La basílica y el baptisterio de Tolmo de Minateda (Hellín, Albacete)

Se presenta el complejo religioso exhumado en la parte alta de la ciudad altomedieval del Tolmo de Minateda (Hellín, Albacete), correspondiente a la Madînat Iyih de las fuentes árabes y, en opinión de los autores, a la sede episcopal Eiotana/Elotana creada a principios del siglo VII. El conjunto religioso está compuesto por una basílica de tres naves con ábside semicircular y un baptisterio anexo situado a los pies del edificio, también con distribución tripartita. En este artículo se estudia detalladamente el baptisterio, así como las distintas remodelaciones de la piscina bautismal, y se propone una restitución del espacio litúrgico.

Alterações cardíacas fisiológicas em atletas : o limiar entre patológico e fisiológico

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2014

Régulation de l'expression de PPARγ dans l'arthrose

L’arthrose (OA) est une maladie dégénérative très répondue touchant les articulations. Elle est caractérisée par la destruction progressive du cartilage articulaire, l’inflammation de la membrane synoviale et le remodelage de l’os sous chondral. L’étiologie de cette maladie n’est pas encore bien définie. Plusieurs études ont été menées pour élucider les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans le développement de l’OA. Les effets protecteurs du récepteur activé par les proliférateurs de peroxysomes gamma (PPARγ) dans l'OA sont bien documentés. Il a été démontré que PPARγ possède des propriétés anti-inflammatoires et anti-cataboliques. Aussi, plusieurs stimuli ont été impliqués dans la régulation de l’expression de PPARγ dans différents types cellulaires. Cependant, les mécanismes exacts responsables de cette régulation ainsi que le profil de l’expression de ce récepteur au cours de la progression de l’OA ne sont pas bien connus. Dans la première partie de nos travaux, nous avons essayé d’élucider les mécanismes impliqués dans l’altération de l’expression de PPARγ dans cette maladie. Nos résultats ont confirmé l’implication de l’interleukine-1β (IL-1β), une cytokine pro-inflammatoire, dans la réduction de l’expression de PPARγ au niveau des chondrocytes du cartilage articulaire. Cet effet coïncide avec l'induction de l’expression du facteur de transcription à réponse précoce de type 1 (Egr-1). En plus, la diminution de l'expression de PPARγ a été associée au recrutement d'Egr-1 et la réduction concomitante de la liaison de Sp1 au niveau du promoteur de PPARγ. Dans la deuxième partie de nos travaux, nous avons évalué le profil d’expression de ce récepteur dans le cartilage au cours de la progression de cette maladie. Le cochon d’inde avec OA spontanée et le chien avec OA induite par rupture du ligament croisé antérieur (ACLT) deux modèles animaux d’OA ont été utilisés pour suivre l’expression des trois isoformes de PPARs : PPAR alpha (α), PPAR béta (β) et PPAR gamma (γ) ainsi que la prostaglandine D synthase hématopoïétique (H-PGDS) et la prostaglandine D synthase de type lipocaline (L-PGDS) deux enzymes impliquées dans la production de l’agoniste naturel de PPARγ, la 15-Deoxy-delta(12,14)-prostaglandine J(2) (15d-PGJ2). Nos résultats ont démontré des changements dans l’expression de PPARγ et la L-PGDS. En revanche, l’expression de PPARα, PPARβ et H-PGDS est restée stable au fil du temps. La diminution de l’expression de PPARγ dans le cartilage articulaire semble contribuer au développement de l’OA dans les deux modèles animaux. En effet, le traitement des chondrocytes par de siRNA dirigé contre PPARγ a favorisé la production des médiateurs arthrosiques tels que l'oxyde nitrique (NO) et la métalloprotéase matricielle de type 13 (MMP-13), confirmant ainsi le rôle anti-arthrosique de ce récepteur. Contrairement à ce dernier, le niveau d'expression de la L-PGDS a augmenté au cours de la progression de cette maladie. La surexpression de la L-PGDS au niveau des chondrocytes humains a été associée à la diminution de la production de ces médiateurs arthrosiques, suggérant son implication dans un processus de tentative de réparation. En conclusion, l’ensemble de nos résultats suggèrent que la modulation du niveau d’expression de PPARγ, de la L-PGDS et d’Egr-1 au niveau du cartilage articulaire pourrait constituer une voie thérapeutique potentielle dans le traitement de l’OA et probablement d’autres formes d'arthrite.

Rôles de la protéine tyrosine phosphatase DEP-1 dans l'angiogenèse, la perméabilité vasculaire et la progression tumorale

L’angiogenèse et l’augmentation de la perméabilité vasculaire sont des éléments clés pour la croissance et la progression tumorale. Par conséquent, de nombreux efforts sont déployés à comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans la formation et le remodelage des vaisseaux sanguins de manière à identifier de nouvelles cibles thérapeutiques potentielles. De cette optique, les travaux de cette thèse se sont concentrés sur la protéine tyrosine phosphatase DEP-1, initialement identifiée comme un régulateur négatif de la prolifération et de la phosphorylation du VEGFR2 lorsque fortement exprimée dans les cellules endothéliales. Toutefois, en utilisant une approche d’ARNi, il a été démontré que via sa capacité à déphosphoryler la tyrosine inhibitrice de Src (Y529), DEP-1 était également un régulateur positif de l’activation de Src dans les cellules endothéliales stimulées au VEGF. Puisque Src joue un rôle central dans la promotion de l’angiogenèse et la perméabilité vasculaire, nous avons en plus démontré que DEP-1 était un promoteur de ces fonctions in vitro et que la tyrosine phosphorylation de sa queue C-terminale, permettant l’interaction et l’activation de Src, était requise. Les travaux de recherche présentés dans cette thèse démontrent dans un premier temps à partir d’une souris Dep1 KO, dont le développement ne présente aucun phénotype apparent, que la perte de l’expression de DEP-1 se traduit en une inhibition de l’activation de Src et de l’un de ses substrats, la VE-Cadherine, en réponse au VEGF chez la souris adulte. Nos résultats démontrent donc, pour la première fois, le rôle primordial de DEP-1 dans l’induction de la perméabilité vasculaire et de la formation de capillaires in vivo. Conséquemment, la croissance tumorale et la formation de métastases aux poumons sont réduites due à une inhibition de leur vascularisation ce qui se traduit par une diminution de la prolifération et une augmentation de l’apoptose des cellules cancéreuses. De façon intéressante, l’expression élevée de DEP-1 dans les vaisseaux sanguins tumoraux de patientes atteintes du cancer du sein corrèle avec une vascularisation accrue de la tumeur. En plus du rôle de DEP-1 dans la réponse angiogénqiue à l’âge adulte, nos travaux ont également démontré le rôle important de DEP-1 lors de la vascularisation de la rétine, un modèle in vivo d’angiogenèse développementale. Dans ce contexte, DEP-1 inhibe la prolifération des cellules endothéliales et limite leur bourgeonnement et la complexification du réseau vasculaire rétinien en permettant l’expression adéquate du Dll4, un régulateur crucial de l’organisation de la vascularisation développementale. Cette expression du Dll4 découlerait de la stabilisation de la β-caténine par l’inactivation de la GSK3β, un régulateur important de la dégradation de la β-caténine, en réponse au VEGF selon la voie de signalisation VEGFR2-Src-PI3K-Akt-GSK3β. Ainsi, ces travaux identifient DEP-1 comme un régulateur important de l’organisation vasculaire rétinienne. Les rôles positifs de DEP-1 dans les cellules endothéliales découlent principalement de sa capacité à lier et activer la kinase Src. En plus de contribuer à la réponse angiogénique, Src est également un oncogène bien caractérisé notamment pour sa contribution au programme invasif des cellules cancéreuses mammaires. Les travaux de cette thèse illustrent que DEP-1 est préférentiellement exprimée dans les cellules cancéreuses mammaires invasives et qu’il régule l’activation de Src, de voies de signalisation invasives et, par le fait même, de l’invasivité de ces cellules in vitro et in vivo. De façon intéressante, ces observations corrèlent avec des données cliniques où l’expression modérée de DEP-1 est associée à un mauvais pronostic de survie et de rechute. Ces résultats démontrent donc, pour la première fois, le rôle positif de DEP-1 dans l’activation de Src au niveau des cellules endothéliales et des cellules cancéreuses mammaires ce qui permet la régulation du bourgeonnement endothélial, de la perméabilité vasculaire, de l’angiogenèse normale et pathologique en plus de l’invasion tumorale.

Modulation allostérique du récepteur FP dans le cancer colorectal

Les prostaglandines modulent d’importants rôles physiologiques. Elles sont aussi impliquées dans le développement d’une variété de conditions pathologiques telles l’inflammation, la douleur et le cancer. La prostaglandine PGF2α et son récepteur (récepteur FP) se trouvent impliqué dans la modulation de nombreuses pathologies tels lors de l’accouchement préterme et le cancer colorectal. Récemment, nous avons fait partie d’un groupe de recherche ayant développé des modulateurs allostériques du récepteur FP. Dans une première étude, l’action du PGF2α sur le déclenchement des contractions myométriales a été évaluée, car peu d’information est connue sur la signalisation de cette prostaglandine lors de l’accouchement. Ainsi, nous avons utilisé un peptidomimétique de la deuxième boucle extracellulaire, dénommée PDC113.824. Nos résultats ont démontré que le PDC113.824 permettait de retarder la mise bas chez des souris gestantes, mais agissait de manière différente sur les multiples voies de signalisation de la PGF2α. Ainsi, le PDC113.824 inhibait la voie RhoA-ROCK, dépendante de l’activation de la protéine Gα12 par le. Les protéines RhoA-ROCK sont des acteurs clés dans le remodelage du cytosquelette d’actine et des contractions myométriales lors de l’accouchement. De plus, le PDC113.824 en présence de PGF2α agit comme un modulateur positif sur la voie dépendante de l’activation de la protéine Gαq. Le PDC113.824 serait donc un modulateur allostérique non compétitif possédant des actions à la fois de modulateurs positifs et négatifs sur la signalisation du récepteur FP Dans une seconde étude, des analogues du PDC113.824 ont été conçus et analysés dans un second modèle pathologique, le cancer colorectal. Ce cancer possède de hauts niveaux de récepteur FP. Nous avons donc étudié le rôle du récepteur FP dans le développement et la progression du cancer colorectal et l’effet de modulateurs allostériques. Il est généralement accepté que dans le cancer colorectal, la prostaglandine PGE2 permet la croissance et l’invasion tumorale, ainsi que l’angiogenèse. Toutefois, peu d’informations sont connues sur le rôle du PGF2α dans le cancer colorectal. C’est dans ce contexte que nous avons décidé d’examiner la contribution de ce récepteur dans la progression du cancer colorectal et cherché à déterminer si la modulation des fonctions du récepteur FP a un impact sur la croissance de tumeurs colorectales. Nos recherches ont révélé que l’activation du récepteur FP permet la migration et la prolifération de plusieurs lignées cellulaires humaines et murines d’adénocarcinomes colorectaux. Dans ce contexte, nos expériences ont démontré que la migration des cellules cancéreuses était dépendante de l’activation de la voie Rho. Nos résultats démontrent qu’en effet, l’activation de RhoA, une petite GTPase clé de la voie Gα12, est inhibée de façon sélective par nos composés. De plus, nos molécules allostériques sont également efficaces pour inhiber la voie de signalisation de la ß-caténine, une protéine impliquée dans la genèse du cancer colorectal. In vivo, le traitement de souris avec un des ces modulateurs a permis une inhibition effective de la croissance tumorale. Dans l’ensemble, nos résultats suggèrent donc que les modulateurs allostériques des récepteurs FP pourraient constituer une nouvelle classe de médicaments utilisés pour le traitement du cancer colorectal.

Effect of aestivation on long bone mechanical properties in the green-striped burrowing frog, Cyclorana alboguttata

The green-striped burrowing frog, Cyclorana alboguttata, survives extended drought periods by burrowing underground and aestivating. These frogs remain immobile within cocoons of shed skin and mucus during aestivation and emerge from their burrows upon heavy rains to feed and reproduce. Extended periods of immobilisation in mammals typically result in bone remodelling and a decrease in bone strength. We examined the effect of aestivation and, hence, prolonged immobilisation on cross-sectional area, histology and bending strength in the femur and tibiolibula of C alboguttata. Frogs were aestivated in soil for three and nine months and were compared with control animals that remained active, were fed and had a continual supply of water. Compared with the controls, long bone size, anatomy and bending strength remained unchanged, indicating an absence of disuse osteoporosis. This preservation of bone tissue properties enables C. alboguttata to compress the active portions of their life history into unpredictable windows of opportunity, whenever heavy rains occur.

Conjugation of an antibody to cross-linked fibrin for targeted delivery of anti-restenotic drugs

There is an urgent need to treat restenosis, a major complication of the treatment of arteries blocked by atherosclerotic plaque, using local delivery techniques. We observed that cross-linked fibrin (XLF) is deposited at the site of surgical injury of arteries. An antibody to XLF, conjugated to anti-restenotic agents, should deliver the drugs directly and only to the site of injury. An anti-XLF antibody (H93.7C.1D2/48; 1D2) was conjugated to heparin (using N-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)-propionate), low molecular weight heparin (LMWH) (adipic acid dihydrazide) and rapamycin (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide/N-hydroxysuccinimide), and the conjugates purified and tested for activity before use in vivo. Rabbits had their right carotid arteries de-endothelialised and then given a bolus of 1D2-heparin, 1D2-LMWH or 1D2-rapamycin conjugate or controls of saline, heparin, LMWH, rapamycin or 1D2 (+/-heparin bolus) and sacrificed after 2 or 4 weeks (12 groups, n=6/group). Rabbits given any of the conjugates had minimal neointimal development in injured arteries, with up to 59% fewer neointimal cells than those given control drugs. Rabbits given 1D2-heparin or 1D2-LMWH had an increased or insignificant reduction in luminal area, with positive remodelling, while the medial and total arterial areas of rabbits given 1D2-rapamycin were not affected by injury. Arteries exposed to 1D2-heparin or 1D2-rapamycin had more endothelial cells than rabbits given control drugs. Thus, XLF-antibodies can site-deliver anti-restenotic agents to injured areas of the artery wall, where the conjugates can influence remodelling, re-endothelialisation and neointimal cell density, with reduced neointimal formation. (C) 2004 Elsevier B.V. All rights reserved.

Targeted delivery of heparin and LMWH using a fibrin antibody prevents restenosis

This study investigates a stent-less local delivery system for anti-restenotic agents utilizing antibodies to cross-linked fibrin (XLF). Heparin and low molecular weight heparin (LMWH) were conjugated to an antibody to cross-linked fibrin D-dinner (1D2). Rabbit right carotid arteries were injured with a balloon catheter, then the animals were given a bolus injection of 40 mug/k,g 1D2-heparin (26-70 mug/kg heparin) or 1D2-LMWH (29-80 mug/kg LMWH) conjugates or controls of saline (0.5 ml/kg), heparin (150 U/kg), LMWH (2 mg), or 1D2 (40 mug/kg), with or without a heparin bolus and sacrificed after 2 weeks (8 groups, n = 6/group). The injured artery of rabbits given 1D2-heparin or 1D2-LMWH conjugates had reduced neointimal development, with decreased luminal narrowing and positive remodelling compared with animals given control drugs. Animals given 1D2-heparin conjugate (with a heparin bolus) had three to five times more endothelial cells than the rabbits given saline or unconjugated heparin, while rabbits given 1D2-LMWH conjugate had up to 59% fewer neointimal cells than those given unconjugated drugs. There was little difference in extracellular matrix organization or composition. Thus cross-linked fibrin-antibodies can site-deliver anti-restenotic agents to injured areas of the artery wall where they influence wall remodelling and endothelial and neointimal cell number, reducing neointimal formation without systemic complications. Local delivery of anti-restenotic agents should minimise systemic effects, bleeding complications and potentially the cost of treatment due to a single, lower dose. (C) 2004 Elsevier Ireland Ltd. All rights reserved.

Nitric oxide donors inhibit 5-hydroxytryptamine (5-HT) uptake by the human 5-HT transporter (SERT)

1 The aim was to test the hypothesis that nitric oxide ( NO) donor drugs can inhibit the 5-hydroxytryptamine (5-HT) transporter, SERT. 2 The NO donors, MAHMA/NO ( a NONOate; (Z)-1-[N-methyl-N-[6-(N-methylammoniohexyl)amino]]diazen- 1-ium-1,2-diolate), SIN-1 ( a sydnonimine; 5-amino-3-(4-morpholinyl)-1,2,3-oxadiazolium chloride), FK409 ( an oxime; (+/-)-(4-ethyl-2E-(hydroxyimino)-5-nitro-3E-hexenamide)) and peroxynitrite, but not Angeli's salt ( source of nitroxyl anion) or sodium nitrite, caused concentration-dependent inhibition of the specific uptake of [H-3]- 5-HT in COS-7 cells expressing human SERT. 3 Superoxide dismutase (150 U ml(-1)) plus catalase ( 1200 U ml(-1)), used to remove superoxide and hence prevent peroxynitrite formation, prevented the inhibitory effect of SIN-1 ( which generates superoxide) but not of MAHMA/NO or FK409. 4 The inhibitory effects of the NO donors were not affected by the free radical scavenger, hydroxocobalamin (1 mM) or the guanylate cyclase inhibitor, ODQ (1H-[ 1,2,4] oxadiazolo[4,3-a] quinoxalin-1-one; 3 muM). 5 L-Cysteine ( 1 mM; source of excess thiol residues) abolished or markedly reduced the inhibitory effects of MAHMA/NO, SIN-1, FK409 and peroxynitrite. 6 It is concluded that inhibition of SERT by the NO donors cannot be attributed exclusively to NO free radical nor to nitroxyl anion. It does not involve guanosine-3',5'-cyclic monophosphate, but may involve nitrosation of cysteine residues on the SERT protein. Peroxynitrite mediates the effect of SIN-1, but not the other drugs. 7 Data in mice with hypoxic pulmonary hypertension suggest that SERT inhibitors may attenuate pulmonary vascular remodelling. Thus, NO donors may be useful in pulmonary hypertension, not only as vasodilators, but also because they inhibit SERT, provided they display this effect in vivo at appropriate doses.

Method for the generation and cultivation of functional three-dimensional mammary constructs without exogenous extracellular matrix

During puberty, pregnancy, lactation and postlactation, breast tissue undergoes extensive remodelling and the disruption of these events can lead to cancer. In vitro studies of mammary tissue and its malignant transformation regularly employ mammary epithelial cells cultivated on matrigel or floating collagen rafts. In these cultures, mammary epithelial cells assemble into three-dimensional structures resembling in vivo acini. We present a novel technique for generating functional mammary constructs without the use of matrix substitutes.

Reversal of cardiac dysfunction by selective ET-A receptor antagonism

1 The effectiveness of a selective endothelin receptor- A ( ET- A) antagonist, A- 127722 ( approximately 10 mg kg(-1) day(-1) as 200 mg kg(-1) powdered food), to reverse existing cardiac remodelling and prevent further remodelling was tested in deoxycorticosterone acetate ( DOCA)- salt hypertensive rats. 2 Uninephrectomised rats ( UNX) administered DOCA ( 25 mg every fourth day s. c.) and 1% NaCl in drinking water for 28 days developed hypertension ( systolic blood pressure ( BP): UNX 128 +/- 6 mmHg, DOCA- salt 182 +/- 5* mmHg; *P

Local therapy for restenosis

The durability of all forms of open or percutaneous revascularisation is affected by the development of localised stenoses within the bypass graft or at the site of endarterectomy, stent or angioplasty. The reported incidence of significant restenosis has varied dependent on initial procedure, site, case mix and definition, but is greatest during the first 12 months (Table 1).1 Over the last 40 years tens of thousands of studies have been carried out in an effort to understand or reduce the incidence of restenosis, with two major mechanisms identified as being responsible for the luminal narrowing, namely intimal hyperplasia and constrictive remodelling. Intimal hyperplasia is provoked by changes in the balance of local cytokines controlling vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation, apoptosis and migration, brought about by endothelial or medial injury and alterations in haemodynamic forces. The overall vessel diameter reduction that occurs in constrictive remodelling is less well defined, but likely involves matrix turnover under the control of proteinases, particularly metalloproteinases.

Evolutionary conservation and murine embryonic expression of the gene encoding the SERTA domain-containing protein CDCA4 (HEPP)

Cdca4 (Hepp) was originally identified as a gene expressed specifically in hematopoietic progenitor cells as opposed to hematopoietic stem cells. More recently, it has been shown to stimulate p53 activity and also lead to p53-independent growth inhibition when overexpressed. We independently isolated the murine Cdca4 gene in a genomic expression-based screen for genes involved in mammalian craniofacial development, and show that Cdca4 is expressed in a spatio-temporally restricted pattern during mouse embryogenesis. In addition to expression in the facial primordia including the pharyngeal arches, Cdca4 is expressed in the developing limb buds, brain, spinal cord, dorsal root ganglia, teeth, eye and hair follicles. Along with a small number of proteins from a range of species, the predicted CDCA4 protein contains a novel SERTA motif in addition to cyclin A-binding and PHD bromodomain-binding regions of homology. While the function of the SERTA domain is unknown, proteins containing this domain have previously been linked to cell cycle progression and chromatin remodelling. Using in silico database mining we have extended the number of evolutionarily conserved orthologues of known SERTA domain proteins and identified an uncharacterised member of the SERTA domain family, SERTAD4, with orthologues to date in human, mouse, rat, dog, cow, Tetraodon and chicken. Immunolocalisation of transiently and stably transfected epitope-tagged CDCA4 protein in mammalian cells suggests that it resides predominantly in the nucleus throughout all stages of the cell cycle. (c) 2006 Elsevier B.V. All rights reserved.

Improved cardiovascular function with aminoguanidine in DOCA-salt hypertensive rats

1 The ability of aminoguanidine (AG), an inhibitor of collagen crosslinking, to prevent changes in cardiac and vascular structure and function has been determined in the deoxycorticosterone acetate (DOCA)-salt hypertensive rat as a model of the cardiovascular remodelling observed in chronic human hypertension. 2 Uninephrectomized rats (UNX) administered DOCA (25 mg every fourth day s.c.) and 1% NaCl in drinking water for 28 days developed cardiovascular remodelling shown as systolic hypertension, left ventricular hypertrophy, increased thoracic aortic and left ventricular wall thickness, increased left ventricular inflammatory cell infiltration together with increased interstitial collagen and increased passive diastolic stiffness, impaired contractility, prolongation of the action potential duration and vascular dysfunction. 3 Treatment with AG (0.05-0.1% in drinking water; average 182 +/- 17 mg kg(-1) day(-1) in DOCA-salt rats) decreased blood pressure (DOCA-salt 176 +/- 4; + AG 144 +/- 5 mmHg; *P < 0.05 vs DOCA-salt), decreased left ventricular wet weights (DOCA-salt 3.17 +/- 0.07; + AG 2.66 +/- 0.08 mg g(-1) body wt*), reduced diastolic stiffness constant (DOCA-salt 30.1 +/- 1.2; + AG 24.3 +/- 1.2* (dimensionless)), improved cardiac contractility (DOCA-salt 1610 +/- 130; + AG 2370 +/- 100 mmHg s(-1)*) and vascular reactivity (3.4-fold increase in maximal contractile response to noradrenaline, 3.2-fold increase in maximal relaxation response to acetylcholine, twofold increase in maximal relaxation response to sodium nitroprusside) and prolonged the action potential duration at 50% repolarization without altering collagen content or inflammatory cell infiltration. 4 Thus, cardiovascular function in DOCA-salt hypertensive rats can be improved by AG independent of changes in collagen content. This suggests that collagen crosslinking is an important cause of cardiovascular dysfunction during cardiovascular remodelling in hypertension.

Diabetic heart disease

Diabetes mellitus is responsible for a spectrum of cardiovascular disease. The best known complications arise from endothelial dysfunction, oxidation, inflammation, and vascular remodelling and contribute to atherogenesis. However, the effects on the heart also relate to concurrent hypertensive heart disease, as well as direct effects of diabetes on the myocardium. Diabetic heart disease, defined as myocardial disease in patients with diabetes that cannot be ascribed to hypertension, coronary artery disease, or other known cardiac disease, is reviewed.