998 resultados para Célula TCD4
Resumo:
La diarrea neonatal representa uno de los problemas sanitarios de mayor relevancia en las primeras semanas de vida del cerdo. Provoca importantes prdidas econmicas por morbilidad y mortalidad. El cultivo de enterocitos primarios representa una herramienta valiosa para el estudio de patologas causadas por agentes infecciosos que afectan la integridad del epitelio intestinal. La produccin de anticuerpos extrados a partir de la yema de huevo de gallinas inmunizadas (IgY), es una tecnologa innovadora, que ha mostrado ser protectiva contra diarreas causadas por agentes vricos y bacterianos. La nanotecnologa permite mejorar la eficiencia en la administracin de distintas drogas. Los nanotubos de carbono han ganado una enorme popularidad por sus propiedades y aplicaciones nicas. La investigacin sobre los aspectos toxicolgicos de estas nanopartculas es escasa. Una vez dentro de la célula, las nanopartculas pueden inducir estrs oxidativo intracelular por perturbar el equilibrio oxidativo. Las hiptesis de trabajo es: La administracin de IgY anti-<i>Escherichia coli</i> a travs de nanotubos proteger <i>in vitro</i> e <i>in vivo</i> a los enterocitos de una infeccin por <i>E. coli<i> previniendo la diarrea neonatal porcina. Los objetivos del trabajo son: Evaluar la proteccin por un anticuerpo aviario IgY anti-<i>E. coli</i> aplicado mediante nanotubos de carbono a cultivo de enterocitos porcinos primarios sometidos a una post-infeccin con <i>E. coli</i>; Analizar los efectos secundarios de los nanotubos con IgY anti-<i>E coli</i> en la citotoxicidad, el balance oxidativo y la apoptosis de los enterocitos porcinos cultivados <i>in vitro</i> y Evaluar la accin terapetica de la IgY anti-<i>E coli</i> aplicada a porcinos y efectos secundarios de la administracin con nanotubos. Se implementar un diseo experimental <i>in vitro</i> con diferentes grupos de cultivos con nanotubos, con IgY anti-<i>E. coli</i> e inespecifica y con exposicin a <i>E. coli</i>. Se realizar cultivo de enterocitos porcinos primarios con una tcnica de disgregacin enzimtica con colagenasa segn protocolo de Bader et al. (2000). Se evaluar la viabilidad por la prueba de azul tripan. Para la obtencin del anticuerpo anti-<i>E. coli</i> aviario se aplicarn un total de 3 dosis de E. coli (109 UFC/ml de adyuvante) a gallinas Legorhn en condiciones fisiolgicas. Se recolectarn los huevos diariamente. Se purificar la IgY segn mtodo de Polson et al. (1985) utilizando PEG 6000. La concentracin de IgY se medir por ELISA de alta sensibilidad. La IgY ser incorporada a nanotubos segn protocolo de Acevedo et al. 2006. Para analizar los posibles efectos secundarios de los nanotubos se evaluar: 1. Citotoxicidad por tcnica de MTT 2. Estrs oxidativo por tcnica de TBARS y 3. Apoptosis por tcnica de TUNEL.Adems, se implementar un diseo experimental <i>in vivo</i> para probar la accin terapetica de este nutracetico aplicados a lechones destetados y los efectos secundarios de la administracin con nanotubos. Se realizar un cultivo de enterocitos de lechones que previamente fueron tratados con la IgY anti-<i>E. coli</i> administrada mediante nanotubos y efectuarn las tcnicas descriptas anteriormente. Los resultados esperados son: Elaboracin de un Ac aviario IgY anti-<i>E. coli</i> para prevenir infeccin de enterocitos, Profundizacin en el conocimiento acerca de los efectos citotxicos de los nanotubos de carbono multilamelares, Generacin de tratamiento alternativo para enfermedades entricas porcinas.
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A hipertrofia ventricular esquerda (HVE) ocorre em reposta sobrecarga hemodinmica relatada em vrias condies fisiolgicas e patolgicas. Entretanto, ainda no est completamente elucidado se o estmulo primrio para a hipertrofia o estiramento mecnico do corao, fatores neuro-humorais, ou mesmo a interao de ambos. Esses fatores so traduzidos no interior da célula como alteraes bioqumicas que levam ativao de segundos (citoslicos) e terceiros (nucleares) mensageiros que iro agir no ncleo da célula, regulando a transcrio, e finalmente determinaro a expresso gnica que induza HVE. A HVE caracterizada por alteraes estruturais decorrentes do aumento das dimenses dos cardiomicitos, da proliferao do tecido conjuntivo intersticial e da rarefao da microcirculao coronariana. Nos ltimos anos, o xido ntrico (NO) surgiu como um importante regulador do remodelamento cardaco, especificamente reconhecido como um mediador anti-hipertrfico. Vrios estudos tm demonstrado os alvos celulares, as vias de sinalizao anti-hipertrfica e o papel funcional do NO. Portanto, a HVE parece desenvolver-se em decorrncia da perda do balano entre as vias de sinalizao pr e anti-hipertrficas. Esses novos conhecimentos sobre as vias de sinalizao pr e anti-hipertrficas permitiro desenvolver novas estratgicas no tratamento das HVE patolgicas.
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El carcinoma colorrectal es una de las neoplasias ms comunes y es la segunda causa de muerte por cncer luego del cncer de pulmn. La principal causa de muerte de los individuos que padecen esta enfermedad es la metstasis heptica. La angiognesis est asociada con la progresin y metstasis de dicho cncer, afectando la supervivencia del paciente, y ocasionando la mayora de las muertes. El crecimiento de nuevos vasos sanguneos en relacin al crecimiento tumoral, es un proceso complejo. En 1971, Judat Folkman postul la hiptesis: el crecimiento tumoral es angiognesis dependiente y que la inhibicin de la angiognesis podra ser teraputica. La Terapia fotodinmica es una modalidad teraputica que utiliza compuestos fotosensibilizadores (FSs) que se acumulan en tejidos tumorales y una vez excitados por la luz actan mediante 3 mecanismos principales: muerte directa de la célula tumoral; dao de la vasculatura tumoral; y respuesta inmunolgica. La inhibicin del proceso angiognico presenta claras ventajas debido a la casi inexistencia, en individuos adultos, de neovascularizacin en condiciones fisiolgicas normales. El desarrollo de ambientes celulares de arquitectura tridimensional es clave para simular las condiciones que gobiernan en el microambiente tumoral ya que las interacciones célula - célula juegan un papel clave en eventos fisiolgicos tal como la angiognesis. Por lo tanto, postulamos que el impacto de la TFD sobre los componentes del ambiente tumoral permitir modular el proceso angiognico como estrategia antitumoral. Los objetivos planteados son: I) Investigar la susceptibilidad individual de las de células endoteliales y tumorales a la TFD en la expresin y alteracin de molculas relevantes en angiognesis. II) Examinar la respuesta de células endoteliales fotosensibilizadas al estmulo tumoral para comprender la regulacin del proceso angiognico 2D y 3D. III) Examinar la respuesta a la TFD vascular y TFD tumoral, determinando la eficacia de la doble teraputica en revertir el proceso de angiognesis 2D y 3D. IV) Investigar la capacidad estimulante de las células tumorales fotosensibilizadas de inducir angiognesis en modelos in vivo. Para cumplir con los objetivos se propone evaluar: a) La expresin de factores proangiognicos, molculas de adhesin, invasividad y migracin de células microendoteliales humanas y de adenocarcinoma de colon, comparando modelos de monocultivos 2D y 3D. b) La capacidad de las células tumorales, con diferente malignidad, de promover en las células endoteliales tratadas con TFD estmulos de: proliferacin, migracin, formacin de tubos y quimiotxis. c) La capacidad de la TFD en modular la respuesta parcrina que participa en la progresin tumoral. d) La implicancia en la respuesta a la TFD de factores de crecimiento y receptores celulares por siRNA o anticuerpos bloqueantes. e) La respuesta angiognica in vivo mediante el uso de implantes de matrigel con células tumorales o sobrenadantes tratados con TFD. Este trabajo aportar conocimientos sobre el dialogo tumor-endotelio y la susceptibilidad de ese estmulo a la TFD. Adems, se determinarn blancos teraputicos que incrementen su efectividad en relacin al proceso angiognico. Las interacciones entre las células tumorales y endoteliales son relevantes en la angiognesis tumoral. Por ello, nuevas y ms eficientes teraputicas involucran estrategias combinadas que se dirigen hacia las células tumorales y su entorno, el cual est compuesto por células endoteliales, perivasculares, y matriz extracelular. El abordaje de esta problemtica de manera integrada hace suponer encontrar una solucin ms especfica al tratamiento del cncer. Se espera, segn los resultados obtenidos, poder optimizar y/o modular la intervencin teraputica de la accin fotodinmica sobre blancos moleculares del proceso angiognico.
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El virus Encefalitis Saint Louis (VESL) (gnero Flavivirus) experimenta una re-emergencia en la regin central del pas, con la ocurrencia de un brote en Crdoba y el aislamiento de cepas de distintos genotipos. Est demostrado que los Flavivirus neurotrpicos, como VESL, replican en macrfagos y células dendrticas, tanto en el tejido local como en ndulos linfticos satlites, para luego llegar a torrente sanguneo y ser transportados a sistema nervioso central. Es as que el nivel de viremia inicial es regulado por la depuracin del virus que realizan los macrfagos. Estas células reconocen a los virus por medio de receptores de reconocimiento de patrones moleculares asociados a patgenos, que incluyen a los receptores Toll-like (TLR). La relacin entre los TLR y los virus, se fundamenta en tres aspectos: 1) los TLR al ser estimulados por molculas derivadas de virus activan vas de sealizacin que inducen la produccin de citoquinas pro-inflamatorias, como TNF- , IL-1, 6, 8 y 18, INF- y , que median la respuesta inmune antiviral; 2) las seales que dependen de los TLR median efectos inmunopatognicos, como la apoptosis y la patognesis del virus; 3) algunas estrategias teraputicas o profilcticas antivirales se basan en la estimulacin de los TLR mediante los respectivos agonistas. Como parte de la respuesta del macrfago a la infeccin viral, hay proliferacin, diferenciacin y muerte celular. A la hora de morir, estas células pueden seguir el camino que lleva a la necrosis o el de la apoptosis. Durante la activacin de la respuesta inmune frente a antgenos extraos, la apoptosis es requerida para eliminar las células efectoras, una vez que han ejecutado su funcin y as evitar el desarrollo de procesos deletreos para el husped. Estudios realizados con distintos Flavivirus documentan el incremento de apoptosis de macrfagos durante la progresin de la infeccin y tambin su relacin con la severidad de la patologa. De acuerdo a los antecedentes expuestos, se formulan las siguientes hiptesis de estudio: 1-El fenotipo de activacin del macrfago infectado con VESL est relacionado con el genotipo viral. 2-La clase de inmunomoduladores liberados y el grado de apoptosis de los macrfagos infectados con el VESL dependen del receptor de reconocimiento utilizado por el virus.El objetivo principal es caracterizar la respuesta inmune inducida en macrfagos infectados in vitro con diferentes genotipos de VESL. Para ello se plantean los siguientes objetivos especficos: 1-Determinar la capacidad de replicacin de VESL en macrfagos.2-Evaluar la expresin de molcula de superficie, receptores y la produccin de inmunomoduladores en macrfagos infectados con VESL.3-Analizar el impacto de la infeccin con VESL sobre la apoptosis de macrfagos.4-Correlacionar la expresin de antgenos de superficie, receptores, produccin de inmunomoduladores, apoptosis y carga viral con el genotipo viral que infecta al macrfago.Se utilizar una lnea lnea celular mieloide U937 y cepas del VESL genotipo III, V y VII. Se estudiar la infeccin de las mismas y determinar la expresin de: CD14, CD16, CD54/ICAM-1, HLA-DR, Fas, R-TNF, CD86, IL4R, TLR2, TLR3, TLR4 y TLR7 por Citometra de Flujo. En el sobrenadante de los cultivos infectados se cuantificarn las concentraciones de IFN-, IFN-, TNF-, IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-18 y TGF- por tcnica de ELISA.Se determinar la apoptosis en los macrfagos infectados mediante marcacin con Anexina V-Ficoeritrina y anlisis de fragmentacin del ADN.La emergencia de esta virosis en nuestro medio amerita abordar distintos aspectos de la respuesta inmune en esta infeccin. El conocimiento de las caractersticas de la activacin del macrfago cuando se infecta con VESL, los inmunomoduladores liberados y el impacto de la infeccin sobre la apoptosis de sta célula, aportara posibles blancos para el diseo futuro de estrategias teraputicas o profilcticas contra esta infeccin.
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FUNDAMENTO: Pacientes com sndrome metablica (SM) tm alto risco coronariano e a disfuno da célula beta ou resistncia insulina pode prever um risco adicional de eventos cardiovasculares precoces. OBJETIVO: Avaliar as alteraes glicometablicas precoces em pacientes com SM, mas sem diagnstico de diabete tipo 2, aps sndrome coronariana aguda. MTODOS: Um total de 114 pacientes foi submetido ao teste oral de tolerncia glicose (TOTG), 1-3 dias da alta hospitalar, aps infarto agudo do miocrdio ou angina instvel. Baseado no TOTG, definimos trs grupos de pacientes: tolerncia normal glicose (TNG; n=26), tolerncia alterada glicose (TAG; n=39) ou diabetes mellitus (DM; n=49). O Modelo de Avaliao da Homeostase (HOMA-IR) foi usado para estimar a resistncia insulina; a responsividade da célula beta foi avaliada atravs do ndice insulinognico de 30 minutos (ΔI30/ΔG30). RESULTADOS: Baseado no HOMA-IR, os pacientes com DM eram mais insulino-resistentes do que aqueles com TNG ou TAG (p<0,001). De acordo com o ndice insulinognico, a responsividade da célula beta tambm estava alterada em indivduos com DM (p<0,001 vs TNG ou TAG). CONCLUSO: Altas taxas de alteraes glicometablicas foram encontradas aps sndrome coronariana aguda em pacientes com SM. Como essas anormalidades acentuadamente aumentam o risco de desfechos adversos, o TOTG precoce pode ser utilizado em pacientes com SM para identificar aqueles que apresentam maior risco coronariano.
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La enfermedad de Chagas, causada por Trypanosoma cruzi, constituye la principal miocarditis infecciosa a nivel mundial. Crecientes evidencias revelan que la respuesta inmune innata tendra un rol determinante en la fisiopatologa de las enfermedades cardiovasculares. La inmunidad innata es la primera lnea de defensa, no especfica, preprogramada para combatir agentes infecciosos. Este sistema censa la presencia de antgenos extraos a travs de los receptores tipo toll (TLR) produciendo citoquinas y activando mecanismos microbicidas. Sin embargo, los TLRs tambin se hayan distribuidos en las células parenquimales no inmunes, jugando un importante rol tanto en la defensa como en la homeostasis de cada tejido. Durante la etapa aguda de la infeccin, el T. cruzi invade y se replica dentro de una amplia variedad de células y tejidos. Pero posteriormente, los parsitos son efectivamente eliminados de la mayora de los tejidos persistiendo durante toda la vida en las células del msculo cardaco y esqueltico de los pacientes infectados. Debido a que el mantenimiento de la célula cardaca infectada es crtica para la patognesis de la enfermedad, los mecanismos que participan en la sobrevida de los cardiomiocitos estn siendo foco de nuestro estudio. Hemos demostrado, que la infeccin ejerce efectos antiapoptticos sobre células cardacas aisladas. Nuestra hiptesis es que la inmunidad innata cardaca estara involucrada en el mantenimiento de la sobrevida de los miocitos as como en la defensa contra el parsito. Objetivo general: determinar la participacin de la respuesta inmune innata cardaca en el desarrollo de la enfermedad de Chagas experimental murina. Objetivos especficos: 1) Analizar el compromiso de TLRs en la respuesta anti-apopttica y de autofagia de cardiomiocitos aislados de ratones salvajes y de ratones deficientes en TLR4, TLR2 y en MyD88, molcula adaptadora de la sealizacin por TLRs, sometidos a la infeccin con el parsito. 2) Determinar la importancia de la actividad cisten proteasa parasitaria en el grado de infectividad y la sobrevida de cultivos primarios de ratones salvajes infectados con parsitos transgnicos que poseen disminuda o nula actividad cisten proteasa. 3) Establecer la cintica de expresin de TLR2/TLR6, TLR4 y TLR9, factores antiapoptticos (Bcl-2, Bcl-xL, etc.), dao cardaco y la carga parasitaria en el tejido cardaco de ratones infectados salvajes y/o deficientes antes mencionados. Materiales y Mtodos: Los animales sern infectados i.p. con 5x103 parsitos y se determinar la cintica de expresin de los mediadores mencionados por western blot e inmunofluorescencia, la carga parasitaria ser determinada por qRT-PCR. Como controles se procesarn animales inyectados con solucin salina. En cultivos primarios de cardiomiocitos de ratones neonatos salvajes y deficientes infectados se estudiar la carga parasitaria, la activacin de los mecanismos microbicidas (produccin de xido ntrico, metabolitos reactivos del oxgeno y del nitrgeno, ciclooxigenasa, etc.), produccin de citoquinas y expresin de molculas anti-apoptticas (Bcl-2, Bcl-xL, Bax, etc.). Se explorar la tasa de apoptosis en cultivos deprivados de suero. La autofagia se analizar por microscopia electrnica. Cultivos controles sern mantenidos en medio o tratados con ligandos de los diferentes TLRs. Resultados preliminares sugieren que tanto TLR2 como Bcl-2 se incrementan en tejido cardaco infectado. Esto nos lleva a profundizar en los mecanismos observados en cultivos y estudiarlos en un modelo in vivo, analizando la posible importancia que tiene la inmunidad innata cardaca en el control del establecimiento de la infeccin. La comprensin de los mecanismos que mantienen la sobrevida de los cardiomiocitos y su respuesta a la infeccin es importante ya que el conocimiento de las bases moleculares es fundamental para el desarrollo de nuevos agentes quimioteraputicos. Chagas disease is endemic in Central and South America and causes the most common myocarditis worldwide. We have previously reported that the cardiotrophic parasite Trypanosoma cruzi, its etiological agent, protects cardiomyocytes against apoptosis induced by growth factor deprivation activating the PI3K/Akt and MEK1/ERK signaling pathways. Recent studies have shown that local innate immunity plays a key role in initiating and coordinating homeostatic as well as defense responses in the heart. One of the mechanisms by which the innate immune system senses the presence of foreign antigens is through TLRs. The stimulation of these receptors leads to the activation and nuclear translocation of NF-kB transcription factor and the production of cytokines. Proinflammatory cytokines, in turn, appear to play a central role in the orchestration and timing of the intrinsic cardiac stress response providing, under different situations, instantaneous anti-apoptotic cytoprotective signals, which allow tissue repair and/or remodeling. The aim of the present project is to study the cardiomyocyte innate immune responses to T. cruzi infection and its role in target cell protection from apoptosis. Specific objectives: 1) Study the mechanism triggered by TLR in the anti-apoptotic response and parasite load of infected cardiomyocyte primary cultures from wild type and mice deficient in TLR2, TLR4 or MyD88. 2) Determine the effect of parasite cisten protease activity on primary cultures from wild type mice. 3) Determine the TLR signaling-involvement in parasite load and survival indicators in deficient mice. Preliminary results showed us that cardiac-TLR2 may be involved in the anti-apoptotic effect elicited by the parasite and prompted us to establish the mechanisms triggered by the innate immunity that mediate parasite persistence within the host cell.
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IDENTIFICACIN ZEB1 (Zinc Finger E-box Binding Homeobox) es un factor de transcripcin funcionalmente asociado con la diferenciacin de células como miocitos, neuronas, células de sostn y linfocitos T, adems de estar involucrado en la Transicin Epitelial-Mesenquimatosa (EMT) de los tumores slidos epiteliales. An no se ha revelado en profundidad la participacin de ZEB1 en los procesos de proliferacin y diferenciacin en los que participa. Estamos interesados en los mecanismos de regulacin de ZEB1 y los factores que intervienen en los procesos de diferenciacin y transformacin celular. HIPTESIS 1. Las vas de sealamiento regulan el estado de fosforilacin y la funcin de ZEB1 en la célula normal, el cual se desregulara en la célula neoplsica llevando a cambios en la funcin normal de ZEB1 y consecuentemente a metstasis. 2. IGF-1 es la seal que, en asociacin con el supresor de tumores CCN6, juega un rol causal en la regulacin de ZEB1 y esto a su vez en la metstasis del cncer de mama. OBJETIVO GENERAL: establecer el rol funcional de ZEB1, su interrelacin con otros factores y su regulacin en los procesos de diferenciacin y transformacin celular. OBJETIVOS ESPECIFICOS (incluye Materiales y Mtodos) 1. Estudiar la participacin de vas de sealizacin sobre la funcin biolgica de ZEB1 en células normales y neoplsicas. Analizaremos la participacin de seales intracelulares en la fosforilacin de ZEB1 por experimentos de ganancia/prdida de funcin de la va (por uso de inhibidores farmacologicos, mutantes silenciadoras y siRNAs), lo cual sera evaluado en EMSAs, ChIP, transfecciones, inmunofluoresc, etc. 2. Estudiar el rol de IGF-1 y CCN6 sobre la expresin y el estado de fosforilacin de ZEB1 en tumores mamarios benignos, no invasivos e invasivos y metastatizantes. A) Se estudiar la expresin y localizacin subcelular de ZEB1 en lneas celulares de cncer mamario y en xenotransplantes de ratn con variada expresin de CCN6. B) Investigar la relevancia de la fosforilacin de ZEB1 mediada por IGF-1 en el EMT por experimentos con ganancia/prdida de funcin. RESULTADOS ESPERADOS Esperamos poder delinear la/s va/s de sealizacin intracelular que fosforilan ZEB1 y as conocer sobre la regulacin del mismo. Podremos establecer algunas bases para entender la biologa bsica del cncer de mama e identificar blancos teraputicos. IMPORTANCIA Un amplio conocimiento de los factores de transcripcin y sus vas de sealamiento es necesario para el desarrollo tanto de pruebas diagnsticas como para la identificacin de nuevos blancos teraputicos para neoplasias. De modo que resulta de gran importancia clnica determinar el rol de ZEB1, sus protenas y vas reguladoras en el proceso de oncognesis. El desarrollo del proyecto prev la formacin de dos tesistas. Se continuaran colaboraciones con dos grupos extranjeros y se iniciara una tercera. ZEB1 (Zinc Finger E-box Binding Homeobox) is a transcription factor involved in cell differentiation and Epithelial Mesenchymal Transition (EMT) of epithelial tumors. We are interested in the study of mechanisms of regulation (pre and post transcriptional). S.A.1. To investigate post translational mechanisms of ZEB1 regulation in normal and cancer cells. We will analyze the involvement of intracellular signals in phosphorylation of ZEB1 by gain- and lost-of-function experiments. S.A.2. A) To determine the role of IGF-1 signaling and CCN6 in regulating the expression of hypo- and hyperphosphorylated forms of ZEB1 in benign and malignant breast cell lines and in xenograft mouse models by overexpressing and inhibiting CCN6 in breast cancer cells. B) To investigate the relevance of CCN6-mediated ZEB1 phosphorylation to EMT, breast cancer invasion and metastasis. The role of CCN6 on ZEB1 phosphorylation and regulation of E-cadherin, induction of EMT, invasion and metastasis of breast cells will be investigated using gain- and loss-of-function experiments.
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Trypanosoma cruzi es el agente causal de la enfermedad de Chagas, un problema de salud importante en Amrica Latina, as como tambin en Amrica Central, ya que causa infeccin crnica afectando a millones de personas [1]. Durante esta enfermedad se han descripto varias alteraciones de la respuesta inmune, entre ellas una severa inmunosupresin durante la etapa aguda de la infeccin, tanto en humanos como en ratones. Células T provenientes de ratones infectados activadas in vitro, muestran reduccin en la respuesta proliferativa a mitgenos, caracterstica de un estado de inmunosupresin [2-4]. La falla del sistema inmune durante estadios tempranos de la infeccin probablemente colabore con la diseminacin y el establecimiento del parsito. Un gran nmero de estudios se han focalizado en la identificacin de mecanismos moleculares responsables del fenmeno de inmunosupresin, entre los mecanismos citados se ha demostrado presencia de células supresoras [5-9], factores inmunosupresores presentes en el parsito [2, 3, 10-13], produccin excesiva de xido ntrico [14], disminuida produccin de IL-2 y reducida expresin del receptor de IL2 en células de bazo de animales infectados [9, 15-17]. Muchos de estos mecanismos han sido exhaustivamente investigados, sin embargo no est del todo claro si existen mecanismos adicionales involucrados en la inmunosupresin de la célula T. Adicionalmente, en los ltimos aos nuevas molculas que median la regulacin negativa de la célula T, entre las cuales estn PD-1/PD1-L [18], arginasa [19] y E3 ubiquitina ligasas [20-22], han sido reportadas durante inmunosupresin en diversas infecciones. Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease, is parasite causing chronic infections in human and other mammalian species. There is an important immunosupresion during the acute phase of the infection that contribute to the dissemination and installation of the parasite. Several studies have been focused on identifying the mechanisms involved in the immunosupresion; however it is not clear if there are additional mechanisms implicated. In addition, during the last years new molecules involved in the negative T cell regulation such as PD-1/PD1-L pathway and E3 ubiquitin ligases (E3-Ub-Lig) have been reported. It has been demonstrated, that E3-Ub-Lig control the amount and localization of intracellular signal mediators, limiting T cell activation. Moreover, these mechanisms mediate the immunosupresion observed during several infections leading to the persistence of the pathogen in the host. In this project the role of E3-Ub-Lig on the T cell immunosupresion and hipo-response mechanisms observed during T. cruzi infection will be studied. On the other hand, it has been reported that some pathogens release proteins with E3-Ub-Lig activity modifying the ubiquitination process to promote their survival and replication in the host. Recently, a protein with E3-Ub-Lig activity was identified in T. cruzi, however its target molecule has not been discovered yet. Therefore, one of the aims of this project consists on studying different potential target molecules for this novel E3-Ub-Lig. In addition, during the last years, important progress has been done about the biological rol of PD-1/PD1-L pathway on the regulation of the immune response in several infections. However, it is not well known how PD-1/PD1-L pathway transduces signals at intracelular level to block T cell response. Because of this, it is interesting to study if there is any relation between the PD-1/PD1-L pathway and E3-Ub-Lig on the mechanism of T cell immunosupression during T. cruzi infection.
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Las didcticas especficas de las ciencias naturales revelan diferentes problemticas en su enseanza y aprendizaje en los diferentes niveles del sistema educativo. En particular, en las clases de ciencias la interaccin discursiva docente alumnos adquiere relevancia, ya que el proceso de comunicacin del conocimiento es uno de los pilares didcticos, junto a la trasposicin del mismo. Especificamente, en este proyecto nos abocamos a aquellas intervenciones de docentes y alumnos que se relacionan con la construccin del conocimiento biolgico y qumico. El proyecto se enmarca en una actual linea de trabajo que indaga sobre las dificultades en los abordajes del conocimiento cientfico en las aulas, las caractersticas del discurso entre docentes y alumnos, las habilidades y dificultades en la comprensin de los enunciados de problemas y las caractersticas de los textos que se utilizan en las clases. Se focaliza este estudio en casos que intentan dar respuesta a tres temticas, agrupadas en un conjunto de situaciones de investigacin relacionadas con la interaccin discursiva docente-alumno, retomando el rol del docente al hablar, guiar o disear las situaciones de referencia para el aprendizaje de los alumnos. Los casos son: 1- En cuanto a las concepciones sobre diversidad biolgica en estudiantes de escuela secundaria y en textos acadmicos, atendemos a cmo la escuela presenta los contenidos ecolgicos como un conjunto de dogmas y conceptos estticos. Adems suelen simplificarse conceptualmente y presentarse poco actualizados. Es por ello que se planea estudiar las concepciones y actitudes de los alumnos de secundaria sobre la biodiversidad, cmo estas dificultan su comprensin y los textos usados en relacin a la promocin de la transposicin didctica. 2- En relacin a cmo se elabora el patrn temtico del tema célula en clases de Biologa, se analizarn las diferentes estrategias de significados y de desarrollo temtico, que se emplean en la comunicacin aulica. Se intentar establecer si hay cambios en el desarrollo temtico a medida que se avanza en la escolaridad. Esto es porque se puede apreciar que muchos de los problemas de aprendizaje del alumnado se deben a un desconocimiento tanto del patrn temtico como del patrn estructural de la ciencia, siendo preciso evocar los patrones temticos que se quieren utilizar, para construir un conocimiento compartido. 3-Finalmente, en los enunciados de problemas de Qumica, se analizarn las dificultades de comprensin lectora de alumnos de Ingeniera. Los docentes frecuentemente atribuyen los problemas a deficiencias en la instruccin recibida, sin considerarse los conocimientos previos del alumno, los obstculos conceptuales originados en el tema, las deficiencias en la habilidad lectora, el tipo textual predominante en la consigna, el formato en el que se escribi la consigna y los factores personales, etc., siendo que la comprensin del enunciado de una consigna de trabajo condiciona fuertemente la posibilidad de su resolucin. Los tres casos utilizarn metodologas cualitaritas que incluyan anlisis de contenido en discursos orales y escritos. Los datos se registrarn desde observacin no participante, registro etnogrfico y con grabaciones de audio. Se espera contribuir al conocimiento, realizando aportes a la formacin docente en tanto las estrategias discursivas que se emplean en el aula, en forma oral y en la escrita, conocer concepciones que dificultan o favoren la construccin del conocimiento cientfico, entre otras. Los productos de estos estudios estarn integrados por nuevos desarrollos para la formacin docente, publicaciones cientficas de impacto nacional e internacional, presentaciones a congresos, materiales didcticos y divulgativos, dictado de seminarios y/o cursos, redaccin de informes a las escuelas intervinientes.. The specific Natural Sciences didactics show different problems in teaching and learning along the school system. In particular, the discourse used to communicate knowledge in Science lessons becomes important. With this project we will focus on the teachers and students actions regarding the construction of biological and chemical knowledge. This project attempts to answer these issues and brings together a range of research situations related to teacher-student interaction, through discourse, taking up the role of the teacher to speak, to plan and to guide student learning. We will study the ideas and attitudes of high school students about biodiversity that make difficult its understanding and the textbooks used in relation to promotion of the didactic transposition. In addition, regarding how the thematic pattern in biology classes is costructed, it will be analyzed the different meaning and thematic development strategies that are used in communication. We will attempt to establish whether there are any changes in the thematic development throughout high school education. Finally, we will analyze the reading comprehension problems in engineering students. Teachers frequently attribute these issues to deficiencies in prior education, without considering the students background, the conceptual obstacles arising in the field, the format in which the prompt is written, personal factors, etc., keeping in mind that the outcome of an activity is strictly dependant con the prompt understanding. We expect to make contributions to the teacher education in both the discourse strategies used in the classroom, orally and in writing, to learn about the conceptions that hinder or favor the knowledge construction, among others. The products of this study will be national and international impact scientific publications, conference presentations, popular science publications, seminars courses and reports to the schools involeved.
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Los Desrdenes Congnitos de la Glicosilacin (CDG), son un grupo creciente de enfermedades metablicas hereditarias de herencia autosmica recesiva, salvo dos clases de CDG autosmicas dominantes, causadas por defectos en la sntesis o la remodelacin de N-u O-glicanos, de glicoesfingolpidos o en anclajes de glycosylphosphatidylinositol. La formacin de la porcin glicano, se produce a travs de etapas secuenciales y comienza la ruta biosintetica en citoplasma, pasando por retculo endoplasmtico y posterior modificacin del glicoconjugado en el aparato de Golgi. Los glicanos constituyen compuestos formados por diversos residuos de carbohidratos y han sido seleccionados en la evolucin para transmitirle a las macromolculas a las cuales se encuentran unidos, propiedades estructurales y funcionales, razn por la cual la sntesis correcta de los mismos y de sus glicoconjugados son esenciales para el funcionamiento normal. La caracterizacin molecular y clnica de ms de 70 clases diferentes de CDG ha contribuido enormemente a comprender las funciones fisiolgicas de los mecanismos de glicosilacin y la importancia de los glicoconjugados en la célula. Mutaciones en genes de esta va metablica, ocasionan fenotipos multisistmicos con afectacin neurolgica severa y muerte temprana. Incluso algunos CDG tienen probabilidad de malignizacin por ej. osteocondromatosis mltiple (EXT1/EXT2-CDG). Respecto a las estrategias para el diagnstico de CDG, debido a la gran heterogeneidad fenotpica de estos pacientes, hemos debido implementar el diagnstico de los trastornos genticos de N-glicosilacin, basado en los cambios bioqumicos y estructurales que se expresan en las glicoprotenas anmalas, demostrados por diferentes metodologas. Existen tcnicas de gran sensibilidad utilizadas para la bsqueda de pacientes CDG como electroforesis capilar, ionizacin por electrospray-espectrometra de masa y cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), sin embargo, el isoelectroenfocado (IEF) es la metodologa mayormente utilizada para su diagnstico.
Anlisis de componentes de la inmunidad innata en infecciones virales: implicancias en la patognesis.
Resumo:
El estudio de células del sistema inmune innato en infecciones virales se ha centrado principalmente en las células dendrticas y las células NK. Los objetivos de este proyecto de investigacin son evaluar el nivel de apoptosis de neutrfilos y las vas de activacin de muerte celular en la infeccin por Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) y caracterizar la respuesta inmune inducida en monocitos/macrfagos infectados in vitro con el Encefalitis San Luis virus (ESLV). En individuos con infeccin por VIH se evaluar la apoptosis (anexina y citomorfologa), la expresin de molculas de adhesin y de receptor Toll-like (TLR) en neutrfilos. Adems, se determinar la concentracin srica de citocinas pro-inflamatorias y anti-inflamatorias y de molculas pro-apoptticas y anti-apoptticas. La infeccin por ESLV ser realizada en una lnea celular mieloide en la que se detectaran los antgenos virales a distintos das post-infeccin viral (inmunofluorescencia y citometra de flujo). Adems, se determinar la expresin de antgenos de superficie y TLR. En sobrenadantes de cultivos de monocitos infectados con diferentes genotipos de ESLV a distintos das post-infeccin sern cuantificada la concentracin de citocinas y determinada la apoptosis de monocito/macrfagos infectados (anexina y citomorfologa). Este proyecto posibilitar una mayor comprensin de la regulacin de la apoptosis en la infeccin por VIH, conocimiento que podr ser de utilidad para avanzar en investigaciones futuras para el entendimiento de los mecanismos y la regulacin de la apoptosis de componentes del sistema inmune innato. En la infeccin por ESLV el conocimiento de las caractersticas de la activacin del macrfago cuando es infectado por este virus, los inmunomoduladores liberados y el impacto de la infeccin sobre la apoptosis de sta célula podran orientar hacia posibles blancos para el diseo futuro de estrategias teraputicas o profilcticas contra esta infeccin.
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FUNDAMENTO: O pr-condicionamento isqumico um mtodo que prepara e protege a célula para suportar um perodo de isquemia prolongada com menor dano celular possvel. OBJETIVO: Avaliar a influncia do pr-condicionamento isqumico na contratilidade ventricular esquerda durante a cirurgia de revascularizao do miocrdio sem circulao extracorprea. MTODO: Quarenta pacientes com indicao para revascularizao do miocrdio foram randomizados em dois grupos, com e sem pr-condicionamento isqumico. O pr-condicionamento isqumico foi obtido realizando a ocluso coronria por dois minutos e liberao do fluxo sanguneo por um minuto, sendo realizados dois ciclos. A contratilidade ventricular esquerda foi avaliada por meio de Doppler pulsado da aorta torcica descendente (Hemosonic 100). As medidas da acelerao do fluxo sanguneo na aorta foram obtidas antes do incio do procedimento, aps o posicionamento do corao e com cinco e dez minutos de ocluso coronria. RESULTADOS: No incio do procedimento, a acelerao do fluxo foi de 9,37 2,9m/s no grupo com pr-condicionamento, e de 12,5 3,1 m/s no grupo sem pr-condicionamento (p = 0,23). Aps o posicionamento do corao foi de 8,47 3,3 e 8,31 3,6 m/s (p=0,96); com cinco minutos foi de 8,7 4,1 e 7,94 2,9 m/s (p = 0,80); e com dez minutos foi de 9,2 4,5 e 7,98 3,4 m/s (p=0,71), respectivamente. No entanto, o comportamento da contratilidade ventricular foi diferente ao longo do tempo. No grupo pr-condicionado houve manuteno da contratilidade ventricular em relao ao incio do procedimento (p = 0,52), enquanto que no grupo sem pr-condicionamento houve reduo da contratilidade ventricular (p = 0,0034). CONCLUSES: O Pr-condicionamento isqumico evitou a reduo da contratilidade ventricular esquerda durante a realizao da revascularizao do miocrdio sem circulao extracorprea.
Resumo:
A correta classificao do diabete melito (DM) permite o tratamento mais adequado e compreende quatro categorias: DM tipo 1; DM tipo 2; Outros tipos e Diabete Gestacional. Em alguns casos, pode ocorrer sobreposio de quadros, principalmente no DM que inicia no adulto jovem ou que se apresenta inicialmente com cetoacidose, intermedirios ao DM 1 e DM 2. Assim, acrscimos ao sistema de classificao clssico tm sido propostos, avaliando a presena de autoimunidade (anticorpos) e a funo de célula β (peptdeo-C) para definir mais precisamente os subtipos. O objetivo desta reviso foi de analisar o desempenho desses ndices diagnsticos para a classificao do DM e descrever os subtipos em detalhe. Os anticorpos contra o pncreas evidenciam a autoimunidade, sendo o anticorpo contra insulina o mais acurado antes dos 5 anos de idade e o anti-descarboxilase do cido glutmico para incio da doena acima dos 20 anos, esse o teste que permanece positivo por mais tempo. J a medida do peptdeo-C avalia a reserva pancretica de insulina, e os mtodos de estmulo mais usados so a medida aps refeio ou aps glucagon endovenoso. Valores de peptdeo-C < 1,5 ng/ml definem o paciente com funo pancretica ausente, e acima desse valor, com funo preservada. Combinando-se a presena de anticorpos (A+) dirigidos ao pncreas e a sua capacidade secretria de insulina (β+), pode-se subdividir a classificao do DM em tipo 1A (A+β-) e 1B (A+ β-); e o DM tipo 2 em subgrupos de DM 2A (A+β+) e DM 2B (A-β+), o que permite uma classificao e tratamento mais precisos, alm de abrir os horizontes para o entendimento da patognese do DM.
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FUNDAMENTO: O tramadol um analgsico de ao central cujo mecanismo de ao envolve a ativao de um receptor opioide. Anteriormente, mostramos que o tramadol e seus enantimeros apresentavam um efeito inotrpico negativo sobre o msculo papilar no qual o (+)-enantimero era mais potente que (-)- e ()-tramadol. OBJETIVO: No presente trabalho, investigamos os efeitos do tramadol e seus enantimeros na corrente de clcio tipo L (I Ca-L). MTODOS: Os experimentos foram realizados em micitos ventriculares isolados de ratos Wistar utilizando a tcnica de patch-clamp com configurao de célula inteira. RESULTADOS: O tramadol (200 M) reduziu a amplitude de pico do I Ca-L em potenciais de 0 a +50 mV. Em 0 mV, a I Ca-L foi reduzida em 33,7 7,2%. (+)- e (-)-tramadol (200 M) produziram uma inibio semelhante da I Ca-L, na qual a amplitude do pico foi reduzida em 64,4 2,8% e 68,9 5,8%, respectivamente a 0 mV (P > 0,05). O tramadol, (+)- e (-)-tramadol mudaram a inativao de estado estacionrio de I Ca-L para potenciais de membrana mais negativos. Alm disso, tramadol e (+)-tramadol alteraram significativamente a curva de recuperao dependente de tempo da I Ca-L para a direita e reduziram a recuperao de I Ca-L da inativao. A constante de tempo foi aumentada de 175,6 18,6 a 305,0 32,9 ms (P < 0,01) para o tramadol e de 248,1 28,1 ms para 359,0 23,8 ms (P < 0,05) para o (+)-tramadol. O agonista do receptor -opioide (DAMGO) no tem nenhum efeito na I Ca-L. CONCLUSO: A inibio da I Ca-L induzida por tramadol e seus enantimeros no teve relao com a ativao de receptores opioides e poderia explicar, pelo menos em parte, seu efeito inotrpico negativo cardaco.
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FUNDAMENTO: A injeo de células-tronco no contexto do infarto agudo do miocrdio (IAM) tem sido testada quase exclusivamente pela via antergrada intra-arterial coronariana (IAC). A via retrgrada intravenosa coronariana (IVC) pode ser uma via adicional. OBJETIVO: Comparar o padro de distribuio e reteno celular nas vias antergrada e retrgrada. Investigar o papel da obstruo microvascular pela ressonncia magntica na reteno de células pelo tecido cardaco aps a injeo de células mononucleares da medula ssea (CMMO) no IAM. MTODOS: Estudo prospectivo, aberto, randomizado. Foram includos pacientes com IAM que apresentassem: (1) reperfuso mecnica ou qumica com sucesso em at 24 horas do incio dos sintomas e (2) infarto acometendo mais de 10% da rea do ventrculo esquerdo (VE) pela cintilografia miocrdica. Cem milhes de CMMO foram injetadas na artria relacionada ao infarto pela via IAC ou veia, pela via IVC. Um por cento das células injetadas foi marcado com Tc99m-hexametil-propileno-amina-oxima(99mTc-HMPAO). A distribuio das células foi avaliada 4 e 24 horas aps a injeo da cintilografia miocrdica. Ressonncia magntica cardaca foi realizada antes da injeo de células. RESULTADOS: Trinta pacientes foram distribudos aleatoriamente em trs grupos. No houve eventos adversos graves relacionados ao procedimento. A reteno precoce e tardia das células marcadas foi maior no grupo IAC do que no grupo IVC, independentemente da presena de obstruo da microcirculao. CONCLUSO: A injeo pela abordagem retrgrada mostrou-se vivel e segura. A reteno de células pelo tecido cardaco foi maior pela via antergrada. Mais estudos so necessrios para confirmar esses achados.
