Piperonylic Acid, a Selective, Mechanism-Based Inactivator of the trans-Cinnamate 4-Hydroxylase: A New Tool to Control the Flux of Metabolites in the Phenylpropanoid Pathway1

Piperonylic acid (PA) is a natural molecule bearing a methylenedioxy function that closely mimics the structure of trans-cinnamic acid. The CYP73A subfamily of plant P450s catalyzes trans-cinnamic acid 4-hydroxylation, the second step of the general phenylpropanoid pathway. We show that when incubated in vitro with yeast-expressed CYP73A1, PA behaves as a potent mechanism-based and quasi-irreversible inactivator of trans-cinnamate 4-hydroxylase. Inactivation requires NADPH, is time dependent and saturable (KI = 17 μm, kinact = 0.064 min−1), and results from the formation of a stable metabolite-P450 complex absorbing at 427 nm. The formation of this complex is reversible with substrate or other strong ligands of the enzyme. In plant microsomes PA seems to selectively inactivate the CYP73A P450 subpopulation. It does not form detectable complexes with other recombinant plant P450 enzymes. In vivo PA induces a sharp decrease in 4-coumaric acid concomitant to cinnamic acid accumulation in an elicited tobacco (Nicotiana tabacum) cell suspension. It also strongly decreases the formation of scopoletin in tobacco leaves infected with tobacco mosaic virus.

N2 fixation in marine heterotrophic bacteria: dynamics of environmental and molecular regulation.

Molecular and immunological techniques were used to examine N2 fixation in a ubiquitous heterotrophic marine bacterium, the facultative anaerobic Vibrio natriegens. When batch cultures were shifted from aerobic N-replete to anaerobic N-deplete conditions, transcriptional and post-translational regulation of N2 fixation was observed. Levels of nifHDK mRNA encoding the nitrogenase enzyme were highest at 140 min postshift and undetectable between 6 and 9 h later. Immunologically determined levels of nitrogenase enzyme (Fe protein) were highest between 6 and 15 h postshift, and nitrogenase activity peaked between 6 and 9 h postshift, declining by a factor of 2 after 12-15 h. Unlike their regulation in cyanobacteria, Fe protein and nitrogenase activity were present when nifHDK mRNA was absent in V. natriegens, indicating that nitrogenase is stored and stable under anaerobic conditions. Both nifHDK mRNA and Fe protein disappeared within 40 min after cultures were shifted from N2-fixing conditions (anaerobic, N-deplete) to non- N2-fixing conditions (aerobic, N-enriched) but reappeared when shifted to conditions favoring N2 fixation. Thus, unlike other N2-fixing heterotrophic bacteria, nitrogenase must be resynthesized after aerobic exposure in V. natriegens. Immunological detection based on immunoblot (Western) analysis and immunogold labeling correlated positively with nitrogenase activity; no localization of nitrogenase was observed. Because V. natriegens continues to fix N2 for many hours after anaerobic induction, this species may play an important role in providing "new" nitrogen in marine ecosystems.

Evaluación del programa de prevención de drogas "Barbacana"

El presente trabajo es parte de una evaluación más amplia del programa de prevención de drogas Barbacana, enfocado a alumnos de secundaria con un doble objetivo: 1. Evaluar las herramientas del programa y del proceso de implantación: conocer cómo se han desarrollado las actividades programadas. 2. Evaluar los resultados: describir los efectos del programa en los destinatarios del mismo y el grado de cumplimiento de los objetivos marcados. Para la consecución del primer objetivo hemos aplicado una metodología cualitativa basada en entrevistas semiestructuradas a los profesores encargados de llevar a cabo el programa en distintos centros de la Comunidad Valenciana. De la información resultante podemos comprobar que tanto los materiales como el proceso han sido calificados de positivo o muy positivo, tanto entre los aplicadores como entre los receptores. Para el segundo objetivo, optamos por un diseño cuasiexperimental con grupo de comparación no equivalente, en un mismo momento temporal que nos permite medir las diferencias y equivalencias entre ambos, confirmando nuestra hipótesis causal de partida: "las diferencias entre los alumnos del grupo experimental y de control en cuanto a información y niveles de consumo hacia las drogas, se deben básicamente a la aplicación del programa Barbacana".

Investigación privada en secta

La investigación trata sobre un supuesto caso de desaparición de una estudiante universitaria de 18 años, por lo que su padre acude a la agencia de detectives para conocer el paradero de su hija. Durante la investigación se descubre que la investigada se ha introducido en una secta destructiva a la cual ha donado todos sus bienes, dejando así sus amistades, estudios, familia que tenía antes de entrar en la secta. Los detectives durante varias semanas, realizarán seguimientos, recabarán información para poder llegar a comprobar dónde se encuentra la investigada. Finalmente se constata que es una secta ilegal, tiene constituida una sociedad pantalla apropiándose de los bienes de los adeptos de dicha secta, mediante el engaño. Una vez que se constata la constancia de delitos los detectives se pondrán en contacto con las autoridades pertinentes finalizando así la investigación.

Rápidas, colección de rimas.

At head of title: Rafael Pérez Cabello (Zerep)

El conspirador (autobiografía de un hombre público) novela político-social.

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[Influencia de las leyes romanas en la legislación mercantil de España] : Discurso leído en la Universidad Central /

Tesis de la Universidad Central (Madrid), Facultad de Derecho, leída el 30-06-1857.

[Reglas que conviene adoptar para trasladarse de un clima a otro opuesto. Aclimatacion] : Discurso leido ante el claustro de la Universidad Central en el acto solemne de recibir la investidura de doctor en Medicina y Cirujía /

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Éloge de la chevelure : discours inédit d'un auteur grec anonyme en réfutation du discours de synésius intitulé éloge de la calvitie /

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Curso Completo de Anatomía del Cuerpo Humano /

Contiene: t.1: Osteología, 1796, [6], LIII, [1], 384 p. - t.2: Miología, 1797, [10], 316 p. - t.3: Angiología, 1797, [11], 501 p. - t.4: Neurología. Esplanología, 1799, [12], 446 p. - t.5: Esplanología. Anatomía práctica.

Hadriani Iunii Hornani ... Animaduersoru[m] libri sex, omnigenae lectionis thesaurus, in quibus infiniti penè autorum loci corriguntur & declarantur, nunc primùm & nati, & in lucem aediti ; eiusdem De coma commentarium quo haud scio an quicquam extet in eo genere uel eruditius uel locupletius ...

CCE, J-869. NLM, 2643. WHML, 3518.

Traité des maladies du cuir chevelu : suivi des conseils hygiéniques sur les soins à donner à la chevelure /

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[¿Es necesaria la influencia de la luz para la vida?] : discurso pronunciado en el salon de actos de la Universidad Central /

Tesis Universidad Central, leída el 23 de diciembre de 1855.

¿Cuales son la extensión y los efectos de la sociedad conyugal? : Discurso leido ante el claustro de la Universidad Central /

Tesis de la Universidad Central (Madrid), Facultad de Derecho, leída el 22-05-1867.

Carlos II el Hechizado : ¡No hay esperanza! /

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