Enhanced sensitivity detection of protein immobilization by fluorescent interference on oxidized silicon.

We present a silicon chip-based approach for the enhanced sensitivity detection of surface-immobilized fluorescent molecules. Green fluorescent protein (GFP) is bound to the silicon substrate by a disuccinimidyl terephtalate-aminosilane immobilization procedure. The immobilized organic layers are characterized by surface analysis techniques, like ellipsometry, atomic force microscopy (AFM) and X-ray induced photoelectron spectroscopy. We obtain a 20-fold enhancement of the fluorescent signal, using constructive interference effects in a fused silica dielectric layer, deposited before immobilization onto the silicon. Our method opens perspectives to increase by an order of magnitude the fluorescent response of surface immobilized DNA- or protein-based layers for a variety of biosensor applications.

Catálogo do material-tipo de Tachinidae (Diptera) depositado no Museu de Zoologia da Universidade de São Paulo

Catálogo do material-tipo de Tachinidae (Diptera) depositado no Museu de Zoologia da Universidade de São Paulo. O Museu de Zoologia da Universidade de São Paulo abriga a maior e mais representativa coleção brasileira de Diptera. A coleção de Tachinidae destaca-se como a segunda mais numerosa, com 32554 espécimes adultos montados. No presente estudo é apresentado um catálogo de tipos primários e secundários de Tachinidae abrigados no Museu de Zoologia, fornecendo informações sobre dados de coleta, seu estado de conservação, bem como o status taxonômico dos nomes específicos e seu atual posicionamento genérico, quando diferente do original. O catálogo lista um total de 847 espécimes-tipo (99 holótipos, 737 parátipos, 8 síntipos, 1 lectótipo, 1 paralectótipo e 1 neótipo) representando um total de 263 espécies nominais de Tachinidae, predominantemente da Região Neotropical. Também são listados espécimes cujo status (se tipo ou não) foi considerado duvidoso. Uma breve biografia de Charles Henry Tyler Townsend e José Henrique Guimarães é apresentada.

Reutilização do Resíduo Oriundo dos Serviços de Restauração Asfáltica Como Material Alternativo em Camadas de Pavimentos Flexíveis

Uma técnica de restauração de pavimentos, bastante empregada atualmente, é a fresagem do revestimento asfáltico e recomposição com um novo revestimento. Na operação de fresagem é gerado um grande volume de resíduo, material fresado, que normalmente é descartado em bota-fora. Face ao desafio moderno de dar um destino ecologicamente correto para os resíduos, este trabalho apresenta uma solução para a reutilização do material fresado em camadas granulares de pavimentos flexíveis. Os ensaios de caracterização mostram que a granulometria do fresado não se enquadra nas faixas de estabilização granulométrica, carecendo de finos. Apesar de apresentar certa degradação durante o ensaio de compactação Proctor o material fresado tem um índice de suporte califórnia maior do que 20%, para a energia modificada. Para corrigir a deficiência de finos o material fresado foi misturado com pó-de-pedra em dois teores diferentes (30% e 70%). As misturas apresentaram melhoras no comportamento mecânico, alcançando massas específicas maiores que o fresado e também índices de suporte califórnia maiores. Também é relatado a execução de uma pista experimental numa rua lateral a BR-285 na cidade de Bozano, utilizando material fresado estabilizado granulometricamente com a adição de pó-de-pedra, como material de base de pavimento. Além dos processos executivos são apresentados levantamentos defletométricos que permitem concluir que simultaneamente a um descarte adequado a utilização do material fresado na camada de base é uma ótima solução para pavimentos de baixo volume de tráfego.

Reutilização do Resíduo Oriundo dos Serviços de Restauração Asfáltica como Material Alternativo em Camadas de Pavimentos Flexíveis

Uma técnica de restauração de pavimentos, bastante empregada atualmente, é a fresagem do revestimento asfáltico e recomposição com um novo revestimento. Na operação de fresagem é gerado um grande volume de resíduo, material fresado, que normalmente é descartado em bota-fora. Face ao desafio moderno de dar um destino ecologicamente correto para os resíduos, este trabalho apresenta uma solução para a reutilização do material fresado em camadas granulares de pavimentos flexíveis. Os ensaios de caracterização mostram que a granulometria do fresado não se enquadra nas faixas de estabilização granulométrica, carecendo de finos. Apesar de apresentar certa degradação durante o ensaio de compactação Proctor o material fresado tem um índice de suporte califórnia maior do que 20%, para a energia modificada. Para corrigir a deficiência de finos o material fresado foi misturado com pó-de-pedra em dois teores diferentes (30% e 70%). As misturas apresentaram melhoras no comportamento mecânico, alcançando massas específicas maiores que o fresado e também índices de suporte califórnia maiores. Também é relatado a execução de uma pista experimental numa rua lateral a BR-285 na cidade de Bozano, utilizando material fresado estabilizado granulometricamente com a adição de pó-de-pedra, como material de base de pavimento. Além dos processos executivos são apresentados levantamentos defletométricos que permitem concluir que simultaneamente a um descarte adequado a utilização do material fresado na camada de base é uma ótima solução para pavimentos de baixo volume de tráfego.

Reutilização do Resíduo Oriundo dos Serviços de Restauração Asfáltica como Material Alternativo em Camadas de Pavimentos Flexíveis

Uma técnica de restauração de pavimentos, bastante empregada atualmente, é a fresagem do revestimento asfáltico e recomposição com um novo revestimento. Na operação de fresagem é gerado um grande volume de resíduo, material fresado, que normalmente é descartado em bota-fora. Face ao desafio moderno de dar um destino ecologicamente correto para os resíduos, este trabalho apresenta uma solução para a reutilização do material fresado em camadas granulares de pavimentos flexíveis. Os ensaios de caracterização mostram que a granulometria do fresado não se enquadra nas faixas de estabilização granulométrica, carecendo de finos. Apesar de apresentar certa degradação durante o ensaio de compactação Proctor o material fresado tem um índice de suporte califórnia maior do que 20%, para a energia modificada. Para corrigir a deficiência de finos o material fresado foi misturado com pó-de-pedra em dois teores diferentes (30% e 70%). As misturas apresentaram melhoras no comportamento mecânico, alcançando massas específicas maiores que o fresado e também índices de suporte califórnia maiores. Também é relatado a execução de uma pista experimental numa rua lateral a BR-285 na cidade de Bozano, utilizando material fresado estabilizado granulometricamente com a adição de pó-de-pedra, como material de base de pavimento. Além dos processos executivos são apresentados levantamentos defletométricos que permitem concluir que simultaneamente a um descarte adequado a utilização do material fresado na camada de base é uma ótima solução para pavimentos de baixo volume de tráfego.

Reutilização do Resíduo Oriundo dos Serviços de Restauração Asfáltica como Material Alternativo em Camadas de Pavimentos Flexíveis

Uma técnica de restauração de pavimentos, bastante empregada atualmente, é a fresagem do revestimento asfáltico e recomposição com um novo revestimento. Na operação de fresagem é gerado um grande volume de resíduo, material fresado, que normalmente é descartado em bota-fora. Face ao desafio moderno de dar um destino ecologicamente correto para os resíduos, este trabalho apresenta uma solução para a reutilização do material fresado em camadas granulares de pavimentos flexíveis. Os ensaios de caracterização mostram que a granulometria do fresado não se enquadra nas faixas de estabilização granulométrica, carecendo de finos. Apesar de apresentar certa degradação durante o ensaio de compactação Proctor o material fresado tem um índice de suporte califórnia maior do que 20%, para a energia modificada. Para corrigir a deficiência de finos o material fresado foi misturado com pó-de-pedra em dois teores diferentes (30% e 70%). As misturas apresentaram melhoras no comportamento mecânico, alcançando massas específicas maiores que o fresado e também índices de suporte califórnia maiores. Também é relatado a execução de uma pista experimental numa rua lateral a BR-285 na cidade de Bozano, utilizando material fresado estabilizado granulometricamente com a adição de pó-de-pedra, como material de base de pavimento. Além dos processos executivos são apresentados levantamentos defletométricos que permitem concluir que simultaneamente a um descarte adequado a utilização do material fresado na camada de base é uma ótima solução para pavimentos de baixo volume de tráfego.

Dispersões Aquosas de Poliuretano como Material Base para o Desenvolvimento de Sistemas de Libertação Controlada de Cetoprofeno

O cetoprofeno (ácido 2-(3-benzoilfenil) propiónico) é um anti-inflamatório não esteroidal (AINE) utilizado no tratamento de uma grande variedade de doenças inflamatórias agudas e crónicas incluindo a artrite reumatoide, osteoartrite e espondilite anquilosante. A sua administração oral prolongada está associada a diversas reações gastrointestinais, tais como irritações e ulcerações. Neste contexto, é importante desenvolver sistemas alternati-vos, nomeadamente sistemas de libertação controlada para administração oral, transdér-mica ou intradérmica. Este trabalho tem como objetivo testar a possibilidade de utilização de dispersões aquosas de poliuretano (PUDs) como material de suporte para a produção de sistemas de liberta-ção controlada de cetoprofeno. Numa primeira etapa, foram sintetizadas PUDs de base poliéster (policaprolactona, PCL) e poliéter (polipropileno-glicol, PPG) utilizando o méto-do de pré-polímero modificado. As dispersões obtidas foram caracterizadas em termos de pH, viscosidade, teor de sólidos e tamanho de partícula. Numa segunda etapa, foi testada a incorporação do cetoprofeno nas PDUs produzidas utilizando duas estratégias para incre-mentar a sua solubilidade em água: (i) utilização de um co-solvente (acetona, DMSO e HYD) e (ii) utilização de um surfactante não iónico (Tween 80). A incorporação foi testada para teores de 5% e 10% (razão fármaco/polímero, m/m). Os filmes produzidos pelo méto-do da evaporação do solvente foram avaliados quanto à sua homogeneidade e caracteriza-dos por FTIR e DSC. Numa terceira fase realizaram-se estudos de libertação em tampão de fosfato salino (PBS) de pH 7.5 tendo como objetivo avaliar a viabilidade de desenvolvimen-to de diferentes tipologias de dispositivos dependendo de um compromisso entre as pro-priedades dos filmes e o comportamento de libertação. Os resultados obtidos podem ajudar na seleção do material de base mais adequado para um determinado fim. Adicionalmente, e mais importante, comprovou-se a viabilidade de utilizar PUDs como material base para o desenvolvimento de sistemas de libertação con-trolada, utilizando como exemplo o cetoprofeno. A avaliação da toxicidade e da atividade anti-inflamatória dos filmes produzidos foi considerada estando em curso neste momento no grupo do Professor Armando Cunha Júnior.

Material estadístico sobre la industria peruana de harina de pescado

Cuadros estadísticos de aspectos cualitativos y cuantitativos ligados a la industria peruana de reducción, que se presenta desde el momento de la pesca de materia prima hasta la venta del producto final y su exportación.

An improved synthesis of dansylated α-galactosylceramide and its use as a fluorescent probe for the monitoring of glycolipid uptake by cells.

A highly efficient synthesis of the biologically important fluorescent probe dansyl α-GalCer is presented. Key in our strategy is the incorporation of the fluorescent dansyl group at an early stage in the synthesis to facilitate in the monitoring and purification of intermediates via TLC and flash column chromatography, respectively, and the use of a high yielding α-selective glycosylation reaction between the phytosphingosine lipid and a galactosyl iodide donor. The ability of dansyl α-GalCer to activate iNKT cells and to serve as a fluorescent marker for the uptake of glycolipid by dendritic cells is also presented.

Construção e utilização de Bibliotecas Digitais:Contextos de acesso deficitário a material impresso e a Tecnologias de Informação e Comunicação

Os países mais pobres enfrentam grandes dificuldades no acesso a publicações impressas. Entretanto, o surgimento das Bibliotecas Digitais aparece como uma grande alternativa, exactamente por permitirem o acesso a uma grande quantidade de materiais bibliográficos teoricamente a qualquer hora e a partir de qualquer lugar, desde que por exemplo se tenha acesso a um computador com ligação à Internet. Apresentam portanto um potencial muito grande para combater o fosso entre países ricos e pobres no acesso a recursos bibliográficos, e desempenham um papel educativo muito importante. Entretanto, esses países enfrentam grandes dificuldades na construção e utilização dessas Bibliotecas Digitais, como falta de técnicos qualificados, analfabetismo digital, dificuldade no acesso a computador, acesso deficitário à Internet e outros recursos das Tecnologias de Informação e Comunicação, etc. Enfrentam igualmente outros problemas de resolução prioritária como abastecimento de água, saneamento básico, entre outros. Perante essas dificuldades, torna-se necessário encontrar mecanismos de construção e utilização de Bibliotecas Digitais que por um lado contribuam para melhorar o acesso a materiais bibliográficos nos países mais pobres, e por outro, não requeiram elevados investimentos. Portanto, torna-se necessário estudar e prover mecanismos de construção e utilização de Bibliotecas Digitais que melhor se adeqúem à realidade dos países menos avançados, caracterizada pela falta de recursos, bem como pelo acesso deficitário a material impresso e a Tecnologias de Informação e Comunicação. Torna-se igualmente necessário compreender a forma como essas bibliotecas são utilizadas nesses contextos. Assim, ao longo desta tese são analisados as potencialidades das bibliotecas digitais para os países mais pobres, os desafios existentes à sua construção e utilização bem como as alternativas existentes. Portanto, são estudados os pontos fortes, pontos fracos, vulnerabilidades e ameaças ao processo de construção e utilização de bibliotecas digitais nos países mais pobres; as dificuldades existentes e as diversas possibilidades de construção e utilização de bibliotecas digitais nessas regiões, sem que para o efeito haja necessidade de avultados investimentos. É demonstrado que apesar dos desafios, é possível construir e utilizar bibliotecas digitais nos países em desenvolvimento sem necessidade de muitos recursos. É analisado o caso concreto da construção e utilização da Biblioteca Digital da Universidade Jean Piaget de Cabo Verde, criada no âmbito deste estudo e enquadrada num contexto de acesso deficitário a material impresso e a Tecnologias de Informação e Comunicação. Essa construção é efectuada levando em consideração as especificidades locais, os inputs dos potenciais utilizadores e utilizando mecanismos que minimizem os seus custos, como o uso do software livre, trabalho voluntário, entre outros. O presente estudo mostra que não obstante esse contexto, a utilização da Biblioteca Digital da Universidade Jean Piaget de Cabo Verde, pelos membros da comunidade académica da Universidade é exponencialmente superior ao uso da biblioteca tradicional da Universidade, contendo os mesmos recursos bibliográficos.

Combination of fluorescent reporters for simultaneous monitoring of root colonization and antifungal gene expression by a biocontrol pseudomonad on cereals with flow cytometry.

Some root-associated pseudomonads sustain plant growth by suppressing root diseases caused by pathogenic fungi. We investigated to which extent select cereal cultivars influence expression of relevant biocontrol traits (i.e., root colonization efficacy and antifungal activity) in Pseudomonas fluorescens CHA0. In this representative plant-beneficial bacterium, the antifungal metabolites 2,4-diacetylphloroglucinol (DAPG), pyrrolnitrin (PRN), pyoluteorin (PLT), and hydrogen cyanide (HCN) are required for biocontrol. To monitor host plant effects on the expression of biosynthetic genes for these compounds on roots, we developed fluorescent dual-color reporters suited for flow cytometric analysis using fluorescence-activated cell sorting (FACS). In the dual-label strains, the constitutively expressed red fluorescent protein mCherry served as a cell tag and marker for root colonization, whereas reporter fusions based on the green fluorescent protein allowed simultaneous recording of antifungal gene expression within the same cell. FACS analysis revealed that expression of DAPG and PRN biosynthetic genes was promoted in a cereal rhizosphere, whereas expression of PLT and HCN biosynthetic genes was markedly less sustained. When analyzing the response of the bacterial reporters on roots of a selection of wheat, spelt, and triticale cultivars, we were able to detect subtle species- and cultivar-dependent differences in colonization and DAPG and HCN gene expression levels. The expression of these biocontrol traits was particularly favored on roots of one spelt cultivar, suggesting that a careful choice of pseudomonad-cereal combinations might be beneficial to biocontrol. Our approach may be useful for selective single-cell level analysis of plant effects in other bacteria-root interactions.

Mutant HbpR transcription activator isolation for 2-chlorobiphenyl via green fluorescent protein-based flow cytometry and cell sorting.

Mutants were produced in the A-domain of HbpR, a protein belonging to the XylR family of σ(54)-dependent transcription activators, with the purpose of changing its effector recognition specificity from 2-hydroxybiphenyl (2-HBP, the cognate effector) to 2-chlorobiphenyl (2-CBP). Mutations were introduced in the hbpR gene part for the A-domain via error-prone polymerase chain reaction, and assembled on a gene circuitry plasmid in Escherichia coli, permitting HbpR-dependent induction of the enhanced green fluorescent protein (egfp). Cells with mutant HbpR proteins responsive to 2-CBP were enriched and separated in a flow cytometry-assisted cell-sorting procedure. Some 70 mutants were isolated and the A-domain mutations mapped. One of these had acquired true 2-CBP recognition but reacted hypersensitively to 2-HBP (20-fold more than the wild type), whereas others had reduced sensitivity to 2-HBP but a gain of 2-CBP recognition. Sequencing showed that most mutants carried double or triple mutations in the A-domain gene part, and were not located in previously recognized conserved residues within the XylR family members. Further selection from a new mutant pool prepared of the hypersensitive mutant did not result in increased 2-CBP or reduced 2-HBP recognition. Our data thus demonstrate that a one-step in vitro 'evolutionary' adaptation of the HbpR protein can result in both enhancement and reduction of the native effector recognition.

Mineralização do nitrogênio incorporado como material vegetal em três solos da Amazônia Central

A mineralização do N proveniente do resíduo de feijão-caupi marcado com 15N foi estudada em condições de laboratório de setembro a dezembro de 1992. O material vegetal foi incorporado em amostras dos três principais solos da Amazônia Central: dois de terra firme, classificados como latossolo amarelo e podzólico vermelho-amarelo, e um de várzea, classificado como glei pouco húmico (GP). As variações nos teores e na forma de N mineral provenientes do resíduo de caupi foram relacionadas com as características químicas dos solos estudados. No latossolo e no podzólico, a incorporação do resíduo de caupi aumentou significativamente a mineralização do N, sendo a forma amoniacal predominante, enquanto, no GP, a forma nítrica preponderou. Nos solos de terra firme, a incorporação do resíduo de caupi aumentou a mineralização do N orgânico do solo, indicando a ocorrência do efeito "priming". Após 60 dias de incubação, cerca de 30 (podzólico) a 40% (latossolo) do N proveniente do caupi foi mineralizado nos solos de terra firme, enquanto no de várzea somente 18% foi mineralizado nesse período. Tais resultados mostram o potencial que essa leguminosa apresenta como fornecedora de N para as plantas nos solos de terra firme da Amazônia Central.

Relações material de origem / solo e pedogênese em uma seqüência de solos predominantemente argilosos e Latossólicos sobre psamitos na depressão periférica Paulista: Paulo State Peripheral Depression, southeastern Brazil

Na região da Depressão Periférica Paulista, estudaram-se os solos em uma encosta representativa das baixas colinas com relevo suave ondulado e lançantes longos do baixo vale do rio Piracicaba. Após intensas observações de campo, foram amostrados cinco pedons, assentados em rochas psamíticas da formação Itararé (Carbonífero-Permiano). Quatro apresentaram características latossólicas e textura argilosa e um, interposto na porção superior da meia encosta, textura média e B textural. Com observações de campo, estratigráficas, macro e micromorfológicas e da mineralogia da argila, concluiu-se que grande parte do material de origem dos pedons Latossólicos argilosos proveio do retrabalhamento de um sedimento neocenozóico argiloso, previamente bastante intemperizado, com remanescentes semelhantes, hoje ocupando preferencialmente as superfícies cimeiras locais, e sem aparente filiação com as rochas psamíticas subjacentes. Deduziu-se que as características latossólicas dos solos da meia encosta e do sopé foram herdadas de idêntico material. No terço inferior da encosta, ocorreu um Bt, relativamente pouco espesso, interpretado como produto de transformação do transportado Bw, principalmente por mecanismos de argiluviação que coalescem os antigos microagregados tipicamente Latossólicos. O mais provável material de origem do Podzólico Vermelho-Amarelo Latossólico textura média/argilosa no terço superior da meia encosta, foi considerado como derivado, em grande parte, de sedimento correlativo a um antigo e elevado depósito aluvial correspondente a um nível de terraço do rio Piracicaba, hoje quase totalmente reafeiçoado.

Stereospecificity of the siderophore pyochelin outer membrane transporters in fluorescent pseudomonads.

Pyochelin (Pch) and enantio-pyochelin (EPch) are enantiomer siderophores that are produced by Pseudomonas aeruginosa and Pseudomonas fluorescens, respectively, under iron limitation. Pch promotes growth of P. aeruginosa when iron is scarce, and EPch carries out the same biological function in P. fluorescens. However, the two siderophores are unable to promote growth in the heterologous species, indicating that siderophore-mediated iron uptake is highly stereospecific. In the present work, using binding and iron uptake assays, we found that FptA, the Fe-Pch outer membrane transporter of P. aeruginosa, recognized (K(d) = 2.5 +/- 1.1 nm) and transported Fe-Pch but did not interact with Fe-EPch. Likewise, FetA, the Fe-EPch receptor of P. fluorescens, was specific for Fe-EPch (K(d) = 3.7 +/- 2.1 nm) but did not bind and transport Fe-Pch. Growth promotion experiments performed under iron-limiting conditions confirmed that FptA and FetA are highly specific for Pch and EPch, respectively. When fptA and fetA along with adjacent transport genes involved in siderophore uptake were swapped between the two bacterial species, P. aeruginosa became able to utilize Fe-EPch as an iron source, and P. fluorescens was able to grow with Fe-Pch. Docking experiments using the FptA structure and binding assays showed that the stereospecificity of Pch recognition by FptA was mostly due to the configuration of the siderophore chiral centers C4'' and C2'' and was only weakly dependent on the configuration of the C4' carbon atom. Together, these findings increase our understanding of the stereospecific interaction between Pch and its outer membrane receptor FptA.