Investigation phytochimique des plantes aquatiques Potamogeton pectinatus L., P. lucens L., P. perfoliatus L. et P. crispus L. (Potamogetonaceae)

Dans le cadre de la recherche de nouveaux composés naturels, les métabolites secondaires de plantes aquatiques indigènes, les potamots Potamogeton pectinatus L., P. lucens L., P. perfoliatus L. et P. crispus L. (Potamogetonaceae), ont été étudiés. Par leur position écologique et évolutive particulière entre environnement terrestre et aquatique, les plantes aquatiques ou macrophytes pourraient en effet avoir sélectionné des composés avec des caractéristiques originales. Les extraits dichlorométhaniques (apolaires) des potamots ont été analysés par HPLCUV, HPLC-MS, HPLC-RMN et GC-MS, et testés contre diverses cibles biologiques. Sur la base de ces résultats, les extraits apolaires de P. pectinatus et P. lucens ont été étudiés de manière plus approfondie. Ils ont été fractionnés sur des colonnes ouvertes et par VLC, LPLC, MPLC, CPC et HPLC semi-préparative. Une partie de leurs constituants ont été isolés et leurs structures déterminées par des méthodes spectroscopiques, en particulier par RMN et par MS. Quinze composés ont été ainsi isolés de P. pectinatus et P. lucens, dont sept sont des nouveaux produits naturels. Parmi ces quinze produits, neuf sont des diterpènes ent-labdanes contenant un noyau furane ou un groupe lactonique, dont six sont décrits ici pour la première fois. Certains de ces diterpènes ont montré une activité algicide, ce qui indique une de leurs fonctions possible dans les potamots, et un de ces labdanes, le méthyl-15,16-époxy-12-oxo-8(17),13(16),14-ent-labatrièn-19-oate, a également des propriétés anti-inflammatoires. Les composés présents dans les extraits méthanoliques (polaires) n?ont pas été isolés, mais quatorze d?entre eux ont pu être identifiés par HPLC-UV, HPLC-MS et HPLCRMN. Une majorité de ces constituants sont des flavonoïdes connus, des dérivés glycosylés de l?apigénine, la lutéoline et le chrysoériol, également présents en tant qu?aglycones. Plusieurs ent-labdanes glycosylés ont pu être également identifiés dans ces extraits, parmi lesquels un nouveau composé dont la structure a pu être partiellement déterminée. En conclusion, ce travail a permis de mieux connaître la phytochimie de plusieurs plantes aquatiques de Suisse, et d?isoler de nouveaux produits naturels avec des propriétés biologiques et pharmacologiques intéressantes.<br/><br/>The secondary metabolites of Swiss freshwater plants, the pondweeds Potamogeton pectinatus L., P. lucens L., P. perfoliatus L. and P. crispus L. (Potamogetonaceae), were investigated. Because of their peculiar habitat, in-between aquatic and terrestrial life, aquatic plants should produce secondary metabolites with original chemical or biological features. Their apolar extracts were analysed by HPLC-UV, HPLC-MS, HPLC-NMR and GCMS, and were tested with different bioassays. Based on these results, the apolar extracts of P. pectinatus and P. lucens were investigated more extensively. They were fractionated on open columns, and by VLC, LPLC, MPLC, CPC and semi-preparative HPLC. Their constituents were isolated and their structures elucidated by spectroscopic methods as MS and NMR. Fifteen compounds could be isolated from P. pectinatus and P. lucens, and seven were new natural products. Nine of them were ent-labdane diterpenes with a furan moiety or a lactone group, and six of these labdanes were reported here for the first time as natural products. Some of these diterpenes showed an algaecide effect. This activity indicated their potential ecological function in pondweeds. One compound, methyl-15,16-epoxy-12-oxo-8(17),13(16),14-ent-labatrien-19-oate, revealed also some anti-inflammatory properties. The constituents of polar extracts were not isolated, but fourteen of them could be identified by HPLC-UV, HPLC-MS and HPLC-NMR. The major part of these compounds was known flavonoids as apigenin, lutolin, chrysoeriol and their glycosylated derivatives. Several glycosylated ent-labdanes were also identified, and the structure of a new labdane dihexoside was partially elucidated. In conclusion this study allowed a better knowledge of the phytochemistry of Swiss aquatic plants, and the isolation of new natural products with interesting biological and pharmacological properties.

Sonata 9 (Mesto)

Digitoitu 20. 8. 2008.

Untersuchungen zur Dynamik des Lipid-Metabolismus von Dictyostelium discoideum

Die soziale Waldamöbe Dictystelium discoideum ist ein etablierter Modellorganismus zur Erforschung grundlegender zellbiologischer Prozesse. Innerhalb der letzten Jahre konnte dabei insbesondere das Wissen zum Lipidmetabolismus umfassend erweitert werden. In diesem Zusammenhang spielt besonders eine Enzymgruppe eine wichtige Rolle: die LC/VLC-Acyl-CoA-Synthetasen. Diese übernehmen dabei die Aufgabe Fettsäuren zu aktivieren, um sie so dem Zellmetabolismus überhaupt erst zugänglich zu machen. D. discoideum verfügt über insgesamt vier dieser Enzyme: FcsA, FcsB, FcsC und das Bubblegum-Enzym Acsbg1. Während die FcsA und FcsB bereits in vorangegangenen Arbeiten untersucht wurden, werden die FcsC und die Acsbg1 in dieser Arbeit erstmals biologisch charakterisiert. Untersuchungen zur subzellulären Lokalisation der Proteine zeigen, dass die meisten LC/VLC-Acyl-CoA-Synthetase auf Endosomen und im Cytoplasma gefunden werden können (FcsA, FcsC und Acsbg1), während die FcsB als Transmembranprotein über das ER zu den Peroxisomen transportiert wird. Die Acsbg1 akkumuliert dabei zusätzlich an der Plasmamembran. Funktionell konnte gezeigt werden, dass neben der FcsA auch die Acsbg1 an der Bereitstellung von Acyl-CoA für Triacylglyceridsynthese beteiligt ist. Dabei besitzt die FcsA die Hauptenzymaktivität und kompensiert den Verlust der Acsbg1 in acsbg1- Zellen. In fcsA-/acsbg1- Zellen dagegen kommt der Verlust der Acsbg1 durch eine zusätzliche Verringerung des TAG-Gehaltes der Doppel-KOs im Vergleich zu fcsA- Zellen zum tragen. Alle vier Enzyme beeinflussen die Phagozytose. Dabei zeigen fcsA- und fcsC- Zellen eine gesteigerte Phagozytose in Gegenwart von der gesättigten Fettsäure Palmitinsäure im Kulturmedium. Auch der knockout der Acsbg1 wirkt sich positiv auf die Phagozytoserate aus, jedoch kommt auch nur dieser zum tragen, wenn neben der Acsbg1 auch die FcsA ausgeschaltet wird. Die FcsB dagegen zeigt eine dramatische Reduktion der Partikelaufnahme in nicht Fettsäure gefütterten Zellen. Durch die Zugabe einer exogenen Fettsäure kann dieser Effekt nicht kompensiert werden. Auch der zusätzliche Verlust der FcsA-Enzymaktivität verändert dieses Verhalten in Palmitinsäure inkubierten Zellen nicht. In fcsA-/fcsB- konnte zudem ein Defekt beim Abbau von Triacylglyceriden gefunden werden. Dieser Defekt liefert erste Hinweise für ein Modell, das den Abbau von LD gespeicherten Lipiden durch Autophagozytose in D. discoideum beschreibt. Peroxisomen sind wichtige Organellen für die Detoxifikation und die Oxidation von Fettsäuren. Durch das Ausschalten der Acaa1, der Thiolase, die den letzten Schritt der β-Oxidation in Peroxisomen katalysiert, zeigte sich ein verlangsamter Triacylglycerol-Abbau sowie eine verringerte Degradation des Etherlipids UKL und von Sterolestern, was auf eine Beteiligung der Peroxisomen beim Abbau von langkettigen Fettsäuren schließen lässt. Bei dem Versuch durch das Ausschalten des pex19-Gens eine Zelllinie zu generieren, die keine Peroxisomen besitzt, wurde die Organelle überraschender Weise, wenn auch mit einer vom Wildtyp abweichenden Morphologie, weiterhin vorgefunden. Dieser Befund korrelierte mit dem Resultat, dass trotzdem das pex19-Gen erfolgreich unterbrochen wurde, dennoch eine intakte Kopie des Gens nachgewiesen werden konnte. Dementsprechend sollte die erschaffene pex19- Zelllinie als knockdown und nicht als knockout gewertet werden. Der pex19 knockdown zeigte beim Abbau von Triacylglyceriden eine ähnliche Verlangsamung wie acaa1- Zellen. Zusätzlich wurde eine Verringerung der Synthese des Etherlipids UKL beobachtet, was darauf hindeutet, dass dieses Lipid im Peroxisom gebildet wird. Auch die Phagozytose und das Wachstum auf Bakterienrasen waren im pex19 knockdown dramatisch reduziert. Durch die Überexpression von Pex19-GFP im knockdown Hintergrund konnten die physiologischen Defekte in den meisten so generierten Zelllinien ausgeglichen werden. Lipid Droplets sind Organellen, die in Eukaryoten und Prokaryoten als Speicher für Neutralfette dienen und ebenfalls als Ort der Lipidsynthese fungieren. Um diese Aufgaben erfüllen zu können, besitzen sie auf ihrer Oberfläche Proteine, die für die Regulierung dieser Prozesse notwendig sind. Durch die weiterführende Analyse von Kandidatenproteinen, die durch eine proteomische Analyse von aufgereinigten LDs identifiziert wurden, konnte für vier weitere Proteine (Plsc1, Net4, Lip5 und Nsdhl) die LD-Assoziation durch GFP-Fusionsproteine bestätigt werden. Bei der Charakterisierung von plsc1 knockouts zeigte sich eine verminderte Fähigkeit beim Wachstum auf Bakterienrasen sowie eine erhöhte Phagozytoserate in Gegenwart einer exogenen Fettsäure, was auf eine Involvierung des Proteins in die Phospholipidsynthese hindeutet. Die bisher einzige identifizierte LD-assoziierte Lipase Lip5 nimmt nur eine untergeordnete Rolle bei der Hydrolyse von Triacylglycerolen und Sterolestern ein, da in KO-Mutanten nur ein milder Defekt beim Abbau beider Substanzen beobachtet werden konnte. Die LD-Lokalisation von Net4 ist evolutionär konserviert und kann nicht nur in D. discoideum beobachtet werden, sondern auch in humanen Zellen. Welche Funktion das Protein auf der LD-Oberfläche ausübt, konnte nicht geklärt werden. Allerdings kann ein direkter Einfluss auf den TAG- und Sterolaufbau ausgeschlossen werden. LDs stehen in engem Kontakt mit anderen Organellen, die in den Lipidmetabolismus involviert sind, wie mit den Mitochondrien oder dem ER. Durch Perilipin-Hybridproteine können künstliche, stabile Verbindungen zwischen LDs und diesen Organellen hergestellt werden. Dabei zeigte Perilipin ein sehr starkes Targeting-Potenzial, durch welches es notwendig war, als zweite Hybridhälfte ein Transmembranprotein zu wählen. Die Analyse eines Hybrids, das eine dauerhafte Verbindung von LDs und dem ER herstellt, wies dabeieine Reduktion der LD-Größe auf, wobei der Gesamt-TAG-Gehalt der Zellen unbeeinflusst blieb. Durch die starke Affinität von Perilipin für die Assoziation an LDs konnten durch die Generierung von Hybriden andere Proteine an die LD-Oberfläche dirigiert werden. Auf diese Weise konnte erfolgreich die LC-Acyl-CoA-Synthetase FcsA auf das LD transplantiert werden.

Precariedad, consumo responsable, agroecología, globalización, inmigración : periferias del sur y del norte.

Se trata de un material para utilizar tanto en ámbitos educativos formales como en contextos vinculados a los movimientos sociales. Las actividades están pensadas específicamente para chicas y chicos de un intervalo de edad de 14 a 18 años, pero muchas de ellas pueden ser útiles para el trabajo con personas adultas. Este material nace a partir de prácticas sociales concretas realizadas en los cinco años de existencia de la Asociación Cambalache. Está formada por dos capítulos: uno sobre inmigración y otro sobre consumo. Ambos tienen un texto introductorio y una propuesta de actividades. Varias de las actividades remiten a otros textos elaborados por Cambalache y a diferentes materiales audiovisuales. Estos textos y algunos de los audiovisuales se pueden encontrar en el DVD que se adjunta, cuyos contenidos son los siguientes: En el fichero 'Periferias del Sur y del Norte.pdf' se incluye el propio texto de la unidad didáctica. Los materiales complementarios a la primera parte, Contextualizando la inmigración, son: el documental 'La Valla de la Vergüenza', material de trabajo para la actividad del mismo título. Para la segunda parte, Agroecología y Consumo Responsable, los materiales complementarios son los documentales: 'A Tornallom', 'Gran Superficie' y 'La Agroecología y el Consumo Responsable' materiales de trabajo para las actividades del mismo título. Imágenes para la actividad 'Comer, beber, compartir', organizadas en carpetas tituladas Bloque 1, Bloque 2, Bloque 3, correspondientes a cada uno de los bloques propuestos en la actividad. Documento en formato PDF con anuncios publicitarios de alimentos para la actividad '¿Nos engaña la publicidad?', para la que se propone la utilización del primero de ellos; lógicamente, si el profesorado lo estima oportuno, pueden usarse también los demás. Para visualizar los documentales en el ordenador personal, puede usarse cualquier reproductor de vídeo, por ejemplo el VLC Media Player, aplicación de software libre que puede descargarse gratuitamente en Internet. Por último, para visualizar las imágenes, puede abrirse la carpeta correspondiente, seleccionando su presentación mediante Tira de Imágenes, o bien usar cualquier visor de imágenes o el propio reproductor de DVD, si dispone de soporte para visualizar el formato JPG.

Animal Biosafety Level 1 Training Video

This training video is intended to familiarise researchers and technicians working with Hazard Group 1 pathogens in Containment Level 1 animal facilities. It is in Flash video format which will require a free media player such as VLC Media Player (http://www.videolan.org/vlc/) to watch.

Animal Biosafety Level 3 Training Video

This training video is intended to familiarise researchers and technicians working with Hazard Group 3 pathogens in Containment Level 3 animal facilities. It is in Flash video format which will require a free media player such as VLC Media Player (http://www.videolan.org/vlc/) to watch.

HSE - Microbiological Safety Cabinet Training Video

This training video is intended to familiarise researchers and technicians, working with potentially airborne pathogens, on the correct and safe use of Microbiological Safety Cabinets. The video also provides instruction on cleaning, disinfection and fumigation regimes; maintenance and testing regimes; and commissioning and decommissioning requirements of such Local Exhaust Ventilation (LEV) systems. It is in Windows Media Video format which will require a free media player such as Windows Media Player or VLC Media Player (http://www.videolan.org/vlc/) to watch.

Animal Biosafety Level 2 Training Video

This training video is intended to familiarise researchers and technicians working with Hazard Group 2 pathogens in Containment Level 2 animal facilities. It is in Flash video format which will require a free media player such as VLC Media Player (http://www.videolan.org/vlc/) to watch.

Animal Biosafety Risk Assessment and Management Training Video

This training video is intended to familiarise researchers and technicians working in animal containment facilities with appropriate risk assessment and risk management systems. It is in Windows Media Video format which will require a free media player such as Windows Media Player or VLC Media Player (http://www.videolan.org/vlc/) to watch.

HPA ECAC Cell Culture Video Preview

This video provides a preview of the biosafety and operational/skills training video intended for researchers working with tissue and cell cultures at Containment Level 1 and 2. It is in AVI format which will require a free media player such as Windows Media Player or VLC Media Player (http://www.videolan.org/vlc/) to watch. Should you wish to reserve the full training DVD (35 minutes), please contact the Biosafety Officer.

Very long chain n-3 polyunsaturated fatty acids in the food chain in the UK and the potential of animal-derived foods to increase intake

The very long chain (VLC) n-3 polyunsaturated fatty acids (PUFA), particularly eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA), are widely recognised to have beneficial effects on human health. However, recommended intakes of VLC n-3 PUFA (450 mg/day) are not being met by the diet in the majority of the population mainly because of low consumption of oil-rich fish. Current mean intake of VLC n-3 PUFA by adults is estimated to be about 282 mg/day with EPA and DHA contributing about 244 mg/day. Furthermore, the fact that only about 27% of adults eat any oil-rich fish (excluding canned tuna) and knowledge of the poor conversion of α-linolenic acid to EPA and DHA in vivo, particularly in men, leads to the need to review current dietary sources of these fatty acids. Animal-derived foods are likely to have an important function in increasing intake and studies have shown that feeding fish oils to animals can increase the EPA and DHA content of the resulting food products. This paper highlights the importance of examining current and projected consumption trends of meat and other animal products when exploring the potential impact of enriched foods by means of altering animal diets. When related to current food consumption data, potential dietary intakes of EPA+DHA from foods derived from animals fed enriched diets are calculated to be about 231 mg/day. If widely consumed, such foods could have a significant impact on progression of conditions such as cardiovascular disease. Consideration is also given to the sources of VLC n-3 PUFA in animal diets, with the sustainability of fish oil being questioned and the need to investigate the use of alternative dietary sources such as those of algal origin.

The role of meat as a source of n-3 polyunsaturated fatty acids in the human diet

It is considered that consumption of very long chain (VLC, carbon chain length >= 20) n - 3 PUFAs in most Western populations is sub-optimal and benefits in relation to chronic disease would be gained from increased consumption. This review examines the current contribution that meat makes to dietary intake of VLC n - 3 PUFA and given its current low contribution, how ruminant meat may be enriched. Enrichment both directly with VLC n - 3 fatty acids and indirectly by increasing intake by the animals of alpha-linolenic acid (ALNA; C 18:3 n - 3) are considered. Since it now appears that dietary ALNA is a very limited source of VLC n - 3 PUFA in humans, the indirect route is controversial but since some forages-are rich sources of ALNA this route has many sustainability and environmental attractions. Consideration is also given to the increased concentrations of trans and conjugated fatty acids that will arise from enriching ruminant meat with PUFA.

The role of meat as a source of n-3 polyunsaturated fatty acids in the human diet

It is considered that consumption of very long chain (VLC, carbon chain length >= 20) n - 3 PUFAs in most Western populations is sub-optimal and benefits in relation to chronic disease would be gained from increased consumption. This review examines the current contribution that meat makes to dietary intake of VLC n - 3 PUFA and given its current low contribution, how ruminant meat may be enriched. Enrichment both directly with VLC n - 3 fatty acids and indirectly by increasing intake by the animals of alpha-linolenic acid (ALNA; C 18:3 n - 3) are considered. Since it now appears that dietary ALNA is a very limited source of VLC n - 3 PUFA in humans, the indirect route is controversial but since some forages-are rich sources of ALNA this route has many sustainability and environmental attractions. Consideration is also given to the increased concentrations of trans and conjugated fatty acids that will arise from enriching ruminant meat with PUFA.

Ultrafast charge separation in a photoreactive rhenium-appended porphyrin assembly monitored by picosecond transient infrared spectroscopy

Rhenium(bipyridine)(tricarbonyl)(picoline) units have been linked covalently to tetraphenylmetalloporphyrins of magnesium and zinc via an amide bond between the bipyridine and one phenyl substituent of the porphyrin. The resulting complexes, abbreviated as [Re(CO)(3)(Pic)Bpy-MgTPP][OTf] and [Re(CO)(3)(Pic)Bpy-ZnTPP][OTf], exhibit no signs of electronic interaction between the Re(CO)(3)(bpy) units and the metalloporphyrin units in their ground states. However, emission spectroscopy reveals solvent-dependent quenching of porphyrin emission on irradiation into the long-wavelength absorption bands localized on the porphyrin. The characteristics of the excited states have been probed by picosecond time-resolved absorption (TRVIS) spectroscopy and time-resolved infrared (TRIR) spectroscopy in nitrile solvents. The presence of the charge-separated state involving electron transfer from MgTPP or ZnTPP to Re(bpy) is signaled in the TRIR spectra by a low-frequency shift in the nu(CO) bands of the Re(CO)(3) moiety similar to that observed by spectroelectrochemical reduction. Long-wavelength excitation of [Re(CO)(3)(Pic)Bpy-MTPP][OTf] results in characteristic TRVIS spectra of the S-1 state of the porphyrin that decay with a time constant of 17 ps (M = Mg) or 24 ps (M = Zn). The IR bands of the CS state appear on a time scale of less than 1 ps (Mg) or ca. 5 ps (Zn) and decay giving way to a vibrationally excited (i.e., hot) ground state via back electron transfer. The IR bands of the precursors recover with a time constant of 35 ps (Mg) or 55 ps (Zn). The short lifetimes of the charge-transfer states carry implications for the mechanism of reaction in the presence of triethylamine.

Rhenium-to-benzoylpyridine and rhenium-to-bipyridine MLCT excited states offac-[Re(Cl)(4-benzoylpyridine)2(CO)3] andfac-[Re(4-benzoylpyridine)(CO)3(bpy)]+: a time-resolved spectroscopic and spectroelectrochemical study

The lowest allowed electronic transition of fac-[Re(Cl)(CO)(3)(bopy)(2)] (bopy = 4-benzoylpyridine) has a Re --> bopy MLCT character, as revealed by UV-vis and stationary resonance Raman spectroscopy. Accordingly, the lowest-lying, long-lived, excited state is Re --> bopy (MLCT)-M-3. Electronic depopulation of the Re(CO)(3) unit and population of a bopy pi* orbital upon excitation are evident by the upward shift of v(Cequivalent toO) vibrations and a downward shift of the ketone v(C=O) vibration, respectively, seen in picosecond time-resolved IR spectra. Moreover, reduction of a single bopy ligand in the (MLCT)-M-3 excited state is indicated by time-resolved visible and resonance Raman (TR3) spectra that show features typical of bopy(.-). In contrast, the lowest allowed electronic transition and lowest-lying excited state of a new complex fac-[Re(bopy)(CO)(3)(bpy)](+) (bpy = 2,2'-bipyridine) have been identified as Re --> bpy MLCT with no involvement of the bopy ligand, despite the fact that the first reduction of this complex is bopy-localized, as was proven spectroelectrochemically. This is a rare case in which the localizations of the lowest MLCT excitation and the first reduction are different. (MLCT)-M-3 excited states of both fac-[Re(Cl)(CO)(3)(bopy)(2)] and fac-[Re(bopy)(CO)(3)(bpy)](+) are initially formed vibrationally hot. Their relaxation is manifested by picosecond dynamic shifts of v(Cequivalent toO) IR bands. The X-ray structure of fac-[Re(bopy)(CO)(3)(bpy)](PF6CH3CN)-C-. has been determined.