP-4 form less muscle when treated with soluble noggin protein or when juxtaposed to a normal Spemann organizer in comparison to control explants. Endogenous BMP-4 transcripts are downregulated in ventral marginal zone explants dorsalized by noggin, in contrast to untreated explants. Thus, while BMP-4 inhibits noggin protein activity, noggin downregulates BMP-4 expression by dorsalizing ventral marginal zone to muscle. Noggin and BMP-4 activities may control the lateral extent of dorsalization within the marginal zone. Competition between these two molecules may determine the final degree of muscle formation in the marginal zone, thus defining the border between dorsolateral and ventral mesoderm.

Saúde mental: concepções e práticas profissionais de um campo em tensão

A Reforma Psiquiátrica, atual política de saúde mental, redireciona os recursos da assistência psiquiátrica para o modelo de base comunitária, substituindo o modelo asilar. A abordagem proposta pela Reforma Psiquiátrica procura conjugar o esforço teórico e prático para a construção da Rede de Atenção Psicossocial. O presente trabalho objetivou desvelar concepções e práticas de trabalhadores da saúde mental, construídas na práxis de suas trajetórias profissionais e contextos de vida, em relação à incorporação do modelo de atenção psicossocial ou manutenção de princípios asilares, caracterizadores da tradicional prática profissional em saúde mental. Objetivou também identificar pontos de tensão, que caracterizam interesses de diferentes naturezas, como obstáculos e desafios à implementação da Reforma Psiquiátrica. A pesquisa, de natureza qualitativa, contou com 10 entrevistas de profissionais atuando na área, baseada na técnica de depoimento oral e em roteiro do tipo temático, sendo 3 enfermeiros, 3 psicólogos, 3 psiquiatras e 1 terapeuta ocupacional. Os relatos dos profissionais foram organizados em categorias gerais e específicas tendo em vista a interpretação das narrativas à luz da literatura especializada. Através dos discursos dos profissionais do campo da saúde mental é possível observar que um tensionamento ideológico marca fortemente o espaço da saúde. Alguns profissionais relataram a busca por construir práticas em equipe interdisciplinar, pautadas pelo modelo psicossocial; porém, referem à resistência de outros profissionais da equipe. Praticamente todos os profissionais apresentam discursos de humanização no campo da saúde mental, mas alguns não enunciam visões críticas aos modelos asilares. Alguns trabalhadores revelam a crença na possibilidade de coexistência integrada entre o Modo Asilar e Modo Psicossocial. Para estes trabalhadores de CAPS, é desejável a permanência dos hospitais psiquiátricos e é possível a humanização dos mesmos. Essa questão indica, ao que parece, que as práticas em saúde mental ainda operam sobre premissas epistemológicas diferenciando sujeitos que podem ou não circular no meio social. A existência dos hospitais psiquiátricos, considerados como instituições totais, é problematizada e questionada pela Luta Antimanicomial, indica a permanência da lógica asilar que respalda a continuidade dos hospitais, exclusivamente psiquiátricos, entre os serviços de atendimento, com o apoio de parte dos profissionais da rede de saúde mental. Concordantes com a possibilidade de coexistência do modelo asilar e modelo psicossocial, estes profissionais permitem-nos demonstrar que mesmo uma visão clínica pretensamente humanizadora, que defenda em seu discurso um tratamento digno, pode operar no modelo teórico-metodológico positivista e não está necessariamente vinculada a uma postura política de sujeitos de direitos e de cidadania. Os profissionais que apresentaram em suas narrativas a não concordância com a permanência dos hospitais psiquiátricos, defendem que as transformações sejam clínicas e políticas nos saberes e nas práticas em Saúde Mental. Estes trabalhadores já fizeram ou fazem parte de movimentos sociais, apontados como lugares de reflexão crítica sobre ideias instituídas contribuindo, ao que parece, para o processo de desnaturalização de concepções construídas culturalmente e orientadoras de práticas profissionais. Diante de tais constatações podemos indagar e refletir se a desinstitucionalização, concreta e simbólica, encontra-se no horizonte de uma política pública de atenção em Saúde Mental que realmente tenha como projeto a sua real implementação e se a permanência dos hospitais psiquiátricos e das comunidades terapêuticas estaria descaracterizando as propostas iniciais da construção da Atenção Psicossocial, considerando os interesses privados e a manutenção da lógica asilar, contrários aos princípios do SUS.

Perfeccionismo socialmente prescrito como predictor del alto rechazo a la escuela

El creciente interés en el estudio del comportamiento de rechazo a la escuela se debe a las consecuencias negativas asociadas a esta problemática. Conocer aquellas variables psicoeducativas que predicen esta conducta resulta de interés para la comunidad científica en la actualidad. El objetivo de esta investigación fue analizar la capacidad predictiva el Perfeccionismo Socialmente Prescrito sobre las altas puntuaciones en rechazo escolar. En este estudio participaron 537 estudiantes españoles entre 8 y 12 años. Los instrumentos utilizados fueron la School Refusal Assessment Scale Revised for Children (SRAS-R-C), para medir los cuatro factores que subyacen al comportamiento de rechazo a la escuela (I. Evitar la Afectividad Negativa; II. Escapar de la Aversión Social o Evaluación; III. Búsqueda de la Atención de otras Personas Significativas; IV. Búsqueda de Refuerzos Tangibles Fuera del Ámbito Escolar), y la Child and Adolescent Perfectionism Scale (CAPS), para evaluar la subescala de Perfeccionismo Socialmente Prescrito. A partir de los resultados obtenidos se confirma que la subescala de perfeccionismo evaluada actúa como un predictor positivo de altas puntuaciones en rechazo escolar para los factores II y III de la SRAS-R-C. Estos resultados deben ser valorados por psicólogos escolares y especialistas al evaluar la problemática del rechazo escolar siendo necesario proponer estrategias de prevención e intervención.

Personalidad e infancia. Diferencias en función de los niveles de perfeccionismo auto-orientado

El objetivo de este trabajo consistió en conocer si existen diferencias en los cinco grandes rasgos de la personalidad (Extraversión, Cordialidad, Neuroticismo, Apertura a la experiencia y Conciencia) entre los participantes con altos y bajos niveles de Perfeccionismo Auto-Orientado (PAO) en población infantil española. Se empleó una muestra compuesta por 483 alumnos entre 8 y 11 años, así como la subescala PAO de la Child and Adolescent Perfectionism Scale (CAPS) y el Cuestionario Big Five de personalidad para niños (BFQ-N) que evalúa los cinco grandes rasgos de la personalidad. Los resultados de la prueba t de Student mostraron que los participantes con altos niveles de PAO obtuvieron medias significativamente más altas en Extraversión, Apertura a la experiencia y Cordialidad que sus iguales con bajos niveles de PAO. Contrariamente, no se observaron diferencias significativas entre ambos grupos en lo que respecta a las puntuaciones medias en Neuroticismo y Conciencia. Los resultados no coinciden con las evidencias empíricas previas, sugiriendo que la relación que se establece entre el PAO y la personalidad puede variar en función de la edad o la cultura.

Perfeccionismo socialmente prescrito y afecto en la infancia

El objetivo de este estudio consistió en analizar la capacidad predictiva del afecto sobre las altas puntuaciones en Perfeccionismo Socialmente Prescrito (PSP) durante la infancia. Se reclutó una muestra de 462 alumnos españoles de Educación Primaria entre 8 y 11 años, de los cuales un 50.08% era varones. Se empleó la Child and Adolescent Perfectionism Scale (CAPS) y la 10-Item Positive and Negative Affect Schedule for Children (10-item PANAS-C) para evaluar, respectivamente, la dimensión PSP y el afecto positivo y negativo. Los resultados del análisis de regresión logística revelaron que tanto el Afecto Positivo como el Afecto Negativo predijeron significativamente altos niveles de PSP, con valores de OR de 1.03 y 1.10. Los resultados apoyaron parcialmente las hipótesis formuladas, indicando que durante la infancia, al contrario que durante la adultez, el PSP se asocia significativamente y de forma positiva con ambos tipos de afecto. No obstante, se evidenció que esta asociación era mucho más estrecha en el caso del Afecto Negativo.

Fortalecimiento de la Gestión de los servicios de Atención Primaria de la Salud de la Municipalidad de Jesús María.

La estrategia de la Atención Primaria de Salud (APS) es reconocida como un componente clave de los sistemas y servicios de salud, tanto para los organismos internacionales de salud, como la Organización Mundial de la Salud, como para las autoridades sanitarias nacionales y provinciales de nuestro país. Así, en Argentina, el Ministerio de Salud de la Nación, señala a la APS como organizadora del sistema y como estrategia fundamental para mejorar diversos componentes de la atención de la salud. En este marco la gestión de los servicios a nivel local adquiere una alta relevancia, toda vez que es en ese nivel desde donde deben estructurarse las redes de atención que contribuyan a garantizar equidad en el acceso a los servicios de salud y a promover mejores condiciones de vida que favorezcan la salud y el bienestar social. Así, para que los centros de salud basados en APS que garanticen accesibilidad a servicios de salud de calidad, implementación de programas específicos y el seguimiento del estado de salud de la población se requiere que los mismos actúen en red, coordinando y complementando sus actividades mediante una gestión integrada. La Municipalidad de Jesús María cuenta con una estructura de atención conformada por 5 Centros de Atención Primaria de la Salud (CAPS), el Complejo para la Tercera Edad, el Complejo para la Discapacidad y el Vacunatorio Municipal. En el área se desempeñan 70 trabajadores ofreciendo cobertura de salud y acción social a los sectores más vulnerables de la ciudad. La Dirección de Calidad de Vida, es el área que tiene a cargo la gestión de los programas de salud que se ejecutan desde la mencionada estructura sanitaria y sus responsables plantean como problemática la carencia de información sistematizada y falta de capacitación especializada para cumplimentar con los objetivos propuestos por la dirección; por ello, perciben la necesidad de implantar un modelo de gestión de los servicios de salud y el seguimiento de los programas implementados, que promueva la toma de decisiones basadas en información de calidad. En base a la demanda mencionada, la pretensión de este proyecto, es colaborar en la creación de las bases para la implantación de un modelo de gestión, que posibilite la efectiva identificación de las necesidades de salud de la población y la adecuación de los servicios y programas ofrecidos a esas necesidades.

INSTRUMENTOS PARA LA EVALUACIÓN DE LA ATENCIÓN PRIMARIA DE SALUD ADAPTADOS PARA ARGENTINA

La evaluación de la atención primaria de la salud (APS) es una actividad de investigación que no se puede limitar al contexto académico y científico sino que está íntimamente ligada a la planificación y a la gestión de los recursos de Salud Pública, tanto en el contexto programático de Ministerios y Secretarías de Salud gubernamentales, de obras sociales o de proveedores privados de cobertura médica, como el de equipos locales de profesionales proveedores de servicios de salud. La evaluación de servicios sanitarios recurre habitualmente a datos de estructura, procesos y resultados obtenidos sistemáticamente por procedimientos administrativos de financiamiento y de prestación de servicios. En cambio, el desarrollo de líneas de investigación sobre la base de modelos conceptuales integrales y capaces de obtener datos de otras fuentes, son escasas en nuestro país. Por ejemplo, existe una notable carencia de conocimiento sobre la perspectiva de la población acerca de su salud y de sus experiencias con la atención médica para analizar si los servicios provistos son apropiados o existe una brecha de necesidades no cubiertas. El grupo de investigación que realiza esta propuesta adaptó un conjunto de cuestionarios para evaluar la APS (PCAT: Primary Care Assessment Tools) cuyo uso a nivel internacional es muy promisorio (ver Descripción del tema abordado). El Ministerio de Salud de la Provincia de Córdoba y la Dirección de Atención Primaria de la Salud (DAPS) de la Municipalidad de Córdoba, manifestaron su interés por la difusión de estos instrumentos entre gestores y efectores de salud para promover su implementación. En la ciudad de Córdoba, estas instituciones tienen a su cargo la totalidad de centros de atención médica pública de primer nivel, 95 municipales y 20 provinciales, que con un plantel profesional de más de 900 personas proporciona cuidados de salud a más de 500.000 habitantes de la ciudad de Córdoba. En boletín estadístico 2009 de la DAPS informa que en los 95 CAPS y en el transcurso de un año, se atienden aproximadamente un 1.000.000 de consultas. Datos provenientes de acciones preventivas muestran que el Programa de Control de Crecimiento y Desarrollo del Niño atiende mensualmente a unos 42.000 niños y niñas menores de 5 años, el de Control de Embarazo y Puerperio registra cada año entre 4.000 y 5.000 mujeres, mientras que en 2009 se contabilizó más de 50.000 mujeres en el Programa de Salud Reproductiva. En cuanto a la población adulta, los Programas de Hipertensión Arterial y de Control del Paciente Diabético registran más de 12.000 y de 6.500 personas, respectivamente. Estos datos dan cuenta de acciones que responden mayoritariamente a demandas efectuadas por la población para los cuales se cuenta con un programa en particular. La información disponible a nivel provincial es aún más acotada y heterogénea, ya que los servicios de APS están descentralizados, a cargo de los municipios. El Ministerio de Salud participa en el financiamiento de la APS a través de los llamados pactos sanitarios y otros tipos de acuerdos. El control de gestión se realiza también a través de indicadores administrativos, por lo que existe un gran interés por la implementación de un nuevo modelo de evaluación de la APS a nivel provincial. La difusión del modelo conceptual y las herramientas PCAT pretende facilitar el acceso a otro tipo de información acerca de características transversales de la organización y particularmente, sobre aspectos de calidad de la atención para la evaluación y la planificación de los servicios. Esta información, que podría ser colectada de una manera uniforme, sería útil para explicar los resultados de la atención sanitaria en función de las necesidades en salud de la población.