Kunjin virus replicon vectors for human immunodeficiency virus vaccine development

We have previously demonstrated the ability of the vaccine vectors based on replicon RNA of the Australian flavivirus Kunjin (KUN) to induce protective antiviral and anticancer CD8(+) T-cell responses using murine polyepitope as a model immunogen (I. Anraku, T. J. Harvey, R. Linedale, J. Gardner, D. Harrich, A. Suhrbier, and A. A. Khromykh, J. Virol. 76:3791-3799, 2002). Here we showed that immunization of BALB/c mice with KUN replicons encoding HIV-1 Gag antigen resulted in induction of both Gag-specific antibody and protective Gag-specific CD8(+) T-cell responses. Two immunizations with KUNgag replicons in the form of virus-like particles (VLPs) induced anti-Gag antibodies with titers of greater than or equal to1:10,000. Immunization with KUNgag replicons delivered as plasmid DNA, naked RNA, or VLPs induced potent Gag-specific CD8(+) T-cell responses, with one immunization of KUNgag VLPs inducing 4.5-fold-more CD8(+) T cells than the number induced after immunization with recombinant vaccinia virus carrying the gag gene (rVVgag). Two immunizations with KUNgag VLPs also provided significant protection against challenge with rVVgag. Importantly, KUN replicon VLP vaccinations induced long-lasting immune responses with CD8(+) T cells able to secrete gamma interferon and to mediate protection 6 to 10 months after immunization. These results illustrate the potential value of the KUN replicon vectors for human immunodeficiency virus vaccine design.

Relationship between oviposition preference and offspring performance in Australian Helicoverpa armigera (Hubner) (Lepidoptera : Noctuidae)

We investigated the oviposition preference and larval performance of Helicoverpa armigera under laboratory conditions to determine if the oviposition preference of individual females on maize, cowpea and cotton correlates with offspring performance on the leaves of the same host plants. The host-plant preference hierarchy of females did not correlate with their offspring performance. Female moths chose host plants that contributed less to their offspring fitness. Plant effects accounted for the largest amount of variation in offspring performance, while the effects of female (family) was low. The offspring of most females (80%, n = 10) were broadly similar, but 20% (two out of 10), showed marked difference in their offspring performance across the host-plant species. Similarly, there was no relation between larval feeding preference and performance. However, like most laboratory experiments, our experi-mental design does not allow the evaluation of ecological factors (for example, natural enemies, host abundance, etc.) that can play an important role in larval performance in the field. Overall, the results highlight the importance of carrying out preference performance analysis on the individual or family level, rather than pooling individuals to obtain average population data.

Pathogenic specialisation within Colletotrichum trifolii in Australia, and lucerne cultivar reactions to all known Australian pathotypes

Anthracnose and crown rot, caused by Colletotrichum trifolii, are serious diseases of lucerne (Medicago saliva L.) in humid regions of the world. A race survey was conducted by inoculating individual lucerne clones (genotypes) with C. trifolii isolates collected from a range of Medicago hosts, locations, and years in south-eastern Queensland. This survey revealed for the first time in Australia the presence of race 2 (virulence on anthracnose resistance gene An I) and the first world report of race 4 (virulence on An(2)). A collection of North American race I and race 2 C. trifolii isolates, when inoculated onto the Australian differential clones, gave responses that were in agreement with their North American reactions. A RAPD analysis was conducted on 9 Australian C. trifolii isolates including races 1, 2, and 4; two C. destructivum and one C. gloeosporioides isolate were included as known outliers. For the C. trifolii isolates, 94.6% similarity was found regardless of host origin or race, compared with 2.2% similarity between this group and the C. gloeosporioides and C. destructivum isolates, confirming that the new races belong to C. trifolii. Currently, it is hypothesised that only plants carrying genes An, and An2 are resistant to the 3 races. Of 22 cultivars screened against the 3 races, only UQL-1, Hallmark, and Pioneer 54Q53 had >30% of plants resistant to the 3 races in separate screenings. The research highlights the need to find new sources of resistance to C. trifolii in lucerne.

The first strand transfer reaction of HIV-1 reverse transcription is more efficient in infected cells than in cell-free natural endogenous reverse transcription reactions

Background: In the presence of dNTPs, intact HIV-1 virions are capable of reverse transcribing at least part of their genome, a process known as natural endogenous reverse transcription (NERT). PCR analysis of virion DNA produced by NERT revealed that the first strand transfer reaction (1stST) was inefficient in intact virions, with minus strand (-) strong stop DNA (ssDNA) copy numbers up to 200 times higher than post-1stST products measured using primers in U3 and U5. This was in marked contrast to the efficiency of 1stST observed in single-round cell infection assays, in which (-) ssDNA and U3-U5 copy numbers were indistinguishable. Objectives: To investigate the reasons for the discrepancy in first strand transfer efficiency between intact cell-free virus and the infection process. Study design: Alterations of both NERT reactions and the conditions of cell infection were used to test whether uncoating and/or entry play a role in the discrepancy in first strand transfer efficiency. Results and Conclusions: The difference in 1stST efficiency could not be attributed simply to viral uncoating, since addition of very low concentrations of detergent to NERT reactions removed the viral envelope without disrupting the reverse transcription complex, and these conditions resulted in no improvement in 1stST efficiency. Virus pseudotyped with surface glycoproteins from either vesicular stomatitis virus or amphotrophic murine leukaemia virus also showed low levels of 1stST in low detergent NERT assays and equivalent levels of (-) ssDNA and 1stST in single-round infections of cells, demonstrating that the gp120-mediated infection process did not select for virions capable of carrying out 1stST. These data indicate that a post-entry event or factor may be involved in efficient HIV-1 reverse transcription in vivo. (C) 2002 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

Immunogenicity of recombinant HBsAg/HCV particles in mice pre-immunised with hepatitis B virus-specific vaccine

Due to their spatial structure virus-like particles (VLPs) generally induce effective immune responses. VLPs derived from the small envelope protein (HBsAg-S) of hepatitis B virus (HBV) comprise the HBV vaccine. Modified HBsAs-S VLPs, carrying the immunodominant hypervariable region (HVR1) of the hepatitis C virus (HCV) envelope protein E2 within the exposed 'a'-determinant region (HBsAg/HVR1-VLPs), elicited HVR1-specific antibodies in mice. A high percentage of the human population is positive for anti-HBsAg antibodies (anti-HBs), either through vaccination or natural infection. We, therefore, determined if pre-existing anti-HBs could influence immunisation with modified VLPs. Mice were immunised with a commercial HBV vaccine, monitored to ensure an anti-HBs response, then immunised with HBsAg/HVR1-VLPs. The resulting anti-HVR1 antibody titre was similar in mice with or without pre-existing anti-HBs. This suggests that HBsAg/HVR1-VLPs induce a primary immune response to HVR1 in anti-HBs positive mice and, hence, they may be used successfully in individuals already immunised with the HBV vaccine. (C) 2003 Elsevier Science Ltd. All rights reserved.

Genetics of melanoma predisposition

Predisposition to melanoma is genetically heterogeneous. Two high penetrance susceptibility genes, CDKN2A and CDK4, have so far been identified and mapping is ongoing to localize and identify others. With the advent of a catalogue of millions of potential DNA polymorphisms, attention is now also being focused on identification of genes that confer a more modest contribution to melanoma risk, such as those encoding proteins involved in pigmentation, DNA repair, cell growth and differentiation or detoxification of metabolites. One such pigmentation gene, MC1R, has not only been found to be a low penetrance melanoma gene but has also been shown to act as a genetic modifier of melanoma risk in individuals carrying CDKN2A mutations. Most recently, an environmental agent, ultraviolet radiation, has also been established as a modifier of melanoma risk in CDKN2A mutation carriers. Hence, melanoma is turning out to be an excellent paradigm for studying gene-gene and gene-environment interactions.

Biochemical characterization of two mutants of human pyruvate dehydrogenase, F205L and T231A of the E1 alpha subunit

Mutations in the E1alpha subunit of the pyruvate dehydrogenase multienzyme complex may result in congenital lactic acidosis, but little is known about the consequences of these mutations at the enzymatic level. Here we characterize two mutants (F205L and T231A) of human pyruvate dehydrogenase in vitro, using the enzyme expressed in Escherichia coli. Wild-type and mutant proteins were purified successfully and their kinetic parameters were measured. F205L shows impaired binding of the thiamin diphosphate cofactor, which may explain why patients carrying this mutation respond to high-dose vitamin B-1 therapy. T231A has very low activity and a greatly elevated K-m for pyruvate, and this combination of effects would be expected to result in severe lactic acidosis. The results lead to a better understanding of the consequences of these mutations on the functional and structural properties of the enzyme, which may lead to improved therapies for patients carrying these mutations.

Decreased coumarin 7-hydroxylase activities and CYP2A6 expression levels in humans caused by genetic polymorphism in CYP2A6 promoter region (CYP2A6*9)

One of seven poor metabolizers of coumarin found in Thai subjects was previously genotyped as heterozygote for the CYP2A6*4 (whole deletion) and CYP2A6*9. Thus, we aimed to investigate the relationship between the genetic polymorphism in the TATA box of the CYP2A6 gene (CYP2A6*9), expression levels of CYP2A6 mRNA and coumarin 7-hydroxylase activities in human livers. Levels of CYP2A6 mRNA were quantified by real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction. The mean expression levels of CYP2A6 mRNA in individuals with CYP2A6*1/*4, CYP2A6*1/*9 and CYP2A6*4/*9 were 58%, 71% and 21% of the individuals genotyped as CYP2A6*1/*1, respectively. The mean in-vitro coumarin 7-hydroxylase activities in subjects carrying CYP2A6*1/*4, CYP2A6*1/*9 and CYP2A6*4/*9 were 41%, 71% and 12%, respectively, compared to those of the subjects judged as wild-type. Vmax values for coumarin 7-hydroxylation in the liver microsomes from human subjects with genotypes of CYP2A6*1/*1, CYP2A6*1/*4, CYP2A6*1/*9 and CYP2A6*4/*9 were 0.58, 0.26, 0.44 and 0.13 nmol/min/nmol total P450, respectively. CYP2A6 protein levels in human liver microsomes with the CYP2A6*4 and the CYP2A6*9 alleles were markedly decreased. These results suggest that the genetic polymorphism in the promoter region of the CYP2A6 gene (CYP2A6*9) reduced the expression levels of CYP2A6 mRNA and protein in human livers, resulting in the decrease of coumarin 7-hydroxylase activities. Individuals judged as CYP2A6*4/*9 were expected to be poor metabolizers, having extremely low activity of CYP2A6.

Estratégias de enfrentamento do cotidiano conjugal

Este estudo analisa estratégias de enfrentamento para a manutenção do casamento, utilizadas por mulheres casadas há mais de 15 anos e pertencentes a estratos econômicos médio e alto, para superação ou minimização de conflitos do cotidiano conjugal. Foram entrevistadas 20 mulheres utilizando roteiro de entrevista semi-estruturada. As entrevistas, gravadas e transcritas, foram analisadas utilizando-se a análise do discurso. Neste artigo analisaram-se as estratégias de ação referida pelas entrevistadas. Entre as mulheres prevaleceu o uso de estratégias diretas (oito), indiretas (quatro mulheres) ou o uso combinado de estratégias diretas e indiretas (oito mulheres). Entre seus maridos, as entrevistadas indicaram o uso de estratégias diretas (treze homens) ou uso combinado de estratégias diretas e indiretas (duas). Em cinco casos enfatizou-se o uso de estratégia indireta, principalmente o silêncio ou o adiamento da busca de solução dos problemas. A estratégia caracterizou-se como uma esperança projectual dessas mulheres de atingirem a superação da condição distópica na direção utópica. A desistência desse jogo implica a adoção de estratégias que assegurem um padrão de comunicação paradoxal no qual os cônjuges ao mesmo tempo que comunicam, evitam comunicar.

Estratégias de cálculo mental de alunos da 5ª série/6º ano do ensino fundamental

Esta pesquisa de mestrado teve como principal objetivo investigar estratégias de cálculo mental, utilizadas por alunos de uma 5ª série/6º ano do ensino fundamental ao resolver cálculos de adição e subtração. Para atingir este objetivo procuramos responder aos questionamentos: Quais estratégias de cálculo mental, alunos da 5ª série/6º ano empregam na resolução de cálculos de adição e subtração? Que relações existem entre o tipo de cálculo envolvido e a estratégia adotada para resolvê-lo? Para respondermos a essas questões, seguimos uma metodologia de natureza qualitativa, configurada como estudo de caso do tipo etnográfico. O trabalho de campo foi desenvolvido em uma turma de 5ª série/6º ano do ensino fundamental de uma escola pública da rede estadual de ensino do município de Serra. A pesquisa aconteceu de maio a dezembro de 2013. Oito alunos resolveram uma atividade diagnóstica composta de quatro sequências de cálculos mentais, a saber, fatos fundamentais do número 5, do número 10, do número 20 e do número 100, dentre adições e subtrações próximas a esses resultados. Todos alunos participaram da etapa de entrevistas. Dos oito alunos, foram escolhidos dados de três que participaram de outras etapas da pesquisa. Os registros realizados pelos alunos na etapa de observação da turma, na etapa diagnóstica e na etapa de intervenção didática, as anotações no caderno de campo e algumas gravações em áudio serviram como fontes de coleta de dados. Utilizamos as estratégias identificadas por Beishuizen (1997), Klein e Beishuizen (1998), Thompson (1999, 2000) e Lucangeli et al. (2003), como categorias de análise. Através da análise de dados, constatamos que as escolhas das estratégias de cálculo mental pelos alunos variaram de acordo com o tipo de sequência de cálculos, a operação aritmética (adição ou subtração) e o estado emocional deles durante a atividade. Foi possível identificar o uso de duas estratégias combinadas, o algoritmo mental e estratégias de contagens nos dedos para grande parte dos cálculos. O uso do algoritmo mental mostrou-se um procedimento de grande sobrecarga mental e, em alguns cálculos de adição sem reserva, serviu apenas como apoio à visualização numérica, sendo executado pelo aluno da esquerda para a direita, semelhantemente à estratégia de decomposição numérica. Os dados deste estudo apontam para: (i) a necessidade de se trabalhar fatos numéricos fundamentais de adição e subtração via cálculo mental de maneira sistemática em sala de aula; (ii) a necessidade de se ensinar estratégias autênticas de cálculo mental para que os alunos não se tornem dependentes de estratégias como contagens e algoritmo mental, que são mais difíceis de serem executadas com êxito; (iii) a importância de entrevistar, individualmente, os alunos a fim de compreender e avaliar o desenvolvimento destes em tarefas de cálculo mental.

Avaliação da qualidade dos serviços prestados pela Biblioteca Central da UFES utilizando o método Servqual

O presente trabalho objetiva avaliar a qualidade dos serviços prestados pela Biblioteca Central (BC) da Universidade Federal do Espírito Santo (UFES) utilizando o método Servqual. Esta pesquisa é um estudo de caso de natureza quantitativa e qualitativa. A triangulação dos dados foi realizada por meio de uma survey com 363 usuários, entrevista com nove servidores que atuam na Biblioteca e consulta a documentos da universidade que descrevem as características básicas da Biblioteca Central. A survey foi aplicada utilizando-se questionário desenvolvido com base na escala Servqual em pré-teste realizado na Biblioteca Setorial Tecnológica (BST) da UFES. Foram utilizadas duas modalidades de coleta na survey aplicada na BC: presencial e online. Foram coletados 110 questionários presenciais e 253 online. As entrevistas com os servidores da BC foram baseadas nos 116 registros de reivindicações dos usuários, coletados pela BC anteriormente à pesquisa. Além desses documentos, consultaramse informações institucionais divulgadas no catálogo de serviços da BC e em páginas da BC e da UFES na internet. Identificaram-se quatro dimensões da qualidade dos serviços prestados pela BC, com médias negativas, indicando necessidade de melhoria nos serviços prestados. As ações prioritárias recomendadas para a BC são: a) melhorar instalações físicas e equipamentos; e b) capacitar e motivar os trabalhadores para atendimento aos usuários. Essas ações devem conduzir a soluções de problemas relacionados a condições de estudo (iluminação, climatização, água, banheiros, espaço físico, móveis e silêncio) e acesso a informação (internet, autoempréstimo, quantitativo de exemplares, limitação do empréstimo e alerta quanto à data de renovação).

Educação corporativa : uma análise sobre sua contribuição no desenvolvimento de competências no trabalho em uma empresa de mineração

O presente trabalho tem como objetivo descrever um Programa de Desenvolvimento oferecido pela Universidade Corporativa de empresa mineradora, com atuação em Vitória/ES, e compreender as possíveis relações deste Programa com o desenvolvimento das competências profissionais esperadas pela Organização. A Empresa Gama, que assim será identificada durante todo o trabalho, teve o início de sua Universidade Corporativa no ano de 2003, sob o propósito de transformar vidas desenvolvendo pessoas, e é vista pela Empresa Gama como fator importante para a geração de competitividade, para evolução nos negócios e aumento da sinergia organizacional. Dentre todos os Programas ofertados, opta-se pelo estudo do Programa “Trilha de Gestão e Liderança”, lançado em 2004, e voltado para a formação de gestores da Empresa Gama. Para a realização desta pesquisa qualitativa, foram entrevistados quatro Supervisores da Empresa Gama, que tiveram a oportunidade de participar da “Trilha de Gestão e Liderança”. Foram realizadas entrevistas semi-estruturadas e pesquisa documental para obtenção de dados. Opta-se pela Analise de Conteúdo como método de análise. Compreende-se que, para a Empresa Gama, o Programa “Trilha de Gestão e Liderança” é uma importante ferramenta para o desenvolvimento das competências esperadas pela organização. Contudo, não se trata da principal ferramenta, estando nítido que este desenvolvimento vai muito além dos Programas oferecidos por sua Universidade Corporativa.

A formação de educadores e a travessia de cercas invisíveis de acesso/produção de conhecimentos : experiências do MST nas inter-relações com universidades brasileiras /

Este estudo sistematiza e aborda a temática da formação de educadores desenvolvida nas inter-relações entre universidades brasileiras e o Movimento dos Trabalhadores Rurais Sem Terra, especificamente nos cursos de graduação em História na Universidade Federal da Paraíba e de Engenharia Agronômica na Universidade Federal de Sergipe, no período de 2004 a 2008. Tal processo desenvolve-se em um contexto difícil e complexo da luta pela reforma agrária no Brasil, principalmente pelas transformações ocorridas nos últimos anos oriundas da ampliação das lógicas de produção do agronegócio. Esta condição leva o MST a discutir e propor uma nova concepção de reforma agrária que a designa de popular em substituição à proposta de reforma agrária clássica. Por outro lado, apresenta uma visão das universidades brasileiras e dos projetos que são construídos e implementados nos últimos anos, inclusive, observando coincidências com as políticas econômicas gerais para a sociedade. Apresenta uma concepção de formação que vem sendo construída no interior das práticas do MST que também procura as universidades para firmar convênios e desenvolver processos de escolarização/formação de seus militantes educadores. Dentre as dimensões desse processo educativo/formativo, destacam-se: vínculo permanente com os processos orgânicos; a formação como um processo ético, estético, místico que trata das atitudes/comportamentos e como um processo dialógico, crítico e articulado que contempla saberes, experiências, em uma interação que busca superar as monoculturas. Captura por intermédio da pesquisa de campo: estranhamentos, entraves, sentidos da ocupação pedagógica e coletiva, alternativas, legados que permanecem tanto no MST como na universidade e apresenta o resultado do envolvimento e atuação dos egressos de ambos os cursos na atualidade. Aponta também para desafios, possibilidades outras de enfrentar a difícil mas necessária tarefa de formar educadores, militantes capazes de coletivamente levar adiante a luta por um mundo mais justo, solidário e democrático, em que a terra e o conhecimento, juntamente com os demais bens econômicos e culturais sejam profundamente democratizados. Pretende ser uma contribuição para o debate acerca da relevância dessas inter-relações entre universidade e movimentos sociais, em que essas experiências demarcam novas possibilidades de abertura e avanços democráticos e menos elitista da universidade e novos patamares de escolarização/formação para integrantes do Movimento dos Sem Terra.

Métodos de estimativa de descarga sólida em rios : análise comparativa

Transporte de sedimentos em bacias hidrográficas está relacionado com geomorfologia, ecologia fluvial, estabilidade das estruturas de engenharia e condições de navegação, dentre outros aspectos importantes para o planejamento e o controle de recursos hídricos. Existência de inúmeras variáveis envolvidas na mecânica de transporte de sedimentos e complexidade nas interações de processos físicos tornam difícil o estabelecimento de metodologias indiretas para estimativa de transporte de sedimentos em rios. Desta forma, não existe ainda metodologia universalmente aceita. O principal objetivo do presente trabalho é a análise comparativa de diferentes métodos empíricos disponíveis na literatura para estimativa de descargas sólidas em rios, considerando suas características específicas e resultados de aplicações às bacias dos rios Santa Joana e Santa Maria do Doce e microbacias Sossego e Santa Júlia, inseridas na porção da bacia do rio Doce localizada no Espírito Santo. Foram aplicados os métodos de estimativa indireta de descarga sólida: Einstein Modificado por Colby e Hembree (1955); Colby Simplificado (1957); Engelund & Hansen (1967); Ackers & White (1973); Yang (1973), Karim (1998) e Cheng (2002). Considerando as médias das estimativas de descarga sólida de material de leito (Qsml) relativas às campanhas realizadas em período chuvoso para a seção transversal do rio Doce, de maior porte, o método de Karim (1998), seguido pelo método de Ackers & White (1973), apresentou o maior valor, enquanto que o método de Yang (1973) apresentou o menor. Para os rios Santa Maria do Doce e Santa Joana e os córregos Santa Júlia e Sossego, verificou-se que o método de Ackers & White (1973), seguido de Karim (1998) e Yang (1973) apresentaram as maiores médias, enquanto que os métodos de Cheng (2002) e Engelund & Hansen (1967) apresentaram as menores. O método Simplificado de Colby apresentou as maiores estimativas de descargas sólidas totais (Qst) para todas as seções transversais de todos os cursos d'água monitorados. Concluiu-se que os diferentes métodos indiretos podem resultar em grandes diferenças em estimativas de transporte de sedimento em rios e que, desta forma, resultados de aplicação destes métodos devem ser considerados com muita cautela. Os resultados mostraram a grande importância de realização de campanhas de medição sedimentométricas para avaliação do transporte de sedimentos e definição dos melhores métodos indiretos de estimativa para cursos d'água específicos.

Towards a model for the measurement of data quality in websites

Websites are, nowadays, the face of institutions, but they are often neglected, especially when it comes to contents. In the present paper, we put forth an investigation work whose final goal is the development of a model for the measurement of data quality in institutional websites for health units. To that end, we have carried out a bibliographic review of the available approaches for the evaluation of website content quality, in order to identify the most recurrent dimensions and the attributes, and we are currently carrying out a Delphi Method process, presently in its second stage, with the purpose of reaching an adequate set of attributes for the measurement of content quality.