Efeitos de diferentes sistemas de cultivo in vitro sobre o crescimento de folículos pré-antrais isolados de ovários de fetos bovinos

The objective of this study is to use different in vitro culture systems of preantral follicles from Nelore breed bovine fetuses in the last gestation quarter. The evaluation of treatments considered the time of growth of isolated follicles. Preantral follicles were mechanically isolated and submitted to the individual culture, for 9 days, in media no supplemented or supplemented with fetal calf serum (FCS), bovine serum albumin (BSA) or synthetic defined supplement substitute of serum KnockoutSR (KNO). We have also evaluated the effects of collagen gel or fetal calf fibroblast monolayer as substratum for in vitro cultures. The increase on the follicular diameter was followed in the first day (0 h), at the 72 h, 144 h and 216 h. Considering cultures of isolated follicles, the results have shown that the association between media supplemented with FCS and collagen gel was significantly more efficient on the increase of the follicular diameter than other treatments. It is not still established a system of appropriate cultivation that sustains the differentiation and multiplication of the granular cells and that maintains the contact of the same ones with the oocyte to provide molecules and factors that supply the metabolic demand. We also understand that our results also represent another promising step on the search for the ultimate system of in vitro culture of preantral follicles from bovines.

Efeito do estádio do ciclo estral e adição de hormônios ao meio de cultivo in vitro sobre a morfologia do complexo cumulus-oócito canino

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Germinação de sementes, enraizamento de estacas caulineares e cultivo in vitro de cubiu (Solanum sessiliflorum Dunal

Pós-graduação em Agronomia (Horticultura) - FCA

A influência do sistema nitrérgico no cultivo in vitro de embriões bovinos

O Óxido Nítrico (NO-) é uma molécula de sinalização celular que regula o desenvolvimento embrionário pré-implantacional. Nós investigamos o papel do NO- no cultivo de embriões bovinos produzidos in vitro, através do uso de N-Nitro-L-Arginina Metil Ester (L-NAME), um inibidor da produção de NO-, e L-arginina (ARG), um precursor de NO-, em diferentes períodos de cultivo (ativação do genoma embrionário e compactação). Foram avaliados seus efeitos sobre as taxas de desenvolvimento, cinética do desenvolvimento, qualidade embrionária, e expressão gênica. Os embriões foram produzidos por maturação e fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários provenientes de abatedouro frigorífico. No experimento 1, as taxas de desenvolvimento foram avaliadas em SOFaa na presença de L-NAME em diferentes períodos: do 1º ao 4º dia de cultivo (LN1-4), do 4º ao 8º (LN4-8) e do 1º ao 8º dia de cultivo (LN1-8). A inibição foi prejudicial a partir do 4º dia de cultivo (grupos LN4-8 e LN1-8), ao reduzir as taxas de eclosão (17,3%±13,44 e 13,7%± 14,51, respectivamente, p<0,05). Entretanto, o efeito mais negativo ocorreu do 1º ao 8º dia (LN1-8) em que a taxa de blastocisto foi significativamente menor comparada ao controle (29,4%±3,72 vs 47,8%±11,34, respectivamente, p<0,05). Por isso no experimento 2, a ARG (1, 10 e 50mM) foi adicionada desde o 1º dia de cultivo. As taxas de blastocisto usando 1 e 10mM de ARG foram similares ao controle (48%±13,03 e 34,2%±3,92 vs 49,4%±4,82, respectivamente, p>0,05), mas 50mM prejudicou a taxa de desenvolvimento embrionário (10,7%±7,24, p<0,001). No experimento 3, ARG a 1mM foi adicionada do 5º ao 8º dia de cultivo. Foram observadas taxas de desenvolvimento similares ao grupo GLN (somente com glutamina). Mas comparada ao controle (sem ambos os aminoácidos), rendeu melhores taxa de eclosão (54,8%±6,9 vs 41,4%±11,47, respectivamente, p<0,05) e qualidade embrionária (84,8%±2,63 vs 52%±8,62, respectivamente, p<0,05), mas não de taxa de blastocisto (49,4%±6,5 vs 49,4%±4,8, respectivamente, p>0,05). Neste período a produção de NO- foi positivamente correlacionada com a taxa de eclosão (R²=96,4%, p<0,001) e a qualidade embrionária (R²=75,5%, p<0,05). Adicionalmente, embriões foram cultivados na presença de L-NAME e ARG simultaneamente (grupo ARG/LN), do 5º ao 8º dia de cultivo, e os transcritos de OCT-4 e INT-t foram quantificados por PCR tempo real. Foi encontrada expressão similar de OCT-4 (p>0,05), mas redução de 1,8x e 1,5x de INT-t em relação aos grupos controles ARG e GLUT (p<0,05), respectivamente. Esses dados fornecem evidências da contribuição do NO-, principalmente no período entre os estágios de mórula e blastocisto, para a melhoria da eclosão e qualidade embrionária. A produção de NO- é requerida para o desenvolvimento pré-implantacional de embriões bovinos produzidos in vitro, e pode ser mediada pela suplementação do meio de cultivo com ARG.

Folículos ovarianos pré-antrais bovinos: cultivo in vitro e xenotransplante

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Uso de resíduos de madeiras e frutos da amazônia para o cultivo in vitro do cogumelo comestível shiitake

Local abundant residues with low or without commercial value with potential to make the production of edible mushrooms economically viable in any region of Brazil must be employed for cultivation. Thus, the radial mycelial growth of LED 20 strain of Lentinula edodes (Berk.) Pegler was verified in culture media prepared with extract of regional residues by using substrates based on Protium puncticulatum, Cariniana micrantha and Caryocar glabum sawdust, supplemented with 20% of grinded residues from the barks of the fruits of Astrocaryum aculeatum and Theobroma grandiflorum. Residues from eucalyptus (Eucalyptus spp) sawdust and wheat bran (Triticum aestivum L) were used as witness because they are commonly used in the cultivation of L. edodes. The experimental design used was totally randomized, in 4x3 factorial scheme, totalizing 12 treatments with five repetitions, being that each repetition corresponded to a Petri dish, adding up a total of 60 dishes, which were incubated under 25 degrees C. The diameter of the colony was daily evaluated during seven days of incubation. After that period, it was verified that media prepared with P. puncticulatum extract, whose supplementation with both brans was favorable for fungic development, presented some of the highest averages of mycelial growth of LED 20 strain of L. edodes, confirming the potential of those residues.

Potencial do cultivo in vitro e do xenotransplante na sobrevida e desenvolvimento de folículos ovarianos pré-antrais em matrizes de ruminantes domésticos em risco de morte: revisão de literatura

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Uso de resíduos madeireiros da Amazônia brasileira no cultivo in vitro de Lentinus strigosus

Lentinus strigosus (Schwein.) Fr. is an exploitable edible mushroom occurring in the Brazilian Amazon, being part of a huge diversity of edible mushrooms which are little grown. The use of regional waste is recommended to reduce production costs of any kind of edible mushroom. Thus, the mycelial growth of L. strigosus in culture media based on regional wood waste extract by using substrates based on Protium puncticulatum, Cariniana micrantha and Caryocar glabum sawdust, supplemented with 20% of wheat bran (Triticum aestivum), corn bran (Zea sp.) or rice bran (Oryza sp.) was observed. Eucalyptus (Eucaliptus sp.) sawdust was used for comparison with the other wood wastes because it is commonly used in the cultivation of edible fungi. The experimental design employed was totally randomized, in 4 x 3 factorial scheme (sawdust x bran), adding up 12 treatments with 5 repetitions, being that each repetition corresponded to a Petri dish, totalizing 60 dishes, incubated at 35 ºC. The diameter of the colony was daily evaluated until the fungus reached the borders of the Petri dish in one of the treatments. After that period, the media based on P. puncticulatum sawdust obtained thebest results of mycelial growth, showing potential to be used as an alternative residuein a future production of L. strigosus in the state of Amazonas.

Resíduos de bananeira como substrato base para o cultivo in vitro de Coprinus comatus

Coprinus comatus is an edible and lignolitic fungus which has presented great potential for commercial use due to its easy development in the different residues, such as banana tree leave. Thus, the mycelial growth of Coprinus comatus in culture media based on leaves of Thap-Maeo, Prata-Anã, Pelipita and Caipira banana tree cultivars, supplemented with 20% of wheat, soy and rice brans, was evaluated. 7 mm-wide discs of CCO 01/01 strain of C. comatus were inoculated in the middle of Petri dishes containing culture medium, inside a laminar flow chamber. Next, the dishes were arranged totally at random inside an incubator at 25 ºC. The daily measurements of the mycelial growth began after 24 hours, until one of the treatments reached the borders of the Petri dish. According to the results obtained, we verified that there was not effect of the kind of supplementation for culture media based on Thap-Maeo, Prata-Anã and Pelipita; the best growth averages for culture media based on Caipira were provided by wheat and rice brans. Therefore, banana residues may be a viable and ecologically correct choice for the cultivation of C. comatus, especially for Thap-Maeo and Prata Anã sorts, which provided the best growth averages, regardless of the supplementation used.

Cultivo in vitro de Pleurotus ostreatus em resíduos de bananeira

The objective of this paper was to evaluate the mycelial growth of Pleurotus ostreatus (strain POS 09/100) in culture media based on different banana tree residues. The experimental design was totally randomized in 3 x 4 factorial scheme and consisted in three combinations of residues (pseudostem, leave and pseudostem + leave) and four banana tree cultivars (Thap Maeo, Prata Anã, Pelipita and Caipira), totalizing twelve treatments each with five repetitions, adding up sixty experimental units. Growth was measured every 24 hours until the mycelium of one of the treatments reached the border of the Petri dish, what occurred five days after the beginning of the experiment. The results obtained showed that all the combinations of banana tree residues were favorable to P. ostreatus mycelial growth, especially pseudostem + leaf of Pelipita, Thap maeo and Prata anã cultivars. Thus, the use of banana tree residues is viable for cultivation of P. ostreatus, and considered as an excellent alternative, besides reducing their disposal in the environment.

Acúmulo de minerais em Aechmea blanchetiana (Baker) L.B. Smith (Bromeliaceae), contaminadas com zinco em cultivo in vitro

Com o objetivo de estudar a absorção e translocação de Ca, Co, Fe, K e Zn em Aechmea blanchetiana, plantas foram cultivadas in vitro em meios de cultivo contendo concentrações de Zn (0,0; 0,18; 1,8; 18 e 180 mg Zn L-1). Após 16 semanas de cultivo, os sistemas aéreo e radicular foram separados e determinadas à massa seca para massa de matéria seca e para a análise por ativação com nêutrons (AAN). O procedimento consistiu em irradiar amostras e padrões no reator nuclear de pesquisa IEA-R1 por 16 h para análise por espectrometria de raios gama. O controle dos resultados foi avaliado por meio das análises dos materiais de referência certificados, com desvios padrão relativo de 9,1 % e erros inferiores a 12,9 %. Os resultados das determinações dos elementos mostraram que o Zn alterou absorção e translocação de Ca, Co, Fe, K e Zn. A espécie apresentou alta quantidade de Zn nos sistemas aéreo e radicular indicando, possivelmente, ser bioacumuladora desse elemento.

Biotecnología del cultivo in vitro de algas rojas (Rhodophyta) de interes industrial

Premio extraordinario, Área de Experimentales.

Estudio de la respuesta inmune innata en la coccidiosis caprina mediante modelos de cultivo "in vitro"

Programa de doctorado: Sanidad Animal

Regeneración de plantas de té (Camellia sinensis) por cultivo in vitro de meristemas, yemas axilares y segmentos uninodales

Tres tipos de explantes de dos clones ( C H 1 4 I N TA y C H 3 1 8 I N TA ) d e t é (Camellia sinensis (L.) O. Kuntze) fueron evaluados para su regeneración in vitro, bajo la influencia de dos citocininas (BAP y CIN) y una giberelina (AG3). Previa desinfección, con etanol 70% (1 minuto) e hipoclorito de sodio 1,5% (20 minutos) y tres enjuagues con agua destilada estéril, los explantes fueron aislados y cultivados en los distintos medios de cultivo. Las mejores respuestas en formación de vástagos se registraron con los segmentos uninodales de ambos clones cultivados en el medio ½ MS + 1 mg/L de BAP o con el cultivo de yemas axilares del clon CH 14 INTA en el medio ½ MS + 1 mg/L de BAP o del clon CH 318 INTA en el medio ½ MS + 1 mg/L BAP + 1 mg/L AG3. Los mejores resultados con el empleo de meristemas caulinares se obtuvieron en el medio ½ MS + 1 mg/L de CIN y 1 mg/L de AG3. Los vástagos obtenidos fueron enraizados mediante su cultivo en ¼ MS + 6 mg/L de IBA.