Antibacterials and modulators of bacterial resistance from the immature cones of Chamaecyparis lawsoniana

As part of an on-going project to characterize compounds from immature conifer cones with antibacterial or modulatory activity against multidrug-resistant (MDR) strains of Staphylococcus aureus, eight compounds were isolated from the cones of Chatnaecyparis lawsoniana. The active compounds were mainly diterpenes, with minimum inhibitory concentrations ranging from 4 to 128 mu g/ml against MDR effluxing S. aureus strains and two epidemic methicillin-resistant (EMRSA) clinical isolates. The compounds extracted were the diterpenes ferruginol, pisiferol and its epimer 5-epipisiferol, formosanoxide, trans-communic acid and torulosal, the sesquiterpene oplopanonyl acetate and the germacrane 4 beta-hydroxygermacra-1(10)-5-diene. Some of these compounds also exhibited modulatory activity in potentiating antibiotic activity against effluxing strains and ferruginol, used at a sub-inhibitory concentration, resulted in an 80-fold potentiation of oxacillin activity against strain EMRSA-15. An efflux inhibition assay using an S. aureus strain possessing the MDR NorA efflux pump resulted in 40% inhibition of ethidium bromide efflux at 10 mu M ferruginol (2.86 mu g/ml). We report the H-1 and C-13 NMR data for the cis A/B ring junction epimer of pisiferol which we have named 5-epipisiferol. We also unambiguously assign all H-1 and C-13 NMR resonances for trans-communic acid. (c) 2006 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Isopimaric acid from Pinus nigra shows activity against multidrug-resistant and EMRSA strains of Staphylococcus aureus

The diterpene isopimaric acid was extracted from the immature cones of Pinus nigra (Arnold) using bioassay. guided fractionation of a crude hexane extract. Isopimaric acid was assayed against multidrug-resistant (MDR) and methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). The minimum inhibitory concentrations (MIC) were 32-64 mu g/mL and compared with a commercially obtained resin acid, abietic acid, with MICs of 64 mu g/mL. Resin acids are known to have antibacterial activity and are valued in traditional medicine for their antiseptic properties: These results show that isopimaric acid is active against MDR an MRSA strains of S. aureus which are becoming, increasingly resistant to antibiotics. Both compounds were evaluated for modulation activity in combination with antibiotics, but did not potentiate the activity of the antibiotics tested. However, the compounds were also assayed in combination with the efflux pump inhibitor reserpine, to ice if inhibition of the TetK or NorA efflux pump increased their activity. Interestingly, rather than a potentiation of activity by a reduction in MIC, a two to four-fold increase in MIC was seen. It may he that isopimaric acid and abietic acid are not substrates for these efflux pumps, but it is also possible that an antagonistic interaction with reserpine may render the antibiotics inactive. H-1-NMR of abietic acid and reserpine taken individually and in combination, revealed a shift in resonance of some peaks for both compounds when mixed together compared with the spectra of the compounds on their own. It is proposed that this may he due to complex formation between abietic acid and reserpine and that this complex formation is responsible for a reduction in activity and elevation of MIC. Copyright (c) 2005 John Wiley & Sons, Ltd.

Estudo da influência dos alelos do HLA classe I e II e do polimorfismo dos genes de citocinas na infecção pelo HTLV-1

INTRODUÇÃO: O vírus linfotrópico para células T humanas (HTLV-1) é o principal agente causador da Paraparesia Espástica Tropical / Mielopatia associada ao HTLV-1 (PET/MAH) e da Leucemia da célula T do Adulto (LTA). A maioria dos indivíduos infectados permanece assintomática, somente 2 a 5% irão desenvolver uma das duas doenças. Fatores da interação HTLV-1/ hospedeiro estão envolvidos no risco de desenvolver doença. A lesão neurológica na PET/MAH parece ser consequência de uma reação inflamatória, desencadeada pelo reconhecimento de células infectadas por linfócitos T citotóxicos, com consequente liberação de citocinas e lesão medular. OBJETIVO: Identificar marcadores genéticos, que possam ajudar no prognóstico e tratamento dos pacientes portadores do HTLV-1. MÉTODOS: Nas amostras de 117 portadores do HTLV-1 assintomáticos e 171 pacientes com acometimento neurológico em acompanhamento na cidade do Rio de Janeiro, foram realizadas as tipificações dos genes do HLA Classe I e II, dos polimorfismos dos genes das citocinas -308TNF-\03B1,-174IL-6, +874IFN-\03B3, códon 10 e 25TGF-\03B21 e -1082 - 819-592IL-10, e a quantificação da carga proviral. Os dados foram organizados em um banco de dados no programa SPSS. As frequências alélicas e genotípicas foram obtidas por contagem direta. O equilíbrio de Hardy-Weinberg foi avaliado para os polimorfismos das citocinas no sitio http://bioinfo.iconcologia.net/ubbweb/SNPStats_web, em relação ao HLA foram utilizadas as ferramentas disponíveis no sítio \201CLos Alamos HIV database tools\201D. As comparações entre os grupos foram realizadas através de tabelas de contingência 2x2 (quiquadrado, exato de Fisher e odds ratios), valores de p\22640,05 foram considerados significantes RESULTADOS E CONCLUSÕES: O alelo A*02 não influencia a condição clínica nem os níveis da carga proviral. Os alelos A*29 e B*44 foram mais frequentes entre os indivíduos assintomáticos e a sua presença influenciou os níveis da carga proviral sugerindo proteção ao desenvolvimento de doença neurológica. O alelo A*68 foi mais frequente entre os pacientes com doença neurológica, porém sua presença não influenciou nos níveis da carga proviral. O alelo C*04 foi mais frequente entre os portadores assintomáticos e não influenciou os níveis de carga proviral, já o alelo DRB1*03 predominou entre os pacientes com doença neurológica e a sua presença entre os indivíduos assintomáticos acarretou níveis mais elevados de carga proviral, sugerindo ser um possível fator de risco para o desenvolvimento de doença neurológica. Na análise do polimorfismo genético das citocinas, o polimorfismo de IL-10, com perfil fenotípico de baixo produtor da citocina foi mais frequente no grupo dos assintomáticos, enquanto que o fenótipo de produtor intermediário predominou entre os sintomáticos. O perfil fenotípico da população estudada foi caracterizado como: baixo produtor da citocina -308TNF-\03B1, intermediário a alto produtor para códon 10 e códon 25 TGF-\03B2, baixo a intermediário produtor para -1082,-819,- 592 IL-10, alto produtor para -174 IL-6 e baixo a intermediário produtor para +874IFN-\03B3

Exposure of Escherichia coli and Salmonella enterica serovar Typhimurium to triclosan induces a species-specific response, including drug detoxification

Objectives: The use of triclosan within various environments has been linked to the development of multiple drug resistance (MDR) through the increased expression of efflux pumps such as AcrAB-ToIC. In this work, we investigate the effect of triclosan exposure in order to ascertain the response of two species to the presence of this widely used biocide. Methods: The transcriptomes of Salmonella enterica serovar Typhimurium SL1344 and Escherichia coli K-12 MG1655 after exposure to the MIC of triclosan (0.12 mg/L) were determined in microarray experiments. Phenotypic validation of the transcriptomic data included RT-PCR, ability to form a biofilm and motility assays. Results: Despite important differences in the triclosan-dependent transcriptomes of the two species, increased expression of efflux pump component genes was seen in both. Increased expression of soxS was observed in Salmonella Typhimurium, however, within E. coli, decreased expression was seen. Expression of fabBAGI in Salmonella Typhimurium was decreased, whereas in E. coli expression of fabABFH was increased. Increased expression of ompR and genes within this regulon (e.g. ompC, csgD and ssrA) was seen in the transcriptome of Salmonella Typhimurium. An unexpected response of E. coli was the differential expression of genes within operons involved in iron homeostasis; these included fhu, fep and ent. Conclusions: These data indicate that whilst a core response to triclosan exposure exists, the differential transcriptome of each species was different. This suggests that E. coli K-12 should not be considered the paradigm for the Enterobacteriaceae when exploring the effects of antimicrobial agents.

Polymer-drug conjugates: towards a novel approach for the treatment of endrocine-related cancer

The last decade has seen successful clinical application of polymer–protein conjugates (e.g. Oncaspar, Neulasta) and promising results in clinical trials with polymer–anticancer drug conjugates. This, together with the realisation that nanomedicines may play an important future role in cancer diagnosis and treatment, has increased interest in this emerging field. More than 10 anticancer conjugates have now entered clinical development. Phase I/II clinical trials involving N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide (HPMA) copolymer-doxorubicin (PK1; FCE28068) showed a four- to fivefold reduction in anthracycline-related toxicity, and, despite cumulative doses up to 1680 mg/m2 (doxorubicin equivalent), no cardiotoxicity was observed. Antitumour activity in chemotherapy-resistant/refractory patients (including breast cancer) was also seen at doxorubicin doses of 80–320 mg/m2, consistent with tumour targeting by the enhanced permeability (EPR) effect. Hints, preclinical and clinical, that polymer anthracycline conjugation can bypass multidrug resistance (MDR) reinforce our hope that polymer drugs will prove useful in improving treatment of endocrine-related cancers. These promising early clinical results open the possibility of using the water-soluble polymers as platforms for delivery of a cocktail of pendant drugs. In particular, we have recently described the first conjugates to combine endocrine therapy and chemotherapy. Their markedly enhanced in vitro activity encourages further development of such novel, polymer-based combination therapies. This review briefly describes the current status of polymer therapeutics as anticancer agents, and discusses the opportunities for design of second-generation, polymer-based combination therapy, including the cocktail of agents that will be needed to treat resistant metastatic cancer.

Interaction between allelic variations in vitamin D receptor and retinoid X receptor genes on metabolic traits

BACKGROUND: Low vitamin D status has been shown to be a risk factor for several metabolic traits such as obesity, diabetes and cardiovascular disease. The biological actions of 1, 25-dihydroxyvitamin D, are mediated through the vitamin D receptor (VDR), which heterodimerizes with retinoid X receptor, gamma (RXRG). Hence, we examined the potential interactions between the tagging polymorphisms in the VDR (22 tag SNPs) and RXRG (23 tag SNPs) genes on metabolic outcomes such as body mass index, waist circumference, waist-hip ratio (WHR), high- and low-density lipoprotein (LDL) cholesterols, serum triglycerides, systolic and diastolic blood pressures and glycated haemoglobin in the 1958 British Birth Cohort (1958BC, up to n = 5,231). We used Multifactor- dimensionality reduction (MDR) program as a non-parametric test to examine for potential interactions between the VDR and RXRG gene polymorphisms in the 1958BC. We used the data from Northern Finland Birth Cohort 1966 (NFBC66, up to n = 5,316) and Twins UK (up to n = 3,943) to replicate our initial findings from 1958BC. RESULTS: After Bonferroni correction, the joint-likelihood ratio test suggested interactions on serum triglycerides (4 SNP - SNP pairs), LDL cholesterol (2 SNP - SNP pairs) and WHR (1 SNP - SNP pair) in the 1958BC. MDR permutation model testing analysis showed one two-way and one three-way interaction to be statistically significant on serum triglycerides in the 1958BC. In meta-analysis of results from two replication cohorts (NFBC66 and Twins UK, total n = 8,183), none of the interactions remained after correction for multiple testing (Pinteraction >0.17). CONCLUSIONS: Our results did not provide strong evidence for interactions between allelic variations in VDR and RXRG genes on metabolic outcomes; however, further replication studies on large samples are needed to confirm our findings.

Programs to compute magnetization to density ratio and the magnetization inclination from 3-D gravity and magnetic anomalies

Vector field formulation based on the Poisson theorem allows an automatic determination of rock physical properties (magnetization to density ratio-MDR-and the magnetization inclination-MI) from combined processing of gravity and magnetic geophysical data. The basic assumptions (i.e., Poisson conditions) are: that gravity and magnetic fields share common sources, and that these sources have a uniform magnetization direction and MDR. In addition, the previously existing formulation was restricted to profile data, and assumed sufficiently elongated (2-D) sources. For sources that violate Poisson conditions or have a 3-D geometry, the apparent values of MDR and MI that are generated in this way have an unclear relationship to the actual properties in the subsurface. We present Fortran programs that estimate MDR and MI values for 3-D sources through processing of gridded gravity and magnetic data. Tests with simple geophysical models indicate that magnetization polarity can be successfully recovered by MDR-MI processing, even in cases where juxtaposed bodies cannot be clearly distinguished on the basis of anomaly data. These results may be useful in crustal studies, especially in mapping magnetization polarity from marine-based gravity and magnetic data. (c) 2007 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Balanoposthitis caused by Pseudomonas aeruginosa co-producing metallo-beta-lactamase and 16S rRNA methylase in children with hematological malignancies

Balanoposthitis is defined as the inflammation of the glans penis and its foreskin. In the presence of other underlying medical conditions, this localized infection may spread systemically, serving as a source of fever and bacteremia in neutropenic males. Two rare cases of balanoposthitis caused by a clonally related Pseudomonas aeruginosa isolate co-producing the SPM-1 metallo-beta-lactamase and the novel 16S rRNA methylase RmtD are described. Four multidrug-resistant (MDR) P. aeruginosa isolates were successively recovered from glans/foreskin swabs and urine cultures from two uncircumcised pediatric patients, one with Burkitt`s non-Hodgkin`s lymphoma and one with acute lymphoblastic leukemia. Clinically, preputial colonization by MDR P. aeruginosa evolved to severe balanoposthitis with glans/foreskin lesions as a source of fever. Combination therapy of ciprofloxacin and/or aztreonam (systemic) plus polymyxin B (topical) was effective once reversion of the neutropenic condition was achieved. Although P. aeruginosa remains an unusual cause of balanoposthitis, these cases should alert the physician to the potential pathogenicity of this bacterium. Furthermore, co-production of metallo-beta-lactamase and 16S rRNA methylase has a potential impact on the empirical management of complicated infections caused by P. aeruginosa. Crown Copyright (C) 2009 Published by Elsevier Ltd on behalf of International Society for Infectious Diseases. All rights reserved.

O mutante pso9-1 de Saccharomyces cerevisiae, sensível a psoralenos fotoativados, contém um alelo mutante do gene MEC3 envolvido em checkpoint

Análises de complementação do mutante pso9-1, sensível a psoralenos mono- e bifuncionais fotoativados, UV254nm e nitrosoguanidina, com os mutantes pso1 a pso8, confirmou que este contém uma nova mutação pso. A clonagem molecular a partir de um banco genômico de levedura sugeriu pso9-1 como alelo mutante do gene de checkpoint que responde a danos no DNA MEC3. A não-complementação de vários fenótipos de sensibilidade em diplóides pso9-1/mec3∆ confirmou o alelismo dos dois mutantes. A sensibilidade à calcofluor white e à cafeína não foi aumentada nas linhagens pso9-1 e mec3∆, em relação as suas respectivas selvagens, sugerindo que o mutante pso9-1 não porta uma mutação na região promotora. O fenótipo mutante de mec3∆ foi levemente mais pronunciado para sensibilidade à 8-MOP + UVA e UVC, e para a supressão de mutação para frente induzida por UVC, sugerindo uma função residual para a proteína produzida por este alelo mutante.

Caracterização molecular da mutação pso8-1/rad6 de Saccharomyces cerevisiae, sensível à fotoadição de psoralenos, à radiação UVC e a mutágenos químicos

Um novo mutante isolado da levedura Saccharomyces cerevisiae, sensível à fotoativação de psoralenos mono- e bi-funcionais, à UVC e ao MNNG, complementou o fenótipo de sensibilidade à fotoadição de psoralenos conferido pelas mutações pso1 a pso7 e assim foi chamado pso8-1. O duplo mutante pso8-1 rad4-4 foi altamente sensível à UVC, indicando assim uma interação sinergística dos dois mutantes alelos. A clonagem molecular pela complementação do fenótipo de sensibilidade à radiação UVC do mutante pso8-1 e estudos genéticos revelaram que pso8-1 é alelo ao gene RAD6. O produto do gene RAD6/UBC2 é uma enzima conjugada à ubiquitina envolvida em reparação de DNA, esporulação, recombinação, indução de mutagênese, degradação de proteínas, genes silenciosos, transposição Ty1. Enquanto o mutante pso8-1 apresenta um fenótipo mutador espontâneo e possui baixa mutabilidade induzida a mutágenos, a esporulação de diplóides homoalélicas mostrou eficiência próxima à da linhagem selvagem. A análise da seqüência do mutante alelo mostrou que pso8-1 contém uma nova, e até agora desconhecida, transição T→C no nucleotídeo 191, levando à substituição de uma prolina altamente conservada por uma leucina na posição 64 (Rad6-[P64L]) que pode ter severas conseqüências na estrutura terciária da proteína mutada, e conseqüente ligação a pRad18.

Relações evolutivas entre Passiflora actinia Hooker e Passiflora elegans masters (Passifloraceae)

Em estudos prévios sobre a filogenia de Passiflora, as espécies P. actinia e P. elegans destacaram-se pela sua grande similaridade genética, apesar de sua classificação em séries taxonômicas distintas. As duas espécies apresentam distribuição geográfica muito diferente. Enquanto P. actinia é encontrada em áreas de Mata Atlântica desde o estado do Espírito Santo até o Rio Grande do Sul (RS), P. elegans está restrita ao RS e a poucas regiões limítrofes. Para melhor avaliar as relações evolutivas entre estas duas espécies foram realizadas coletas intensivas em todo o estado e desenvolvidos testes quanto às seqüências dos espaçadores intergênicos cloroplasmáticos trnL-trnF e psbA-trnH, e dos espaçadores transcritos dos genes ribossomais nucleares ITS de plantas de diferentes localidades. As análises revelaram uma baixa variabilidade intraespecífica, e evidenciaram um perfil genético próprio a cada espécie. Nas comparações interespecíficas, foram utilizadas seqüências de espécies do subgênero (Passiflora) estudadas previamente, pertencentes às séries Simplicifoliae e Lobatae, as mesmas de P. actinia e P. elegans, respectivamente. Nos três marcadores as menores distâncias genéticas encontradas foram entre estas duas espécies, sugerindo o pouco tempo de divergência entre elas. Estas comparações não mostraram diferenças marcantes nas diversidades dentro e entre as duas séries, indicando similaridade genética entre elas Apesar da intensa amostragem realizada na área limítrofe das distribuições de P. actinia e P. elegans, somente foi encontrado um híbrido entre as duas. Além do fenótipo morfológico intermediário, o híbrido pôde ser reconhecido através das suas características genéticas, o espaçador nuclear ITS apresentando padrão aditivo nos sítios variáveis destas duas espécies; as seqüências dos marcadores cloroplasmáticos foram iguais às de P. actinia, indicando que esta é a espécie doadora deste genoma. Os padrões genéticos e geográficos destas duas espécies sugerem que o processo de especiação que se desenvolveu entre as duas seja recente e tenha ocorrido em alopatria, estando provavelmente ligado aos eventos geológicos do Holoceno que influenciaram a migração da Mata Atlântica no RS. A investigação das características abióticas das regiões de ocorrência das espécies não apresentou grandes dissimilaridades, podendo indicar que a atual segregação espacial deva-se à fragmentação florestal ou que haja exclusão competitiva entre elas, pois apresentam nichos ecológicos muito semelhantes.

Caracterização fenotípica e molecular de genótipos de fumo utilizados no sul do Brasil

O conhecimento do germoplasma disponível permite ao melhorista de fumo planejar estrategicamente o uso de genitores visando à ampliação da variância genética nas populações segregantes. Apesar de acreditar-se que a base genética do fumo é estreita, nenhum estudo foi feito com os genótipos utilizados pelos programas de melhoramento de fumo no Sul do Brasil. Os objetivos deste trabalho foram investigar a base genética e caracterizar genótipos de fumo utilizados em programas de melhoramento no Sul do Brasil através de caracteres fenotípicos e marcadores moleculares, comparando diferentes métodos quanto à capacidade de distinção de genótipos individuais. Trinta e dois genótipos de fumo foram avaliados para 32 características fenotípicas, 271 marcadores RAPD, 86 microssatélites e 484 marcadores AFLP. Características fenotípicas e marcadores moleculares RAPD e AFLP foram eficientes para distinguir os genótipos estudados, permitindo evidenciar moderada similaridade e estreita base genética. Apesar disso, foi encontrada variabilidade para as características fenotípicas de maior importância econômica em fumo, sendo possível caracterizar individualmente os 32 genótipos através de 23 das 32 características fenotípicas avaliadas. Os genótipos K-326 LF e BY-64 divergiram dos demais e se destacaram para características de importância econômica, como rendimento, índice qualitativo de folhas, teor de nicotina e percentual de talo, sendo de grande potencial como genitores em cruzamentos elite. Foram identificados marcadores RAPD e AFLP específicos, capazes de distinguir, individualmente, os genótipos estudados. Os resultados deste estudo permitem concluir que os diferentes métodos utilizados se complementam na distinguibilidade dos genótipos e devem ser utilizados conjuntamente para o desenvolvimento de germoplasma e linhagens superiores de fumo.

Avaliação da apresentação fenotípica comportamental do autismo em uma amostra de famílias de crianças autistas em Porto Alegre e região metropolitana

O autismo apresenta uma alta herdabilidade e uma etiologia heterogênea, com o provável envolvimento de vários genes. Estudos recentes sugerem que características presentes nos pais de crianças com autismo apresentam paralelo com as apresentações de traços associados nos filhos. Este estudo avaliou 15 famílias de autistas, de Porto Alegre e região metropolitana, e controles. Foram utilizados quatro instrumentos de avaliação no estudo: dois avaliando as características nos filhos (ADI-R e Protocolo de Bosa) e dois aplicados aos pais (ITC e EDS). Os resultados deste estudo apontaram para a confirmação da agregação familiar de características fenotípicas herdadas independentemente. Apesar de diferirem dos resultados dos controles (pais de crianças com desenvolvimento típico), não comprovou-se a existência de uma diferença significativa na severidade de apresentações fenotípicas em pais de crianças autistas. Foi possível estabelecer a presença de uma configuração de características fenotípicas ligadas a aspectos do autismo em pais e crianças com autismo. Esta pesquisa aponta pistas para a existência de um padrão de herança dentro das famílias autistas.

Estudos moleculares em pacientes com fibrose cística do sul do Brasil

Fibrose Cística (FC) ou mucoviscidose é uma das doenças hereditárias mais comuns em caucasóides, com uma freqüência estimada em um caso em cada 2000 nascimentos sendo a freqüência de indivíduos portadores estimada em 5% em indivíduos. Esta doença caracteriza-se principalmente por infecções e obstrução crônica do aparelho respiratório, insuficiência pancreática exócrina e suas conseqüências nutricionais e por elevados níveis de eletrólitos no suor. A apresentação clínica, a gravidade da doença e a velocidade de progressão da FC variam consideravelmente, incluindo-se entre as manifestações a agenesia congênita de vasos deferentes (ACVD). Dentre as 1006 mutações associadas à FC, a R117H foi descrita em associação com um sítio polimórfico de timidinas no intron 8 do gene CFTR, a qual pode estar relacionada a ACVD. Este trabalho teve como objetivos: ① identificar alterações nas seqüências de nucleotídeos dos exons 3, 4, 5, 7, 9, 11, 12, 19, 20 e 22 do gene CFTR; ② identificar a freqüência de algumas mutações freqüentes no gene CFTR (R347P, R347H, R334W, Q359K, G542X, G551D, R553X, S549N, R1162X, W1282X e N1303K) na amostra e estimar a freqüência destas mutações na população estudada; ③ determinar o genótipo dos pacientes com FC participantes do estudo; ④ estabelecer um protocolo eficiente e rápido para identificar as alterações de politimidinas em pacientes não homozigotos para a mutação ∆F508; ⑤ estabelecer a freqüência dos alelos 5T, 7T e 9T em pacientes com FC do sul do Brasil; ⑥ estabelecer a correlação do polimorfismo politimidinas com manifestações clínicas da doença, como por exemplo, azoospermia Para a identificação das mutações no gene CFTR foram avaliados 100 alelos ou 50 pacientes portadores de FC. No entanto, para a avaliação do polimorfismo de politimidinas foram avaliados 54 pacientes não relacionados. Estes pacientes foram previamente diagnosticados e se encontram em tratamento no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Após extração de DNA destes pacientes, o material foi amplificado por PCR utilizando-se primers específicos para as regiões de interesse. A identificação de alterações nas seqüências de nucleotídios foi possível através da técnica de SSCP. Esta técnica permitiu a detecção de 7 pacientes com alteração no exon 7, 3 pacientes com alterações no exon 11, 2 pacientes com alterações no exon 19 e de 3 pacientes com alterações no exon 20. Nenhum paciente apresentou alteração molecular nos exons 3, 4, 5, 12 e 22. As freqüências das mutações R334W, R1162X e W1282X na amostra estudada foram estabelecidas em 1,0% para cada uma delas. Não foram encontrados pacientes portadores das mutações R347P, R334H, Q359N e S549N na amostra estudada. Com a utilização deste protocolo associado ao do estudo anterior (Streit et al., 1999) foi possível a triagem de mutações em 44,4% do gene da FC O alelo 5T foi encontrado em 2 dos 108 alelos analisados. Já o polimorfismo 7T, o mais comum, foi detectado em 65 alelos, enquanto o polimorfismo 9T estava presente em 41 alelos. O genótipo mais comum estabelecido no presente estudo foi o 7T/9T, encontrado em 39 pacientes (72,2%), seguido do genótipo 7T/7T, encontrado em 12 pacientes (22,2%), e do 5T/7T, encontrado em 2 pacientes (3,7%) e, finalmente, do genótipo 9T/9T, em 1 paciente (1,85%). Os resultados obtidos sugerem que o fenótipo dos pacientes com FC estudados não resulta apenas do genótipo dos mesmos, pois existem pacientes com o mesmo genótipo e expressões fenotípicas diferentes. Fatores epigenéticos assim como ambientais devem influenciar a expressão das alterações moleculares. Entretanto, a identificação do defeito molecular básico é de fundamental importância para a confirmação precoce e precisa do diagnóstico em pacientes suspeitas e para o estudo familiar permitindo que as medidas de tratamento e prevenção sejam implementadas do modo mais eficiente.

Estudo clínico e bioquímico de 28 pacientes com mucopolissacaridose tipo VI

Realizamos um estudo observacional de pacientes com mucopolissacaridose tipo VI, com o objetivo de determinar o perfil epidemiológico, clínico e bioquímico de um grupo de pacientes sul-americanos a fim de contribuir em estudos futuros de correlação genótipo-fenótipo e de avaliação de protocolos clínicos. Os critérios de inclusão foram: ter 4 anos ou mais e confirmação bioquímica da doença (níveis reduzidos da atividade da ARSB, aumento de GAGs urinários e atividade normal de outra sulfatase). Os critérios de exclusão foram: terapia com reposição enzimática atual ou prévia ou ter realizado transplante de medula óssea. Foram avaliados 28 pacientes por anamnese, exame físico, acocardiograma, eletrocardiograma, avaliação oftalmológica, medidas de glicosaminoglicanos urinários e da atividade da N-acetilgalactosamina-4-sulfatase em leucócitos. A amostra estudada tinha 92,9% de brasileiros, sendo 53,8% da região sudeste. No momento da avaliação, a média de idade foi de 97,1 meses e a média de idade ao diagnóstico foram de 48,4 meses. Em 88% da amostra os sintomas iniciaram com menos de 36 meses e em 27% das famílias houve relato de consangüinidade entre os pais. A média de peso e estatura ao nascimento foi de 3481 gramas e 51,3 centímetros, respectivamente. Da amostra, 57,1% nasceram de parto vaginal. Todos apresentavam alguma alteração ecocardiográfica, bem como opacificação corneana. As manifestações clínicas mais freqüentes foram: baixa estatura, opacificação corneana, facies grosseira, contraturas articulares e mãos em garra. A média da atividade enzimática em leucócitos foi de 5,4 nmoles/h x mg proteína e a excreção urinária de glicosaminoglicanos foi, em média, 7,9 vezes superior ao normal. O número de manifestações clínicas citadas não apresentou correlação significativa com a idade, com a excreção urinária de GAGs ou com a atividade enzimática em leucócitos. Também não houve correlação significativa entre a excreção urinária de GAGS e a atividade enzimática. Concluímos que a MPS VI é uma patologia com alta morbidade e que, comparados com a literatura, os pacientes da nossa amostra têm um diagnóstico tardio e maior freqüência de alterações cardiológicas.