A Loop-mediated Isothermal Amplification Method for Rapid Direct Detection and Differentiation of Non-pathogenic and Verocytotoxigenic Escherichia coli in Beef and Bovine Faeces

The aim of this study was to develop a multiplex loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method capable of detecting Escherichia coli generally and verocytotoxigenic E. coli (VTEC) specifically in beef and bovine faeces. The LAMP assay developed was highly specific (100%) and able to distinguish between E. coli and VTEC based on the amplification of the phoA, and stx1 and/or stx2 genes, respectively. In the absence of an enrichment step, the limit of detection 50% (LOD50) of the LAMP assay was determined to be 2.83, 3.17 and 2.83-3.17 log CFU/g for E. coli with phoA, stx1 and stx2 genes, respectively, when artificially inoculated minced beef and bovine faeces were tested. The LAMP calibration curves generated with pure cultures, and spiked beef and faeces, suggested that the assay had good quantification capability. Validation of the assay, performed using retail beef and bovine faeces samples, demonstrated good correlation between counts obtained by the LAMP assay and by a conventional culture method, but suggested the possibility of false negative LAMP results for 12.5-14.7% of samples tested. The multiplex LAMP assay developed potentially represents a rapid alternative to culture for monitoring E.coli levels in beef or faeces and it would provide additional information on the presence of VTEC. However, some further optimisation is needed to improve detection sensitivity.

Stato microbiologico di pomodori distribuiti sul mercato del fresco

Le epidemie tossinfettive dovute al consumo di prodotti vegetali freschi hanno subito negli ultimi anni un rilevante incremento a causa della crescente centralizzazione delle produzioni in prossimità di aree destinate alle produzioni animali, all’aumento dell’importazione e del trasporto di prodotti provenienti da grandi distanze, all’aumento del settore dei prodotti di IV gamma e all’incremento delle fasce di popolazione più sensibili ai principali patogeni degli alimenti. I dati recenti indicano che, negli USA, le tossinfezioni associate al consumo di vegetali freschi sono passati dallo 0.7% del totale negli anni ‘70, al 6% negli anni ’90, al 13% nei primo anni 2000, fino a rappresentare nel 2014 il 46% delle tossinfezioni complessive. Il consumo di pomodori freschi è stato implicato in numerose tossinfezioni, anche di ampie dimensioni, in diverse aree del globo. Oltre alle salmonellosi, i pomodori costituiscono importanti veicoli per la trasmissione per altri patogeni quali Listeria monocytogenes, Escherichia coli VTEC e Yersinia enterocolitica. Gli studi sulla composizione quali-quantitativa dei microrganismi presenti sui pomodori al momento della loro commercializzazione sono pochissimi. Per queste ragioni, nel mio elaborato mi sono occupata di valutare alcuni parametri microbiologici campionando la superficie di pomodori a grappolo di diversa tipologia, prelevati dai banchi della distribuzione, venduti sfusi o preconfezionati. Le analisi condotte erano mirate alla ricerca della carica batterica totale, di Escherichia coli, enterobatteriacee, stafilococchi, muffe e lieviti. Dai risultati ottenuti si evince che non esistono effettivamente delle differenze significative sulle caratteristiche microbiologiche dei pomodori in base al tipo di confezionamento. Inoltre si può anche osservare come le cariche microbiche individuate siano relativamente contenute e paragonabili a quelle riportate in letteratura per prodotti analoghi considerati a basso rischio.

Confronto di sistemi di attuazione variabile delle valvole per motori ad accensione comandata

Nell'elaborato si descrivono i benefici dei sistemi VVA e si approfondiscono il funzionamento e le caratteristiche di alcuni di essi: Multiair, VTEC, Valvetronic, Variocam e Freevalve.