A quantitative reverse-transcriptase PCR assay for the assessment of drug activities against intracellular Theileria annulata schizonts.

Intracellular schizonts of the apicomplexans Theileria annulata and Theileria parva immortalize bovine leucocytes thereby causing fatal immunoproliferative diseases. Buparvaquone, a hydroxynaphthoquinone related to parvaquone, is the only drug available against Theileria. The drug is only effective at the onset of infection and emerging resistance underlines the need for identifying alternative compounds. Current drug assays employ monitoring of proliferation of infected cells, with apoptosis of the infected host cell as a read-out, but it is often unclear whether active compounds directly impair the viability of the parasite or primarily induce host cell death. We here report on the development of a quantitative reverse transcriptase real time PCR method based on two Theileria genes, tasp and tap104, which are both expressed in schizonts. Upon in vitro treatment of T. annulata infected bovine monocytes with buparvaquone, TaSP and Tap104 mRNA expression levels significantly decreased in relation to host cell actin already within 4 h of drug exposure, while significant differences in host cell proliferation were detectable only after 48-72 h. TEM revealed marked alterations of the schizont ultrastructure already after 2 h of buparvaquone treatment, while the host cell remained unaffected. Expression of TaSP and Tap104 proteins showed a marked decrease only after 24 h. Therefore, the analysis of expression levels of mRNA coding for TaSP and Tap104 allows to directly measuring impairment of parasite viability. We subsequently applied this method using a series of compounds affecting different targets in other apicomplexan parasites, and show that monitoring of TaSP- and Tap104 mRNA levels constitutes a suitable tool for anti-theilerial drug development.

Flaviviruses in mosquitoes from Southern Portugal, 2009-2010

Os flavivírus são vírus pertencentes à família Flaviviridae, género Flavivirus. Estes formam um grande grupo caraterizado pela sua ampla distribuição e diversidade genética. Os flavivírus são, na sua maioria, transmitidos por artrópodes vectores incluíndo agentes patogénicos para humanos e animais que podem potencialmente provocar grandes epidemias e causar elevadas taxas de mortalidade e morbidade. Nos últimos anos, tem-se registado uma grande expansão a nível da distribuição geográfica dos flavivirus e diversidade dos seus hospedeiros. O vírus do Nilo Ocidental tem sido continuamente detectado em toda a Europa recentemente, e também isolado de mosquitos colhidos no Sul de Portugal, onde já foram registados casos humanos e animais. O principal objectivo deste trabalho é o rastreio de flavivírus em mosquitos colhidos em duas regiões do Sul de Portugal, onde os mesmos foram anteriormente detectados. As colheitas de mosquitos foram realizadas em 24 locais em zonas húmidas nos districtos de Faro e Setúbal, através de armadilhas luminosas tipo CDC com CO2 e aspiradores mecânicos manuais para colheita de mosquitos em repouso em abrigos de animais. Os mosquitos colhidos foram agrupados por lotes contendo aproximadamente 50 espécimens cada, e rastreados para a presença de flavivírus por heminested RT-PCR, direccionado à amplificação de um pequeno fragmento do gene NS5 usando oligonucleótidos degenerados específicos para flavivírus. Entre Abril e Outubro de 2009 e 2010 foram colhidos no total 36273 mosquitos pertencentes às seguintes espécies: Anopheles algeriensis, An.atroparvus, Aedes berlandi, Ae.caspius, Ae.detritus, Coquillettidia richiardii, Culex laticinctus, Cx.pipiens, Cx.theileri, Cx.univittatus, Culiseta annulata, Cs.longiareolata, Cs.subochrea, e Uranotaenia unguiculata. As espécies mais abundantes foram Ae.caspius, Cx.theileri e Cx.pipiens, respectivamente. Contudo, as densidades de mosquitos foram variáveis de acordo com o método de colheita e área de amostragem. As densidades de mosquitos colhidos em 2010 foram quatro vezes superior às registadas no ano anterior. No total foram analisados 745 lotes dos quais 31% testaram positivos para a presença de sequências de flavivirus. As espécies que apresentaram taxas de positividade mais elevadas foram: An.algeriensis com uma Taxa Mínima de Infecção (TMI) de 56/1000 no Algarve em 2009, Cs.annulata TMI =22/1000 no Algarve em 2010, Cx.theileri e Cx.pipiens em Setúbal em 2010, TMI =20/1000. An. atroparvus, Ae. caspius, Ae. detritus e Cx. univittatus também produziram lotes positives. No geral, a positividade foi maior no Algarve. Análise das sequências virais obtidas revelou homologia das nossas sequências virais com sequências de referência de flavivírus específicos de mosquitos depositadas em bases de dados de acesso livre. A análise filogenética reflectiu a variabilidade genética dos flavivírus e revelou a relação genética das nossas sequências com as de outros flavivírus, especialmente os específicos de insectos. Tendo em consideração os anteriores isolamentos do vírus do Nilo Ocidental, o aumento acentuado nas densidades de mosquitos, o aumento de temperaturas que se tem vindo a registar, os casos recentes de transmissão de flavivírus por toda a Europa e o padrão desconhecido e imprevisível dos surtos destes vírus, os programas contínuos de vigilância epidemiológica têm-se revelado uma ferramenta indispensável para a Saúde Pública.

Sôbre os inimigos naturais da lagarta das palmáceas Brassolis sophorae sophorae (L.) (Lep., Brassolidae)

Brassolis sophorae (L.) (Lep., Brassolidae) is an old and important pest of some Brazilian Palmae, among which Cocos nucifera L. and Copemicia cerifera Mart, are the most valuable economically. Eggs are attacked by Anastatus reduvii (Howard) (Eupel-midae) and Telenomus sp. and Telenomus nigrocoxdlis Ashmead (Scelionidae), the larvae being destroyed by Withemia pinguis (F.) (Tachinidae). Six other insects devellop inside the pupae : Xanthozona melanopyga (Wiedmann) and Belvosia sp. (Tachinidae) and the Hymenoptera Brachymeria annulata (F.), B. incerta (Cres-son), Spilochalcis nigrifrons Cameron and S. morleyi Ashmead (Chalcicidae), the last of them being principally treated in this paper. A species of Sarcophagidae (Sarcophaga lambens Wiedmann) was also noted, some flies being gotten from a single pupa. In Piracicaba (State of S. Paulo, Brasil), according to the Author's observations, B. sophorae principal enemy is X. melanopyga, to which our attention has to be directed in a biological fight against the mentioned Brassolidae. The reported Telenomus sp. is also very harmful to B. sophorae eggs. In the whole zone of its distribution, the hosts of B. sophorae caterpillars are Palmae plants, appearing sporadically feeding on banana and sugar cane leaves.

Espécies novas e chave para as espécies de Callia (Coleoptera, Cerambycidae)

New species described: Callia marginata from Peru, C. punctata from Colombia, C. annulata from Ecuador, C. tristis from Bolivia, C. paraguaya from Paraguay; from Brazil: C. divisa and C. tomentosa (Mato Grosso), and C. lissonota (Rondônia). A key to the species of Callia is added.

Himenópteros parasitóides associados a pupas de Methona themisto (Lepidoptera, Nymphalidae) em Florianópolis, Santa Catarina, Brasil

Os objetivos deste estudo foram conhecer a guilda de parasitóides associados a pupas de Methona themisto (Hübner, 1818), avaliando a abundância relativa de cada espécie de parasitóide e o efeito do parasitoidismo na mortalidade do hospedeiro. Foram coletadas 160 pupas de M. themisto, 80 em outubro de 2001 e 80 em outubro de 2002. Essas foram mantidas em temperatura de 25 ± 2,0ºC e fotofase de 14 horas, sendo diariamente observadas, até a emergência de parasitóides ou borboletas. Os seguintes parasitóides foram obtidos das pupas de M. themisto: Brachymeria annulata (Fabricius, 1793), B. mnestor (Walker, 1841) (Chalcididae), Neotheronia sp. (Ichneumonidae), Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1996 e Tetrastichus sp. (Eulophidae). Somente os gêneros Brachymeria e Neotheronia ocorreram nos dois anos de estudo, sendo que o primeiro foi mais abundante em 2001 e o último, em 2002. As outras espécies de parasitóides ocorreram somente no segundo ano de estudo. Este é o primeiro relato da associação de B. annulata, B. mnestor, Neotheronia sp. e P. elaeisis com M. themisto.

Estudos citogenéticos em formigas neotropicais do gênero Gnamptogenys Roger (Hymenoptera, Formicidae, Ectatomminae)

Foram caracterizados os cariótipos de três espécies neotropicais do gênero Gnamptogenys Roger: Gnamptogenys striatula Mayr, Gnamptogenys sp. e Gnamptogenys annulata Mayr, coletadas em Viçosa (Minas Gerais) e Ilhéus (Bahia). O número cromossômico de G. striatula nas duas localidades foi 2n=34, com fórmula cariotípica 2K=24M+10A. Em Gnamptogenys sp., o número cromossômico foi de 2n=46 (fêmea) e n=23 (machos), com a fórmula cariotípica 2K=18M+28A. O número cromossômico de G. annulata foi 2n=68 com a fórmula cariotípica 2K= 6M+62A. Esse tipo de estudo complementa outros estudos iniciados por nosso grupo sobre a citogenética das formigas poneromorfas (sensu Bolton) e poderá contribuir no melhor entendimento da evolução das formigas deste grupo considerado primitivo.

Tabela de vida de fertilidade de três espécies neotropicais de Trichogrammatidae em ovos de hospedeiros alternativos como critério de seleção hospedeira

Tabela de vida de fertilidade de três espécies neotropicais de Trichogrammatidae em ovos de hospedeiros alternativos como critério de seleção hospedeira. O objetivo deste trabalho foi selecionar o hospedeiro alternativo que permita o melhor desenvolvimento das três espécies neotropicais de tricogramatídeos, Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner, 1983; Trichogramma bruni Nagaraja, 1983 e Trichogrammatoidea annulata De Santis, 1972, utilizando-se como parâmetro comparativo as tabelas de vida de fertilidade nos respectivos hospedeiros. Foram estimados a duração média de uma geração (T), taxa líquida de reprodução (Ro), razão infinitesimal (r m) e a razão finita de aumento (λ). A tabela de vida de fertilidade pode ser utilizada para selecionar o hospedeiro alternativo mais adequado para as espécies de tricogramatídeos. Corcyra cephalonica (Stainton, 1865) (Lepidoptera, Pyralidae) foi o hospedeiro alternativo mais adequado para criação de T. annulata e de T. bruni, enquanto que para T. atopovirilia, Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) (Lepidoptera, Pyralidae) e/ou C. cephalonica foram os hospedeiros mais adequados. Sitotroga cerealella (Olivier, 1819) (Lepidoptera, Gelechiidae) apresentou baixa capacidade de aumento populacional para as três espécies de parasitóides, sendo, portanto, uma espécie inadequada como hospedeiro alternativo para as mesmas.

When rare is just a matter of sampling: unexpected dominance of clubtail dragonflies (Odonata, Gomphidae) through different collecting methods at Parque Nacional da Serra do Cipó, Minas Gerais State, Brazil

When rare is just a matter of sampling: Unexpected dominance of clubtail dragonflies (Odonata, Gomphidae) through different collecting methods at Parque Nacional da Serra do Cipó, Minas Gerais State, Brazil. Capture of dragonfly adults during two short expeditions to Parque Nacional da Serra do Cipó, Minas Gerais State, using three distinct collecting methodsaerial nets, Malaise and light sheet trapsis reported. The results are outstanding due the high number of species of Gomphidae (7 out of 26 Odonata species), including a new species of Cyanogomphus Selys, 1873, obtained by two non-traditional collecting methods. Because active collecting with aerial nets is the standard approach for dragonfly inventories, we discuss some aspects of the use of traps, comparing our results with those in the literature, suggesting they should be used as complementary methods in faunistic studies. Furthermore, Zonophora campanulata annulata Belle, 1983 is recorded for the first time from Minas Gerais State and taxonomic notes about Phyllogomphoides regularis (Selys, 1873) and Progomphus complicatus Selys, 1854 are also given.

Linhagens de Trichogramma e Trichogrammatoidea para controle de Stenoma catenifer

O objetivo deste trabalho foi selecionar espécies e linhagens de Trichogramma e Trichogrammatoidea, com potencial para controle da broca-do-abacate Stenoma catenifer, considerada a principal praga do abacateiro (Persea americana Mill.). Experimentos em laboratório foram realizados com 12 linhagens das seguintes espécies, sendo: oito de Trichogramma pretiosum; uma de Trichogramma atopovirilia; duas de Trichogramma bruni; e uma de Trichogrammatoidea annulata. Em telado, determinou-se o número de parasitóides a ser liberado por ovo de S. catenifer. Os parâmetros biológicos avaliados em laboratório foram: duração do período ovo-adulto, emergência, parasitismo, razão sexual, número de parasitóides emergidos por ovo de S. catenifer e longevidade de fêmeas e machos. Em telado, avaliou-se o número de ovos parasitados. As espécies Trichogrammatoidea annulata e Trichogramma atopovirilia e suas linhagens foram selecionadas por parasitar maior número de ovos de S. catenifer. Nessas condições, o maior parasitismo foi obtido com uma proporção estimada de 28 e 30 parasitóides, por ovo da praga, respectivamente, para Trichogrammatoidea annulata e Trichogramma atopovirilia.

Seleção de hospedeiro alternativo para três espécies de tricogramatídeos neotropicais

O objetivo deste trabalho foi avaliar as características biológicas dos parasitóides Trichogrammatoidea annulata, Trichogramma atopovirilia e Trichogramma bruni, criados em hospedeiros alternativos durante diferentes gerações, para selecionar o melhor hospedeiro para a criação massal desses parasitóides. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente ao acaso, em esquema fatorial 3x3 (três hospedeiros - Anagasta kuehniella, Corcyra cephalonica e Sitotroga cerealella - e três gerações - 1ª, 10ª e 28ª). Avaliaram-se: o total de ovos parasitados por fêmea; a longevidade de fêmeas e machos; a duração do período ovo-adulto; a razão sexual; e a viabilidade dos parasitóides. Os parasitóides Trichogrammatoidea annulata e Trichogramma bruni apresentaram melhores resultados em C. cephalonica. Para Trichogramma atopovirilia, o hospedeiro alternativo é C. cephalonica ou A. kuehniella. O hospedeiro S. cerealella foi o menos adequado para as três espécies de parasitóides. Os tricogramatídeos avaliados apresentaram capacidade adaptativa aos hospedeiros alternativos preferenciais, ao longo das gerações.

Reproductive ecology of dipsadine snakes, with emphasis on South American species

A relatively large amount of variation occurs in the reproductive ecology of tropical snakes, and this variation is generally regarded as being a consequence of seasonality in climate and prey availability. In some groups, even closely related species may differ in their reproductive ecology; however, in others it seems to be very conservative. Here we explore whether characters related to reproduction are phylogenetically constrained in a monophyletic group of snakes, the subfamily Dipsadinae, which ranges from Mexico to southern South America. We provide original data on reproduction for Leptodeira annulata, Imantodes cenchoa, and three species of Sibynomorphus from southern, southeastern and central Brazil, and data from literature for other species and populations of dipsadines. Follicular cycles were seasonal in Atractus reticulatus, Dipsa, albifrons, Hypsiglena torquata, Leptodeira maculata, L. punctata, Sibynomorphus spp. and Sibon sanniola from areas where climate is seasonal. In contrast, extended or continuous follicular cycles were recorded in Dipsas catesbyi, D. neivai, Imantodes cenchoa, Leptodeira annulata, and Ninia maculata from areas with seasonal and aseasonal climates. Testicular cycles also varied from seasonal (in H. torquiata) to continuous (in Dipsa,5 spp., Leptodeira annulata, L. maculata, N. maculata, and Sibynomorphus spp.). Most dipsadines are small (less than 500 rum SVL), and females attain sexual maturity with similar relative body size than males. Sexual dimorphism occurred in terms of SVL and tail length in most species, and clutch size tended to be small (less than five eggs). Combat behavior occurs in Imantodes cenchoa, which did not show sexual size dimorphism. Reproductive timing, for both females and males, varied among species but in general there were no differences between the tribes of Dipsadinae in most of the reproductive characteristics, such as mean body size, relative size at sexual maturity, sexual size and tail dimorphism, duration of vitellogenesis or egg-carrying in oviducts.

Identification of bradykinins in solitary wasp venoms

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Taxonomy and distribution of Paralemanea (Lemaneaceae, Rhodophyta) in Central Mexico

Three collections of Paralemanea from Central Mexico included two species. Paralemanea mexicana is large (length ≥ 4.0 cm; diameter > 400 μm) and generally branched (≥ 40 % of plants branched), with whorled branches, of first to second order. Paralemanea annulata is small (length < 5.0 cm ; diameter < 500 μm), generally unbranched (≤ 5 % of plants branched), with branches of first order. Spermatangial sori contained obovoid spermatangia, formed from cells of the outer cortical layers, extending above the thallus surface. Carpogonial branches are described for the first time in P. mexicana. They develop on lateral filaments at nodes or internodes and have ovoid to globular cells, abundantly branched at the basal portion, penetrating the cortex towards the thallus surface. Carposporophytes are sessile on the inner portion of the cortex and produce carpospores in chains of up to twelve. The 'Chantransia' stage was observed in P. mexicana. Paralemanea annulata is described for the first time from Mexico and P. mexicana is endemic from this country. Both species were collected in cold (temperature 12-16°C), acidic (pH 5.5-6.0), shallow (depth 1-60 cm) and moderate to fast flowing waters (> 35 cm s-1), in shaded or partly shaded river segments, on rocky substrata (mostly bedrock).

Cytogenetical aspects of testicular cells in economically important species of coreidae family (Heteroptera)

Some cytogenetical aspects of spermatozoa formation were studied in 9 Coreidae Brazilian species: Anasa bellator, Athaumastus haematicus, Chariesterus armatus, Dallacoris obscura, Dallacoris pictus, Leptoglossus gonagra, Leptoglossus zonatus, Sphictyrtus fasciatus, and Zicca annulata. Similarly to the other species described to date, all the species studied herein showed cystic spermatogenesis, a reddish membrane covering the testes, a X0 sex determining system, a pair of m-chromosomes, intersticial chiasmata in most autosomes, and autosomes dividing reductionally at first meiotic division and equationally in the second 1 while sex chromosomes, divide equationally and reductionally at first and second meiotic division, respectively. In addition, it was observed that the sex chromosome is heteropycnotic at prophase and that heteropycnotic chromosomal material is found in the nuclei at spermiogenesis. In the species studied, the diploid chromosome number ranged from 19 to 25. It was 19 in S. fasciatus (16A+2m+X0); 21 in A. bellator, A. haematicus, D. obscura, D. pictus, L. gonagra, and L. zonatus (18A+2m+X0); 23 in Z. annulata (20A+2m+X0); and 25 in C. armatus (22A+2m+X0). © 2007 The Japan Mendel Society.