Rapid genotyping of loci involved in antifolate drug resistance in Plasmodium falciparum by primer extension

Current methods used to genotype point mutations in Plasmodium falciparum genes involved in resistance to antifolate drugs include restriction digestion of PCR products, allele-specific amplification or sequencing. Here we demonstrate that known point mutations in dihydrofolate reductase and dihydropteroate synthase can be scored quickly and accurately by single-nucleotide primer extension and detection of florescent products on a capillary sequencer. We use this method to genotype parasites in natural infections from the Thai-Myanmar border. This approach could greatly simplify large-scale screening of resistance mutations of the type required for evaluating and updating antimalarial drug treatment policies. The method can be easily adapted to other P. falciparum genes and will greatly simplify scoring of point mutations in this and other parasitic organisms. © 2002 Australian Society for Parasitology Inc. Published by Elsevier Science Ltd. All rights reserved.

Resistência do Plasmodium falciparum ao fansidar, quinina e tetraciclina

Descreve-se pela primeira vez uma cêpa amazônica de Plasmodium falciparum resistente ao Fansidar (pirimetamina mais sulfadoxina) e quinino mais tetraciclina simultaneamente. O paciente, com 13 anos de idade, residia há cinco anos em Ariquemes, Estado de Rondônia, na Amazônia brasileira. A infecção foi curada com dose elevada de cloroquina administrada em dose única intravenosa (IV). É evidenciado o alto valor da cloroquina na cura da malária falciparum resistente, quando administrada em doses maiores que as usadas nos esquemas convencionais de tratamento.

Malária falciparum resistente à cloroquina e ao Fansidar R tratada com minociclina

Em abril de 1978 uma infecção malárica causada por Plasinodium falciparum foi diagnosticada em um paciente adulto do sexo masculino, nativo da Amazônia brasileira. O parasito foi resistente in vitro à cloroquina e in vivo à associação pirimetamina + sulfadoxina (FansidarR). O paciente foi tratado com minociclina (MinomaxR); contudo, sua resposta imune ao parasito pode ter tido um importante papel na eficácia do tratamento com a minociclina.

New insights into host-parasite ubiquitin proteome dynamics in P. falciparum infected red blood cells using a TUBEs-MS approach

Malaria, caused by Plasmodium falciparum (P. falciparum), ranks as one of the most baleful infectious diseases worldwide. New antimalarial treatments are needed to face existing or emerging drug resistant strains. Protein degradation appears to play a significant role during the asexual intraerythrocytic developmental cycle (IDC) of P. falciparum. Inhibition of the ubiquitin proteasome system (UPS), a major intracellular proteolytic pathway, effectively reduces infection and parasite replication. P. falciparum and erythrocyte UPS coexist during IDC but the nature of their relationship is largely unknown. We used an approach based on Tandem Ubiquitin-Binding Entities (TUBEs) and 1D gel electrophoresis followed by mass spectrometry to identify major components of the TUBEs-associated ubiquitin proteome of both host and parasite during ring, trophozoite and schizont stages. Ring-exported protein (REX1), a P. falciparum protein located in Maurer's clefts and important for parasite nutrient import, was found to reach a maximum level of ubiquitylation in trophozoites stage. The Homo sapiens (H. sapiens) TUBEs associated ubiquitin proteome decreased during the infection, whereas the equivalent P. falciparum TUBEs-associated ubiquitin proteome counterpart increased. Major cellular processes such as DNA repair, replication, stress response, vesicular transport and catabolic events appear to be regulated by ubiquitylation along the IDC P. falciparum infection.

Malaria at Humaita county, Amazonas state, Brazil: XVII — immune response in patients with Plasmodium falciparum according to gametocytes

In August 1983 the Authors studied 36 patients with Plasmodium falciparum malaria and 14 normal individuals born in Humaita region who had never had malaria, had no spleen enlargement and had negative parasitemia as well as passive hemagglutination. Medical histories were obtained and complete physical examination were performed in all of them just as blood tests, parasite density and lymphocyte typing. The lymphocytes were separated and then frozen in liquid nitrogen for later typing by rosette formation. The patients were divided in two groups according to the presence (13 patients) or abscence (23 patients) of gametocytes before treatment. Severe malaria was predominant in the group without gametocytes. The results showed a decrease in the T-cell numbers in Plasmodium falciparum acute malaria patients both with or without gametocytes before the treatment, while B-cell numbers were normal only in the patients with gametocytes. These observations as like as those previously reported by the Authors, permit to associate the presence of gametocytes in peripheral blood and normal number of B-cells in patients with mild Plasmodium falciparum malaria.

Caracterização de cepas de P. falciparum coletadas de pacientes recrudescentes

A caracterização de cepas de P. falciparum coletadas de três pacientes internados no Centro de Provas Clínico-Farmacológicas do Hospital Barros Barreto (Belém, PA), através da eletroforese em acetato de celulose para duas enzimas (GPI e ADA), assim como através de testes de sensibilidade para duas drogas, cloroquina e mefloquina, permitiram observações da variação dos tipos enzimáticos em um dos pacientes e modificação no nível de sensibilidade à cloroquina em outro, tanto em amostras obtidas da infecção original, como em cada uma das recrudescências.

Prevalence of anti-p: Falciparum sporozoite antibodies in adults in the amapa region of Brazil

17 of 20 adult sera from the Amapa region of Brazil were active in the inhibition of P. falciparum sporozoite invasion (ISI) assay which has been correlated with protective antibodies. In contrast 11 sera were positive in IFA tests and 6 were positive in CSP tests. These results suggest that the ISI assay will be useful for evaluating naturally acquired protective anti-sporozoite antibodies in endemic areas, particularly during vaccine efficacy studies using sporozoite-based vaccines.

Caracterização de cepas de plasmodium falciparum do Estado de Rondônia, Brasil, utilizando microtestes de sensibilidade aos antimaláricos, tipificação enzimática e anticorpos monoclonais

Nove amostras de Plasmodium falciparum foram coletadas de migrantes infectados no Estado de Rondônia. Estas amostras foram mantidas em cultivo para caracterização por tipificação enzimática em acetato de celulose, sensibilidade á cloroquina, amodiaquina, mefloquina e quinino e análise da diversidade antigê-nica através de anticorpos monoclonais específicos. Os resultados obtidos mostraram variação entre todas as amostras estudadas: encontrou-se resistência crescente à cloroquina, resistência intermediária à amodiaquina e quinino e sensibilidade a baixos níveis de mefloquina; apenas dois isolados mostraram sensibilidade a todas as drogas. A tipificação enzimática mostrou presença de parasitas GPI 1 e 2 e ADA 1 e 2, enquanto que para PEP e LDH todas as amostras foram do tipo 1. Sorotipagem com anticorpos monoclonais PSA mostrou presença de três sorotipos diferentes (II, III e IV). Estes resultados mostraram: a) variação entre as amostras para os marcadores analisados; b) nesta região, para o pequeno número de amostras analisadas, não foram observadas diferenças significativas ou novos tipos de parasitas.

Manifestações respiratórias na malária por Plasmodium falciparum e Vivax: vivax

Foram selecionados 110 pacientes que procuraram a SUCAM/CUIABÁ para diagnóstico e tratamento de malária, com queixa de febre e procedente de área malarígena. Nestes pacientes foram realizados: gota espessa para a pesquisa de Plasmodium; aplicação de questionário padronizado para detectar sintomas respiratórios presentes no momento da entrevista; gasometria arterial e espirometria para avaliar a função pulmonar. Desta amostra, 62 pacientes foram positivos para malária sendo 41 P. vivax, 20 P. falciparum e 01 forma mista (grupo Malárico); 48 mostraram-se negativos à pesquisa de hematozoários através da gota espessa (grupo Não Malárico). As manifestações respiratórias encontradas nesta população quando comparadas os grupos Malárico e Não Malárico, foram respectivamente: 1º) Sintomáticos Respiratórios de 46,8% para 22 9% (p < 0,05); 2°) Alterações Espirométricas de 53,2% para 20,8% (p < 0,05); 3°) Alterações Gasométricas de 62,9% para 25,0% (p < 0,05). Com estes resultados concluímos que há nítida associação entre a Malária produzida pelo P. vivax e P. falciparum e as manifestações respiratórias apresentadas, nesta população de estudo.

Estudos "in vitro" dos níveis de resistência do Plasmodium falciparum a drogas, de 1983 a 1986

Foram realizados 171 testes de sensibilidade (microtécnica) com cepas de Plasmodium falciparum da Região Amazônica brasileira para cloroquina, mefloquina, amodiaquina e quinino. Os testes tiveram duração de 24 horas com as drogas preparadas na hora da realização de cada teste. Os resultados mostraram elevada resistência a cloroquina (83%) e sensibilidade em quase a totalidade das amostras testadas para mefloquina (97,7%). Para amodiaquina e quinino observou-se sensibilidade em 51,0% e 56,5% das cepas, respectivamente. Este estudo demonstra a emergência de um possível foco de resistência do Plasmodium falciparum a mefloquina, em Tucuruí.

Malária no município de Humaitá, estado do Amazonas: XXI. Prevalência da deficiência de glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) Em amostra da população e em doentes com malaria causada pelo Plasmodium falciparum

Os autores estudaram a prevalência da deficiência de glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD), pelo método de BREWER et alii, em 141 indivíduos da população do município de Humaitá, Estado do Amazonas. Destes, 128 eram amazônides, 67 dos quais nunca tiveram malária, enquanto que 61 tinham tido ou estavam tendo a doença; os 13 restantes que estavam com malária não eram arnazônides. Os resultados revelaram que 7 arnazônides (4,96%), eram deficientes. Destes, 5 eram do sexo feminino e 2 do masculino. Em todos os indivíduos do sexo feminino o teste foi positivo com comportamento do tipo heterozigoto. Dos indivíduos deficientes, 4 nunca tinham tido malária; dos outros 3, 2 apresentavam a reação de hemaglutinação positiva com título 1/16 e o terceiro estava tendo malária causada pelo Plasmodium falciparum pela primeira vez. Este doente apresentou forma benigna de malária evoluindo para cura clínica e parasitológica no 3.° dia de tratamento com a clindamicina. Nenhum dos 13 doentes não arnazônides apresentava deficiência de G6PD. Dessa forma, não houve diferença na prevalência da deficiência de G6PD em arnazônides que nunca tiveram malária e em arnazônides que tinham tido ou estavam tendo a doença. Portanto, os indivíduos com deficiência de G6PD estão sujeitos a infecções por Plasmodium falciparum na mesma proporção que os não deficientes. Por outro lado, o aumento da prevalência da deficiência de G6PD, na amostra estudada, poderia estar relacionado com a pressão seletiva exercida pela malária em população submetida à homozigose.

"In vitro" activity of gentian violet against asexual Plasmodium falciparum parasites

In order to investigate whether gentian violet exhibited "in vitro" inhibitory activity against Plasmodium falciparum, the Authors have carried out 20 sensitivity tests according to the microtechnique described by RIECK MANN et al.5. Results have shown inhibition of schizonts'maturation at the following concentration: 1/1000; 1/1500; 1/2000; 1/2500; 1/3000 and 1/4000, thus demonstrating inhibitory activity of the tested dye against asexual blood parasites. The present data suggest gentain violet may be possibly used in the prophylaxis of transfusion-acquired malaria.

Avaliação da resposta do Plasmodium falciparum à cloroquina, quinino e mefloquina

Nosso estudo envolveu a análise de cepas de Plasmodium falciparum provenientes da Região Amazônica Brasileira, coletadas no Laboratório de Malária da SUCEN. Os estudos "in vitro" foram efetuados com a cloroquina (46 ensaios), quinino (42 ensaios) e mefloquina (51 ensaios). Os resultados mostraram resistência de 100% em relação à cloroquina, 2,4% ao quinino e 31,4% à mefloquina, na análise "in vitro". Sete pacientes foram tratados com quinino isolado e nove com a associação mefloquina + pirimetamina-sulfadoxina, não mostrando correlação com os testes "in vitro".

Plasmodium falciparum drug resistance in Angola

Facing chloroquine drug resistance, Angola promptly adopted artemisinin-based combination therapy as the first-line to treat malaria. Currently, the country aims to consolidate malaria control, while preparing for the elimination of the disease, along with others African countries in the region. However, the remarkable capacity of Plasmodium to develop drug resistance represents an alarming threat for those achievements. Herein, the available, but relatively scarce and dispersed, information on malaria drug resistance in Angola, is reviewed and discussed. The review aims to inform but also to encourage future research studies that monitor and update the information on anti-malarial drug efficacy and prevalence of molecular markers of drug resistance, key fields in the context and objectives of elimination.