Caracterización del ensuciamiento en membranas de ultrafiltración mediante parámetros de medida de resistencia en operación de flujo cruzado

Programa de Doctorado: Ingeniería Ambiental y Desalinización

Microsatélites polimórficos : estudio de su posible papel en el cáncer de mama y la resistencia a insulina

Programa de doctorado: Cáncer: Biología y clínica

Exploring host-pathogen interactions through protein microarray. Large-scale protein microarray analysis revealed novel human receptors for the staphylococcal immune evasion protein FLIPr and for the neisserial adhesin NadA

Adhesion, immune evasion and invasion are key determinants during bacterial pathogenesis. Pathogenic bacteria possess a wide variety of surface exposed and secreted proteins which allow them to adhere to tissues, escape the immune system and spread throughout the human body. Therefore, extensive contacts between the human and the bacterial extracellular proteomes take place at the host-pathogen interface at the protein level. Recent researches emphasized the importance of a global and deeper understanding of the molecular mechanisms which underlie bacterial immune evasion and pathogenesis. Through the use of a large-scale, unbiased, protein microarray-based approach and of wide libraries of human and bacterial purified proteins, novel host-pathogen interactions were identified. This approach was first applied to Staphylococcus aureus, cause of a wide variety of diseases ranging from skin infections to endocarditis and sepsis. The screening led to the identification of several novel interactions between the human and the S. aureus extracellular proteomes. The interaction between the S. aureus immune evasion protein FLIPr (formyl-peptide receptor like-1 inhibitory protein) and the human complement component C1q, key players of the offense-defense fighting, was characterized using label-free techniques and functional assays. The same approach was also applied to Neisseria meningitidis, major cause of bacterial meningitis and fulminant sepsis worldwide. The screening led to the identification of several potential human receptors for the neisserial adhesin A (NadA), an important adhesion protein and key determinant of meningococcal interactions with the human host at various stages. The interaction between NadA and human LOX-1 (low-density oxidized lipoprotein receptor) was confirmed using label-free technologies and cell binding experiments in vitro. Taken together, these two examples provided concrete insights into S. aureus and N. meningitidis pathogenesis, and identified protein microarray coupled with appropriate validation methodologies as a powerful large scale tool for host-pathogen interactions studies.

Importance of the collagen adhesin ace in pathogenesis and protection against Enterococcus faecalis experimental endocarditis.

Ace is an adhesin to collagen from Enterococcus faecalis expressed conditionally after growth in serum or in the presence of collagen. Here, we generated an ace deletion mutant and showed that it was significantly attenuated versus wild-type OG1RF in a mixed infection rat endocarditis model (P<0.0001), while no differences were observed in a peritonitis model. Complemented OG1RFDeltaace (pAT392::ace) enhanced early (4 h) heart valve colonization versus OG1RFDeltaace (pAT392) (P = 0.0418), suggesting that Ace expression is important for early attachment. By flow cytometry using specific anti-recombinant Ace (rAce) immunoglobulins (Igs), we showed in vivo expression of Ace by OG1RF cells obtained directly from infected vegetations, consistent with our previous finding of anti-Ace antibodies in E. faecalis endocarditis patient sera. Finally, rats actively immunized against rAce were less susceptible to infection by OG1RF than non-immunized (P = 0.0004) or sham-immunized (P = 0.0475) by CFU counts. Similarly, animals given specific anti-rAce Igs were less likely to develop E. faecalis endocarditis (P = 0.0001) and showed fewer CFU in vegetations (P = 0.0146). In conclusion, we have shown for the first time that Ace is involved in pathogenesis of, and is useful for protection against, E. faecalis experimental endocarditis.

Identification and phenotypic characterization of a second collagen adhesin, Scm, and genome-based identification and analysis of 13 other predicted MSCRAMMs, including four distinct pilus loci, in Enterococcus faecium.

Attention has recently been drawn to Enterococcus faecium because of an increasing number of nosocomial infections caused by this species and its resistance to multiple antibacterial agents. However, relatively little is known about the pathogenic determinants of this organism. We have previously identified a cell-wall-anchored collagen adhesin, Acm, produced by some isolates of E. faecium, and a secreted antigen, SagA, exhibiting broad-spectrum binding to extracellular matrix proteins. Here, we analysed the draft genome of strain TX0016 for potential microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules (MSCRAMMs). Genome-based bioinformatics identified 22 predicted cell-wall-anchored E. faecium surface proteins (Fms), of which 15 (including Acm) had characteristics typical of MSCRAMMs, including predicted folding into a modular architecture with multiple immunoglobulin-like domains. Functional characterization of one [Fms10; redesignated second collagen adhesin of E. faecium (Scm)] revealed that recombinant Scm(65) (A- and B-domains) and Scm(36) (A-domain) bound to collagen type V efficiently in a concentration-dependent manner, bound considerably less to collagen type I and fibrinogen, and differed from Acm in their binding specificities to collagen types IV and V. Results from far-UV circular dichroism measurements of recombinant Scm(36) and of Acm(37) indicated that these proteins were rich in beta-sheets, supporting our folding predictions. Whole-cell ELISA and FACS analyses unambiguously demonstrated surface expression of Scm in most E. faecium isolates. Strikingly, 11 of the 15 predicted MSCRAMMs clustered in four loci, each with a class C sortase gene; nine of these showed similarity to Enterococcus faecalis Ebp pilus subunits and also contained motifs essential for pilus assembly. Antibodies against one of the predicted major pilus proteins, Fms9 (redesignated EbpC(fm)), detected a 'ladder' pattern of high-molecular-mass protein bands in a Western blot analysis of cell surface extracts from E. faecium, suggesting that EbpC(fm) is polymerized into a pilus structure. Further analysis of the transcripts of the corresponding gene cluster indicated that fms1 (ebpA(fm)), fms5 (ebpB(fm)) and ebpC(fm) are co-transcribed, a result consistent with those for pilus-encoding gene clusters of other Gram-positive bacteria. All 15 genes occurred frequently in 30 clinically derived diverse E. faecium isolates tested. The common occurrence of MSCRAMM- and pilus-encoding genes and the presence of a second collagen-binding protein may have important implications for our understanding of this emerging pathogen.

Contribution of the collagen adhesin Acm to pathogenesis of Enterococcus faecium in experimental endocarditis.

Enterococcus faecium is a multidrug-resistant opportunist causing difficult-to-treat nosocomial infections, including endocarditis, but there are no reports experimentally demonstrating E. faecium virulence determinants. Our previous studies showed that some clinical E. faecium isolates produce a cell wall-anchored collagen adhesin, Acm, and that an isogenic acm deletion mutant of the endocarditis-derived strain TX0082 lost collagen adherence. In this study, we show with a rat endocarditis model that TX0082 Deltaacm::cat is highly attenuated versus wild-type TX0082, both in established (72 h) vegetations (P < 0.0001) and for valve colonization 1 and 3 hours after infection (P or=50-fold reduction relative to an Acm producer) were found in three of these five nonadherent isolates, including the sequenced strain TX0016, by quantitative reverse transcription-PCR, indicating that acm transcription is downregulated in vitro in these isolates. However, examination of TX0016 cells obtained directly from infected rat vegetations by flow cytometry showed that Acm was present on 40% of cells grown during infection. Finally, we demonstrated a significant reduction in E. faecium collagen adherence by affinity-purified anti-Acm antibodies from E. faecium endocarditis patient sera, suggesting that Acm may be a potential immunotarget for strategies to control this emerging pathogen.

A functional collagen adhesin gene, acm, in clinical isolates of Enterococcus faecium correlates with the recent success of this emerging nosocomial pathogen.

Enterococcus faecium recently evolved from a generally avirulent commensal into a multidrug-resistant health care-associated pathogen causing difficult-to-treat infections, but little is known about the factors responsible for this change. We previously showed that some E. faecium strains express a cell wall-anchored collagen adhesin, Acm. Here we analyzed 90 E. faecium isolates (99% acm(+)) and found that the Acm protein was detected predominantly in clinically derived isolates, while the acm gene was present as a transposon-interrupted pseudogene in 12 of 47 isolates of nonclinical origin. A highly significant association between clinical (versus fecal or food) origin and collagen adherence (P

Construction of improved temperature-sensitive and mobilizable vectors and their use for constructing mutations in the adhesin-encoding acm gene of poorly transformable clinical Enterococcus faecium strains.

Inactivation by allelic exchange in clinical isolates of the emerging nosocomial pathogen Enterococcus faecium has been hindered by lack of efficient tools, and, in this study, transformation of clinical isolates was found to be particularly problematic. For this reason, a vector for allelic replacement (pTEX5500ts) was constructed that includes (i) the pWV01-based gram-positive repAts replication region, which is known to confer a high degree of temperature intolerance, (ii) Escherichia coli oriR from pUC18, (iii) two extended multiple-cloning sites located upstream and downstream of one of the marker genes for efficient cloning of flanking regions for double-crossover mutagenesis, (iv) transcriptional terminator sites to terminate undesired readthrough, and (v) a synthetic extended promoter region containing the cat gene for allelic exchange and a high-level gentamicin resistance gene, aph(2'')-Id, to distinguish double-crossover recombination, both of which are functional in gram-positive and gram-negative backgrounds. To demonstrate the functionality of this vector, the vector was used to construct an acm (encoding an adhesin to collagen from E. faecium) deletion mutant of a poorly transformable multidrug-resistant E. faecium endocarditis isolate, TX0082. The acm-deleted strain, TX6051 (TX0082Deltaacm), was shown to lack Acm on its surface, which resulted in the abolishment of the collagen adherence phenotype observed in TX0082. A mobilizable derivative (pTEX5501ts) that contains oriT of Tn916 to facilitate conjugative transfer from the transformable E. faecalis strain JH2Sm::Tn916 to E. faecium was also constructed. Using this vector, the acm gene of a nonelectroporable E. faecium wound isolate was successfully interrupted. Thus, pTEX5500ts and its mobilizable derivative demonstrated their roles as important tools by helping to create the first reported allelic replacement in E. faecium; the constructed this acm deletion mutant will be useful for assessing the role of acm in E. faecium pathogenesis using animal models.

Antropología de las relaciones transnacionales en las regiones de frontera. Hegemonía y resistencia en el sistema mundo (Hanuin VIII- 2010/2012). 16H312

Pueden ser las mismas que las incluidas en el Proyecto, pero también pueden aparecer nuevas actividades que no hayan sido previstas originalmente. Esta sección puede ser publicada en la página de la Facultad y de la Universidad. Las actividades realizadas en este período se ajustaron a lo planeado oportunamente en el proyecto y en el primer informe de avance (2010). La existencia en el equipo de becarios, y tesistas de grado y postgrado suponen una diversificación de temas, de trabajos de campo, de viajes a lugares de interés, y de una permanente incorporación de nuevos problemas estrictamente científicos por un lado y prácticos y administrativos por otro. La existencia de los subproyectos : CEDAPPA, CEDEAD, HISTORIA REGIONAL y el proyecto central de síntesis que se cifra en el nombre de la propuesta supone un avance que debe ser considerado en sus partes y en el todo. Por eso los documentos anexos poseen los informes parciales de cada área junto al informe troncal de síntesis.

Antropología de las relaciones transnacionales en las regiones de frontera. Hegemonía y resistencia en el Sistema Mundo (2010/2012) “HANUIN VIII”.. 16H312

La presente investigación forma parte de un ciclo integrado por siete investigaciones precedentes, cuyas referencias están incluidas en el apartado de antecedentes. Dichas investigaciones cuentan con los informes de avance y finales aprobados. Su objetivo principal es conocer y describir la complejidad de la región de frontera estudiada (Triple Frontera entre Argentina, Brasil y Paraguay) ), el núcleo duro de las relaciones directas, y las acciones propias, que desde la región, protagonizan organizaciones y movimientos sociales en relación a las cada vez mas intensas amenazas de intervención militar/”humanitaria”, por parte del poder hegemónico de Estados Unidos y la intensificación de los controles estatales nacionales que responden a las presiones internacionales. ¿Qué lugar ocupa en las estrategias de la hegemonía imperial esta región? y ¿cuales son las respuestas locales tanto en acciones como en representaciones?. El proyecto posee las siguientes sub-áreas con sus respectivos coordinadores a) Centro de estudios de la población paraguaya en Argentina (CEDAPPA); b) Centro de Estudios de Antropología y Derecho (mediante un convenio de cooperación e investigadores adscriptos) y c) Área de estudios de Historia Regional El presente proyecto es la novena etapa de una secuencia que incluye ocho proyectos precedentes del programa de incentivos. Todos, menos el último, fueron bianuales y el octavo, que finalizó en el 2012, trianual. La nómina completa de estos proyectos es la siguiente: Proyectos pertenecientes al Programa de Incentivos: "Integración Regional Fronteriza: sectores vulnerables frente al impacto global. Políticas y acciones alternativas" UNaM, Sec. de Investigación FHCS. 1994-96.Informes de avance y final aprobados. Código: H-16-001 “Hanuin I” (“Hacer nuestra la integración”) En este proyecto se adoptó este nombre general que luego se repitió en toda la secuencia y que proviene de un lema formulado en un encuentro de movimientos sociales de los cuatro países del MERCOSUR.. “Estrategias de una red de movimientos sociales argentinos, brasileños y paraguayos en el marco de la integración regional fronteriza. Factores de cohesión y de conflicto”. Sec. de Invs. y Posgrado, 1996/1998.Informes de avance y final aprobados. Código: H-16-033, “Hanuin II”. “Los movimientos sociales en la integración regional. Relaciones transfronterizas de solidaridad y lucha. La cuestión agraria integral. Secretaría de Investigación y Postgrado, FHYCS, UNaM.1999-2000 Código: H-16-034, “Hanuin III”. “Interacciones transfronterizas, procesos socioculturales emergentes en el contexto de la integración. Los movimientos sociales ante el impacto del Mercosur. (Arg., Br. y Par.) (2001-2002). Código: H-16- 035 “Hanuin IV”. 4 “Procesos transfronterizos complejos: El caso de la Triple Frontera. Movimientos y organizaciones sociales, grupos “bajo sospecha”, control y políticas públicas. (2003-2005). Código: H-16- 135., “Hanuin V”. “Hegemonías y resistencias en el sistema mundo. Estados y procesos transfronterizos. El caso de la Triple frontera. (2006-2007) Código: H-16-198. Incluye el proyecto de Voluntariado CEDAPA. Convenio entre la UNaM (FHYCS) y la Comisión de Verdad y Justicia del Paraguay “Hanuin VI”. “Antropología de los procesos transfronterizos: La Triple Frontera en el sistema mundo. Complejidad y resistencia regional” Incluye el proyecto de Voluntariado CEDAPA. Convenio entre la UNaM (FHYCS) y la Comisión de Verdad y Justicia del Paraguay. (2008-2009). 16-H-245. “Hanuin VII”. “ Antropología de las relaciones transnacionales en las regiones de frontera. Hegemonía y resistencia en el sistema mundo” Incluye el proyecto CEDAPPA, Historia Regional, convenio con el CEDEAD. (2010-2012) “Hanuin VIII”,cod. 16-H-312 La inclusión de esta iformación procura ofrecer a los posibles evaluadores datos sobre la secuencia que hoy finaliza su etapa 2010-2012, pero que se continuará en el proyecto Hanuin IX que ya fue presentado. Tambien se abre una nueva instancia con la formulación de un programa que convierte a los subproyectos en proyectos.. Dicho programa lleva por título: “Investigaciónes interdisciplinarias sobre las regiones de frontera. Estado, sistemas socioculturales y terrorios” (2013/15). Una de las conclusiones del proyecto que reseñamos, fue presisamente, la necesidad de ampliar las líneas de investigación con equipos de mayor autonomía que puedan, además, atender las exigencias de creciente incorporación de auxiliares, becarios, tesistas, investigadores adscriptos o invitados.

Antropología de los procesos transfronterizos. La Triple Frontera en el sistema mundo. Complejidad y resistencia regional. (HANUIN VII) 2008-2009. 16H245

La presente investigación forma parte de un ciclo integrado por seis investigaciones precedentes, cuyas referencias están incluidas en el apartado de antecedentes. Su objetivo principal es conocer y describir la complejidad de la región de fronteras estudiada (triple frontera), las zonas de influencia directa y las acciones propias, que desde la región, protagonizan organizaciones y movimientos sociales en relación a las cada vez mas intensas amenazas de intervención militar por parte del poder hegemónico de Estados Unidos y la intensificación de los controles estatales nacionales que responden a las presiones internacionales. Qué lugar ocupa en las estrategias de la hegemonía imperial esta región y cuales son las respuestas locales tanto en acciones como en representaciones

Nuevos movimientos sociales. Resistencia al desplazamiento forzoso. El caso de los vecinos de El Brete (Posadas, Misiones. Argentina). 16H236

Esta investigación se plantea analizar la organización de la resistencia al desplazamiento forzoso que desarrollan los vecinos del barrio El Brete, en la costa norte de la ciudad de Posadas, ante la inminente elevación de la cota del embalse de la Represa Hidroeléctrica Binacional Yacyretá. Los terrenos en que residen quedarán en parte bajo las aguas y, en parte, serán base de la continuidad del proyecto de prolongación de la avenida costanera de la ciudad. Así, con precios inmobiliarios fuertemente incrementados, el sitio de los antiguos pobladores de El Brete, forma parte de un proyecto de “renovación urbana” del que estos vecinos son excluidos. Los efectos de desgarramiento del tejido social provocados tanto por el desplazamiento compulsivo de la población, como por la espera a ser trasladados por el programa operativo de reasentamiento de la EBY que se prolongado más de 2 décadas, genera stress multidimencional por relocalización y agrava la condición de vulnerabilidad social de los vecinos de la ribera que, no obstante, se organizan para resistir estas políticas de exclusión territorial de la que son objeto. A lo largo del trabajo de investigación se registraron los principales acontecimientos desatados por la efectivización por parte de la EBY del proceso de relocalización, en el contexto del actual Programa de Terminación de Yacyretá (PTY). Se atendieron prioritariamente los aspectos políticos, sociales, económicos e ideológicos del conflicto haciendo énfasis particularmente en las acciones de resistencia desplegadas por estos vecinos, sus percepciones de la situación, sus experiencias vividas y las formas de organización que fueron articulando.

Antropología de las relaciones transnacionales en las regiones de frontera. Hegemonía y resistencia en el Sistema Mundo. (2010/2012) – “Hanuin VIII”.16H312

Actividades desarrolladas durante el período: Las actividades realizadas en el período considerado se incluyen en cuatro relatórios individuales de actividades como anexos y corresponden al proyecto central y a los sub-proyectos de Historia Regional, CEDAPPA y CEDEAD.

Elogio del silencio. La resistencia en los tiempos del mercado

Este artículo es una de las ponencias presentadas en el Primer Coloquio Internacional sobre Arte Latinoamericano, Gestión Cultural y Medios de Comunicación, realizado entre los días 31 de julio y 2 de agosto del 2003, en la Facultad de Artes y Diseño, Universidad Nacional de Cuyo