Efficient gene activation in cultured mammalian cells mediated by FLP recombinase-expressing recombinant adenovirus

A recombinant adenovirus (rAd) expressing Cre recombinase derived from bacteriophage P1 has already been extensively used for the conditional gene activation and inactivation strategies in mammalian systems. In this study, we generated AxCAFLP, a rAd expressing FLP recombinase derived from Saccharomyces cerevisiae and carried out quantitative comparisons with Cre-expressing rAd in both in vitro and in cultured cells to provide another efficient gene regulation system in mammalian cells. In the in vitro experiments, the relative recombination efficiency of FLP expressed in 293 cells infected with FLP-expressing rAd was approximately one-thirtieth that of Cre even at 30°C, the optimum temperature for FLP activity, and was approximately one-ninetieth at 37°C. Co-infection experiments in HeLa cells using a target rAd conditionally expressing LacZ under the control of FLP showed that an FLP-expressing rAd, infected at a multiplicity of infection (MOI) of 5, was able to activate the transgene in almost 100% of HeLa cells whereas the Cre-expressing rAd was sufficient at an MOI of 0.2. Since an MOI of 5 is ordinarily used in rAd experiments, these results showed that the FLP-expressing rAd is useful for gene activation strategies and is probably applicable to a sequential gene regulation system in combination with Cre-expressing rAd in mammalian cells.

A deletion mutant in the human cytomegalovirus gene encoding IE1(491aa) is replication defective due to a failure in autoregulation.

Human cytomegalovirus (CMV) replication begins with the expression of two regulatory proteins, IE1(491aa) and IE2(579aa), produced from differentially spliced transcripts under control of the ie1/ie2 promoter-enhancer. A deletion mutation removing all 406 IE1(491aa)-specific amino acids was engineered into the viral genome and this mutant (RC303 delta Acc) was propagated on an IE1(491aa)-expressing human fibroblast cell line (ihfie1.3). RC303 delta Acc failed to replicate on normal human fibroblasts at low multiplicities of infection (mois). At mois > 3 plaque-forming units per cell, virus replication and production of progeny were comparable to wild type. However, at mois between 0.01 and 1, mutant virus replicated slowly on normal fibroblasts, a pattern that suggested initiation of productive infection required multiple hits. Replication of RC303 delta Acc correlated with the ability to express IE2(579aa), consistent with a role for IE1(491aa) in positive autoregulation of the ie1/ie2 promoter-enhancer and with data suggesting that virion transactivators compensate for the lack of IE1(491aa) under high moi conditions. ie1-deficient CMV should be completely avirulent, suggesting its utility as a gene therapy vector for hematopoietic progenitors that are normal sites of CMV latency.

Efficient infection of a human T-cell line and of human primary peripheral blood leukocytes with a pseudotyped retrovirus vector.

Peripheral blood lymphocytes (PBLs) are an important target for gene transfer studies aimed at human gene therapy. However, no reproducibly efficient methods are currently available to transfer foreign, potentially therapeutic genes into these cells. While vectors derived from murine retroviruses have been the most widely used system, their low infection efficiency in lymphocytes has required prolonged in vitro culturing and selection after infection to obtain useful numbers of genetically modified cells. We previously reported that retroviral vectors pseudotyped with vesicular stomatitis G glycoprotein (VSV-G) envelope can infect a wide variety of cell types and can be concentrated to titers of greater than 10(9) infectious units/ml. In this present study, we examined the ability of amphotropic and pseudotyped vectors expressing a murine cell surface protein, B7-1, to infect the human T-cell line Jurkat or human blood lymphocytes. Limiting dilution analysis of transduced Jurkat cells demonstrated that the pseudotyped vector is significantly more efficient in infecting T cells than an amphotropic vector used at the same multiplicity of infection (moi). To identify the transduction efficiency on PBLs, we examined the levels of cell surface expression of the B7-1 surface marker 48 to 72 hr after infection. The transduction efficiency of PBLs with the pseudotyped vector increased linearly with increasing moi to a maximum of approximately 16-32% at an moi of 40. This relatively high efficiency of infection of a T-cell line and of blood lymphocytes with VSV-G pseudotyped virus demonstrates that such modified pseudotyped retrovirus vectors may be useful reagents for studies of gene therapy for a variety of genetic or neoplastic disorders.

Isolation of a differentially regulated splicing isoform of human NF-E2.

The transcription factor NF-E2 (nuclear factor erythroid 2), interacting via DNA motifs within regulatory regions of several hematopoietic genes, is thought to mediate the enhancer activity of the globin locus control regions. By screening a human fetal liver cDNA library with probes derived from mouse NF-E2, we have isolated a splicing variant of the NF-E2 gene (fNF-E2) that differs in the 5' untranslated region from the previously reported cDNA (aNF-E2). The fNF-E2 isoform is transcribed from an alternative promoter located in the 3' end of the first intron and joined by alternative splicing to the second and third exons, which are shared by both RNA isoforms. Although the two forms produce the same protein, they are expressed in different ratios during development. fNF-E2 is more abundant in the fetal liver and less abundant in the adult bone marrow compared to the previously described form. Their distribution apparently follows the differential expression of fetal and adult hemoglobins.

Stability switches in a first-order complex neutral delay equation

Stability of the first-order neutral delay equation x’ (t) + ax’ (t – τ) = bx(t) + cx(t – τ) with complex coefficients is studied, by analyzing the existence of stability switches.

La danza española y la ilusión cinematográfica en Mariemma: de las variedades al recital de danzas (1934-1943)

El papel específico de Mariemma (1917-2008) en su contribución a la conformación de la identidad de la danza española tras la guerra civil, exige ser estudiado desde los numerosos frentes que plasmaron su actividad como bailarina, coreógrafa y maestra. Este trabajo busca dar una primera aproximación de la recepción, el contexto formal y el repertorio en el que Mariemma proyecta su carrera artística desde España (1940), tras sus años de infancia y juventud en París (1920-1939). Con este objetivo, se utiliza una metodología que combina las entrevistas a informantes que fueron testigos cercanos de su labor, además del apoyo en fuentes documentales (hemeroteca y fílmicas) desconocidas hasta ahora. Desde los años 40, la bailarina presentó bailes regionales junto con repertorio de escuela bolera, flamenco y danza estilizada en el formato del recital de danzas. Al mismo tiempo. Mariemma hacía sus primeras incursiones en el cine con títulos como Boy (Antonio Calvache, 1940) o Donne-moi tes yeux (Sacha Guitry, 1943). Películas que han pasado desapercibidas porque pertenecen a los primeros años de la posguerra española y coinciden cronológicamente con su debut en el formato del recital de danzas. Por otra parte, son documentos con una visibilidad mínima al quedar sumergidos en las hemerotecas o supeditados a las exigencias de la gran industria cinematográfica.

Situación actual del acogimiento familiar y acogimiento residencial en España

Este Trabajo Final de Grado, en primer lugar, recoge un acercamiento al acogimiento residencial y acogimiento familiar, derivada la información de las diferentes investigaciones, teorías y opiniones de expertos de la protección a la infancia. Seguidamente, hemos recogido los datos a través de un enfoque cualitativo de corte descriptivo, con entrevistas semi-estructuradas en profundidad, a cuatro profesionales y/o expertos del acogimiento residencial y acogimiento familiar. Para el análisis de los datos se ha utilizado la corriente en función de análisis o interpretación de los textos “interno” o “contextual”, más concretamente el análisis temático. Dichas entrevistas han tenido suficiente riqueza y visión desde las diferentes perspectivas, debido a la experiencia de los profesionales consultados. A través de estas entrevistas, hemos conocido según criterios técnicos cual es la preferencia de los profesionales para un menor, el acogimiento familiar o acogimiento residencial, según la casuística. También hemos profundizado en la realidad existente del acogimiento familiar y acogimiento residencial en relación a la Ley 26/2015, de 28 de julio1. Por otro lado, se han identificado las diferentes situaciones, barreras y problemáticas que existen en cuanto al acogimiento familiar y residencial en España. Y por último, en relación a lo anterior, hemos realizado una serie de propuestas para la mejora de la ejecución de las medidas de protección de menores. Los resultados nos han arrojado la preferencia del acogimiento familiar por delante del acogimiento residencial, aunque dependiendo de la casuística del menor, ya que hay en casos específicos que basado en criterios técnicos debe priorizarse el acogimiento residencial. También, hemos destacado como positivo las nuevas propuestas de la nueva ley, principalmente la referida a que prevalecerá la medida de acogimiento familiar sobre la de acogimiento residencial para cualquier menor de 6 años, aunque se necesita de dotarlo de recursos para que se pueda llevar a cabo. En tercer lugar, en cuanto al acogimiento familiar, se ha reflejado que las barreras y problemas existentes están en relación a la financiación y dotación de recursos, seguimiento, campañas de sensibilización y captación, formación de los profesionales, cultura del recurso, acogimiento profesional y ayuda complementaria al menor. Y en cuanto al acogimiento residencial, la financiación y dotación de recursos, estigma social, formación de los profesionales, intervención asistencialista, integración en la sociedad, excesiva burocratización y centros específicos. Por último, en cuanto a las propuestas, para el acogimiento familiar dotaciones económicas suficientes, ratio más bajo de profesional por familias, el seguimiento se realice de manera continua, dar el salto a familias profesionales o familias profesionales especializadas, creación de servicio en los centros de protección para que esas familias puedan verse con los niños, formación de profesionales en acogimiento familiar, recurso más abierto a la comunidad y coordinación con el acogimiento residencial. Las propuestas para el acogimiento residencial son responsabilidad pública y dotación económica suficiente, trabajo conjunto entre entidades y administración pública, profesionalización, apertura a la comunidad y a la sociedad y coordinación con el acogimiento familiar.

Les emprunts lexicaux français du roumain. Étude de cas: Ion Luca Caragiale, O soacrã

L’étude que je viens de mener s’adresse principalement à un public universitaire, aux italiens, à mes amis et professeurs, et à toutes ces personnes curieuses comme moi, qui n’ont pas encore eu la chance de connaitre la Roumanie dans le sens de son lien bien étroit avec la France. Il s’agit d’une analyse contextuelle et spécifique à la fois. Bien que restant une étude de surface sur de nombreux aspects j’ai tenté de montrer, à travers l’historiographie atypique de la culture roumaine, que celle-ci s’imprègne avant tout du français, aussi bien par son mimétisme socio-culturel que par l’évolution de sa langue. Nous avons pu constater à travers divers exemples - en partant du phénomène social “Petit-Paris” aux termes calqués en passant par l’intertextualité française - que la France a joué un rôle majeur dans l’épanouissement de la culture roumaine. Plus particulièrement, l’étude de la farce fantaisiste de Ion Luca Caragiale, O soacră, m’a permis de comprendre et de partager à travers l’analyse et la traduction de cette pièce ce mimétisme classique que le théâtre français prodiguait tant au XVIIè siècle.

La chanson du Charbonnier /

For voice and piano.

Un groupe d'artistes : opéra-bouffe en un acte : no. 4, couplets pour ténor /

For voice (T) and piano.

Album /

For voice and piano.

Drevni i vizanti i ski i kovchezhets.

Cover title.

Recherches sur les premiers papiers employés en Occident et en Orient du Xe au XIVe siècle,

"Extrait des Mémoires de la Société nationale des antiquaires de France. t. XLVI.'

Razskazy [i pʹesy]

Makar Chudra. O chizhi︠e︡, kotoryĭ lgal, i o d︠ia︡tli︠e︡- li︠u︡biteli︠e︡ istiny. Emelʹi︠a︡n Pili︠a︡ĭ. D︠ie︡d Arkhip i Lenʹka. Chelkash. Starykha Izergil. Odnazhdy osenʹi︠u︡. Oshibka. Moĭ sputnik. D︠ie︡lo s zastezhkami. P︠ie︡sn︠ia︡ o so koli︠e︡. Na plotakh. Bolesʹ. Toska. -- t. 2. Konovalov. Khan i ego syn. Vyvod. Suprugi Orlovy. Byvshīe li︠u︡di. Ozornik. Barenʹka Olesova. Tovarishchi. -- t. 3. V stepi. Malʹva. I︠A︡rmarka v Goltvi︠e︡. Zazubrina. Skuki padi. Kain i Artem. Druzhki. Prokhodimet︠︡s. Chitatelʹ. O chort︠ie︡. Eshche o chort︠ie︡. Vasʹka Krasnyĭ. -- t. 4. Foma Gord︠ie︡ev. Dvad︠t︡satʹ shestʹ i odna. -- Troe. Pesn︠ia︡ o burevestnike. -- t. 6-8. Mi︠e︡shchane. Na dne. Dachniki. D︠ie︡ti soln︠t︡sa. Varvary. Vragi. -- t. 9. Chelovek. T︠iu︡rʹma. Bukoemov, Karp Ivanovich. Razskazy Filippa Vasilʹevicha. Ispovedʹ

Zapiski i dnevnik

Half-title: Moi︢a︣ povest'o samom sebi︢e︣ i o tom "Chemu svidietel' v zhizni byl."