Effect of substituent on the thermodynamics of D-glucopyranoside binding to concanavalin A, pea (Pisum sativum) lectin and lentil (Lens culinaris) lectin

Titration calorimetry measurements of the binding of phenyl-alpha (alpha PhOGlu), 3-methoxy (3MeOGlu), fluorodeoxy and deoxy derivatives of alpha-D-glucopyranose (Glu) to concanavalin A (conA), pea lectin and lentil lectin were performed at approx. 10 and 25 degrees C in 0.01 M dimethylglutaric acid/NaOH buffer, pH 6.9, containing 0.15 M NaCl and Mn2+ and Ca2+ ions. Apparently the 3-deoxy, 4-deoxy and 6-deoxy as well as the 4-fluorodeoxy and 6-fluorodeoxy derivatives of Glu do not bind to the lectins because no heat release was observed on the addition of aliquots of solutions of these derivatives to the lectin solutions. The binding enthalpies, delta H0b, and entropies, delta S0b, determined from the measurements were compared with the same thermodynamic binding parameters for Glu, D-mannopyranoside and methyl-alpha- D-glucopyranoside (alpha MeOGlu). The binding reactions are enthalpically driven with little change in the heat capacity on binding, and exhibit enthalpy-entropy compensation. Differences between the thermodynamic binding parameters can be rationalized in terms of the interactions apparent in the known crystal structures of the methyl-alpha-D-mannopyranoside-conA [Derewenda, Yariv, Helliwell, Kalb (Gilboa), Dodson, Papiz, Wan and Campbell (1989) EMBO J. 8, 2189-2193] and pea lectin-trimanno-pyranoside [Rini, Hardman, Einspahr, Suddath and Carber (1993) J. Biol. Chem. 268, 10126-10132] complexes. Increases in the entropy change on binding are observed for alpha MeOGlu binding to pea and lentil lectin, for alpha PhOGlu binding to conA and pea lectin, and for 3MeOGlu binding to pea lectin relative to the entropy change for Glu binding, and imply that the phenoxy and methoxy substituents provide additional hydrophobic interactions in the complex. Increases in the binding enthalpy relative to that of Glu are observed for deoxy and fluoro derivatives in the C-1 and C-2 positions and imply that these substituents weaken the interaction with the surrounding water, thereby strengthening the interaction with the binding site.

Modes of binding of α(1–2) linked manno-oligosaccharides to concanavalin A

Three-dimensional structures of the complexes of concanavalin A (ConA) with alpha(1-2) linked mannobiose, triose and tetraose have been generated with the X-ray crystal structure data on native ConA using the CCEM (contact criteria and energy minimization) method. All the constituting mannose residues of the oligosaccharide can reach the primary binding site of ConA (where methyl-alpha-D-mannopyranose binds). However, in all the energetically favoured complexes, either the non-reducing end or middle mannose residues of the oligosaccharide occupy the primary binding site. The middle mannose residues have marginally higher preference over the non-reducing end residue. The sugar binding site of ConA is extended and accommodates at least three alpha(1-2) linked mannose residues. Based on the present calculations two mechanisms have been proposed for the binding of alpha(1-2) linked mannotriose and tetraose to ConA.

成熟番茄果实多聚半乳糖醛酸酶（PG）cDNA克隆

本研究以成熟的番茄果实为材料，以其中提取总RNA，通过O1igo(dT)纤维素亲合层析，获得了mRNA。以该mRNA为模板，以Oligo(dT)为引物合成了相应的cDNA，将其克隆到载体入gtll中，构建了一个滴度(titer)为7×105pfu，重组率高于90％的番茄果实的cDNA文库。与此同时，利用PCR技术，以上述cONA为模板，扩增到了一个含有全部阅读框架的PG cDNA片段，将该片段克隆到质粒pBluescript中，该克隆的酶切分析和部分序列分析与Grieson等发表的完全一致，表明扩增到的片段确系PG的cDNA。由于上述片段不含PG的3'非编码区，因此以上述PCR片段的部分序列为探针，对cONA文库进行筛选。通过两轮噬菌斑原位杂交，获得了11个阳性克隆，利用PCR将它们从入gtli中亚克隆到质粒pBlusoript上，对其中一个1.0kb的片段进行部分序列分析，表明其5，末端缺少800bp，3'端完整，含有一个I3个A的多聚A尾。将找们测得的序列与国外发表的比较，没有发现因PCR技术产生的错误，证明PCR是一种克隆基因的可靠方法。目前已将PCR扩增的含有全部阅读框架的1.5kb片段以反方向插入到pBl121的衍生质粒pBin437中构建表达反义RNA的双元载体中，正在对其重组子进一步鉴定。

复方昆明山海棠颗粒对小鼠淋巴细胞体外增殖活化影响的研究

目的:研究复方昆明山海棠颗粒(composite tripterygium hypoglaucum hutch, CTHH)对小鼠脾淋巴细胞增殖、活化标志CD69和CD25及细胞因子IL-4及γ-IFN的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据.方法:无菌分离小鼠脾淋巴细胞,加入不同浓度的复方昆明山海棠颗粒溶液,MTT法检测ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖;流式细胞仪检测活化标志CD69及CD25;酶联免疫法检测细胞因子IL-4及γ-IFN.结果: CTHH对脾淋巴细胞增殖活化及分泌均有抑制作用.

欧洲鳗鲡淋巴细胞转化试验条件的建立

通过对培养时间、培养温度、刀豆蛋白A(ConA)质量浓度和鳗鲡血清质量分数4个参数的测定,确定欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的实验条件。结果表明,在培养时间为42-90 h,培养温度分别为15.0℃、20.0℃、25.0℃和30.0℃时,细胞培养液中ConA质量浓度分别为0、10μg/mL、20μg/mL和30μg/mL,鳗鲡血清质量分数分别为0、5%、10%和15%时,淋巴细胞于20.0℃、含10μg/mL ConA,10%鳗鲡血清的RPMI

鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验培养条件的初步研究

探讨鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验的最优条件,为鳗鲡的细胞免疫研究提供方法。通过对培养时间、培养温度、小牛血清和刀豆蛋白A(ConA)浓度4个参数的测定,初步确定了鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的培养条件。结果表明,在培养时间60 h和68 h,培养温度为18.0℃、24.0℃、30.0℃,RPMI细胞培养液中小牛血清浓度为5%、10%和15%,ConA浓度为0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL的范围内,淋巴细胞于18.0℃、含10μg/mL ConA和15%小牛血

草鱼、中华鳖脾细胞培养上清液IL-2物质的检测

用刀豆蛋白A(ConA)刺激诱导草鱼和中华鳖脾细胞 ,收集细胞培养上清液 ,用小鼠胸腺细胞增殖试验和对小鼠L92 9细胞系杀伤试验检测上清液中白细胞介素 2 (简称IL 2 )活性。结果表明 :草鱼、中华鳖脾细胞培养上清液中有IL 2样活性物质 ,这种物质使小鼠的胸腺细胞3H TdR掺入量明显增加 ,在相同效靶比的条件下对小鼠L92 9细胞系杀伤率也显著增强 ,这种IL 2活性均能被抗人rIL 2血清所抑制。中华鳖脾细胞培养上清液 (含IL 2 )对中华鳖胸腺细胞也有较明显的促增殖作用并能消除兔抗中华鳖胸

川牛膝多糖的免疫活性及其水解活性片段分离研究

川牛膝多糖（CP）是从传统中药川牛膝（Cyathula officinalis Kuan）中提取的一种活性多糖，现代药理研究表明川牛膝多糖是川牛膝许多生物活性的物质基础。本实验室前期进行了川牛膝多糖的提取、分离、结构鉴定及其部分活性研究，发现川牛膝中多糖含量非常高，在对川牛膝多糖活性的初步研究中也证实了其具有免疫调节作用。我们为了进一步了解其免疫调节活性，并为构效关系的研究奠定基础，对其进行了如下研究： 1． 通过体外毒性检测、淋巴细胞增殖实验、NK细胞杀伤活性和腹腔巨噬细胞吞噬中性红活性测定，发现川牛膝多糖在10～300μg/mL浓度范围内，对细胞无毒性作用；能够促进LPS诱导的B淋巴细胞增殖(P<0.01)、增强NK细胞杀伤活性(P<0.05)和PMΦ吞噬中性红活性(P<0.01)，且随多糖浓度增高而增强；但其对ConA诱导的T淋巴细胞的增殖无促进作用(P>0.05)。 2． 通过正常小鼠体内淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应分析、抗体生成细胞检测、碳粒廓清检测、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活性和NK细胞活性测定，发现川牛膝多糖在适应性免疫方面能够促进SRBC免疫小鼠体内的抗体生成细胞的生成（P<0.01）和增强DNFB诱导的DTH（P<0.05），但对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖无促进作用（P>0.05）；在固有免疫方面能够提高小鼠碳粒廓清速率（P<0.05），PMΦ吞噬 CRBC 活性（P<0.01）和NK细胞杀伤活性（P<0.05）。同时还发现其对由环磷酰胺(Cy)引起的白细胞数下降具有很好的抑制作用（P<0.01）。 3． 为了获得结构明确、均一的保留活性的川牛膝多糖片段，为其作用机制、构效关系研究提供关键研究材料，我们开展了“保留免疫活性的最小片段”的分离制备的初步研究。建立并优化了川牛膝多糖的酸水解条件，发现在6%的样品浓度，0.025mol/L的硫酸浓度，65℃的水解温度，水解时间为8min的条件下可以得到一系列连续的多糖片段；采用Bio-Gel P2 分子筛柱层析分离得到5个级分，通过体外淋巴细胞增殖实验、NK细胞活性测定、腹腔巨噬细胞吞噬中性红实验发现其中的一个片段仍保留较强的免疫活性，并测得其分子量约为2057Da，为保留免疫活性的最小片段的进一步分离奠定了基础。 Cyathula officinalis Kuan is a commonly-used Traditional Chinese Medicine (TCM) with a wide range of pharmacological activities. Modern pharmacological researches showed the polysaccharide extracted from it (CP) is an important component for many bioactivities of this TCM. In the previous studies, we found CP showed significant immuno-regulative activities. In order to evaluate this activity systematically and lay foundations for revealling its immuno-regulative machanisms and the Structure -Function relationship, we carried out the following research works: 1． The in vitro immunoactivities of CP were evaluated by using normal mice immunocytes with respects to cytotoxicity, lymphocytes proliferation, NK activity and the ability of peritoneal macrophage phagocytizing neutral red. The polysaccharide showed no cytotoxicity below the concentration of 300 μg/mL, and could promote B lymphocytes proliferation (P<0.01), enhance NK activity (P<0.05) and the ability of peritoneal macrophage phagocytizing neutral red (P<0.01) at the concentration of 10-300 μg/mL. The above effects were positively correlated with the concentration of the polysaccharides. But it could not promote T lymphocytes proliferation (P>0.05). 2． The in vivo immunoactivities of CP were observed on normal mice through the following indices: splenic lymphocyte transformation efficiency, delayed-type allergy, antibody-forming cells activity (AFC), rate of carbon clearance, rate of peritoneal macrophage phagocytizing chicken red blood cell (CRBC) and NK activity, and its influence on the decline of the mouse leucocyte count induced by Cy. The polysaccharide at medium-dose enhanced delayed-type allergy （P<0.05）and NK activity（P<0.05） and increased the rate of carbon clearance（P<0.05）, AFC activity（P<0.01） and the rate of peritoneal macrophage phagocytizing CRBC（P<0.01）. The polysaccharides also effectively resisted the decline of the mouse leucocyte count induced by Cy（P<0.01）. However, it couldn’t increase the splenic lymphocyte transformation efficiency（P>0.05）. 3． Attempting to isolate and prepare the minimal fragments retaining activity with identical structure for further studying on immuno-regulative mechanism and Structure-Function relationship, we carried out the study on hydrolysis of CP, isolation of hydrolysed fragments, and the activity evaluation of the isolated fragments. CP with concentration of 6% was hydrolysed at 65℃ for 8 min with sulfuric acid of 0.025 mol/L，then the hydrolysate was separated using Bio-Gel P2 chromatography, 5 portions of fragments were obtained. The immunoactivities of these fragments were evaluated by using normal mice immunocytes with respect to lymphocytes proliferation, NK activity and ability of peritoneal macrophage phagocytizing neutral red. One fragment with relative molecular mass of 2057Da was found retaining immunoactivity.

虎眼万年青多糖对小鼠免疫功能的调节作用

依据虎眼万年青组分中多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响,筛选并优化出60%醇浓度中性多糖活性组分S3,进而研究其对体液免疫、细胞免疫及细胞因子变化的影响,并从细胞和分子水平探讨其作用的机理.方法:采用溶血素测定方法,测定S3对小鼠脾细胞溶血素抗体的诱导作用;采用3H-TdR渗入法,测定S3对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞的增殖作用;采用3H-TdR后标记法,测定S3对NK细胞细胞毒活性的影响;以ELISA法测定S3对小鼠脾细胞IL-2产生的影响;利用流式细胞术,检测S3对T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8阳性细胞百分率的影响;采用RT-PCR方法检测IL-2 mBNA的表达水平.结果:S3高、中剂量组能明显增强小鼠脾细胞溶血素抗体的形成(P<0.05);各剂量组均能明显增强ConA诱导的淋巴细胞增殖能力(P<0.001);各剂量组均能增强NK细胞的细胞毒活性并促进IL-2的产生(P<0.001,P<0.01);高、中剂量组CD8阳性细胞百分率明显降低(P<0.001),各剂量组均能显著地提高CD4/CD8阳性细胞百分率(P<0.001);高剂量组可明显促进脾细胞中细胞因子IL-2的mRNA表达,使表达量增加(P<0.05).结论:S3具有较强的增强机体多种免疫功能的作用,可利用开发为一种免疫增强药物.

条件反射性免疫抑制及其脑机制的c-fos研究

To explore the neural mechanisms underlying conditioned immunomodulation, this study employed the classical taste aversion (CTA) behavioral paradigm to establish the conditioned humoral and cellular immunosuppression (CIS) in Wistar rats, by paring saccharin (CS) with intraperitoneal (i.p.) injection of an immunosuppressive drug cyclophophamide (UCS). C-fos immunohistochemistry method was used to observe the changes of the neuronal activities in the rat brain during the acquisition, expression and extinction of the conditioned immunosuppression (CIS). The followings are the main results: 1. Five days after one trial of CS-UCS paring, reexposure to CS alone significantly decreased the level of the anti-ovalbumin (OVA) IgG in the peripheral serum. Two trials of CS-UCS paring and three reexposures to CS not only resulted in further suppression of the primary immune response, but also reduced the numbers of peripheral lymphocytes and white blood cells. This finding indicates that CS can induce suppression of the immune function, and the magnitude of the effects is dependent on the intensity of training. 2. On day 5 following two trials of CS-UCS pairing, CS suppressed the spleen lymphocytes responsiveness to mitogens ConA, PHA and PWM, and decreased the numbers of peripheral lymphocytes and white blood cells. On day 15, only PHA induced lymphocyte proliferation was suppressed by CS. On day 30, presentation of CS did not have any effect on these immune parameters. These results suggest that the conditioned suppression of the cellular immune function can retain 5-15 days, and extinct after 30 days. 3. CTA was easily induced by one or two CS-UCS parings, and remained robust even after 30 days. These data demonstrate that CIS can be dissociated from CTA, and they may be mediated by different neural mechanisms. 4. Immunohistochemistry assays revealed a broad pattern of c-fos expression throughout the rat brain following the CS-UCS pairing and reexposure to CS, suggesting that many brain regions are involved in CIS. Some brain areas including the solitary tract nucleus (Sol), lateral parabrachial nucleus (LPB) and insular cortex (IC), showed high level c-fos expressions in response to both CS and UCS, suggesting that they may be involved in the transmission and integration of the CS and UCS signals in the brain. There were dense c-FOS positive neurons in the paraverntricular nucleus (PVN) and supraoptic nucleus (SO) of hypothalamus, subfornical organ (SFO) and area postrema (AP) etc. after two trials of CS-UCS paring and after the reexposure to CS 5 days later, but not in the first training and after the extinction of CIS (30 days later). The results reflect that these nuclei may have an important role in CIS expression, and may also response to the immunosuppression of UCS. The conditioned training and reexposure to CS 5 days later induced high level c-fos expression in the cingulate cortex (Cg), central amygdaloid nucleus (Ce), intermediate part of lateral septal nucleus (LSI) and ventrolateral parabrachial nucleus (VLPB) etc. But c-fos induction was not apparent when presenting CS 30 days later. These brain regions are mainly involved in CIS, and may be critical structures in the acquisition and expression of CIS. Some brain regions, including the frontal cortex (Fr), ventral orbital cortex (VO), IC, perirhinal cortex (PRh), LPB and the medial part of solitary nucleus (SolM), showed robust c-FOS expression following the conditioning training and reexposure to CS both on day 5 and day 30, suggesting that they are critically involved in CTA.

Trójpłaszczyznowa Szachownica. Segmentacja „Wielkiej Polityki” w rozważaniach Josepha Nye’a

Autor książki: Wielka szachownica. Cele polityki amerykańskiej (Warszawa 1998) postrzega stosunki wzajemne pośród uczestników areny międzynarodowej jako wielką szachownicę, na której toczy się pomiędzy nimi „Wielka Polityka” (gra). Sytuacja światowa rozgrywa się, według niego, na jednej szachownicy (arenie międzynarodowej), a uczestnicy „gry” zajmują pozycje pionków. Jest to, więc swoista partia szachów, gdzie silniejszy zdobywa prestiż, pieniądze i władzę, natomiast słabszy przegrywa wszystko, osiągając marginalne znaczenie na globalnej szachownicy. Z kolei J. Nye eksponuje trzy płaszczyzny tej samej szachownicy, a mianowicie: potęgę militarną, gospodarczą oraz „miękkie środki oddziaływania politycznego”, wokół których toczy się polityka międzynarodowa. Jego trylogia poświęcona postrzeganiu potęgi państw powinna być lekturą obowiązkową, skierowaną przede wszystkim do polityków i mężów stanu, z przesłaniem, aby wskazane przez autora czynniki siły stosowali w praktyce, co pomoże im lepiej władać państwem. Jest to także książka przeznaczona dla wszystkich zainteresowanych polityką i jej zagadnieniami związanymi z percepcją potęgi. W niniejszej rozprawie naukowej skoncentrowałam się na trzech najważniejszych książkach J. Nye’a, stanowiących analizę atrybutów potęgi i wyjaśniających jej znaczenie. Są to: Bound to Lead. The Changing Nature of American Power (New York 1991), The Paradox of American Power. Why the World’s Only Superpower Can’t Go It Alone (Oxford 2002) oraz Soft Power. The Means to Success in World Politics (New York 2004; wyd. polskie: Soft Power. Jak osiągnąć sukces w polityce światowej, Warszawa 2007). Stanowią one podstawę do zrozumienia percepcji pojęcia potęgi Stanów Zjednoczonych. Choć autora zajmują także kwestie innych państw, to jednak właśnie mocarstwowość USA jako najpotężniejszego kraju na świecie, posiadającego wszelkie czynniki wzmacniające jego potęgę (władzę), stanowi podstawę rozważań J. Nye’a.

„Livre des merveilles”. Burgundzka wizja Orientu późnego średniowiecza w miniaturach manuskryptu fr. 2810 z Bibliothèque nationale de France

Wydział Historyczny: Instytut Historii Sztuki

Nie tylko Dzierżon: wprowadzenie do bibliografii piśmiennictwa pszczelniczego na Śląsku

Zadaniem artykułu jest ukazanie dorobku piśmiennictwa pszczelniczego na Śląsku. Pretekstem do poruszenia tego tematu jest przypadająca w 2011 roku dwusetna rocznica urodzin wybitnego pszczelarza Jana Dzierżona. Osoba i dokonania najsłynniejszego chyba w świecie Ślązaka do tego stopnia zdominowały historię pszczelarstwa tego regionu, że właściwie bardzo niewiele mówi się o dorobku innych działających aktywnie śląskich pszczelarzach praktykach i publicystach. Tymczasem dorobek ten jest imponujący. W części pierwszej artykułu przypomniano Nickela Jacoba ze Szprotawy, autora pierwszej wydanej na Śląsku książki pszczelarskiej, uznanego jednocześnie za ojca niemieckiej bibliografii pszczelarskiej. Wśród pionierów niemieckiej literatury fachowej dotyczącej pszczół znajduje się też Johann Coler ze Złotoryi. W XVIII wieku swą działalność praktyczną i publicystyczną w znacznej mierze związali ze Śląskiem Łużyczanin Adam Gottlieb Schirach i Niemiec Johann Riem. W dziełach innych autorów z zakresu gospodarstwa wiejskiego pojawiają się również fragmenty poświęcone pszczelarstwu. Dorobek swych poprzedników wzbogacił i swą działalnością rozsławił śląskie pszczelarstwo ksiądz dr Jan Dzierżon, odkrywca partenogenezy, konstruktor nowoczesnego ula, autor licznych publikacji. „Księciu pszczół” poświęcona została druga część artykułu. Przedstawiono w niej pokrótce jego życie i działalność, dzieje walki o uznanie teorii partenogenezy, ogromny dorobek publicystyczny. Wskazano jednocześnie na brak opracowania pełnej bibliografii podmiotowej. Dzierżon był wydawcą jednego z pierwszych na Śląsku czasopism pszczelarskich. Dorobek śląskiego czasopiśmiennictwa pszczelarskiego jest bogaty i dziwi fakt, że właściwie w bardzo małym dotychczas stopniu został poznany. Część trzecią poświęcono niemieckim i polskim czasopismom pszczelarskim wydawanym na Śląsku. Uwzględniono tutaj tytuły samoistne oraz dodatki. W podsumowaniu wykazano, że we wszystkich obszarach bibliografia piśmiennictwa śląskiego wymaga kompleksowego rozpoznania. Stan opracowania piśmiennictwa pszczelarskiego na Śląsku stanowi w pewnej mierze odbicie stanu bibliografii tego zagadnienia na ziemiach polskich.

Od wielkich do małych narracji. Definiowanie sztuki w kulturze płynności

Wydział Nauk Społecznych: Instytut Kulturoznawstwa

Autsajder literacki w niemieckiej i rosyjskiej prozie XIX-XI wieku. Badania narratologiczne

Wydział Neofilologii: Instytut Filologii Germańskiej