Análise e expressão de genes de PKS II e de carboidrases provenientes de bibliotecas metagenômicas

Pós-graduação em Microbiologia Agropecuária - FCAV

Identificação de genes candidatos à indução do florescimento em cana-de-açúcar em câmara de fotoperíodo

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

A molecular linkage map for Drosophila mediopunctata confirms synteny with Drosophila melanogaster and suggests a region that controls the variation in the number of abdominal spots

The classic approach to gene discovery relies on the construction of linkage maps. We report the first molecular-based linkage map for Drosophila mediopunctata, a neotropical species of the tripunctata group. Eight hundred F2 individuals were genotyped at 49 microsatellite loci, resulting in a map that is approximate to 450 centimorgans long. Five linkage groups were detected, and the species' chromosomes were identified through cross-references to BLASTn searches and Muller elements. Strong synteny was observed when compared with the Drosophila melanogaster chromosome arms, but little conservation in the gene order was seen. The incorporation of morphological data corresponding to the number of central abdominal spots on the map was consistent with the expected location of a genomic region responsible for the phenotype on the second chromosome.

A human-horse comparative map based on equine BAC end sequences

In an effort to increase the density of sequence-based markers for the horse genome we generated 9473 BAC end sequences (BESs) from the CHORI-241 BAC library with an average read length of 677 bp. BLASTN searches with the BESs revealed 4036 meaningful hits (E BLASTN hits allowed the anchoring of 3079 BAC clones to the human genome, on average one corresponding equine BAC clone per megabase of human DNA. We used the BLASTN anchored BESs for an in silico prediction of the gene content and chromosome assignment of comparatively mapped equine BAC clones. As a first verification of our in silico mapping strategy we placed 19 equine BESs with matches to HSA6 onto the RH map. All markers were assigned to the predicted localizations on ECA10, ECA20, and ECA31, respectively.

A radiation hybrid map of sheep chromosome 23 based on ovine BAC-end sequences

More than 375,000 BAC-end sequences (BES) of the CHORI-243 ovine BAC library have been deposited in public databases. blastn searches with these BES against HSA18 revealed 1806 unique and significant hits. We used blastn-anchored BES for an in silico prediction of gene content and chromosome assignment of comparatively mapped ovine BAC clones. Ovine BES were selected at approximately 1.3-Mb intervals of HSA18 and incorporated into a human-sheep comparative map. An ovine 5000-rad whole-genome radiation hybrid panel (USUoRH5000) was typed with 70 markers, all of which mapped to OAR23. The resulting OAR23 RH map included 43 markers derived from BES with high and unique BLAST hits to the sequence of the orthologous HSA18, nine EST-derived markers, 16 microsatellite markers taken from the ovine linkage map and two bovine microsatellite markers. Six new microsatellite markers derived from the 43 mapped BES and the two bovine microsatellite markers were linkage-mapped using the International Mapping Flock (IMF). Thirteen additional microsatellite markers were derived from other ovine BES with high and unique BLAST hits to the sequence of the orthologous HSA18 and also positioned on the ovine linkage map but not incorporated into the OAR23 RH map. This resulted in 24 markers in common and in the same order between the RH and linkage maps. Eight of the BES-derived markers were mapped using fluorescent in situ hybridization (FISH), to thereby align the RH and cytogenetic maps. Comparison of the ovine chromosome 23 RH map with the HSA18 map identified and localized three major breakpoints between HSA18 and OAR23. The positions of these breakpoints were equivalent to those previously shown for syntenic BTA24 and HSA18. This study presents evidence for the usefulness of ovine BES when constructing a high-resolution comprehensive map for a single sheep chromosome. The comparative analysis confirms and refines knowledge about chromosomal conservation and rearrangements between sheep, cattle and human. The constructed RH map demonstrates the resolution and utility of the newly constructed ovine RH panel.

FULL-malaria: a database for a full-length enriched cDNA library from human malaria parasite, Plasmodium falciparum

FULL-malaria is a database for a full-length-enriched cDNA library from the human malaria parasite Plasmodium falciparum (http://133.11.149.55/). Because of its medical importance, this organism is the first target for genome sequencing of a eukaryotic pathogen; the sequences of two of its 14 chromosomes have already been determined. However, for the full exploitation of this rapidly accumulating information, correct identification of the genes and study of their expression are essential. Using the oligo-capping method, we have produced a full-length-enriched cDNA library from erythrocytic stage parasites and performed one-pass reading. The database consists of nucleotide sequences of 2490 random clones that include 390 (16%) known malaria genes according to BLASTN analysis of the nr-nt database in GenBank; these represent 98 genes, and the clones for 48 of these genes contain the complete protein-coding sequence (49%). On the other hand, comparisons with the complete chromosome 2 sequence revealed that 35 of 210 predicted genes are expressed, and in addition led to detection of three new gene candidates that were not previously known. In total, 19 of these 38 clones (50%) were full-length. From these obser­vations, it is expected that the database contains ∼1000 genes, including 500 full-length clones. It should be an invaluable resource for the development of vaccines and novel drugs.

Fungos associados ao escurecimento da madeira em paricá.

O paricá (Schizolobium parahyba var. amazonicum (Huber ex Ducke) Barneby) é uma espécie de potencial madeireiro e alternativa para reflorestamento de recuperação de áreas degradadas. Sua ocorrência é restrita à Bacia Amazônica, no Brasil, Bolívia e Venezuela. No Brasil, ocorre em mata primária e secundária de terra-firme e várzea alta. Muitos fungos têm sido relatados causando doenças nesta cultura. Em amostras de madeira provenientes de plantios do município de Vigia-PA observou-se a presença de manchas escurecidas associadas à fungos. Assim, o trabalho teve como objetivo identificar os fungos associados ao escurecimento da madeira de paricá por meio de PCR, seguido do sequenciamento do DNA. Para isso, amostras de tecido doente de paricá foram plaqueados em ágar-água. Posteriormente, os fungos foram repicados para meio BDA e mantidos a temperatura ambiente. Foi realizada a extração de DNA para a realização do PCR utilizando os primers ITS4 e ITS5 e posteriormente o sequenciamento nucleotídico. Os produtos do PCR foram avaliados utilizando o programa Blastn, onde foi permitido apenas a identificação dos gêneros dos fungos Lasiodiplodia sp., Fusarium sp., Trichoderma sp. e Rhizoctonia sp. Outros dois fungos não foram identificados.

Identificação molecular de Groundnut ringspot virus em alface no município de Altamira.

A alface (Lactuca sativa L.), pertencente a família Asteracea, é uma das principais hortaliças folhosas cultivadas no Brasil. Em um cultivo de alface no município de Altamira, Estado do Pará, observou-se plantas apresentando manchas necróticas e bronzeamento das folhas, sintomas característicos de Tospovirus. O objetivo do trabalho foi identificar a espécie viral através dos testes de RT-PCR e sequenciamento do DNA. Para isso, amostras das plantas doentes foram levadas ao laboratório de fitopatologia da Embrapa Amazônia Oriental para realizar a extração do DNA e RT-PCR utilizando primers universais para o gênero Tospovirus (BR60/BR65). O produto do RT-PCR foi purificado e enviado para sequenciamento. As sequências foram avaliadas utilizando os programas Blastn, ClustalW e MEGA 7.0. Os isolados de alface provenientes do município de Altamira-PA foram identificados como Groundnut ringspot virus (GRSV).

Identificação molecular de Macrophomina phaseolina em feijão-de-metro.

O feijão-de-metro pertencente à família Fabaceae, é uma hortaliça bastante cultivada no Estado do Pará. Segundo a literatura, várias doenças podem comprometer a sua produtividade, entre elas as causadas por fungos. Em cultivo de feijão-de-metro localizado na área experimental da Embrapa, observou-se podridão mole das vagens. O objetivo deste trabalho foi identificar o fungo associado à podridão da vagem de feijão-de-metro. Para isso, realizou-se o isolamento do fungo da vagem em ágar-água e BDA, e posteriormente a identificação por meio do PCR e sequenciamento de DNA utilizando-se primers da região ITS. A sequência de DNA foi avaliada utilizando os programas Blastn, ClustalW e MEGA 7.0. Através do estudo filogenético da sequência, o isolado foi identificado como sendo Macrophomina phaseolina. Este é o primeiro relato de Macrophomina phaseolina associado à hortaliça feijão-de-metro no Estado do Pará.