Avaliação de diversos métodos de detecção de cistos de Giardia spp. e Oocistos de Cryptosporidium parvum presentes no resíduo gerado após o tratamento de água de abastecimento com turbidez elevada

Este trabalho teve como objetivo avaliar diversos métodos de detecção e recuperação de cistos de Giardia spp. e de oocistos de Cryptosporidium parvum em resíduos gerados no tratamento de águas de abastecimento com turbidez elevada tendo como padrão o Método 1623.1 da USEPA (2012 ). Para tanto, ensaios utilizando aparelho Jarteste (coagulação, floculação, decantação e filtração ) foram realizados utilizando o coagulante cloreto de polialumínio - PAC. Em todos os métodos avaliados foi utilizada a técnica de purificação por separação imunomagnética - IMS. A adaptação do método floculação em carbonato de cálcio FCCa elaborado por Vesey et al. (1993) e adaptado por Feng et al. (2011), repercutiu nos melhores resultados para a amostra de resíduo sedimentado, com recuperações de 68 ± 17 % para oocisto de C. parvum e de 42 ± 7 % para cisto de Giardia spp. Entretanto, as recuperações para a amostra de água de lavagem dos filtros - ALF foram inferiores à 1 %, não sendo possível determinar um método adequado. A presença dos patógenos indica que o reuso da ALF em ETA convencionais ou o descarte em mananciais sem um tratamento prévio, pode representar problemas de contaminação. A adaptação dos métodos de Boni de Oliveira (2012) e Keegan et al. (2008), também repercutiram em porcentagens de recuperação expressivas para a amostra de resíduo sedimentado, sendo de: 41 ± 35 % para oocisto de C. parvum e 11 ± 70 % para cisto de Giardia spp., e 38 ± 26 % para oocisto de C. parvum e 26 ± 13 % para cisto de Giardia spp., respectivamente. A análise estatística não resultou em diferença significativa entre estes dois métodos, entretanto, as elevadas recuperações indicam que estes métodos podem ser melhor avaliados em pesquisas futuras.

Identification et caractérisation génétique et phénotypique de deux espèces de Cryptosporidium après divers passages chez le veau

L’étude de la variation du génotype et du phénotype fut réalisée sur deux espèces de parasites intestinaux (Cryptosporidium parvum et C. muris) via une infection expérimentale de 10 passages successifs chez le veau (Bos taurus). L’infection avec C. parvum a bien fonctionné alors qu’aucun signe clinique n’a été observé dans le cadre de cette étude avec C. muris. Pour le génotype, deux gènes (HSP70 et GP60) ont été amplifiés par double PCR puis séquencés. Les résultats ont indiqué que ces gènes n’étaient pas modifiés après 10 passages chez des veaux. Cela montre une faible évolution génétique du parasite lorsqu’il passe dans un animal hôte, facilitant ainsi les études épidémiologiques lors d’épisode de cryptosporidiose. Il faut cependant noter que les parasites utilisés ne provenaient pas de l’environnement mais d’une compagnie spécialisée en parasitologie (WaterBorne®). L’étude de la variation du phénotype a été tentée, sans succès, à l’aide d’un immuno-buvardage en point utilisant le sérum des veaux infectés. Des problèmes liés à la concentration des ookystes de C. parvum placés sur la membrane de l’immuno-buvardage en point furent suspectés.

Molecular identification of Cryptosporidium spp. from fecal samples of felines, canines and bovines in the state of São Paulo, Brazil

The objective of this study was to obtain information of epidemiological nature through genotypic characterization of Cryptosporidium isolates from dogs, cats and bovines from the state of São Paulo, Brazil. The extraction of DNA from oocysts was carried out and polymerase chain reaction was accomplished using specific primers to 18S rRNA gene. The amplicons were directed sequenced. Seven cat samples, nine dog samples and nine bovine samples were analysed. From the seven cat samples the genotypic analyses revealed Cryptosporidium felis in all. These were the first genotypic characterization of Cryptosporidium from domestic felines in Brazil. In nine sequenced samples from dogs, genotypic identities compatible with Cryptosporidium canis were revealed in all samples. The genotypic analyses in bovines revealed Cryptosporidium parvum in eight samples and Cryptosporidium bovis in another sample, the last one being a non-zoonotic species, not related to clinical symptoms and described for the first time in Brazil. (c) 2007 Elsevier B.V. All rights reserved.

Molecular characterization of Cryptosporidium spp. from fecal samples of birds kept in captivity in Brazil

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Prevalência de Cryptosporidium sp. em cães de instituições da cidade de São Paulo

Objective Dogs play an important role as infection source of human cryptosporidiosis. The objective of the study was to determine the prevalence of Cryptosporidium sp. in dogs as well as to compare two techniques of fecal analysis.Methods Four-hundred and fifty canine fecal samples from the city of São Paulo were analyzed between 2003 and 2004. Fecal samples were randomly selected from dogs housed in a university veterinary hospital (group 1, n=200) and private kennels (group 2, n=250). The detection of Cryptosporidium was performed using modified Ziehl-Neelsen staining and Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. Statistical analysis was performed using the two-tailed test of significance at 5% confidence interval (z critical=+/- 1.645).Results Only Cryptosporidium parvum oocysts were found the prevalences found by light microscopy examination and PCR techniques were 8.8% and 9.5%, respectively. Young animals showed a lower frequency (5.5%) compared to adults (10.1%). There was no statistically significant difference in Cryptosporidium prevalence between males and females.Conclusions the prevalence of C. parvum in the canine population studied was similar to that one found in the literature and affects equally males and females. The use of PCR allowed the detection of more positive cases than light microscopy.

Diagnóstico e caracterização molecular de Giardia duodenalis e Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bovinos e ovinos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Ocorrência e caracterização molecular de Cryptosporidium spp. em cordeiros na Região de Araçatuba-SP-Brasil: avaliação da transferência da imunidade passiva

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Caracterização molecular de Cryptosporidium spp. em bezerros bubalinos do Estado de São Paulo, SP

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Detecção molecular e subtipagem de Cryptosporidium spp. em caprinos, ovinos, bovinos, leitões e eqüinos jovens

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Infecção por Cryptosporidium em bezerros e humanos de assentamentos rurais na região de Araçatuba, São Paulo

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

First molecular characterization of Cryptosporidium spp. infecting buffalo calves in Brazil

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

[Cryptosporidiose (C. parvum) in a foal with diarrhea]

The protozoon parasite Cryptosporidium parvum is an important cause of diarrhea in farm animals, but it can also infect other animals and humans. In this case report, oocysts of Cryptosporidium spp. were microscopically detected by modified Ziehl-Neelsen staining in the feces of a 9 day old Arabian colt presented with yellowish, foul smelling, diarrhea and fever of 40 degrees C. PCR and sequencing of the isolate revealed C. parvum (bovine genotype). Hemato-chemical analysis of the foals blood revealed a marked hypogammaglobulinaemia (IgG 108mg/dl). The colt responded well to a supportive therapy and administration of plasma (until a gammaglobulin-concentration of 620 mg/dl was reached) and was released in good health from the clinic after 10 days. Follow-up testing for Cryptosporidium oocycsts remained negative. Cryptosporidiosis with life-threatening diarrhea is a rare diagnosis in foals in Switzerland. Immunodeficiency increases the risk for cryptosporidiosis. We hypothesize that the low concentration of gammaglobulins together with the weak INF-gamma response normally observed in young foals may have favored the clinical manifestation with diarrhea. Foals with diarrhea should be screened for cryptosporidia with specific tests.

Ocorrência e caracterização de Giardia e Cryptosporidium em águas captadas para abastecimento público no município de Cajamar-SP e avaliação do risco

Introdução: O risco à saúde humana ocasionado pela contaminação biológica de águas captadas para abastecimento público é realçado pela ocorrência de surtos de doenças associadas aos protozoários Giardia e Cryptosporidium, que possuem baixas doses infecciosas e alta capacidade de sobrevivência no ambiente, além de serem capazes de resistir ao processo tradicional de desinfecção da água (cloração). Partindo-se da hipótese de que há um risco elevado de infecção por estes protozoários pela ingestão de água tratada por métodos convencionais e que fazem uso de mananciais superficiais impactados por contaminação biológica, resultando num possível incremento da incidência de diarréias, este estudo se propôs a verificar a ocorrência destes protozoários em águas captadas para abastecimento público no município de Cajamar-SP, caracterizar sua patogenicidade e avaliar o risco associado ao seu consumo através da água tratada. Métodos: Foram coletadas 48 amostras do ribeirão dos Cristais no ponto de captação da estação de tratamento de água, semanalmente, durante 12 meses (de 16/05/2013 a 21/05/2014). A detecção e a análise da concentração dos protozoários foram realizadas de acordo com Método 1623.1 da United States Environmental Protection Agency e a extração e caracterização dos espécies/genótipos de Giardia e Cryptosporidium foi realizada através metodologias moleculares e seqüenciamento. O risco de infecção pela ingestão de cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium presentes na água tratada foi calculado usando a ferramenta da Avaliação Quantitativa do Risco Microbiológico, a partir dos dados de concentração dos patógenos obtidos pelo Método 1623.1, eficiência de remoção dos (oo)cistos durante o processo convencional de tratamento da água, modelo dose-resposta e taxa de ingestão diária de água para indivíduos menores de 5 anos e maiores de 21 anos. Resultados: Cistos de Giardia foram detectados em 83,3% das amostras (40/48), com concentrações variando desde o limite de detecção (<0,1) até 8,6 cistos/L. Oocistos de Cryptosporidium foram etectados em 37,5% das amostras (18/48), com concentrações variando desde o limite de detecção (<0,1) até 2 oocistos/L. As espécies/genótipos encontrados (Giardia intestinalis A e B e Cryptosporidium parvum e hominis) são característicos de contaminação antrópica e são frequentemente identificados em estudos epidemiológicos como responsáveis por surtos. A estimativa do risco anual de infecção por Giardia foi de 3,3x10-3 (IC95% 4,6x10-3) para crianças e de 11,5x10-3 (IC95% 13,3x10-3) para adultos, enquanto o risco por Cryptosporidium foi de 1,1x10-3 (IC95% 1,7x10-3) para crianças e de 3,9x10-3 (IC95% 5,0x10-3) para adultos. O incremento da incidência de diarréias foi observado no cenário de estudo após um acidente que resultou em transbordamento de esgotos não tratados no manancial, coincidindo com o aumento na detecção de (oo)cistos. Conclusão: Os resultados evidenciaram que a vulnerabilidade do ribeirão dos Cristais a contaminações biológicas pode culminar em um risco elevado de infecção e adoecimento por Giardia e Cryptosporidium através da ingestão de água tratada. Portanto, o caso é preocupante, tanto do ponto de vista do tratamento e abastecimento de água potável, quanto da degradação e contaminação do manancial, evidenciando a necessidade de se estabelecer medidas de intervenção direcionadas a promover a qualidade da água e garantir sua segurança

Genetic diversity of Cryptosporidium identified in clinical samples from cities in Brazil and Argentina

The identification and characterisation of Cryptosporidium genotypes and subtypes are fundamental to the study of cryptosporidiosis epidemiology, aiding in prevention and control strategies. The objective was to determine the genetic diversity of Cryptosporidium in samples obtained from hospitals of Rio de Janeiro, Brazil, and Buenos Aires, Argentina. Samples were analysed by microscopy and TaqMan polymerase chain reaction (PCR) assays for Cryptosporidium detection, genotyped by nested-PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of the 18S rRNA gene and subtyped by DNA sequencing of the gp60 gene. Among the 89 samples from Rio de Janeiro, Cryptosporidium spp were detected in 26 by microscopy/TaqMan PCR. In samples from Buenos Aires, Cryptosporidium was diagnosed in 15 patients of the 132 studied. The TaqMan PCR and the nested-PCR-RFLP detected Cryptosporidium parvum , Cryptosporidium hominis , and co-infections of both species. In Brazilian samples, the subtypes IbA10G2 and IIcA5G3 were observed. The subtypes found in Argentinean samples were IbA10G2, IaA10G1R4, IaA11G1R4, and IeA11G3T3, and mixed subtypes of Ia and IIa families were detected in the co-infections. C. hominis was the species more frequently detected, and subtype family Ib was reported in both countries. Subtype diversity was higher in Buenos Aires than in Rio de Janeiro and two new subtypes were described for the first time.

Health risk from the use of roof-harvested rainwater in Southeast Queensland, Australia, as potable or nonpotable water, determined using quantitative microbial risk assessment

A total of 214 rainwater samples from 82 tanks were collected in urban Southeast Queensland (SEQ) in Australia and analysed for the zoonotic bacterial and protozoan pathogen using real-time binary PCR and quantitative PCR (qPCR). Quantitative Microbial Risk Assessment (QMRA) analysis was used to quantify the risk of infection associated with the exposure to potential pathogens from potable and non-potable uses of roof-harvested rainwater. Of the 214 samples tested, 10.7%, 9.8%, and 5.6%, and 0.4% samples were positive for Salmonella invA, Giardia lamblia β-giardin , Legionella pneumophila mip, and Campylobacter jejuni mapA genes. Cryptosporidium parvum could not be detected. The estimated numbers of viable Salmonella spp., G. lamblia β-giradin, and L. pneumophila genes ranged from 1.6 × 101 to 9.5 × 101 cells, 1.4 × 10-1 to 9.0 × 10-1 cysts, and 1.5 × 101 to 4.3 × 101 per 1000 ml of water, respectively. Six risk scenarios were considered from exposure to Salmonella spp., G. lamblia and L. pneumophila. For Salmonella spp., and G. lamblia, these scenarios were: (1) liquid ingestion due to drinking of rainwater on a daily basis (2) accidental liquid ingestion due to garden hosing twice a week (3) aerosol ingestion due to showering on a daily basis, and (4) aerosol ingestion due to hosing twice a week. For L. pneumophila, these scenarios were: (5) aerosol inhalation due to showering on a daily basis, and (6) aerosol inhalation due to hosing twice a week. The risk of infection from Salmonella spp., G. lamblia, and L. pneumophila associated with the use of rainwater for showering and garden hosing was calculated to be well below the threshold value of one extra infection per 10,000 persons per year in urban SEQ. However, the risk of infection from ingesting Salmonella spp. and G. lamblia via drinking exceeds this threshold value, and indicates that if undisinfected rainwater were ingested by drinking, then the gastrointestinal diseases of Salmonellosis and Giardiasis is expected to range from 5.0 × 100 to 2.8 × 101 (Salmonellosis) and 1.0 × 101 to 6.4 × 101 (Giardiasis) cases per 10,000 persons per year, respectively. Since this health risk seems higher than that expected from the reported incidences of gastroenteritis, the assumptions used to estimate these infection risks are critically examined. Nonetheless, it would seem prudent to disinfect rainwater for potable use.