991 resultados para Destruction des lymphocytes T CD4
Resumo:
Major histocompatibility complex (MHC) molecules are of crucial importance for the immune system to recognize and defend the body against external attacks. Foreign antigens are presented by specialized cells, called antigen presenting cells, to T lymphocytes in the context of MHC molecules, thereby inducing T cell activation. In addition, MHC molecules are essential for Natural Killer (NK) cell biology, playing a role in NK cell education and activation. Recently, the NOD-like receptor (NLR) family member NLRC5 (NLR caspase recruitment domain containing protein 5) was found to act as transcriptional regulator of MHC class I, in particular in T and NK cells. Its role in MHC class I expression is however minor in dendritic cells (DCs). This raised the question of whether inflammatory conditions, which augment the levels of NLRC5 in DCs, could increase its contribution to MHC class I expression. Our work shows that MHC class I transcript and intracellular levels depend on NLRC5, while its role in MHC class I surface expression is instead negligible. We describe however a general salvage mechanism that enables cells with low intracellular MHC class I levels to nevertheless maintain relatively high MHC class I on the cell surface. In addition, we lack a thorough understanding of NLRC5 target gene specificity and mechanism of action. Our work delineates the unique consensus sequence in MHC class I promoters required for NLRC5 recruitment and pinpoints conserved features conferring its specificity. Furthermore, through genome-wide analyses, we confirm that NLRC5 regulates classical MHC class I genes and identify novel target genes all encoding non-classical MHC class I molecules exerting an array of functions in immunity and tolerance. We finally asked why a dedicated factor co-regulates MHC class I expression specifically in T and NK lymphocytes. We show that deregulated NLRC5 expression affects the education of NK cells and alters the crosstalk between T and NK cells, leading to NK cell-mediated killing of T lymphocytes. Altogether this thesis work brings insights into molecular and physiological aspects of NLRC5 function, which might help understand certain aspects of immune responses and disorders. -- Les molcules du complexe majeur d'histocompatibilit (CMH) sont essentielles au systme immunitaire pour l'initiation de la rponse immunitaire. En effet, l'activation des lymphocytes T ncessite la reconnaissance d'un antigne tranger prsent par les cellules prsentatrices d'antignes sur une molcule du CMH. Les molcules du CMH ont galement un rle fondamental pour la fonction des cellules Natural Killer (NK) puisqu'elles sont ncessaires leur processus d'ducation et d'activation. Rcemment, NLRC5 (NLR caspase recruitment domain containing protein 5), un membre de la famille des rcepteurs de type NOD (NLRs), a t dcrit comme un facteur de transactivation de l'expression des gnes du CMH de classe I. A l'tat basai, cette fonction transcriptionnelle est essentielle dans les lymphocytes T et NK, alors que ce rle reste mineur pour l'expression des molcules du CMH de classe I dans les cellules dendritiques (DCs). Dans des conditions inflammatoires, l'expression de NLRC5 augmente dans les DCs. Notre travail dmontre que, dans ces conditions, les transcrits et les niveaux intracellulaires des molcules du CMH de classe I augmentent aussi d'une faon dpendante de NLRC5. A contrario, le rle de NLRC5 sur les niveaux de molcules de surface reste minoritaire. Cette observation nous a conduits l'identification d'un mcanisme gnral de compensation qui permet aux cellules de maintenir des niveaux relativement levs de molcules de CMH de class I leur surface malgr de faibles niveaux intracellulaires. De plus, il semblait ncessaire de s'orienter vers une approche plus globale afin de dterminer l'tendue de la fonction transcriptionnelle de NLRC5. Par une approche du gnome entier, nous avons pu dcrire une squence consensus conserve prsente dans les promoteurs des gnes du CMH de classe I, sur laquelle NLRC5 est spcifiquement recrut. Nous avons pu galement identifier de nouveaux gnes cibles codant pour des molcules de CMH de classe I non classiques impliqus dans l'immunit et la tolrance. Finalement, nous nous sommes demand quel est l'intrt d'avoir un facteur transcriptionnel, en l'occurrence NLRC5, qui orchestre l'expression du CMH de classe I dans les lymphocytes T et NK. Nous montrons que la drgulation de l'expression de NLRC5 affecte l'ducation des cellules NK et conduit la mort cellulaire des lymphocytes T mdie par les cellules NK. Dans l'ensemble ce travail de thse contribue la caractrisation du rle de NLRC5, tant au niveau molculaire que physiologique, ce qui prsente un intrt dans le cadre de la comprhension de certains aspects physiopathologique de la rponse immunitaire.
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T cells move randomly ("random-walk"), a characteristic thought to be integral to their function. Using migration assays and time-lapse microscopy, we found that CD8+ T cells lacking the lymph node homing receptors CCR7 and CD62L migrate more efficiently in transwell assays, and that these same cells are characterized by a high frequency of cells exhibiting random crawling activity under culture conditions mimicking the interstitial/extravascular milieu, but not when examined on endothelial cells. To assess the energy efficiency of cells crawling at a high frequency, we measured mRNA expression of genes key to mitochondrial energy metabolism (peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1beta [PGC-1beta], estrogen-related receptor alpha [ERRalpha], cytochrome C, ATP synthase, and the uncoupling proteins [UCPs] UCP-2 and -3), quantified ATP contents, and performed calorimetric analyses. Together these assays indicated a high energy efficiency of the high crawling frequency CD8+ T-cell population, and identified differentially regulated heat production among nonlymphoid versus lymphoid homing CD8+ T cells.
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Le cancer de la vessie est le deuxime cancer urologique le plus frquent dans le monde. La plupart des patients (75%) sont initialement diagnostiqus avec un cancer non musculo- invasif. Aprs rsection trans-urtrale, ie traitement standard pour ce type de lsion chez les patients prsentant un risque important de rcidive/progression consiste en une srie d'instillations intravsicales du Bacille de Calmette-Guerin (i.e. le vaccin BCG). Cependant cette "BCG thrapie" est associe des effets secondaires non ngligeables et s'avre inefficace dans 30% des cas, des limitations donc importantes qui soulignent la ncessit de dvelopper des stratgies thrapeutiques alternatives. L'utilisation d'antignes associs aux tumeurs (TAA) comme vaccin, combine une application locale d'immunostimulants sur le site tumoral, est une approche prometteuse en vue de maximiser les rponses immunitaires anti-tumorales localement. Nous montrons que la bactrie vivante attnue Ty21a, issue du vaccin Vivotif contre la fivre typhode, peut tre utilise comme immunostimulant intravsical (IVES), mais ce uniquement dans le cas o la bactrie est en phase exponentielle de croissance (Vivotif exp). En effet, l'instillation IVES de Vivotif exp la suite d'une vaccination par un TAA, un antigne mineur d'histocompatibilit mle H-Y (Uty), permet d'augmenter de 15 fois le nombre de cellules T CD8 totales et spcifiques de l'antigne dans la vessie. Le recrutement des cellules T est TLR4-dpendent, ce qui suggre un rle des lipopolysaccharides du Vivotif exp. Par ailleurs, en comparaison avec le contenu bactrien de la capsule de Vivotif, les bactries en phase exponentielle de croissance permettent galement une augmentation prfrentielle des chemokines C5/C5a, CXCL1, CXCL2 et CXCL5 dans la vessie, mais pas du nombre de cellules T exprimant les rcepteurs apparents (C5aR et CXCR2). De plus, combiner la vaccination Uty avec le Vivotif exp en IVES permet d'amliorer la survie des souris prsentant une tumeur orthotopique de la vessie exprimant l'antigne Uty (ligne tumorale murine MB49). Puisque pour certains cancers, aucun TAA - du moins exprim tous les stades tumoraux - n'est identifi, il est ncessaire de dvelopper d'autres approches non vaccinales. Dans une deuxime partie de ce travail de thse, nous avons donc investigu deux stratgies permettant d'induire une destruction des cellules tumorales, la thrapie gnique par gne de suicide, d'une part, et la thrapie photodynamique dans le proche infrarouge (NIR-PDT), d'autre part. Pour appliquer ces thrapies, nous avons utilis comme vecteur sr et non toxique une forme non rplicative du virus du Human Papillomavirus (HPV) capable de "pseudo-infecter" prfrentiellement les souris prsentant des tumeurs vsicales (MB49). L'utilisation de pseudovirions (PsV) HPV portant comme gne suicide la thymidine kinase, une enzyme du virus de l'herps simplex, suivi d'un traitement par la prodrogue Ganciclovir, permet de tuer 90% des cellules MB49 in-vitro ainsi que de ralentir significativement le dveloppement des tumeurs vsicales in-vivo. Par ailleurs, l'emploi de particules pseudo- virales HPV couples la phtalocyanine IR700, un pigment photosensible prsentant un pouvoir cytotoxique une fois activ, permet de tuer, aprs application d'une lumire dans le proche infrarouge, quasi 100% des cellules MB49 in-vitro et, plus important, de rgresser des tumeurs in-vivo. De faon gnrale, ce travail de thse prsente des approches thrapeutiques innovantes et prometteuses pour le traitement des patients avec un cancer non musculo-invasif de la vessie. -- Bladder cancer is the second most common urological malignancy in the world. At initial diagnosis, non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC) accounts for 75% of bladder cancer. The standard of care of NMIBC consists of intravesical (IVES) treatments with Bacillus- Calmette-Guerin (BCG) following transurethral resections of the lesions. However, repeated BCG treatments are associated with significant side effects and treatment failure may occur in 30% of the cases, underlying the necessity of alternative therapeutic strategies. The use of tumor-associated antigens (TAA) as vaccines followed by the local application of immunostimulants where the tumor resides is a promising approach to increase anti-tumor immune responses locally. We show that live attenuated Ty21a bacteria used from the vivotif vaccine against typhoid fever can efficiently be used as IVES immunostimulant, only if bacteria are grown to exponential phase (Vivotif exp). In this condition, IVES immunostimulation after TAA vaccination with a minor histocompatibility male antigen HY (Uty) resulted in more than 15-fold increase of both vaccine-specific and total CD8-T cells in the bladder. T cell recruitment was mediated by TLR-4 suggesting that it was mainly mediated by lipopolysaccharides of Vivotif exp. In addition, these bacteria, as compared to the bacterial content of the vivotif capsule preferentially increased C5/C5a, CXCL1, CXCL2 and CXCL5 chemokines, but not the numbers of T cells expressing the cognate receptors (C5aR and CXCR2). Combination of IVES Vivotif exp with Uty vaccination improved survival of mice with pre-established orthotopic Uty-expressing MB49 murine bladder tumors, as compared to vaccination alone. As known TAA are not identified in all cancers, or not expressed in all stages of the tumor, we further investigated two potent approaches able of initiating tumor-cell destruction, suicide-gene therapy and near-infrared (NIR) photodynamic therapy (PDT). Towards a safe and non-toxic application of these therapies, we used Human Papillomavirus (HPV) replication-defective vectors that were able to preferentially pseudo-infect MB49-tumor bearing mice. HPV pseudovirions (PsV) carrying the Herpex-Simplex virus thymidine kinase suicide-gene followed by treatment with the prodrug Ganciclovir resulted in 90% of MB49 cell-death in-vitro and was able to significantly reduce bladder tumor growth in-vivo. Furthermore, HPV virus-like particles coupled to a NIR phtalocyanine dye, IR700 in combination with specific NIR light led to almost 100% of MB49 cell-death in-vitro and more interestingly, to bladder tumors shrinkage in-vivo. Overall, in this thesis, we offer promising therapeutic approaches for application in NMIBC patients.
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Avec plus de 100000 transplantations d'organes solides (TOS) par anne dans le monde, la transplantation d'organes reste actuellement l'un des meilleurs traitements disponibles pour de nombreuses maladies en phase terminale. Bien que les mdicaments immunosuppresseurs couramment utiliss soient efficaces dans le contrle de la rponse immune engendrant le rejet aigu d'une greffe, la survie du greffon long terme ainsi que la prsence d'effets secondaires indsirables restent un enjeu considrable en clinique. C'est pourquoi il est ncessaire de trouver de nouvelles approches thrapeutiques innovantes permettant de contrler la rponse immunitaire et ainsi d'amliorer les rsultats long terme. L'utilisation des lymphocytes T rgulateurs (Treg), suppresseurs naturels de la rponse inflammatoire, a fait l'objet de nombreuses tudes ces dix dernires annes, et pourrait tre considre comme un moyen intressant d'amliorer la tolrance immunologique de la greffe. Cependant, l'un des obstacles de l'utilisation des Treg comme agent thrapeutique est leur nombre insuffisant non seulement en conditions normales, mais en particulier lors d'une forte rponse immune avec expansion de cellules immunitaires alloractives. En raison des limitations techniques connues pour l'induction des Treg ex-vivo ou in vitro, nous avons ddi la premire partie du travail de thse la dtermination de l'efficacit de l'induction des Treg in vivo grce l'utilisation d'un complexe protique IL-2/JES6-1 (IL2c). Nous avons montr que l'expansion des Treg par IL2c permettait d'augmenter la survie du greffon sur un modle murin de transplantation de peau avec mismatch entre le donneur et le receveur pour le complexe majeur d'histocompatibilit (CMH). De plus, nous avons vu qu'en combinant IL2c une inhibition court terme de la voie de co-stimulation CD40L-CD40 (anti-CD154/MRl, administr au moment de la transplantation) pour empcher l'activation des lymphocytes T, il est possible d'induire une tolrance robuste long terme. Finalement, nos rsultats soulignent l'importance de cibler une voie de co-stimulation bien particulire. En effet, l'utilisation d'IL2c combine au blocage de la co-stimulation CD28-B7.1/2 (CTLA-4 Ig) n'induit qu'une faible prolongation de la survie de la greffe et n'induit pas de tolrance. L'application chez l'humain des traitements induisant la tolrance dans des modles exprimentaux murins ou de primates n'a malheureusement pas montr de rsultats probants en recherche clinique ; une des principales raisons tant la prsence de lymphocytes B et T mmoires provenant du systeme d immunit acquise. C est pourquoi nous avons test si la combinaison d'IL2c et MR1 amliorait la survie de la greffe dans des souris prsensibilises. Nous avons trouv qu'en prsence de lymphocytes B et T mmoires alloractifs, l'utilisation d'IL2c et MR1 permettait une amlioration de la survie de la greffe de peau des souris immunocomptentes mais compar aux souris receveuses naves, aucune tolrance n'a pu tre induite. Toutefois, l'ajout d'un traitement anti-LFA-1 (permettant de bloquer la circulation des lymphocytes T actives) a permis d'amliorer de manire significative la survie de la greffe. Cependant, le rejet chronique, d la prsence de lymphocytes B activs/mmoires et la production d'anticorps donneur-spcifiques, n'a pas pu tre vit. Cibler l'activation des lymphocytes T est la stratgie immunothrapeutique prpondrente aprs une TOS. C'est pourquoi dans la deuxime partie de cette thse nous nous sommes intresss au systme de signalisation d'un rcepteur des lymphocytes T qui dpend de la paracaspase Malti en tant que nouvelle stratgie immunosuppressive pour le contrle des lymphocytes T alloractifs. Nous avons montr que bien que l'inhibition de la signalisation du lymphocyte T en aval de Malti induise une tolrance envers un greffon de peau avec incompatibilits antigniques mineures, cela ne permet cependant qu'une rgulation partielle de l'allorponse contre des antignes du CMH. Nous nous sommes aussi intresss spcifiquement l'activit protolytique de Malti. L'inhibition constitutive de l'activit protolytique de Malti chez les souris Malti-ki s'est rvle dltre pour l'induction de la tolrance car elle diminue la fonction des Treg et augmente l'alloractivit des cellules Thl. Cependant, lors de l'utilisation d'un inhibiteur peptidique de l'activit protase de Malti in vitro, il a t possible d'observer une attnuation de l'alloactivit des lymphocytes T ainsi qu'un maintien de la population des Treg existants. Ces rsultats nous laissent penser que des tudes plus pousses sur le rle de la signalisation mdie par Malti seraient envisager dans le domaine de la transplantation. En rsum, les rsultats obtenus durant cette thse nous ont permis d'lucider certains mcanismes immunologiques propres de nouvelles stratgies thrapeutiques potentielles dont le but est d'induire une tolrance lors de TOS. De plus, ces rsultats nous ont permis de souligner l'importance d'utiliser des modles davantage physiologiques contenant, notamment en tenant compte des lymphocytes B et T mmoires alloractifs. -- Organ transplantation remains the best available treatment for many forms of end-stage organ diseases, with over 100,000 solid organ transplantations (SOT) occurring worldwide eveiy year. Although the available immunosuppressive (IS) drugs are efficient in controlling acute immune activation and graft rejection, the off-target side effects as well as long-term graft and patient survival remain a challenge in the clinic. Hence, innovative therapeutic approaches are needed to improve long-term outcome across immunological barriers. Based on extensive experimental data obtained over the last decade, it is tempting to consider immunotherapy using Treg; the natural suppressors of overt inflammatory responses, in promoting transplantation tolerance. The first hurdle for the therapeutic use of Treg is their insufficient numbers in non- manipulated individuals, in particular when facing strong immune activation and expanding alloreactive effector cells. Because of the limitations associated with current protocols aiming at ex-vivo expansion or in vitro induction of Treg, the aim of the first part of this thesis was to determine the efficacy of direct in vivo expansion of Treg using the IL-2/JES6- 1 immune complex (IL2c). We found that whilst IL2c mediated Treg expansion alone allowed the prolonged graft survival of flli MHC-mismatched skin grafts, its combination with short-term CD40L-CD40 co-stimulation blockade (anti-CD 154/MR1) to inhibit T cell activation administered at the time of transplantation was able to achieve long-term robust tolerance. This study also highlighted the importance of combining Treg based therapies with the appropriate co-stimulation blockade as a combination of IL2c and CD28-B7.1/2 co- stimulation blockade (CTLA-4 Ig) only resulted in slight prolongation of graft survival but not tolerance. The translation of tolerance induction therapies modelled in rodents into non-human primates or into clinical trials has seldom been successful. One main reason being the presence of pre-existing memory T- and B-cells due to acquired immunity in humans versus laboratory animals. Hence, we tested whether IL2c+MRl could promote graft survival in pre-sensitized mice. We found that in the presence of alloreactive memory T- and B-cells, IL2c+MRl combination therapy could prolong MHC-mismatched skin graft survival in immunocompetent mice but tolerance was lost compared to the nave recipients. The addition of anti-LF A-1 treatment, which prevents the trafficking of memory T cells worked synergistically to significantly further enhance graft survival. However, late rejection mediated by activated/memory B cells and persistent donor-specific alloantibodies still occurred. Immunotherapeutic strategies targeting the activation of T cells are the cornerstone in the current immunosuppressive management after SOT. Therefore, in the next part of this thesis we investigated the paracaspase Malti-dependent T-cell receptor signalling as a novel immunosuppressive strategy to control alloreactive T cells in transplantation. We observed that although the inhibition of Malti downstream T signalling lead to tolerance of a minor H- mismatch skin grafts, it was however not sufficient to regulate alloresponses against MHC mismatches and only prolonged graft survival. Furthermore, we investigated the potential of more selectively targeting the protease activity of Malti. Constitutive inhibition of Malti protease activity in Malti-ki mice was detrimental to tolerance induction as it diminished Treg function and increased Thl alloreactivity. However, when using a small peptide inhibitor of Malti proteolytic activity in vitro, we observed an attenuation of alloreactive T cells and sparing of the pre-existing Treg pool. This indicates that further investigation of the role of Malti signalling in the field of transplantation is required. Collectively, the findings of this thesis provide immunological mechanisms underlying novel therapeutic strategies for the promotion of tolerance in SOT. Moreover, we highlight the importance of testing tolerance induction therapies in more physiological models with pre-existing alloreactive memory T and B cells.
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Notre systme immunitaire joue un rle important pour la protection envers les maladies infectieuses. Au cours d'une rponse une infection primaire, des cellules B et des cellules T spcifiques, diriges contre le pathogne en question, sont gnres et certaines d'entre elles deviennent des cellules dites mmoires. Leur fonction est de nous protger contre une nouvelle infection avec le mme pathogne, une infection secondaire. Dans certaines situations, comme c'est par exemple le cas avec la grippe, les pathognes ne sont pas toujours compltement identiques et les cellules mmoires ne sont pas mme d'assurer leur rle protecteur et d'empcher une rinfection. Pourtant, on ne sait l'heure actuelle que trs peu comment une immunit acquise, mais non protectrice, influence le dveloppement d'une rponse immunitaire ultrieure. Dans la premire partie de cette thse, nous avons tudi comment les cellules T mmoires cytotoxiques altrent la rponse de cellules T cytotoxiques nouvellement induites. Au cours d'une raction immunitaire dirige contre une infection primaire, un vaste rpertoire de lymphocytes T est cr, constitu de cellules T possdant divers degrs d'affinit pour le pathogne. Lors d'une infection secondaire, seules les cellules T ayant une forte affinit pour le pathogne participent la rponse. Nous avons pu dmontrer que ce phnomne de restriction du rpertoire des cellules T est principalement caus par les cellules T mmoires qui sont mme de reconnatre un antigne pathognique prsent dans les deux infections. Dans un deuxime projet, nous avons tudi comment l'absence de PTPN2 influence la rponse des cellules T. Chez l'homme, une mutation dans le gne de PTPN2 est associe des maladies auto-immunes et rsulte en une activit rduite de cette phosphatase dans les lymphocytes T. Nous avons montr que la baisse d'activit de la phosphatase PTNP2 conduit une meilleure expansion des cellules T ayant une qualit comparable des cellules T auto-antigne spcifiques. De plus, nous avons observ que la survie de ces cellules T effectues ayant une phosphatase diminue est nettement amliore. Cela peut conduire une rponse immunitaire plus efficace ou, ventuellement, une pathologie auto-immune plus grave. En outre, nos rsultats montrent qu'en manipulant l'activit de cette phosphatase, il est possible d'augmenter l'efficacit du transfert des cellules T dans un hte receveur. Un tel transfert de cellules T est pratiqu chez des patients atteints de tumeurs. Nos travaux suggrent que la manipulation de la phosphatase PTPN2 pourrait donc reprsenter une approche thrapeutique novatrice et prometteuse. -- Notre systme immunitaire joue un rle important pour la protection contre les maladies. Les cellules T CD8+ ont une importance primordiale pour le contrle d'infections primaires causes par des virus ou bactries, mais galement contre certaines tumeurs. Par consquent, mieux comprendre les exigences ncessaires l'induction de bonnes rponses des cellules T CD8 pourrait nous permettre de construire des vaccins contre les pathognes contre lesquels nous n'avons pour l'instant pas de vaccins mais aussi d'amliorer les ractions immunitaires diriges anti-tumorales. Dans la premire partie de cette thse, nous avons tudi l'influence qu'une immunit prexistante a sur la rponse des cellules T CD8. Nous sommes souvent exposs des pathognes qui sont similaires mais pas identiques ceux que nous avons rencontrs auparavant. De telles infections htrologues ne sont pas l'objet de beaucoup d'tudes et certains exemples indiquent mme qu'une immunit prexistante partielle peut mener une aggravation de la maladie. Nous avons tudi le rpertoire des lymphocytes T CD8 qui sont gnrs lors d'une rencontre avec un nouvel antigne, et ce en comparant infection primaire et secondaire. En utilisant le modle exprimental d'infections Listeria monocytogenes, nous avons pu montrer que lors d'une infection primaire, un rpertoire diversifi comprenant des cellules T CD8 de forte et faible affinit est constitu. Au contraire, dans le cas d'une infection secondaire, le rpertoire des cellules T est fortement limit et seulement les lymphocytes T de forte affinit sont impliqus dans la rponse immunitaire. Nous avons pu dmontrer que ces Rangements sont provoqus par des cellules T CD8 mmoires capables de reconnatre un antigne prsent dans les deux infections. Cette augmentation du seuil d'activation des cellules effectrices est majoritairement cause par les lymphocytes T CD8 mmoires non transfrables. Ces observations indiquent que les vaccins visant induire des cellules T anti-tumorales de faible affinit seraient inefficaces si le vaccin contient des pitopes contre lesquels il existe une mmoire immunologique. Les rponses immunitaires conduites par les cellules T contre les antignes tumoraux dpendent des cellules T CD8 de faible ractivit contre les antignes tumoraux puisque les cellules forte ractivit sont limines par les mcanismes de tolrance. Nous basant sur l'existence dans la littrature de preuves indiquant que PTPN2 influence la rponse des cellules T de faible affinit, nous nous sommes intresss comprendre comment PTPN2 impacte les rponses des cellules T CD8 en gnral. Nous avons remarqu que des cellules T CD8 dficientes en PTPN2 exhibent une meilleure capacit prolifrer suite une faible ou courte stimulation du rcepteur des lymphocytes T. La phase effectrice est prolonge et la contraction retarde rsultant ainsi globalement plus de cellules effectrices. Ce phnomne est galement accompagn d'une meilleure survie des cellules effectrices de diffrentiation terminale. Une fois transfres dans un nouvel hte receveur, les cellules effectrices terminales KLRG1+CD127- dficientes en phosphatase PTPN2 peuvent survivre et se transformer en cellules mmoires CD127+ fonctionnelles. De faon inattendue, nous avons dcouvert que l'limination de PTPN2 amliore l'efficacit du transfert et la formation des cellules mmoires ainsi que leur capacit protectrice. Manipuler l'activit de cette phosphatase apparat donc comme une approche intressante et prometteuse pour la thrapie cellulaire par transfert adoptif de lymphocytes T. Nos observations montrent que la manipulation d'un facteur intrinsque, l'absence de PTPN2, peut, dans certaines circonstances, amliorer la rponse des cellules T. Une meilleure connaissance des mcanismes contrlant la rponse des lymphocytes T CD8 pourrait donc permettre la manipulation de ces derniers et conduire des rponses immunitaires plus vigoureuses. Si ces rponses sont dclenches par l'utilisation de vaccins, il est ncessaire de considrer l'historique d'une exposition pralable des agents pathognes ou des vaccins puisque celle-ci peut, comme nous l'avons dmontr, influencer le rpertoire des cellules T recrutes dans la rponse immunitaire et, par consquent, modifier l'aptitude de notre systme immunitaire faire face une infection. -- Our immune system plays an important role in the protection from disease. CD8 T cells are critical for the control of primary infections with most viruses and certain bacteria as well as against some tumors. Therefore, better knowledge of CD8 T cell responses might enable us to generate vaccines against pathogens for which currently no vaccines are available or to improve anti-tumor immune responses. In the first part of this thesis we addressed the issue how previously acquired immunity impacts on the response of CD8 T cells. We are often exposed to pathogens that are related but not identical to the previously encountered ones. Such heterologous infections are not well studied and there are some indications that partial pre-existing immunity may in some cases even lead to an enhancement of disease. We specifically studied the T cell repertoire of CD8 T cells that are responding to a newly encountered antigen in secondary compared to primary infections. Using the experimental model of Listeria monocytogenes infections, we showed that in primary infections a wide repertoire including high and low affinity CD8 T cells is recruited into the immune response. In contrast to this, in secondary infections, the T cell repertoire is severely restricted and only T cells of high affinity are responding. We were able to pinpoint this difference to the presence of memory CD8 T cells that recognize an antigen that is shared between the two subsequent infections. This increase in the activation threshold was most effectively mediated via non-transferable memory CD8 T cells. This would argue that vaccines targeting low affinity tumor-specific T cells would fail if the vaccine contains previously encountered CD8 T cell epitopes. T cell mediated immune responses to tumor antigen rely often on T cells which weakly react to tumor antigen as high affinity T cells are eliminated by tolerance mechanisms. Following indication in the literature that PTPN2 impacts on the response of such weakly antigen-reactive T cells, we investigated how PTPN2 impacts in general the response of CD8 T cells. We observed that CD8 T cells lacking PTPN2 show an enhanced expansion following weak or short-term T cell receptor stimulation. The effector phase is prolonged and contraction delayed thus resulting in overall more effector cells. This is accompanied by a better survival of terminal effector cells. When transferred into new recipients, KLRG1+CD127- terminal effector cells lacking PTPN2 can survive and convert into CD127+ functional memory cells. Surprisingly, we discovered that elimination of PTPN2 enhances the transfer efficacy and formation of memory cells as well as the protective capacity. Targeting PTPN2 might thus be a promising approach for adoptive T cell therapy. Our observations show how the manipulation of an intrinsic factor, the absence of PTPN2, can enhance T cell responses under certain circumstances. A better understanding of underlying mechanisms for the control of CDS T cell responses might enable the manipulation of these and allow for more powerful responses. If these responses are induced through vaccines it is imperative that the previous history of exposure to pathogens or vaccines is considered as it can, as we have shown in this thesis, influence the recruited T cell repertoire and thus possibly the ability to handle the infection.
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It is well established that cytotoxic T lymphocytes play a pivotal role in the protection against intracellular pathogens and tumour cells. Such protective immune responses rely on the specific T cell receptor (TCR)-mediated recognition by CD8 T cells of small antigenic peptides presented in the context of class-I Major Histocompatibility Complex molecules (pMHCs) on the surface of infected or malignant cells. The strength (affinity/avidity) of this interaction is a major correlate of protection. Although tumour-reactive CD8 T cells can be observed in cancer patients, anti-tumour immune responses are often ineffective in controlling or eradicating the disease due to the relative low TCR affinity of these cells. To overcome this limitation, tumour-specific CD8 T cells can be genetically modified to express TCRs of improved binding strength against a defined tumour antigen before adoptive cell transfer into cancer patients. We previously generated a panel of TCRs specific for the cancer-testis antigen NY-ESO-l,57.165 with progressively increased affinities for the pMHC complex, thus providing us with a unique tool to investigate the causal link between the surface expression of such TCRs and T cell activation and function. We recently demonstrated that anti-tumour CD8 T cell reactivity could only be improved within physiological affinity limits, beyond which drastic functional declines were observed, suggesting the presence of multiple regulatory mechanisms limiting T cell activation and function in a TCR affinity-dependent manner. The overarching goal of this thesis was (i) to assess the precise impact of TCR affinity on T cell activation and signalling at the molecular level and (ii) to gain further insights on the mechanisms that regulate and delimitate maximal/optimized CD8 T cell activation and signalling. Specifically, by combining several technical approaches we characterized the activation status of proximal (i.e. CD3, Lek, and ZAP-70) and distal (i.e. ERK1/2) signalling molecules along the TCR affinity gradient. Moreover, we assessed the extent of TCR downmodulation, a critical step for initial T cell activation. CD8 T cells engineered with the optimal TCR affinity variants showed increased activation levels of both proximal and distal signalling molecules when compared to the wild-type T cells. Our analyses also highlighted the "paradoxical" status of tumour-reactive CD8 T cells bearing very high TCR affinities, which retained strong proximal signalling capacity and TCR downmodulation, but were unable to propagate signalling distally (i.e. pERKl/2), resulting in impaired cell-mediated functions. Importantly, these very high affinity T cells displayed maximal levels of SHP-1 and SHP-2 phosphatases, two negative regulatory molecules, and this correlated with a partial pERKl/2 signalling recovery upon pharmacological SHP-l/SHP-2 inhibition. These findings revealed the putative presence of inhibitory regulators of the TCR signalling cascade acting very rapidly following tumour-specific stimulation. Moreover, the very high affinity T cells were only able to transiently express enhanced proximal signalling molecules, suggesting the presence of an additional level of regulation that operates through the activation of negative feedback loops over time, limiting the duration of the TCR-mediated signalling. Overall, the determination of TCR-pMHC binding parameters eliciting optimal CD8 T cell activation, signalling, and effector function while guaranteeing high antigen specificity, together with the identification of critical regulatory mechanisms acting proximally in the TCR signalling cascade, will directly contribute to optimize and support the development of future TCR-based adoptive T cell strategies for the treatment of malignant diseases. -- Les lymphocytes T CD8 cytotoxiques jouent un rle prdominant dans la protection contre les pathognes intracellulaires et les cellules tumorales. Ces rponses immunitaires dpendent de la spcificit avec laquelle les rcepteurs T (TCR) des lymphocytes CD8 reconnaissent les peptides antigniques prsents par les molcules du complexe Majeur de Histocompatibilit de classe I (pCMH) la surface des cellules infectes ou malignes. La force (ou affinit/avidit) de l'interaction du TCR-pCMH est un corrlat majeur de protection. Les rponses immunitaires sont cependant souvent inefficaces et ne permettent pas de contrler ou d'liminer les cellules tumorales chez les patients atteint du cancer, et ce cause de la relative faible reconnaissance des TCRs exprims par les lymphocytes T CD8 envers les antignes tumoraux. Afin de surmonter cette limitation, les cellules T anti-tumorales peuvent tre gntiquement modifies en les dotant de TCRs pralablement optimiss afin d'augmenter leur reconnaissance ou affinit contre les antignes tumoraux, avant leur rinfusion dans le patient. Nous avons rcemment gnr des cellules T CD8 exprimant un panel de TCRs spcifiques pour l'antigne tumoral NY-ESO-l157.16J avec des affinits croissantes, permettant ainsi d'investiguer la causalit directe entre l'affinit du TCR-pCMH et la fonction des cellules T CD8. Nous avons dmontr que la ractivit anti-tumorale pouvait tre amliore en augmentant l'affinit du TCR dans une intervalle physiologique, mais au del duquel nous observons un important dclin fonctionnel. Ces rsultats suggrent la prsence de mcanismes de rgulation limitant l'activation des cellules T de manire dpendante de l'affinit du TCR. Le but de cette thse a t (i) de dfinir l'impact prcis de l'affinit du TCR sur l'activation et la signalisation des cellules T CD8 au niveau molculaire et (ii) d'acqurir de nouvelles connaissances sur les mcanismes qui rgulent et dlimitent l'activation et la signalisation maximale des cellules T CD8 optimises. Spcifiquement, en combinant plusieurs approches technologiques, nous avons caractris l'tat d'activation de diffrentes protines de la voie de signalisation proximale (CD3, Lek et ZAP-70) et distale (ERK1/2) le long du gradient d'affinit du TCR, ainsi que l'internalisation du TCR, une tape clef dans l'activation initiale des cellules T. Les lymphocytes T CD8 exprimant des TCRs d'affinit optimale ont montr des niveaux d'activation augments des molcules proximales et distales par rapport aux cellules de type sauvage (wild-type). Nos analyses ont galement mis en vidence un paradoxe chez les cellules T CD8 quipes avec des TCRs de trs haute affinit. En effet, ces cellules anti-tumorales sont capables d'activer leurs circuits biochimiques au niveau proximal et d'internaliser efficacement leur TCR, mais ne parviennent pas propager les signaux biochimiques dpendants du TCR jusqu'au niveau distal (via phospho-ERKl/2), avec pour consquence une limitation de leur capacit fonctionnelle. Finalement, nous avons dmontr que SHP-1 et SHP-2, deux phosphatases avec des proprits rgulatrices ngatives, taient majoritairement exprimes dans les cellules T CD8 de trs hautes affinits. Une rcupration partielle des niveaux d'activation de ERK1/2 a pu tre observe aprs l'inhibition pharmacologique de ces phosphatases. Ces dcouvertes rvlent la prsence de rgulateurs molculaires qui inhibent le complexe de signalisation du TCR trs rapidement aprs la stimulation anti-tumorale. De plus, les cellules T de trs hautes affinits ne sont capables d'activer les molcules de la cascade de signalisation proximale que de manire transitoire, suggrant ainsi un second niveau de rgulation via l'activation de mcanismes de rtroaction prenant place progressivement au cours du temps et limitant la dure de la signalisation dpendante du TCR. En rsum, la dtermination des paramtres impliqus dans l'interaction du TCR-pCMH permettant l'activation de voies de signalisation et des fonctions effectrices optimales ainsi que l'identification des mcanismes de rgulation au niveau proximal de la cascade de signalisation du TCR contribuent directement l'optimisation et au dveloppement de stratgies anti-tumorales bases sur l'ingnierie des TCRs pour le traitement des maladies malignes.
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Leishmaniasis is widely spread disease found in bath tropical and temperate regions but limited to the habitat of its sand fly vector. lt affects over 12 million people with 2 million new cases each year. As cutaneous leishmaniasis patients show varying levels of immunity to the disease after recovery, the development of a vaccine has much promise as a prevention strategy. Unfortunately however, existing anti-leishmanial vaccines are plagued by safety issues and have only ever shown limited efficacy .So, despite much effort, no effective vaccine is currently available. Recent studies suggest a correlation between the presence of Leishmania RNA virus (LRV) and the development of mucocutaneous leishmaniasis (MCL), which is characterised by the presence of secondary lesions in nasal and buccal mucosa, causing destructive and disfiguring facial lesions. Moreover, recent research has associated the viral presence to treatment fa ilure in patients. ln the first part of this work, we propose that these viral particles may serve as promising vaccine candidates due to their powerful TLR-3 antigenicity, launching an early cell-mediated attack on stimulated cells and thus eliminating their virulent complications. The second part of this work discusses a preliminary study on the lymphocyte immune response against Leishmania guyanensis infection. The lymphocyte response (and in particular, the raie of CDS+ T cells) is controversial and varies greatly between Leishmania species. Here, we illustrate the importance of a small CDS+ T cell subpopulation, expressing the CDSaa+ receptor. These intraepithelial lymphocytes are mainly present in the skin, vagina and intestinal tissue and are best known for their raie in the early immune response against pathogens. Similarly to traditional CDS+ cells, they secrete the tissue-destructive enzymes, perforin and granzyme, which can result in a hyper-inflammatory cutaneous lesion, raising a possibility for their raie in Leishmania infection. lndeed, our initial results in a murine mode( of Leishmania guyanensis infection suggest a pathogenic raie for CDSaa+ T cells. Further research into species-specific immune responses against the various Leishmania parasites is critical to realising the clinical potential of immunotherapy in the treatment and prevention of this disfiguring disease . -- La Leishmaniose est une maladie infectieuse cause par le parasite Leishmania. Elle est localise dans les rgions o son vecteur se reproduit, c'est--dire dans des rgions tropicales ou tempres. Cette pathologie affecte 12 millions des personnes dans le monde et 2 millions de nouveaux cas sont recenss chaque anne. D'autres facteurs, tels la dforestation, les conditions d'hygine ou encore l'accs limit aux mdicaments, aggravent la pathologie et renforcent sa propagation. Les patients affects par la leishmaniose et qui arrivent en gurir, prsentent une protection contre une rinfection. Pour cette raison, le dveloppement d'un vaccin reste la meilleure solution pour combattre ce flau. Mais, ce jour, et malgr beaucoup d'efforts, aucun vaccin efficace n'a encore t dvelopp. Un autre facteur responsable de l'aggravation de la pathologie et de la rsistance de ces parasites aux drogues est un virus qui peut infecter certaines souches de Leishmania. Ce virus, appel Leishmania RNA virus, peut induire une rponse inflammatoire exagre, ce qui a comme rsultat l'aggravation de la pathologie, la survie et la dissmination de ce parasite au sein de l'hte infect. Vu l'absence d'un vaccin contre ce parasite, Leishmania, nous proposons de dvelopper un vaccin non pas contre le parasite lui- mme mais contre l'agent qui provoque l'exacerbation de la pathologie, c'est--dire le virus. Dans cette tude, nous dcrivons le dveloppement d'un vaccin contre LRV, qui empche le parasite d'induire des inflammations exagres dans les souris. En d'autres mots, nous essayons de prvenir toutes les complications gnres par cet hyperpathogne qu'est le LRV, en utilisant sa capside comme cible pour le dveloppement d'un vaccin. Dans la deuxime partie de ce manuscrit, nous avons aussi tudi plus en dtail la rponse immunitaire, et en particulier la rponse des lymphocytes T COB suite l'infection du parasite Leishmania guyanensis porteur du LRV.
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The effect of an adventure sprint race (ASR) on T-cell proliferation, leukocyte count and muscle damage was evaluated. Seven young male runners completed an ASR in the region of Serra do Espinhao, Brazil. The race induced a strong leukocytosis (6.222.04103 cells/mm3 beforevs 14.813.53103 cells/mm3after the race), marked by a significant increase of neutrophils and monocytes (P<0.05), but not total lymphocytes, CD3+CD4+ or CD3+CD8+ cells. However, the T-cell proliferative response to mitogenic stimulation was increased (P=0.025) after the race, which contradicted our hypothesis that ASR, as a high-demand competition, would inhibit T-cell proliferation. A positive correlation (P=0.03, r=0.79) was observed between the proliferative response of lymphocytes after the race and the time to complete the race, suggesting that the proliferative response was dependent on exercise intensity. Muscle damage was evident after the race by increased serum levels of aspartate amino transferase (24.998.30 vs 50.6115.76 U/L, P=0.003). The results suggest that humoral factors and substances released by damaged muscle may be responsible for lymphocyte activation, which may be involved in muscle recovery and repair.
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Contient : 1 Lettre de HENRY [III]... au tres illustre prince et bon amy le roy de Fez et empereur des Marrocques... Escript Paris, le XXIe jour de febvrier 1588 ; 2 Lettre de MARIE DE BOURBON [duchesse DE LONGUEVILLE]... monsieur le duc de Nevers,... De Trie, ce IIIe septembre ; 3 Lettre de DIANE l[gitime] DE FRANCE [duchesse d'Angouleme]... De l'Isle Adem, le IXe septembre 1588 ; 4 Lettre de HENRY [III]... mon cousin monseigneur le duc de Nevers,... Escript Bloys, le 6e jour d'octobre 1588 ; 5 Lettre de MARIE DE BOURBON,... monsieur le duc de Nevers,... De Vallemont, ce VIIIe jour d'octobre 1588 ; 6 Lettre de HENRY [III]... mon cousin le duc de Nevers,... A Bloys, ce XXIe jour d'octobre 1588 ; 7 Lettre de HENRY [III]... mon cousin le duc de Nevers,... Escrit Bloys, le XXVIIe octobre 1588 ; 8 Lettre de HENRY [III]... mon cousin le duc de Nevers,... Escrit Bloys, le XXVIIe jour d'octobre 1588 ; 9 Lettre de CATERINE [DE MEDICIS]... mon cousin monseigneur le duc de Nevers,... A Blois, le XXVIIe jour d'octobre 1588 ; 10 Lettre de HENRY D'ORLEANS [duc DE LONGUEVILLE]... monsieur... le duc de Nevers,... D'Amyens, ce XXVIIe octobre 1588 ; 11 Lettre de HENRY [III]... mon cousin le duc de Nevers,... Escrit Blois, le dernier octobre 1588 ; 12 Lettre de M. D' ENTRAIGUES,... monseigneur le duc de Nevers,... D'Orleans, ce 22 mars 1588 ; 13 Lettre de HENRY [III]... mon cousin le duc de Nevers,... Escript Bloys, le VIe jour de novembre 1588 ; 14 Lettre de HENRY [III]... mon cousin le duc de Nevers,... Escrit Blois, le XVIe jour de novembre 1588 ; 15 Copie de la lectre du roy... HENRY [III]... au collonel Galaty,... Escrit Bloys, le IX novembre 1588 ; 16 Lettre de PHILIPPE EMANUEL DE LORRAINE,... monsieur... de Nevers ; 17 Lettre de HENRY DE BOURBON [prince DE CONDE]... monsieur le duc de Nevers,... A Champigny, ce XVIIe novembre ; 18 Lettre de M. D'AUMONT,... monsieur... le duc de Nevers,... A Bloys, ce 21 novembre 1588 ; 19 Lettre de HENRY [III]... mon cousin le duc de Nevers,... Escrit Bloys, le IIIe jour de decembre 1588 ; 20 Lettre de HENRY [III]... mon cousin le duc de Nevers,... Escrit Blois, le Ve jour de decembre 1588 ; 21 Lettre de M. D'AUMONT,... monsieur... le duc de Nevers,... A Bloys, ce IXe decembre 1588 ; 22 Lettre de HENRY [III]... mon cousin le duc de Nevers,... Escrit Blois, le XIe jour de decembre 1588 ; 23 Lettre de SCIPION SARDINI,... monseigneur le duc de Nevers,... A Blois, ce XVIe decembre 1588 ; 24 Lettre de A[RNAUD] SORBIN [DE SAINTE-FOI], e[vque] de Nevers... monsieur le duc de Nevers,... De Nevers, ce 17 decembre 1588 ; 25 Lettre de M. DE LANSSAC,... monseigneur le duc de Nevers,... De Blois, ce XVIIe decembre 1588 ; 26 Lettre de M. DE LANSSAC,... monseigneur le duc de Nevers,... De Blois, ce XVIIe decembre 1588 ; 27 Lettre de M. DE LANSSAC,... monseigneur le duc de Nevers,... De Blois, ce XIXe decembre 1588 ; 28 Lettre de M. D'ENTRAIGUES,... monseigneur le duc de Nevers,... A Blois, ce 19 de dessembre 1588 ; 29 Lettre de CHARLES, cardinal DE BOURBON,... monsieur le duc de Nevers,... A Bloys, le XIXe de decembre 1588 ; 30 Lettre de HENRY [III]... mon cousin le duc de Nevers,... Escript Bloys, le XXe jour de decembre 1588 ; 31 Lettre de HENRY [DE NAVARRE]... mon cousyn monseigneur le duc de Nyvernoys,... A La Rochelle, ce XXe jour de decembre 1588 ; 32 Lettre de PHILIPPE EMANUEL DE LORRAINE,... monsieur... le duc de Nevers ; 33 Lettre de FOULON, abb de Ste Geneviefve... monseigneur le duc de Nevers,... A Saincte Geneviefve, ce XXIIme decembre 1588 ; 34 Lettre de PHILIPPE EMANUEL DE LORRAINE,... monsieur le duc de Nevers,... A Nantes, ce 27 de decembre 1588 ; 35 Lettre de M. DE CHEMERAULT,... monseigneur le duc de Nevers,... De Poictiers, ce XXIXe decembre 1588 ; 36 Lettre de HENRY [III]... monseigneur le duc de Nevers, mon cousin... Escrit Bloys, ce XXXe decembre 1588 ; 37 Extraict du serment faict et prest par devant monseigneur le gouverneur de Peronne... et les mayeur et eschevins dudict Peronne, par les Estatz, manans et habitans d'icelle ville de Peronne, pour l'unyon d'icelle avec celles de Paris et Amyens, tendant la conservation de la relligion catholicque, apostolicque et romaine ; 38 Copie du pouvoir don par le roi HENRY [III]... monseigneur de Longueville pour comander en Picardie en l'absence du duc de Nevers. Donn Paris, le XXIIe jour de febvrier, l'an de grace mil V.C. quatre vingtz huict ; 39 Contrat pass par le chancelier de France Phellippes Hurault, conte de Cheverny , pour la fourniture de 240 chevaux d'artillerie. Du 23 febvrier et 2 mars 1588 . Copie ; 40 Coppie d'arrest donn par le roy entre les eschevins de la ville d'Amyens, du IIIIe avril 1588 ; 41 Coppie d'arrest donn au conseil des finances entre Robert Couvreur et les maieur; prevost et eschevins de la ville d'Amyens, le VIe avril 1588, et commission sur icelluy pour l'execution dudict arrest ; 42 Memoire de ce qu'est advenu Amyans en may 1588 . Copie ; 43 Remonstrances des habitans d'Amiens pour presenter au roy... Le IIIe jour de juin mil V.C.IIII.XX. VIII . Copie ; 44 Coppie de l'instruction que les mayeur et eschevins d'Amiens baillerent aux deputez qui allerent Paris au mois de juin 1588 ; 45 Articles de ce qui a est advis par les Srs de Halwin, de Chaunes, de Crevecoeur et autres, sur le commendement qui leur a est envoy par Sa Majest... Faict Crevecoeur, le XXVIe juin 1588 . Copie ; 46 Reiglement pour l'establissement des capitaines et la garde de la ville d'Amyens... Faict en pleine assemble d'eschevinage, le XIIIIme juillet M.V.C.IIII.XX. huict ; 47 Memoire baill par GUILLAUME DU KAISEL, Sr DE FLORINTUN,... deput des habitans du Boullonnois... Ce 2 avril 1588 ; 48 Articles dresss pour oster la source des divisions dans la province de Picardie. Le 8 aoust 1588 . Copie ; 49 Lettres patentes de HENRI III confirmant les privilges de Claude Medart, maistre des requestes de feu le duc d'Anjou. Donn Chartres, le XVe jour d'aoust l'an de grace mil cinq cens quatre vingtz huict . Copie ; 50 Lettres patentes de HENRI III accordant au duc de Nevers la somme de cent cinquante mil escuz... Donn Chartres, le XXVIIe jour d'aoust, l'an de grace mil cinq cens quatre vingtz huict ; 51 Remonstrances de ceulx de la ville d'Amyens pour l'establissement des 21 capitaines qu'ils desirent faire, baill Mr de Crevecoeur pour envoier au roy, le 5 septembre 1588 . Copie ; 52 Instruction de monseigneur DE CREVECUEUR pour envoier au roy, touchant le nouveau establissement des capitaines de la ville d'Amiens... Faict au Saulchoy, le IIIIe jour de septembre 1588 . Copie ; 53 Advis particullier sur la commodit de l'observation des anciens statutz, privilleiges et pollices de guerre, et sur l'incommodit aussy des nouvelles loix et institutions que l'on pretend establir Amyens... baill Mr de Crevecueur pour envoier au roy . Copie ; 54 Memoire sur l'ordre et institution des nouveaux cappitaines et sur l'importance et prejudice d'icelle au faict de la ville, baill Mr de Crevecoeur pour envoier au roy . Copie ; 55 Adviz sur la remonstrance de ceulx de la ville d'Amyans, baill Mr de Crevecoeur pour envoier au roy . Copie ; 56 Coppie de l'arest obtenu pour monsigneur de Guemen contre les Srs de Vilquier et d'O,... Donn Paris, en nostre parlement, le septiesme jour de septembre, l'an de grace mil cinq cens quatre vingtz huict ; 57 Declaration des maieurs et eschevins d'Amiens touchant le reiglement d'entre les XXI nouveaux capitaines et les capitaines previlegez... Faict en l'eschevinage tenu le... dernier jour d'aoust 1588 . Copie ; 58 Forme de reglement quy se garde la ville d'Amyans pour la force et seuret d'icelle... II settembre 1588 . Copie ; 59 Dclaration des chevins d'Amiens rservant les droits du gouverneur de Picardie. Faict en l'eschevinage tenu Amyens, le jeudy quinziesme jour de septembre mil V.C.IIII.XX. huict . Copie ; 60 Declaration d'Amyans touchant... la destruction des deux places... de Doullens et Monstroeul... Faict en l'eschevinage tenu Amyens, le jeudy quinziesme jour de septembre mil V.C.IIII.XX. huict . Copie ; 61 Lectre[s closes] du roy HENRY [III]... aux majeur, prevost et eschevins d'Amyens... Escript Bloys, ce XVIIIe septembre 1588 . Copie ; 62 Coppie d'annoblissement pour Jehan de Collemont, maieur de la ville d'Amyens... Donn Bloys, du moys de septembre, l'an de grace mil V.C. quatre vingtz huict . Copie ; 63 Coppie de commission au bailly d'Amyens ou son lieutenant criminel pour informer contre ceulx qui ont faict des brigues pour parvenir la charge de majeur de la dicte ville d'Amyens et empescher lesdictes brigues... Donn Bloys, le XVIIIe jour de septembre, l'an de grace mil V.C. quatre vingtz huict ; 64 Coppie de declaration du roy sur l'establissement des nouveaulx capitaines de la ville d'Amyens... Donn Bloys, le XVIIIe jour de septembre, l'an de grace mil cinq cens quatre vingtz huict ; 65 Declaration d'Abbeville monseigneur de Nevers touchant Montreuil et Doullens. Faict au grand eschevinaige, le dix noeufviesme jour de septembre mil V.C. quatre vingtz et huict . Copie ; 66 Articles que les mayeur, eschevins et jurez de la ville de St Quentin entendent presenter au roy... Faict audict St Quentin, le vingtiesme jour de septembre mil cinq cens quatre vingtz et huict . Copie ; 67 Copie de l'acte don par ceulx de Amyens Mr de Crevecoeur, touchant les capitaines qu'ils avoint cres en leur ville, lesquelz ils ont abolis par commandement du roy... Le lundy XXVIe jour de septembre mil V.C.IIII.XX.VIII ; 68 Declaration des... prevost et eschevins de Corbie que le duc de Nevers est compris dans le serment d'obissance prt par eux au roi. Faict Corbye, le mardy vingt septiesme jour de septembre, l'an mil cincq cens quattre vingtz et huict ; 69 Mmoire sur l'lection des maire et chevins de la ville d'Amiens, 1588. Copie ; 70 Roolle des majeur, prevost et eschevins de la ville d'Amiens, esleuz pour cette presente anne 1588 ; 71 Memoire monseigneur [le duc de Nevers] du faict de Jehan de Cours, lieutenant general du prevost provincial de Picardye, sur le bien de justice, soulagement et commodit publique, es pays de Boulonnois, lieux frontieres et maritimes dudict cost jusqu' la riviere d'Ottye . Copie ; 72 Memoyre pour instruire Sa Majest de ses bons et maulvays serviteurs en sa ville d'Amyens... Paris, 1588, febvrier . Copie ; 73 Promesse du Sr SCIPION SARDINI d'acquitter et paier la somme de 3,000 cus lui prte par le Sr Gobelin, sur la promesse du duc de Nevers. A Paris, le IIIIe jour d'octobre mil V.C. quatre vingtz huict . Copie ; 74 Prouvision pour monsieur de Crevecueur de l'estat de lieutenant general en Picardye... Donn Blois, le XVIIIe jour d'octobre, l'an de grace mil V.C. quatre vingtz huict . Copie ; 75 Survivance de la seneschaulse de Boulnoys pour le fils de monsieur d'Estre,... Donn Bloys, le XVIIIe jour d'octobre, l'an de grace mil V.C. quatre vingtz huict . Copie ; 76 Prouvision pour monseigneur de Humieres de l'estat de soubslieutenant general en Picardye... Donn Bloys, le XVIIIe jour d'octobre, l'an de grace mil V.C. quatre vingtz huict . Copie ; 77 Prouvision de l'estat de lieutenant general en l'Isle de France pour monsieur d'Estre,... Donn Bloys, le XVIIIe jour d'octobre, l'an de grace mil V.C. quatre vingtz huict . Copie ; 78 Lettres patentes de HENRY III relatives au don de 100,000 cus fait au duc de Nevers. Donn Blois, le vingtiesme jour d'octobre, l'an de grace mil cinq cens quatre vingtz huict . Copie ; 79 Contrat avec les roulliers , pass par le duc de Nevers pour le service des charrois de l'arme du Poitou. Faict... au conseil d'Estat tenu en la viile de Chartres, le vingt quatreiesme jour d'aoust, l'an mil cinq cens quatre vingtz huict . Copie ; 80 Remonstrances tres humbles faictes au roy par les depputez de Fontenay en Poictou . Copie ; 81 Memoire monseigneur de Gevre pour presenter au roy , concernant une demande du Sr de Tagen au duc de Nevers. IIIe decembre 1588 . Copie ; 82 Memoire servant d'instruction monseigneur de Gesvre pour presenter au roy, concernant la redition de la ville et chasteau de Montaigu et l'estat de son arme... Faict ce IIIe decembre 1588 . Copie ; 83 Roolle des chasteaux et maisons fortes situez en Poictou, baillez en garde par monseigneur de Nevers plussieurs jentishomes depuis le 9 novembre 1588 ; 84 Certifficat de religion de monsieur le duc DE MERCUEUR,... PHILIPPE EMANUEL DE LORRAINE,... pour le Sr de Chantebuzin,... Faict au camp devant Montegu, le Ve jour de decembre 1588 ; 85 Certifficat... de Mr DE ROIAN,... GILBERT DE LA TREMOILLE,... pour le Sr de La Tabarotiere,... Le septiesme jour de decembre mil cinq cens quattre vingtz et huit ; 86 Certifficat... de Mr DE ROIAN, G. DE LA TREMOILLE,... pour Loys Rousseau,... Le septiesme jour de decembre, l'an mil V.C. quatre vingtz huict ; 87 Certifficat... de Mr DE ROIAN,... G. DE LA TREMOILLE,... pour le Sr de La Vannerie,... Au camp de Montagu, le septiesme jour de decembre mil cincq cens quattrevingtz huit ; 88 Certifficat... de Mr DE ROIAN,... G. DE LA TREMOILLE,... pour le Sr de La Floransiere,... Le septiesme jour de decembre mil V.C. quatre vingtz huict ; 89 Certifficat... de Mr DE ROIAN,... G. DE LA TREMOILLE,... pour le Sr de Brandeau,... Le septiesme jour de decembre, l'an mil cincq cens quatre vingtz huict ; 90 Certifficat... de Mr DE ROIAN,... G. DE LA TREMOILLE,... pour le Sr de La Morissiere,... Montagu, le neufiesme jour de decembre, l'an mil cincq cens quatre vingtz huict ; 91 Discours sur la prison de Mme la duchesse de Longueville, faitte par les habitans de Amiens contre tout droit, le 26 decembre 1588 . Copie ; 92 Contrat faict par messrs de Nantes avec Mr Charles de Gondi, marquis de Belylle,... pour la fourniture de 300 M. pains pour le siege de La Garnache... Nantes... quatorzeiesme de decembre mil cinq cens quatre vingtz huict . Copie ; 93-94 Estat des pensions, gaiges et rentes viageres... dubs en la presente anne 1588 par le duc de Nevers. Deux copies
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Les nombreux exemples russis o lamnagement du territoire intgre des milieux naturels nous ont amene nous questionner sur les techniques dintgration des milieux naturels et les outils de planification disponibles au Qubec. La prsente recherche porte sur le volet environnemental du projet rsidentiel le Faubourg de la Pointe-aux-Prairies Montral (FPP) situ dans lArrondissement Pointe-aux-Trembles/Rivire-des-Prairies/Montral est. Un premier objectif reli aux rsultats nous a permis danalyser le taux de succs du quartier FPP intgrer efficacement des proccupations environnementales concernant la mise en valeur des milieux naturels. En nous basant sur le taux de conservation, lintgrit cologique et les tmoignages des intervenants de la Ville de Montral, nous avons dtermin que le plan damnagement du projet prsente un bilan environnemental mitig. Un second objectif reli aux processus nous a permis de dterminer si les outils sollicits pendant la conception et la mise en uvre du projet ont facilit lintgration des milieux naturels. En nous basant sur les outils dencadrement et proactifs utiliss tout au long de la mise en oeuvre, nous avons dtermin que ceux-ci sont inadapts certaines situations. La non intgration des milieux protgs dans les outils de planification, la destruction des milieux aquatiques avec laccord du Ministre de lenvironnement (MDDEP), le manque de vrification des ententes lors de lattribution des certificats dautorisation, l'absence de protection des milieux naturels terrestres et la difficult dvaluer les bnfices conomiques de lintgration de la nature ont t les dfis majeurs observs.
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Ibn Khaldun(1332-1406) fut homme dEtat et historien des conflits et des changements politiques au Moyen-Orient et en Afrique du Nord. Il a ecrit la Muqaddima, une vaste analyse du declin de la civilisation arabe. Dans cet ouvrage l ethique du Juste est presentee comme lobeissance a la loi et lapplication des sciences rationnelles a la tradition. Ceci le mene a condamner l ethique du Bien en tant que calcul de son propre bonheur. Le conflit actuel reflete bien ce dualisme sous de nouvelles formes deudemonisme telle que lutilitarisme. Sa theorie du changement politique et des conflits est toujours dactualite : le developpement economique conduit a la destruction des dynasties au pouvoir ; ce dernier repose sur lAsabiya, une forme specifique du capital social. Le pouvoir politique dure trois generations et connait une evolution faite dessor, dapogee et de declin. Cette theorie des trois phases du developpement permet de mieux comprendre les conflits que connait actuellement le monde arabe.
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Les travaux antrieurs du laboratoire ont dmontr le rle du CD47 dans la fonction des cellules dendritiques ainsi que dans linduction des lymphocytes T rgulateurs (Tregs) chez lhumain in vitro. Notre premier objectif tait de dterminer le rle de CD47 sur la fonction des DCs in vivo. Nos travaux dmontrent que le CD47 contrle slectivement la migration des DCs au travers des vaisseaux lymphatiques et des barrires cellulaires endothliales in vivo sans interfrer avec celle des lymphocytes T et B. Des expriences de migration comptitive et d immunisation active avec des DCs mylodes dmontrent que la migration des DCs est dpendante de lexpression du CD47 sur les DCs et non sur les cellules endothliales. Ce dfaut de migration est corrl avec labsence de DCs splniques dans la zone marginale chez nos souris CD47-/-. Notre second objectif tait de dterminer le rle de CD47 dans lhomostasie et la fonction des Tregs. Nous dmontrons que lexpression du CD47 contrle slectivement lhomostasie dune sous-population de Tregs CD103+ ltat de base. La proportion de cellules actives/mmoires (CD44hi CD62Llo ) Foxp3+ CD103+ augmente rapidement au cours du vieillissement chez nos souris CD47-/- compare aux souris CD47+/+ du mme ge, tandis que le pourcentage de cellules (CD44loCD62Lhi) Foxp3+ CD103- reste comparable entre les deux souches de souris. En conclusion, le CD47 inhibe la prolifration excessive des Tregs CD103+ empchant ainsi laccumulation de ces cellules en absence dinflammation. Les DCs et les Tregs sont troitement rgules de manire reciproque. Cette rgulation croise contribue au maintien dun quilibre entre limmunit protectrice et la tolrance. La perspective de nos travaux est dapprofondir nos connaissances sur le rle du CD47 et de ses ligands dans la rgulation des DCs par les Tregs et vice et versa. Les DCs et les Tregs tant impliqus dans la pathogense de multiples maladies telles que le cancer, les maladies infectieuses et les maladies auto-immunes. Par consquent, nos tudes pourraient ouvrir des portes de nouvelles stratgies thrapeutiques.
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Le virus Epstein-Barr (VEB) est un pathogne opportuniste qui a la capacit dimmortaliser les lymphocytes B et de provoquer une prolifration maligne, appele syndrome lymphoprolifratif post-transplantation (SLP), chez les individus immunodprims. A lintrieur de ce groupe, les personnes plus haut risque sont les enfants, puisquils sont risque de dvelopper une infection primaire par le VEB pendant leur rgime dimmunosuppression post-greffe. Dans le but de dvelopper un anticorps prventif, notre laboratoire sest attard au rle du cycle lytique du VEB dans le dveloppement du SLP. cette fin, le premier objectif du prsent projet vise fournir la preuve exprimentale de lexistence ou non dune phase rplicative productive pendant linfection aigu des lymphocytes B sanguins. Un examen des vnements qui se droulent au tout dbut de linfection par le VEB tant au niveau de la rplication virale quau niveau de lexpression des gnes lytiques prcoces et tardifs a rvl lexistence dune phase rplicative productive pendant linfection aigu. Ceci a permis de justifier llaboration, dans notre laboratoire, dun anticorps chimre (murin-humain) neutralisant, dirig contre la protine gp350 situe sur lenveloppe virale. Le deuxime objectif, quant lui, vise fournir la preuve exprimentale de la capacit neutralisante de cet anticorps chimre. Des essais de caractrisation in vitro ont dmontr une capacit de reconnaissance de la protine cible, notamment la gp350, et une capacit de neutralisation du virus par lanticorps chimre. Lanticorps chimre anti-gp350 pourra faire lobjet dessais prcliniques in vivo en vue dvaluer sa capacit reconnatre le virus et prvenir lapparition de tumeurs de type SLP chez les souris SCID.Il pourrait tre ventuellement utilis, par la suite, comme traitement premptif contre les tumeurs dans lespoir de mieux grer les patients risque de dvelopper un SLP.
Resumo:
La sclrose en plaques (SEP) est caractrise par des infiltrations privasculaires de cellules immunitaires et par de la dmylinisation au sein du systme nerveux central (SNC). Ces deux paramtres de la maladie sont associs la fragilisation de la barrire hmato-encphalique (BHE). En ce sens, le recrutement des cellules prsentatrices dantigne (CPA) mylodes, telles que les monocytes, les macrophages et les cellules dendritiques, dans le SNC travers la BHE, est une tape cruciale dans linitiation et la persistance de linflammation crbrale. Nerve injury-induced protein (Ninjurin)-1 est une nouvelle molcule dadhrence qui mdie une interaction de type homophilique et dont lexpression sur lendothlium vasculaire de la BHE humaine fut identifie grce une analyse protomique des protines associes la BHE. Les rsultats prsents dans ce mmoire montrent que lexpression de Ninjurin-1 augmente dans un contexte inflammatoire dans les cultures primaires de cellules endothliales de la BHE (CE-BHE) et sur les CPA mylodes humaines ex vivo et gnres in vitro. De plus, les CPA infiltrantes retrouves dans les lsions crbrales de patients atteints de SEP et dans le SNC des souris atteintes dencphalomylite autoimmune exprimentale (EAE), le modle murin de la SEP, expriment de hauts niveaux de Ninjurin-1. laide du modle in vitro de la BHE, la neutralisation de Ninjurin-1 restreint spcifiquement la migration des monocytes travers les CE-BHE sans affecter le recrutement des lymphocytes, ni la permabilit des CE-BHE. Enfin, les souris atteintes dEAE et traites avec un peptide bloquant dirig contre Ninjurin-1 prsentent une maladie moins svre ainsi quune diminution des CPA infiltrant le SNC et ce compar au groupe contrle. Ces rsultats suggrent que Ninjurin-1 est une molcule dadhrence de la BHE implique dans le recrutement de CPA mylodes au sein du SNC et quelle peut tre considre comme une cible thrapeutique potentielle en SEP.
Resumo:
L'interleukine-15 (IL-15) contribue au dveloppement et lactivation des lymphocytes T CD8, des cellules immunes qui ont t impliques dans plusieurs maladies auto-immunes telle la sclrose en plaques. Des niveaux levs de l'IL-15 ont t trouvs chez les patients atteints de cette maladie comparativement aux tmoins, mais aucune tude n'a examin les effets de tels niveaux levs sur les lymphocytes T CD8. Les objectifs de notre tude taient 1- de caractriser lexpression de l'IL-15 par des lymphocytes B humains et de dterminer ses effets sur les fonctions des lymphocytes T CD8, et 2- dvaluer l'expression in vivo de l'IL-15 dans des modles murins de la sclrose en plaques. Nous avons tabli que les cellules B humaines augmentaient leur expression de l'IL-15 suite une stimulation via le CD40. De plus, les fonctions effectrices des lymphocytes T CD8 ont t significativement augmentes lors des co-cultures avec des cellules B alloractives exprimant l'IL-15. Dans les modles murins de la sclrose en plaques, nous avons dtect au sein du systme nerveux central des cellules immunes exprimant lIL-15 ainsi que des cellules T CD8 exprimant le rcepteur pour cette cytokine diffrents stades de la maladie. Nous avons dmontr que les cellules B modulent des rponses des lymphocytes T CD8 via lIL-15, ce qui suggre un rle pour les cellules B dans la pathogense de la sclrose en plaques. Nous avons aussi mis en vidence la prsence de cellules exprimant lIL-15 dans le systme nerveux central dans des modles murins de cette maladie.
