Avian infectious bronchitis virus (IBV): differential pathological and immunological profiles of two Brazilian variants.

2015

Chicken infectious anemia virus vaccination induces immune disorders and viral persistency in infectious bursal disease virus-infected young chicks

La bursite infectieuse aviaire (IBD) est une des causes majeures de pertes économiques pour l’industrie aviaire. La vaccination est le principal outil de contrôle de cette maladie et les oiseaux susceptibles doivent être vaccinés aussitôt que le niveau des anticorps maternels (MA) anti-IBDV est suffisamment bas. L’estimation du moment de vaccination est habituellement déterminée par la formule de Deventer qui utilise le titre initial de MA anti-IBDV et la demi-vie des anticorps pour prédire l’évolution du titre. Dans la présente étude, l’effet du gain de poids sur la vitesse de disparition des MA a été étudié dans le but de l’utiliser pour prédire la détermination du moment de la vaccination. L’analyse des taux d’anticorps neutralisants par ELISA a montré que les poussins avec une forte croissance avaient un taux de disparition plus rapide des MA que ceux à faible croissance. Une formule pour la prédiction du moment de vaccination contre le IBDV, basée sur le gain de poids et le niveau des MA a été développée et vérifiée. La prédiction du moment de vaccination avec cette formule a montré une haute corrélation avec les titres de MA mesurés par ELISA. Le virus de l’anémie infectieuse aviaire (CIAV) est une cause importante d’immunosuppression chez le poulet augmentant la pathogénicité des infections secondaires et en entraînant une réponse humorale suboptimale et une forte mortalité. D’autre part, l’infections sub-clinique du au CIAV provoque une immunosuppression qui facilite la coinfection par d’autre virus tel que le IBDV. Les effets de la coinfection à J1 avec une souche vaccinale de CIAV CAV-VAC® (Intervet) et à J14 avec une souche faiblement virulente de IBDV isolée au Québec, sur l’état de santé des poussins, sur la persistance virale et sur la réponse immunitaire ont été étudiés autant chez des poussins de 1 jour d’âge exempts d’agents pathogènes specifique (SPF) que ceux provenant d’élevages commerciaux. Les résultats ont montré que l’inoculation de la souche vaccinale du CIAV a entraîné une infection sub-clinique, une persistance virale dans la rate et le thymus, une altération de la thymopoièse et une réponse humorale temporaire chez les poussins SPF. Ces effets ont aussi été mis en évidence chez des poussins d’élevage commerciaux malgré des taux élevés de MA. Lors de l’infection avec la souche de IBDV chez des poussins déjà vaccinés contre le CIAV, la persistance du CIAV dans les organes lymphoïdes a été aggravée par une présence de réponses humorales temporaires contre les deux virus et une altération des populations lymphocytaires dans les organes lymphoïdes. Par contre, la présence des MA contre le CIAV a limité temporairement ces effets. Ces travaux ont mis en évidence des désordres immunitaires cellulaires et humoraux et une persistance virale chez des poussins vaccinés contre le CIAV et co-infectés avec le IBDV.

Cell cycle perturbations induced by infection with the coronavirus infectious bronchitis virus and their effect on virus replication

In eukaryotic cells, cell growth and division occur in a stepwise, orderly fashion described by a process known as the cell cycle. The relationship between positive-strand RNA viruses and the cell cycle and the concomitant effects on virus replication are not clearly understood. We have shown that infection of asynchronously replicating and synchronized replicating cells with the avian coronavirus infectious bronchitis virus (IBV), a positive-strand RNA virus, resulted in the accumulation of infected cells in the G(2)/M phase of the cell cycle. Analysis of various cell cycle-regulatory proteins and cellular morphology indicated that there was a down-regulation of cyclins D1 and D2 (G(2) regulatory cyclins) and that a proportion of virus-infected cells underwent aberrant cytokinesis, in which the cells underwent nuclear, but not cytoplasmic, division. We assessed the impact of the perturbations on the cell cycle for virus-infected cells and found that IBV-infected G(2)/M-phase-synchronized cells exhibited increased viral protein production when released from the block when compared to cells synchronized in the Go phase or asynchronously replicating cells. Our data suggested that IBV induces a G(2)/M phase arrest in infected cells to promote favorable conditions for viral replication.

Mass spectroscopic characterization of the coronavirus infectious bronchitis virus nucleoprotein and elucidation of the role of phosphorylation in RNA binding by using surface plasmon resonance

Phosphorylation of the coronavirus nucleoprotein (N protein) has been predicted to play a role in RNA binding. To investigate this hypothesis, we examined the kinetics of RNA binding between nonphosphorylated and phosphorylated infectious bronchitis virus N protein with nonviral and viral RNA by surface plasmon resonance (Biacore). Mass spectroscopic analysis of N protein identified phosphorylation sites that were proximal to RNA binding domains. Kinetic analysis, by surface plasmon resonance, indicated that nonphospborylated N protein bound with the same affinity to viral RNA as phosphorylated N protein. However, phosphorylated N protein bound to viral RNA with a higher binding affinity than nonviral RNA, suggesting that phosphorylation of N protein determined the recognition of virus RNA. The data also indicated that a known N protein binding site (involved in transcriptional regulation) consisting of a conserved core sequence present near the 5' end of the genome (in the leader sequence) functioned by promoting high association rates of N protein binding. Further analysis of the leader sequence indicated that the core element was not the only binding site for N protein and that other regions functioned to promote high-affinity binding.

Evaluation of a nucleoprotein-based enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of antibodies against infectious bronchitis virus

As an immunogen of the coronavirus, the nucleoprotein (N) is a potential antigen for the serological monitoring of infectious bronchitis virus (IBV). In this report, recombinant N protein from the Beaudette strain of IBV was produced and purified from Escherichia coli as well as Sf9 ( insect) cells, and used for the coating of enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA) plates. The N protein produced in Sf9 cells was phosphorylated whereas N protein from E. coli was not. Our data indicated that N protein purified from E. coli was more sensitive to anti-IBV serum than the protein from Sf9 cells. The recombinant N protein did not react with the antisera to other avian pathogens, implying that it was specific in the recognition of IBV antibodies. In addition, the data from the detection of field samples and IBV strains indicated that using the recombinant protein as coating antigen could achieve an equivalent performance to an ELISA kit based on infected material extracts as a source of antigen(s). ELISAs based on recombinant proteins are safe ( no live virus), clean ( only virus antigens are present), specific ( single proteins can be used) and rapid ( to respond to new viral strains and strains that cannot necessarily be easily cultured).

Changes in nucleolar morphology and proteins during infection with the coronavirus infectious bronchitis virus

The nucleolus is a dynamic subnuclear structure involved in ribosome subunit biogenesis, cell cycle control and mediating responses to cell stress, among other functions. While many different viruses target proteins to the nucleolus and recruit nucleolar proteins to facilitate virus replication, the effect of infection on the nucleolus in terms of morphology and protein content is unknown. Previously we have shown that the coronavirus nucleocapsid protein will localize to the nucleolus. In this study, using the avian infectious bronchitis coronavirus, we have shown that virus infection results in a number of changes to the nucleolus both in terms of gross morphology and protein content. Using confocal microscopy coupled with fluorescent labelled nucleolar marker proteins we observed changes in the morphology of the nucleolus including an enlarged fibrillar centre. We found that the tumour suppressor protein, p53, which localizes normally to the nucleus and nucleolus, was redistributed predominately to the cytoplasm.

The coronavirus infectious bronchitis virus nucleoprotein localizes to the nucleolus

The coronavirus nucleoprotein (N) has been reported to be involved in various aspects of virus replication. We examined by confocal microscopy the subcellular localization of the avian infectious bronchitis virus N protein both in the absence and in the context of an infected cell and found that N protein localizes both to the cytoplasmic and nucleolar compartments.

How the double spherules of infectious bronchitis virus impact our understanding of RNA virus replicative organelles

Powered by advances in electron tomography, recent studies have extended our understanding of how viruses construct "replication factories" inside infected cells. Their function, however, remains an area of speculation with important implications for human health. It is clear from these studies that whatever their purpose, organelle structure is dynamic (M. Ulasli, M. H. Verheije, C. A. de Haan, and F. Reggiori, Cell. Microbiol. 12:844-861, 2010) and intricate (K. Knoops, M. Kikkert, S. H. Worm, J. C. Zevenhoven-Dobbe, Y. van der Meer, et al., PLOS Biol. 6:e226, 2008). But by concentrating on medically important viruses, these studies have failed to take advantage of the genetic variation inherent in a family of viruses that is as diverse as the archaea, bacteria, and eukaryotes combined (C. Lauber, J. J. Goeman, M. del Carmen Parquet, P. T. Nga, E. J. Snijder, et al., PLOS Pathog. 9:e1003500, 2013). In this climate, Maier et al. (H. J. Maier, P. C. Hawes, E. M. Cottam, J. Mantell, P. Verkade, et al., mBio 4:e00801-13, 2013) explored the replicative structures formed by an avian coronavirus that appears to have diverged at an early point in coronavirus evolution and shed light on controversial aspects of viral biology.

Inflammatory and Cell-Mediated Immune Responses in the Respiratory Tract of Chickens to Infection with Avian Infectious Bronchitis Virus

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Experimental infection of inbred BALB/c and A/J mice with Massachusetts and Brazilian strains of infectious bronchitis virus (IBV)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Pesquisa de agentes etiológicos patogênicos para galinhas de produção, em aves selvagens próximas as instalações avícolas

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Facteurs de risque associés à la prévalence d'aérosacculite à l'abattoir chez le poulet de chair

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal

Epidemiological study on antimicrobial use and non-compliance with withdrawal times in broiler farms in Vietnam

L’utilisation d’antimicrobiens chez les animaux de consommation est une source de préoccupation importante pour la santé publique à travers le monde en raison de ses impacts potentiels sur l’émergence de micro-organismes résistants aux antimicrobiens et sur la présence de résidus antimicrobiens néfastes dans la viande. Cependant, dans les pays en développement, peu de données sont disponibles sur les pratiques d’utilisation des antimicrobiens à la ferme. Par conséquent, une étude épidémiologique transversale a été menée de juin à août 2011 dans des élevages de poulets de chair situés dans le sud du Vietnam, ayant pour objectifs de décrire la prévalence d’utilisation des antimicrobiens ajoutés à l’eau de boisson ou aux aliments à la ferme, et de tester les associations entre les caractéristiques des fermes et la non-conformité avec les périodes de retrait recommandés sur l’étiquette des produits. Un échantillon d’accommodement de 70 fermes a été sélectionné. Les propriétaires des fermes ont été interrogés en personne afin de compléter un questionnaire sur les caractéristiques des fermes et les pratiques d’utilisation d’antimicrobiens. Au cours des 6 mois précédant les entrevues, il a été rapporté que la colistine, la tylosine, l’ampicilline, l’enrofloxacine, la doxycycline, l’amoxicilline, la diavéridine et la sulfadimidine ont été utilisés au moins une fois dans les fermes échantillonnées, avec une fréquence descendante (de 75.7% à 30.0%). D’après deux scénarios de risque basés sur la comparaison de la période de retrait recommandée sur l’étiquette du produit et celle pratiquée à la ferme, de 14.3% à 44.3% des propriétaires de ferme interrogés n’ont pas respecté la période de retrait recommandée sur l’étiquette au moins une fois au cours des 6 derniers mois, et ce pour au moins un antimicrobien. Les facteurs de risque associés (p<0.05) avec une non-conformité avec la période de retrait recommandée sur l’étiquette pour au moins un des deux scénarios sont les suivants : élever des oiseaux qui n’appartiennent pas tous à des races d’origine asiatique, vacciner contre la bronchite infectieuse, avoir utilisé plus de 6 différents antimicrobiens à la ferme au cours des 6 derniers mois, et utiliser un mélange d’aliments fait maison et commerciaux. Nos résultats soulignent l’importance d’utiliser les antimicrobiens de façon judicieuse et en respectant les temps de retrait officiels, afin de protéger le consommateur contre les risques pour la santé causés par une exposition à des niveaux nocifs de résidus antimicrobiens.