Complete genome sequence and integrated protein localization and interaction map for alfalfa dwarf virus, which combines properties of both cytoplasmic and nuclear plant rhabdoviruses

Summary We have determined the full-length 14,491-nucleotide genome sequence of a new plant rhabdovirus, alfalfa dwarf virus (ADV). Seven open reading frames (ORFs) were identified in the antigenomic orientation of the negative-sense, single-stranded viral RNA, in the order 3′-N-P-P3-M-G-P6-L-5′. The ORFs are separated by conserved intergenic regions and the genome coding region is flanked by complementary 3′ leader and 5′ trailer sequences. Phylogenetic analysis of the nucleoprotein amino acid sequence indicated that this alfalfa-infecting rhabdovirus is related to viruses in the genus Cytorhabdovirus. When transiently expressed as GFP fusions in Nicotiana benthamiana leaves, most ADV proteins accumulated in the cell periphery, but unexpectedly P protein was localized exclusively in the nucleus. ADV P protein was shown to have a homotypic, and heterotypic nuclear interactions with N, P3 and M proteins by bimolecular fluorescence complementation. ADV appears unique in that it combines properties of both cytoplasmic and nuclear plant rhabdoviruses.

Fish Silage as Replacement of Fishmeal in Red Tilapia Feeds

We estimated the effect on growth and nutrient efficiency of replacing fishmeal with silage incorporated with rice bran in diets for fingerling red tilapia (Oreochromis mossambicus × Oreochromis niloticus × Oreochromis aureus) over 12 weeks. Isonitrogenous (300 g kg−1 protein dry matter basis) and isoenergetic (4450 Kcal gross energy kg−1) feed formulations with increasing levels of tilapia silage as a replacement for fishmeal were prepared: Diet 1 with no silage (0 g Kg−1), Diet 2 (250 g Kg−1), Diet 3 (500 g Kg−1), and Diet 4 (750 g Kg−1). Feed intake was similar among Diets 1, 2, and 3, while Diet 4 had a significantly lower intake. There was no significant difference (P > 0.05) in weight gain or specific growth rate (SGR), feed conversion ratio (FCR), and protein efficiency ratio (PER), among fish fed Diets 1, 2, and 3. Fish fed with Diet 4 had significantly lower weight gain; SGR and PER and significantly higher FCR. Organoleptic properties of the fish were not affected by the diets. The results of this study indicate that less expensive dried fish silage with rice bran is an alternative protein source for tilapia feed up to 50% of fishmeal replacement.

Nutritional evaluation of silage made from the toxic weed parthenium hysterophorus in animals

After ensilation, the toxic Compositae weed Parthenium hysterophorus was devoid of the toxic principle parthenin. Laboratory-scale ensilation indicated that no parthenin was detectable after 5 wk of anaerobic fermentation. For animal feeding studies, silage was made on a large scale from Parthenium mixed with maize or from Parthenium alone. Crossbred bull and buffalo bull calves were fed diets containing the silages, or control diet without silage, for 12 wk. The animals consumed both silages with relish, and body weight gains of silage-fed calves did not differ from those of the controls. The digestibilities of dry matter, fibre and nitrogen-free extract were greater with the control diet, but the biological value of proteins tended to be greater with the silage-containing diets. Haematological studies indicated no significant differences between experimental and control groups in selected parameters, except for a reduction in blood urea nitrogen in the animals fed silage. The possible causes for these biochemical alterations are discussed. Since the nutritive value of Parthenium silage compares favourably with the standard diet, and Parthenium seeds collected from the silage did not germinate, we suggest that ensilation can be used as an additional method in the containment and eradication of these plants, which grow wild in India.

Adaptacion de cuatro lineas de alfalfa forrajera (Medicago sativa L.) a las condiciones climaticas de la Hacienda Las Mercedes, campo y vivero

Con el objeto de evaluar el comportamiento adaptativo de cuatro líneas de alfalfa (Medicago sativa L.) en condiciones de campo y de vivero, se realizó un estudio en la Hacienda Las Mercedes, propiedad de la Universidad Nacional Agraria, ubicada en la ciudad de Managua Km 11 carretera norte, , entrada al CARNIC 2 km al lago. Teniendo su ubicación geográfica en un cuadrante con las siguientes coordenadas: 12°10'14"a 12"08'05" en latitud Norte y 86.10'22" a 86"09'44" longitud Oeste. El estudio se realizó en dos fuses 1) de campo y 2) en vivero. En ambos se determinó el grado de adaptación de cuatro líneas de alfalfa (Medicago sativa L.), tres procedentes de Texas-EE UU (8L418, 105916 y 9818) y una de Sébaco-Nicaragua (l3-A50) donde se ha establecido por más de tres años. El ensayo de campo se estableció en un área que anteriormente fue utilizada para la siembra de sorgo forrajero y el de vivero se realizó en el vivero de la UNA, en la misma finca. Se consideró cada una de las líneas como tratamiento. El Diseño experimental usado para ambas fases fue de bloques completos al azar (BCA), con 4 repeticiones. En campo con parcelas experimentales fueron de 4 m2 (2 m x 2 m), para un área total de 120m2 Se sembraron 6 surcos a una distancia de 30 cm entre surco y 14 plantas por surcos distanciados a 15 cm. Se realizó análisis de varianza utilizando programa SAS versión 99, cuando se encontró diferencias significativas o altamente significativas para tratamientos se realizaron pruebas de medias según Duncan. El terreno se preparó de forma convencional, con una chapea inicial, un paso de arado y gradeo de forma mecanizada, posteriormente se realizó la estructuración del diseño de campo. Las variables evaluadas según las condiciones de campo fueron: germinación, altura de la plantas, daños por plaga y enfermedades y ramificación, en las condiciones de vivero fueron: germinación, sobrevivencia, altura (cm), daños por plagas y enfermedades. Como resultado se obtuvo que 3 de las líneas presentaron buena germinación en condiciones de campo y vivero siendo la de mejor comportamiento la línea 13A-50 con un promedio del 97%. Para altura la línea 9818 presentó el mejor comportamiento en condiciones de campo con rangos de 48cm - 58 cm manteniendo superioridad durante el estudio en comparación con el resto de las líneas evaluadas. En daños por plagas la línea 8L418 la de menor afectación, y la más afectada fue la línea l3A-50. En daños por enfermedades la línea 9818 obtuvo los mayores daños en los niveles de moderado a muy grave y la línea l3A-50 fue la de menor incidencia. Todas las líneas presentaron una ramificación media de 30%, siendo la línea 105916 la de mejor comportamiento. En vivero la línea l3A-50 presentó la mejor altura. La línea 9818 fue la de mejor adaptabilidad en condiciones de campo, seguida de la línea BA-50. Pero en condiciones de vivero la línea 13A-50 fue la de mejor adaptabilidad, seguida de la línea 8L418.en resumen la línea l3A-50 fue la de mejor comportamiento adaptativo.

Studies on the preparation of fish silage. 1. Effect of quality of raw material and type of acid

An experiment was undertaken in which silver bellies (Leiognathus splendens) of different quality were used to produce silages using different concentrations of hydrochloric acid and formic acid. The quality and storage life of the various preparations are reported. Silages which keep for at least 30 days can be produced from silver belly held for 3 or 12 hours at 28°C by: 1) reducing the pH by addition of hydrochloric acid; 2) adding 0.5% formic acid and reducing the pH to 3.5 with hydrochloric acid; or 3) adding 2.5% formic acid.

Studies on the preparation of fish silage. 2. Rate of liquefaction in different parts of silver belly

An experiment was undertaken to determine from which part of silver belly (Leiognathus splendens) carcasses originate the autolytic enzymes responsible for liquefaction of silage. Findings show that it is important to leave head and viscera present in order to get a satisfactory liquefaction in silage prepared from silver belly using 3.5% formic acid. The storage life of silage produced from various parts of the fish carcasses is also discussed.

Studies on the preparation of fish silage. 3. Dried silage products

An investigation was undertaken on the production of dried products from silver belly (Leiognathus splendens) silage mixed with plant filter materials. Silages produced using hydrochloric acid and/or formic acid when mixed with rice bran or maize meal and dried, yielded powders having an acceptable appearance and a pleasant odour, which are suitable for use in compounded chicken feeds.

Studies on the preparation of fish silage. 4. Economics of production

Economic aspects of producing liquid and dried silage from silver belly (Leiognathus splendens) in Sri Lanka are considered. A discounted cash flow analysis for the production of a dried fish silage/rice bran product suitable for use in compounded poultry feeds shows that the internal rate of return for a 10-year project would be between 34-77% and for a 5-year project between 26-73%. Thus it is concluded that the project would be extremely profitable.

Biomethane production from grass silage: laboratory assessment to maximise yields

On-farm biogas production is typically associated with forage maize as the biomass source. Digesters are designed and operated with the focus of optimising the conditions for this feedstock. Thus, such systems may not be ideally suited to the digestion of grass. Ireland has ca. 3.85 million ha of grassland. Annual excess grass, surplus to livestock requirements, could potentially fuel an anaerobic digestion industry. Biomethane associated with biomass from 1.1 % of grassland in Ireland, could potentially generate over 10 % renewable energy supply in transport. This study aims to identify and optimise technologies for the production of biomethane from grass silage. Mono-digestion of grass silage and co-digestion with slurry, as would occur on Irish farms, is investigated in laboratory trials. Grass silage was shown to have 7 times greater methane potential than dairy slurry on a fresh weight basis (107 m3 t-1 v 16 m3 t-1). However, comprehensive trace element profiles indicated that cobalt, iron and nickel are deficient in mono-digestion of grass silage at a high organic loading rate (OLR) of 4.0 kg VS m-3 d-1. The addition of a slurry co-substrate was beneficial due to its wealth of essential trace elements. To stimulate hydrolysis of high lignocellulose grass silage, particle size reduction (physical) and rumen fluid addition (biological) were investigated. In a continuous trial, digestion of grass silage of <1 cm particle size achieved a specific methane yield of 371 L CH4 kg-1 VS when coupled with rumen fluid addition. The concept of demand driven biogas was also examined in a two-phase digestion system (leaching with UASB). When demand for electricity is low it is recommended to disconnect the UASB from the system and recirculate rumen fluid to increase volatile fatty acid (VFA) and soluble chemical oxygen demand (SCOD) production whilst minimising volatile solids (VS) destruction. At times of high demand for electricity, connection of the UASB increases the destruction of volatiles and associated biogas production. The above experiments are intended to assess a range of biogas production options from grass silage with a specific focus on maximising methane yields and provide a guideline for feasible design and operation of on-farm digesters in Ireland.

Efectos de la distancia entre hileras a la siembra sobre los componentes del rendimiento de forraje y el uso de la radiación en el cultivo de alfalfa

La siembra de alfalfa (Medicago sativa L.) se caracteriza por presentar un arreglo espacial rectangular, i.e. mayor distancia entre hileras que entre plantas dentro de la hilera. Si se acercan las hileras de siembra se genera un arreglo espacial más cuadrado que podría influir sobre la competencia intra-específica y el aprovechamiento de los recursos, especialmente radiación. El objetivo de esta tesis fue: estudiar el efecto de la distancia entre hileras a la siembra sobre los componentes del rendimiento de forraje y la captura y eficiencia en el uso de la radiación en el cultivo de alfalfa. Se realizaron dos experimentos evaluando distancias entre hileras a la siembra en cultivos puros de alfalfa. El primero experimento fue de largo plazo y se evaluó el efecto de la distancia sobre variables productivas en dos cultivares con distinto reposo invernal (Monarca y Victoria) bajo una misma densidad de siembra. En el segundo experimento se estudió el efecto de la distancia entre hileras a la siembra, bajo una misma densidad de plantas establecida por raleo, sobre variables productivas y ecofisiológicas en un cultivo de alfalfa (Monarca) durante el primer año de producción. En ambos experimentos la producción de biomasa aérea se favoreció por los arreglos espaciales más cuadrados (p menor a 0,05) hasta una distancia óptima, entre 15 cm y 17,5 cm. Adicionalmente, se observó que en distancias cercanas hubo mayor densidad de plantas (p menor a 0,01). Las respuestas en producción de biomasa al reducir la distancia entre hileras a la siembra estuvieron determinadas por el aumento lineal en la intercepción de radiación (p menor a 0,0001) y por un patrón de tipo óptimo en la eficiencia de uso de la radiación (p menor a 0,01). Se concluye que la reducción en la distancia entre hileras a la siembra hasta una distancia óptima, entre 15 cm y 17,5 cm, es una práctica agronómica que permite establecer un arreglo espacial más favorable del cultivo de alfalfa que impacta sobre la producción de forraje.

Manipulación de la senescencia de alfalfa (Medicago sativa L.) por ingeniería genética

En plantas forrajeras como la alfalfa, la senescencia foliar produce tanto una pérdida de la biomasa de forraje como una reducción de la calidad del mismo. Una estrategia molecular para retrasar la senescencia mediante la ingeniería genética se basa en la expresión de la secuencia codificante de la isopentenil transferasa (ipt), enzima clave en la biosíntesis de citoquininas. Para lograrlo resulta crítico la utilización de promotores con expresión no constitutiva que permitan la producción sitio-específica y autorregulada de citoquininas. La manipulación de la senescencia constituye un objetivo particularmente atractivo en especies forrajeras. Se transformaron clones de alfalfa con las construcción AtMYB32-ipt, se logró la regeneración de 3 plantas transgénicas, las cuales fueron confirmadas por PCR al amplificar el transgen ipt. La expresión del transgen se confirmó por RT-PCR y a través de la técnica de Southern blot se observó un patrón de inserción múltiple. También se estableció el patrón de expresión de la construcción AtMYB32-gus, la cual se limitó a los tejidos vasculares, con cierta variabilidad de expresión en la parte aérea las plantas. Los fenotipos observados en las plantas AtMYB32-ipt fueron desde plantas normales a plantas que perdieron la dominancia apical con raíces necrosadas en su mayoría. Se evaluó la senescencia foliar a través de bioensayos de hojas de plantas que incorporaron el transgen ipt y plantas que no lo incorporaron, se observó una senescencia foliar retrasada en plantas transgénicas, se cuantificó dicho retraso a través de los contenidos de clorofila a y b, proteínas foliares totales y cambios en el perfil de las proteínas foliares en geles SDS-PAGE (subunidad mayor de Rubisco). Se observó a los 35 días un mayor contenido de clorofila a y b, proteínas foliares y una mayor intensidad de las bandas de la subunidad mayor de Rubisco en las plantas que incorporaron el transgen ipt

Fertilización fosfórica de alfalfa en dos suelos del sudoeste bonaerense

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