Early changes in apoplast composition associated with defence and disease in interactions between Phaseolus vulgaris and the halo blight pathogen Pseudomonas syringae pv. phaseolicola

The apoplast is the arena in which endophytic pathogens such as Pseudomonas syringae grow and interact with plant cells. Using metabolomic and ion analysis techniques, this study shows how the composition of Phaseolus vulgaris leaf apoplastic fluid changes during the first six hours of compatible and incompatible interactions with two strains of Pseudomonas syringae pv. phaseolicola (Pph) that differ in the presence of the genomic island PPHGI-1. Leaf inoculation with the avirulent island-carrying strain Pph 1302A elicited effector-triggered immunity (ETI) and resulted in specific changes in apoplast composition, including increases in conductivity, pH, citrate, γ-aminobutyrate (GABA) and K+, that are linked to the onset of plant defence responses. Other apoplastic changes, including increases in Ca2+, Fe2/3+ Mg2+, sucrose, β-cyanoalanine and several amino acids, occurred to a relatively similar extent in interactions with both Pph 1302A and the virulent, island-less strain Pph RJ3. Metabolic footprinting experiments established that Pph preferentially metabolizes malate, glucose and glutamate, but excludes certain other abundant apoplastic metabolites, including citrate and GABA, until preferred metabolites are depleted. These results demonstrate that Pph is well-adapted to the leaf apoplast metabolic environment and that loss of PPHGI-1 enables Pph to avoid changes in apoplast composition linked to plant defences.

Male and female odors induce Fos expression in chemically defined neuronal population

Olfactory information modulates innate and social behaviors in rodents and other species. Studies have shown that the medial nucleus of the amygdala (MEA) and the ventral premammillary, nucleus (PMV) are recruited by conspecific odor stimulation. However, the chemical identity of these neurons is not determined. We exposed sexually inexperienced male rats to female or male odors and assessed Fos immunoreactivity (Fos-ir) in neurons expressing NADPH diaphorase activity (NADPHd, a nitric oxide synthase), neuropeptide Urocortin 3, or glutamic acid decarboxylase rnRNA (GAD-67, a GABA-synthesizing enzyme) in the MEA and PMV. Male and female odors elicited Fos-ir in the MEA and PMV neurons, but the number of Fos-immunoreactive neurons was higher following female odor exposure, in both nuclei. We found no difference in odor induced Fos-ir ill the MEA and PMV comparing fed and fasted animals. Ill the MEA, NADPHd neurons colocalized Fos-ir only in response to female odors. In addition, Urocortin 3 neurons comprise a distinct population and they do not express Fos-ir after conspecific odor stimulation. We found that 80% of neurons activated by male odors coexpressed GAD-67 mRNA. Following female odor, 50% of Fos neurons coexpressed GAD-67 rnRNA. The PMV expresses very little GAD-67, and virtually no colocalization with Fos was observed. We found intense NADPHd activity in PMV neurons, some of which coexpressed Fos-ir after exposure to both odors. The majority of the PMV neurons expressing NADPHd colocalized cocaine-and amphetamine-regulated transcript (CART). Our findings suggest that female and male odors engage distinct neuronal populations in the MEA, thereby inducing contextualized behavioral responses according to olfactory cues. In the PMV, NADPHd/CART neurons respond to male and female odors, suggesting a role in neuroendocrine regulation in response to olfactory cues. (C) 2009 Elsevier Inc. All rights reserved.

Chemical identity and connections of medial preoptic area neurons expressing melanin-concentrating hormone during lactation

Lactation is an energy-demanding process characterized by massive food and water consumption, cessation of the reproductive cycle and induction of maternal behavior. During lactation, melanin-concentrating hormone (MCH) mRNA and peptide expression are increased in the medial preoptic area (MPO) and in the anterior paraventricular nucleus of the hypothalamus. Here we show that MCH neurons in the MPO coexpress the GABA synthesizing enzyme GAD-67 mRNA. We also show that MCH neurons in the MPO of female rats are innervated by neuropeptides that control energy homeostasis including agouti-related protein (AgRP), alpha-melanocyte stimulating hormone (alpha MSH) and cocaine- and amphetamine-regulated transcript (CART). Most of these inputs originate from the arcuate nucleus neurons. Additionally, using injections of retrograde tracers we found that CART neurons in the ventral premammillary nucleus also innervate the MPO. We then assessed the projections of the female MPO using injections of anterograde tracers. The MPO densely innervates hypothalamic nuclei related to reproductive control including the anteroventral periventricular nucleus, the ventrolateral subdivision of the ventromedial nucleus (VMHvl) and the ventral premammillary nucleus (PMV). We found that the density of MCH-ir fibers is increased in the VMHvl and PMV during lactation. Our findings suggest that the expression of MCH in the MPO may be induced by changing levels of neuropeptides involved in metabolic control. These MCH/GABA neurons may, in turn, participate in the suppression of cyclic reproductive function and/or sexual behavior during lactation through projections to reproductive control sites. (C) 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.

Melanin-concentrating hormone projections to areas involved in somatomotor responses

The lateral hypothalamic area (LHA) participates in the integration of sensory information and somatomotor responses associated with hunger and thirst. Although the LHA is neurochemically heterogeneous, a particularly high number of cells express melanin-concentrating hormone (MCH), which has been reported to play a role in energy homeostasis. Treatment with MCH increases food intake, and MCH mRNA is overexpressed in leptin-deficient (ob/ob) mice. Mice lacking both MCH and leptin present reduced body fat, mainly due to increased resting energy expenditure and locomotor activity. Dense MCH innervation of the cerebral motor cortex (MCx) and the pedunculopontine tegmental nucleus (PPT), both related to motor function, has been reported. Therefore, we postulated that a specific group of MCH neurons project to these areas. To investigate our hypothesis, we injected retrograde tracers into the MCx and the PPT of rats, combined with immunohistochemistry. We found that 25% of the LHA neurons projecting to the PPT were immunoreactive for MCH, and that 75% of the LHA neurons projecting to the MCx also contained MCH. Few MCH neurons were found to send collaterals to both areas. We also found that 15% of the incerto-hypothalamic neurons projecting to the PPT expressed MCH immunoreactivity. Those neurons preferentially innervated the rostral PPT. In addition, we observed that the MCH neurons express glutamic acid decarboxylase mRNA, a gamma-aminobutyric acid (GABA) synthesizing enzyme. We postulate that MCH/GABA neurons are involved in the inhibitory modulation of the innervated areas, decreasing motor activity in states of negative energy balance. (C) 2007 Published by Elsevier B.V.

TRPV1 receptors modulate retinal development

We investigated the possible participation of TRPV1 channels in retinal apoptosis and overall development. Retinas from newborn, male albino rats were treated in vitro with capsazepine, a TRPV1 antagonist. The expression of cell cycle markers was not changed after TRPV1 blockade, whereas capsazepine reduced the number of apoptotic cells throughout the retina,increased ERK1/2 and p38 phosphorylation and slightly reduced JNK phosphorylation. The expression of BAD, Bcl-2, as well as integral and cleaved capsase-3 were similar in all experimental conditions. Newborn rats were kept for 2 months after receiving high doses of capsazepine. In their retinas, calbindin and parvalbumin protein levels were upregulated, but only the number of amacrine-like, parvalbumin-positive cells was increased. The numbers of calretinin, calbindin, ChAT, vimentin, PKC-alpha and GABA-positive cells were similar in both conditions. Protein expression of synapsin Ib was also increased in the retinas of capsazepine-treated rats. Calretinin, vimentin, GFAP, synapsin Ia, synaptophysin and light neurofilament protein levels were not changed when compared to control values. Our results indicate that TRPV1 channels play a role in the control of the early apoptosis that occur during retinal development, which might be dependent on MAPK signaling. Moreover, it seems that TRPV1 function might be important for neuronal and synaptic maturation in the retina. (C) 2011 ISDN. Published by Elsevier Ltd. All rights reserved.

INHIBITION OF THE CAUDAL PRESSOR AREA REDUCES CARDIORESPIRATORY CHEMOREFLEX RESPONSES

The caudal pressor area (CPA) is a brainstem area located close to the spinal cord. The activation of the CPA increases sympathetic activity and mean arterial pressure (MAP) by mechanisms dependent on the commissural nucleus of the solitary tract (commNTS) and rostroventrolateral medulla, however, the signals that activate the CPA to produce these responses are still unknown. Therefore, in the present study, we investigated the activity of glutamatergic and GABAergic mechanisms from the CPA and commNTS in rats exposed to hypoxia and the effects of the inhibition of CPA neurons on cardiorespiratory responses to peripheral chemoreceptor activation with i.v. sodium cyanide (NaCN). Male Sprague-Dawley rats (250-280 g, n=5-8/group) were used. In conscious rats, most of the commNTS neurons (66 +/- 11%) and part of the CPA neurons (36 +/- 7%) activated by hypoxia (8% O2) were glutamatergic (contained VGLUT2mRNA). Small part of the neurons activated during hypoxia was GABAergic (contained GAD-67mRNA) in the commNTS (9 +/- 4%) or the CPA (6 +/- 2%). In urethane anesthetized rats, the inhibition of CPA neurons with bilateral injections of muscimol (GABA-A agonist, 2 mM) reduced baseline MAP, splanchnic sympathetic nerve discharge (SND) and phrenic nerve discharge (PND). Muscimol into the CPA also reduced by around 50% the pressor and sympathoexcitatory responses and the increase in PND to peripheral chemoreceptor activation with NaCN (50 mu g/kg i.v.), without changing sympathetic baroreflex responses. These data suggest that CPA mechanisms facilitate cardiorespiratory responses to peripheral chemoreflex activation. Immunohistochemistry results also suggest that at least part of the CPA mechanisms activated by hypoxia is glutamatergic. (C) 2011 IBRO. Published by Elsevier Ltd. All rights reserved.

Ventrolateral medulla mechanisms involved in cardiorespiratory responses to central chemoreceptor activation in rats

A rise in arterial PCO(2) stimulates breathing and sympathetic activity to the heart and blood vessels. In the present study, we investigated the involvement of the retrotrapezoid nucleus (RTN) and glutamatergic mechanisms in the Botzinger/C1 region (Botz/C1) in these responses. Splanchnic sympathetic nerve discharge (sSND) and phrenic nerve discharge (PND) were recorded in urethane-anesthetized, sino-aortic-denervated, vagotomized, and artificially ventilated rats subjected to hypercapnia (end-expiratory CO(2) from 5% to 10%). Phrenic activity was absent at end-expiratory CO(2) of 4%, and strongly increased when end-expiratory CO(2) reached 10%. Hypercapnia also increased sSND by 103 +/- 7%. Bilateral injections of the GABA-A agonist muscimol (2 mM) into the RTN eliminated the PND and blunted the sSND activation (Delta = +56 +8%) elicited by hypercapnia. Injections of NMDA receptor antagonist AP-5 (100 mM), non-NMDA receptor antagonist 6,7-dinitro-quinoxaline-2,3-dione (DNQX; 100 mM) or metabotropic glutamate receptor antagonist (+/-)-alpha-methyl-4-carboxyphenylglycine (MCPG; 100 mM) bilaterally into the Botz/C1 reduced PND (Delta = +43 +/- 7%, +52 +/- 6% or +56 +/- 11%, respectively). MCPG also reduced sSND (Delta = +41 +/- 7%), whereas AP-5 and DNQX had no effect. In conclusion, the increase in sSND caused by hypercapnia depends on increased activity of the RTN and on metabotropic receptors in the Botz/C1, whereas PND depends on increased RTN activity and both ionotropic and metabotropic receptors in the Botz/C1.

Important GABAergic mechanism within the NTS and the control of sympathetic baroreflex in SHR

Inhibitory neurotransmission has an important role in the processing of sensory afferent signals in the nucleus of the solitary tract (NTS), particularly in spontaneously hypertensive rats (SHR). In the present study, we tested the hypothesis that gamma-aminobutyric acid (GABA) mediated neurotransmission within the NTS produces an inhibition of the baroreflex response of splanchnic sympathetic nerve discharge (sSND). In urethane-anesthetized, artificially ventilated and vagotomized male SHR and Wistar Kyoto (WKY) rats we compared baroreflex-response curves evoked after bilateral injections into the NTS of the GABA-A antagonist bicuculline (25 pmol/50 nl) or the GABA-B antagonist CGP 35348 (5 nmol/50 nl). Baseline MAP in SHR was higher than the WKY rats (SHR: 153+/-5, vs. WKY: 112+/-6 mm Hg, p<0.05). Bilateral injection of bicuculline or CGP 35348 into the NTS induced a transient (5 min) reduction in MAP (Delta = -26+/-4 and -41+/-6 mm Hg, respectively vs. saline Delta = +4+/-3 mm Hg, p<0.05) and sSND (Delta = -21+/-13 and -78+/-7%, respectively vs. saline: Delta = +6+/-4% p<0.05). Analysis of the baroreceptor curve revealed a decrease in the lower plateau (43+/-11 and 15+/-5%, respectively vs. saline: 78+/-6%, p<0.05) and an increase in the sympathetic gain of baroreflex (6.3+/-0.3, 7.2+/-0.8% respectively vs. saline: 4.2+/-0.4%, p<0.05). Bicuculline or CGP35348 into the NTS in WKY rats did not change MAP, sSND and sympathetic baroreflex gain. These data indicate that GABAergic mechanisms within the NTS act tonically reducing sympathetic baroreflex gain in SHR. Crown Copyright (C) 2010 Published by Elsevier By. All rights reserved.

Exercise changes regional vascular control by commissural NTS in spontaneously hypertensive rats

Ogihara CA, Schoorlemmer GHM, Levada AC, Pithon-Curi TC, Curi R, Lopes OU, Colombari E, Sato MA. Exercise changes regional vascular control by commissural NTS in spontaneously hypertensive rats. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 299: R291-R297, 2010. First published April 21, 2010; doi: 10.1152/ajpregu.00055.2009.-Inhibition of the commissural nucleus of the solitary tract (commNTS) induces a fall in sympathetic nerve activity and blood pressure in spontaneously hypertensive rats (SHR), which suggests that this subnucleus of the NTS is a source of sympathoexcitation. Exercise training reduces sympathetic activity and arterial pressure. The purpose of the present study was to investigate whether the swimming exercise can modify the regional vascular responses evoked by inhibition of the commNTS neurons in SHR and normotensive Wistar-Kyoto (WKY) rats. Exercise consisted of swimming, 1 h/day, 5 days/wk for 6 wks, with a load of 2% of the body weight. The day after the last exercise session, the rats were anesthetized with intravenous alpha-chloralose, tracheostomized, and artificially ventilated. The femoral artery was cannulated for mean arterial pressure (MAP) and heart rate recordings, and Doppler flow probes were placed around the lower abdominal aorta and superior mesenteric artery. Microinjection of 50 mM GABA into the commNTS caused similar reductions in MAP in swimming and sedentary SHR (-25 +/- 6 and -30 +/- 5 mmHg, respectively), but hindlimb vascular conductance increased twofold in exercised vs. sedentary SHR (54 +/- 8 vs. 24 +/- 5%). GABA into the commNTS caused smaller reductions in MAP in swimming and sedentary WKY rats (-20 +/- 4 and -16 +/- 2 mmHg). Hindlimb conductance increased fourfold in exercised vs. sedentary WKY rats (75 +/- 2% vs. 19 +/- 3%). Therefore, our data suggest that the swimming exercise induced changes in commNTS neurons, as shown by a greater enhancement of hindlimb vasodilatation in WKY vs. SHR rats in response to GABAergic inhibition of these neurons.

The Central Nervous System as Target for Antihypertensive Actions of a Proline-Rich Peptide from Bothrops jararaca Venom

Pyroglutamyl proline-rich oligopeptides, present in the venom of the pit viper Bothrops jararaca (Bj-PROs), are the first described naturally occurring inhibitors of the angiotensin I-converting enzyme (ACE). The inhibition of ACE by the decapeptide Bj-PRO-10c (GABA release that may be responsible for its antihypertensive activity and its effect on HR. (C) 2010 International Society for Advancement of Cytometry

Actions of octocoral and tobacco cembranoids on nicotinic receptors

Nicotinic acetylcholine receptors (AChRs) are pentameric proteins that form agonist-gated cation channels through the plasma membrane. AChR agonists and antagonists are potential candidates for the treatment of neurodegenerative diseases. Cembranoids are naturally occurring diterpenoids that contain a 14-carbon ring. These diterpenoids interact with AChRs in complex ways: as irreversible inhibitors at the agonist sites, as noncompetitive inhibitors, or as positive modulators, but no cembranoid was ever shown to have agonistic activity on AChRs. The cembranoid eupalmerin acetate displays positive modulation of agonist-induced currents in the muscle-type AChR and in the related gamma-aminobutyric acid (GABA) type A receptor. Moreover, cembranoids display important biological effects, many of them mediated by nicotinic receptors. Cembranoids from tobacco are neuroprotective through a nicotinic anti-apoptotic mechanism preventing excitotoxic neuronal death which in part could result from anti-inflammatory properties of cembranoids. Moreover, tobacco cembranoids also have anti-inflammatory properties which could enhance their neuroprotective properties. Cembranoids from tobacco affect nicotine-related behavior: they increase the transient initial ataxia caused by first nicotine injection into naive rats and inhibit the expression of locomotor sensitization to repeated injections of nicotine. In addition, cembranoids are known to act as anti-tumor compounds. In conclusion, cembranoids provide a promising source of lead drugs for many clinical areas, including neuroprotection, smoking-cessation, and anti-cancer therapies. (C) 2009 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Derivados da guanina e a modulação da captação astrocitária de glutamato

O nucleosídeo Guanosina (GUO) já foi descrito como capaz de estimular a captação de glutamato em cultura de astrócitos. A proposta deste estudo foi determinar o efeito e a especificidade das purinas, derivadas da guanina ou da adenina, na captação de glutamato e GABA em cultura de astrócitos. A estimulação da captação de glutamato foi observada quando usamos GUO, GMP e GTP. Quando utilizamos os derivados de Guanina simultaneamente não observamos efeito aditivo. Nós também investigamos se interconversões entre as purinas derivadas da guanina têm influência no efeito observado. O efeito do GTP foi preliminarmente descartado já que seu análogo GMP-PNP não estimulou a captação de glutamato. Quando utilizamos um inibidor da ecto-5’-nucleotidase, o efeito do GMP na captação de glutamato desaparece e não houve interferência no efeito da GUO. Assim, esses resultados sugerem que a GUO é o derivado da guanina responsável pelo efeito na captação de glutamato. Ao mesmo tempo, os derivados da adenina não são capazes de estimular a captação de glutamato. Além disso, a captação de GABA não foi afetada pela guanosina. Dessa forma, nossos resultados indicam uma especificidade na interação entre GUO e a captação astrocitária de glutamato.

Efeitos de antidepresivos ou do nado forçado sobre parâmetros gabaérgicos e de glicose em ratos não diabéticos por estreptozotocina

Pacientes diabéticos apresentam maior risco de depressão e o tratamento com antidepressivos melhora o controle glicêmico. O envolvimento do GABA na etiologia da depressão tem sido estudado e, coincidentemente, esse neurotransmissor está diminuído no pâncreas de ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina . Assim sendo, o objetivo foi estudar o efeito de antidepressivos sobre a glicemia e a insulinemia de ratos diabéticos por estreptozotocina, bem como as alterações centrais de glicose, pelo emprego de um agente GABAérgico. Avaliou-se também a concentração do GABA no teste do nado forçado. Ratos Wistar, não diabéticos e diabéticos por estreptozotocina, foram tratados com imipramina, moclobemina, fluoxetina, sertralina e clonazepam. Após mensurada a glicemia de jejum se administrou sobrecarga de glicose, com coletas de sangue a cada 30 min. Dentre os antidepressivos testados, fluoxetina e moclobemida aumentaram a glicemia pós-prandial, enquanto sertralina reduziu tanto a glicemia de jejum quanto a pós-prandial. A coleta de sangue de animais não diabéticos aos 60 min revelou que a redução da glicemia pela sertralina foi acompanhada de aumento significativo dos níveis de insulina após a sobrecarga de glicose. As alterações de glicose central pelo emprego de clonazepam, um agente GABAérgico com propriedades antidepressivas, bem como as alterações na concentração do GABA no estriado de ratos submetidos ao teste da natação forçada eram avaliados in vivo por técnica de microdiálise. Previamente ao dia de experimentação era realizada cirurgia estereotáxica para implantação de cânula-guia no núcleo estriado dos ratos. As alterações in vivo da glicose eram observadas em todos os animais na caixa de livre movimentação, ao passo que os níveis extracelulares de GABA eram determinados no estriado de ratos durante e após o teste do nado forçado. Clonazepam não alterou a glicemia de jejum ou pós-prandial de ratos diabéticos e não diabéticos, porém aumentou a concentração de glicose extracelular no estriado desses animais. Quando submetidos ao teste da natação forçada, os ratos diabéticos apresentaram maior tempo de imobilidade e retardo no incremento da concentração do GABA no estriado. Os resultados mostram que nesse modelo animal de diabete há interferência de agentes GABAérgicos sobre a glicose estriatal, bem como deficiência do sistema GABAérgico, sugerindo o envolvimento desse sistema com as alterações de humor que acompanham o diabete.

Estratigrafia de seqüências : uso da icnologia, dos argilominerais e da geoquímica em rochas de idade permiana na Bacia do Paraná, Região de Lauro Müller (SC), Brasil

A Icnologia, os Argilominerais e a Geoquímica foram integradas aos estudos de Associação Faciológica com objetivo de testá-las como ferramentas auxiliares na caracterização de Seqüências Deposicionais, segundo os conceitos da Estratigrafia de Seqüências (sentido Exxon). Para isso, foi selecionado o intervalo estratigráfico, compreendido do Sakmariano ao Kunguriano (Permiano), correspondente às formações Rio do Sul, Rio Bonito e base da Formação Palermo. A área de estudo está situada na borda leste da Bacia do Paraná, nos municípios de Orleans e Lauro Müller, região sul do estado de Santa Catarina. Como metodologia de trabalho, foi selecionado um arcabouço estratigráfico considerando uma hierarquia de eventos de 3a e 4a ordem, inseridos em um evento de 2a ordem, correspondente a uma superseqüência. Para isso, foram selecionados dez afloramentos, e os poços PB-18 e PB-20, com testemunhos, totalizando 500 m. Foram interpretadas seis associações faciológicas, representadas, da base para o topo, por rochas glácio-marinha, plataforma marinha dominada por ondas com estrutura “hummocky”, arenito de “shoreface” médio/superior, bioturbados, pelitos marinho/marinhos marginais, flúvio-estuarino e ilha de barreira/laguna. Admitiu-se ainda a formação de vales incisos para as região de Lauro Müller e para a área do poço RL-6, a partir da deposição das rochas flúvio-estuarinas. O uso da Icnologia limitou-se à interface entre o topo da formação Rio do Sul e a base do Membro Triunfo da Formação Rio Bonito, onde a identificação da Icnofábrica de Glossifungites auxiliou na delimitação de limites de seqüência de alta freqüência. Além disso, foram reconhecidas, o predomínio das Icnofábricas de Thalassinoides e Teichichnus e, secundariamente, Planolites, Ophiomorpha, Arenicolites, Cylindrichnus, Monocraterion, Diplocraterion e Rosselia, permitindo posicionar a interface entre estas formações na Icnofácies Skolithos/Cruziana. Helminthopsis, Condrites e Palaeophycus passam a predominar quando da presença de subambientes mais restritos tipo baías e lagunas. Os argilominerais identificados foram a caolinita, a clorita, a ilita e o interestratificado ilita-esmectita (I-S) do tipo ordenado. O predomínio da clorita e da ilita, na Formação Rio do Sul e o da caolinita no Membro Siderópolis, indicam variações paleoclimáticas, onde, inicialmente, existiram condições mais frias e secas, passando para condições de clima mais quente e úmido. Os pelitos transgressivos do Membro Paraguaçu da Formação Rio Bonito foram caracterizados pelos valores relativos mais elevados do interestratificado I-S, e do SiO2 e Na2O e, os menores valores relativos do Al2O3, K2O, Fe2O3, MgO e TiO2. Interpretou-se uma proveniência detrítica para estes argilominerais sendo associados a minerais micáceos e feldspáticos. As relações V/(V+Ni) e V/Cr indicam condições paleoambientais restritas, de caráter redutor, praticamente para todo o intervalo estudado. A relação Sr/Ba mostrou-se boa indicadora de eventos transgressivos no PB-18 e no poço 1-TV-4-SC, perfurado em posição mais distal na bacia. Embora o uso da Taphonomia não tenha sido contemplada no objetivo inicial, a utilização da razão pólens/esporos foi satisfatória. Pulsos transgressivos de alta freqüência puderam também ser balizados pelas razões mais elevadas desta relação, havendo uma correlação razoável com as indicações advindas da curva da razão Sr/Ba. Integrando-se os resultados destas várias ferramentas foi possível dividir o intervalo estratigráfico no PB-18, em sete seqüências deposicionais de 4a ordem e, em cinco seqüências deposicionais, no PB-20. As variações encontradas nos estilos de estaqueamento estratigráfico entre as áreas perfuradas por estes poços, deve-se às variações locais no estilo tectono-sedimentar, dentro do modelo de bacias tipo “foreland” – parte distal, modelo este adotado para a sedimentação destas seqüências e que tiveram, na subsidência e no controle glácio-eustático, os agentes moduladores deste padrão estratigráfico.

Efeitos citotóxicos do teniposide, um derivado semi-sintético das epipodofilotoxinas, sobre linhagens celulares de carcinoma renal humano

O câncer renal corresponde a aproximadamente 3% dos tumores malignos do adulto, sendo a terceira malignidade urológica mais comum. Os tratamentos sistêmicos disponíveis para pacientes portadores de carcinoma renal avançado são, via de regra, pouco eficazes e sem um impacto definido na sobrevida. Portanto, torna-se imperioso que novos agentes e/ou estratégias terapêuticas para esta enfermidade sejam desenvolvidas. O derivado das epipodolofilotoxinas, etoposide, tem sido utilizado com sucesso no tratamento de vários tipos de tumores sólidos e hematológicos. Este agente exerce a sua ação antitumoral através da inibição da enzima nuclear topoisomerase II. Estudos recentes demonstraram que o efeito citotóxico in vitro deste agente é bem mais pronunciado quando as linhagens tumorais são expostas à droga por um tempo mais prolongado. Isto vem sendo confirmado em estudos clínicos, nos quais foi documentado um aumento significativo no percentual de respostas tumorais objetivas em pacientes com câncer avançado tratados com etoposide em doses repetidas diárias de forma continuada, comparativamente a pacientes que receberam pulsos de doses altas da droga a intervalos mais longos. Infelizmente, estudos iniciais com etoposide não revelaram uma atividade antitumoral significativa em pacientes com câncer renal avançado. Por esta razão, os estudos preliminares explorando o potencial terapêutico de seu análogo teniposide nesta doença também não receberam a devida atenção na literatura. Entretanto, este análogo possui potenciais vantagens terapêuticas em relação ao etoposide, uma vez que apresenta um tempo de retenção intracelular mais prolongado em linhagens de tumores sólidos in vitro. Estas observações nos estimularam a reconsiderar o estudo do potencial citotóxico do teniposide em modelos experimentais de câncer renal avançado. Nesta dissertação, foram estudados vários protocolos de administração de teniposide em linhagens de câncer renal humano, uma vez que esta neoplasia carece de drogas ativas disponíveis no armamentário terapêutico. Foram utilizadas as linhagens celulares RXF-393, A-498 e TK-10, as quais foram incubadas com teniposide em concentrações pré-determinadas e tempos de incubação variáveis. Além disto, foram feitos experimentos em que protocolos de administração de teniposide como agente único foram comparados a protocolos em que o mesmo foi combinado com agentes que bloqueiam a ação da glicoproteína P, responsável pelo efluxo ativo da droga do interior da célula tumoral. Além disso, foram também estudados protocolos incluindo a associação de teniposide com agentes que interferem com a síntese do DNA. Para os estudos de avaliação de citotoxicidade dos agentes quimioterápicos, os mesmos foram pré-incubados por 24 h na ausência ou presença do inibidor da DNA polimerase α afidicolina glicinada (0,2 µM) ou do inibidor da ribonucleotídeo redutase hidroxiuréia (200 µM) e após incubados por diferentes tempos de exposição com diluições seriadas de teniposide. Os efeitos citotóxicos foram avaliados através do método colorimétrico com sulforodamina B (SRB). Os protocolos de exposição prolongada das células ao teniposide mostraram um aumento significativo na sua citotoxicidade nas linhagens RXF-393, A-498 e TK-10, sugerindo que a citotoxicidade do teniposide é dependente de tempo de administração. Neste sentido, uma maior taxa de dano no DNA foi observada nas células expostas ao teniposide por tempos de administração mais prolongados. Curiosamente, os diferentes tempos de exposição ao teniposide não influenciaram de forma clara na formação de complexos DNA-topoisomerase II, nem nas medidas da atividade desta enzima. O uso concomitante de agentes moduladores da glicoproteína P como o verapamil, a ciclosporina A e o tamoxifeno não produziu potencialização do efeito antiproliferativo do teniposide. Por sua vez, os tratamentos com agentes que interferem na síntese de DNA, como a afidicolina glicinada ou a hidroxiuréia, potencializaram a citotoxicidade do teniposide em todas as linhagens estudadas, seguindo as características intrínsecas de cada linhagem. Em conclusão, os resultados apresentados nesta dissertação sugerem que o teniposide apresenta um maior efeito citotóxico em protocolos de administração prolongada em combinação com agentes inibidores da síntese de DNA. Frente a estes resultados iniciais, o teniposide será testado nos protocolos de administração acima mencionados em um painel contendo um maior número de linhagens tumorais in vitro. Uma vez confirmadas as observações acima descritas, serão iniciados estudos em modelos tumorais in vivo. Estes estudos servirão de base nas decisões quanto à reavaliação clínica do teniposide em ensaios de fase I em pacientes com neoplasias avançadas refratárias.