PCR Multiplex fluorescente para detecção de bactérias em sêmen bovino

Este estudo teve como objetivo avaliar o limiar de detecção da técnica de PCR multiplex fluorescente aliada a eletroforese capilar na detecção de agentes infecciosos em amostras de sêmen experimentalmente contaminadas com concentrações decrescentes das bactérias Brucella abortus, Leptospira interrogans sorovar pomona, Campylobacter fetus e Haemophilus somnus. Amostras de sêmen bovino foram experimentalmente contaminadas com concentrações decrescentes de bactérias obtidas através de diluições seriadas na base 10 de modo a obter-se amostras contendo desde 1 vez até 10-7 bactérias/mL a partir da concentração inicial de Leptospira pomona, Brucella abortus, Campylobacter fetus e Haemophilus somnus. As diluições foram efetuadas individualmente para cada bactéria, bem como nas diferentes concentrações necessárias para a padronização do teste de multiplex PCR. As extrações de DNA de todas as soluções contendo espermatozóides e bactérias analisadas no presente estudo foram realizadas segundo protocolo descrito por Heinemann et al. (2000). Os produtos de PCR multiplex foram avaliados por eletroforese em gel de poliacrilamida 8% e separação eletroforética por sistema capilar em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA MegaBace. Observou-se a amplificação de fragmentos de 193pb, 330pb, 400pb e 415pb a partir do DNA de B. abortus, L. pomona, H. somnus, C. fetus, respectivamente. Na análise por eletroforese capilar de produtos da PCR multiplex do DNA para detecção simultânea dos quatro patógenos observou-se a sinal de positividade até a diluição de 10-3 bactérias/mL vezes da concentração inicial da solução estoque de cada bactéria. A técnica de PCR multiplex aliada à eletroforese capilar foi usada pela primeira vez para o diagnóstico direto de quatro bactérias patogênicas no sêmen, demonstrando ser um método rápido na detecção de bactérias causadoras de doenças reprodutivas.

Subgingival microbiota from Cebus apella (capuchin monkey) with different periodontal conditions

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Molecular detection of in-vivo microbial contamination of metallic orthodontic brackets by checkerboard DNA-DNA hybridization

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Importância do Staphylococcus aureus nas mastites subclínicas: pesquisa de enterotoxinas e toxina do choque tóxico, e a relação com a contagem de células somáticas

O Staphylococcus aureus é um dos principais agentes das mastites consideradas contagiosas, apresentando elevada incidência na maioria dos rebanhos leiteiros em vários países. Além de perdas econômicas é importante salientar o aspecto de saúde pública para cepas produtoras de enterotoxinas e da toxina do choque tóxico. A enterotoxina A, relacionada com maior ênfase nos casos de toxinfecções alimentares, pode ser veiculada pelo leite cru, pasteurizado e subprodutos lácteos. A síndrome do choque tóxico é determinada mais freqüentemente pela toxina do choque tóxico, porém as enterotoxinas do tipo B e C também podem ser implicadas. O objetivo deste estudo foi verificar a ocorrência de S.aureus produtores de enteroxinas e da toxina do choque tóxico em amostras de leite de animais com mastite subclínica, e correlacionar estes resultados com a contagem de células somáticas; utilizando a técnica de celofane over agar para detecção da TNAase, kit comercial para identificação das enterotxinas e contagem eletrônica de células somáticas. Avaliod]MORENO, B.[u-se 209 amostras de leite oriundas de vacas com mastite subclínica por S.aureus, e dentre estas, 209 (98,86%) produziram TNAse, nove amostras (4,39%) foram produtoras de enterotoxinas, sendo que uma (0,49%) dentre elas foi produtora de EED, três (1,46%) de EEC, e três (1,46%) de EEB. em uma amostra (0,49%), detectou-se concomitantemente EEA e EEB e em outra EEB e EEC. A toxina do choque tóxico não foi encontrada nas cepas avaliadas neste estudo, assim como não houve aumento estatisticamente significativo, na contagem de células somáticas, das amostras de cepas produtoras de enteroxinas.

Detection of enterotoxins genes in coagulase-negative staphylococci isolated from foods

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Polymerase Chain Reaction Detection of Enterotoxins Genes in Coagulase-Negative Staphylococci Isolated from Brazilian Minas Cheese

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Phenotype characterization of Staphylococcus species strains isolated from buffalo (Bubalus bubalis) milk

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Mucosa-associated but not luminal Escherichia coli is augmented in Crohn's disease and ulcerative colitis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Study of virulence factors in coagulase-negative staphylococci isolated from newborns

Coagulase-negative staphylococci (CNS) have been identified as the etiological agent in various infections and are currently the microorganisms most frequently isolated in nosocomial infections. However, little is known about the virulence factors produced by CNS that contribute to the pathogenesis of infections caused by these microorganisms. The study of CNS isolated from infectious processes of newborns hospitalized in the Neonatal Unit of the Hospital of the Botucatu Medical School, Unesp, indicated Staphylococcus epidermidis as the most frequently isolated species (77.8%), which was also associated with clinically significant situations. The analysis of virulence factors revealed the production of slime in 20 (17.1%) of all CNS samples isolated and the synthesis of a broad spectrum of enzymes and toxins, including hemolysins (19.6%), lipase (17.1%), lecithinase (3.4%), DNAse (15.4%), thermonuclease (7.7%), and enterotoxin A, B or C (37.6%). Taking into consideration that the etiological importance of CNS has often been neglected, the present investigation confirmed that these microorganisms should not be ignored or classified as mere contaminants.

Fatores de virulência em linhagens de Escherichia coli isoladas de mastite bovina

Avaliou-se a ocorrência de fatores de virulência e do sorotipo O157:H7 em 120 linhagens de Escherichia coli, isoladas de 80 casos de mastite clínica bovina e 40 de mastite subclínica. Verificou-se alfa-hemolisina em oito (6,7%) linhagens, isoladas de cinco casos de mastite clínica e três de mastite subclínica e em nenhuma das estirpes detectou-se enteroemolisina. A presença de sideróforos foi encontrada em 11 (9,2%) linhagens, sete de mastite clínica e quatro de subclínica. em duas (1,7%) estirpes isoladas de mastite subclínica, identificou-se enterotoxina STa. Observou-se efeito citopático em células vero compatível com a produção de verotoxina-VT em cinco (4,2%) linhagens, duas de mastite clínica e três subclínicas. em uma (0,8%) linhagem isolada de mastite clínica, detectou-se efeito citopático compatível com o fator necrosante citotóxico. Nenhuma estirpe apresentou-se sorbitol-negativa no MacConkey-sorbitol, tampouco aglutinou com o sorotipo O157:H7. Os antimicrobianos mais efetivos foram polimixina B (97,5%) e norfloxacina (95,8%). Observou-se multi-resistência a dois ou mais antimicrobianos em 24 (20%) estirpes, principalmente com o uso de ampicilina e ceftiofur.

IDENTIFICAÇÃO DOS GENES QUE CODIFICAM PARA A ENTEROTOXINA TERMOLÁBIL LT-II em AMOSTRAS DE ESCHERICHIA COLI ISOLADAS DE BEZERROS COM DIARRÉIA NA REGIÃO DE JABOTICABAL, SP, BRASIL

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Identification of enteropathogens from buffalo calves with and without diarrhoea in the Ribeira Valley, State of São Paulo, Brazil

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Fezes de galinhas poedeiras na alimentação de ruminantes análises microbiológicas

The objectives of the present study were: to evaluate the variation in total number of microorganisms in laying hen fecal samples and to identify the pathogenic microorganisms possibly present such as Staphylococcus aureus, Salmonella sp., Clostridium botulinum, C chauvoei, Campylobacter sp., Escherichia coli, and Corynebacterium sp. The experiment was conducted at the School of Agrarian and Veterinarian Sciences of Jaboticabal, - UNESP. Fecal samples were collected from the aviary. A fully randomized experimental design was used with 7 treatments and 4 replications, for a total of 28 samples. A decrease in total number of microorganisms was detected when treatment T0 (zero days of storage) was compared with treatment T6 (42 days of storage), with oscillations in numbers being observed during this period of time. Pathogenic bacteria such as Clostridium noyvi, C perfringens, C sordelli, C septicum and C noyvi type B were detected, as well as non-pathogenic bacteria such as Bacillus sp. and Staphylococcus epidermidis.

Microbiological analyses of poultry litter used for ruminant feeding

The aims of this study were to estimate the changes in total bacterial counts (TBC) in poultry litter samples, consisting of rice hulls, after storage, and to identify pathogenic bacteria. For the countings Plate Count agar (Difco) was used. Enrichment and selective media such as blood agar, MacConkey, Baird Parker, brain and heart agar, and egg yolk solid media, and cooked meat and brain and heart infusion, incubated under aerobic or anaerobic conditions were used to isolate Staphylococcus aureus, Salmonella sp, Clostridium perfringens, C. botulinum, C. chauvoei, Campylobacter sp, Escherichia coli, and Corynebacterium sp. Litter samples were collected from the houses of the Veterinary School experimental aviary. A fully randomized experimental design was used with four treatments and four replications, for a total of 16 samples. A decrease in TBC was detected when treatment T1 (zero days of storage) was compared with treatments T2 (14 days of storage). on the other hand the treatments T3 (28 days of storage) and T4 (42 days of storage) presented significantly superior counting in relation to treatment T1. Some pathogenic bacteria of Enterobacteriaceae such as Escherichia coil, Proteus, Arizona, Providencia, Edwardsiella, as well as Staphylococcus aureus, S. epidermidis, different species of genus Clostridium as C. perfringens, C. sordelli, C. chauvoei, C. tetani and C. novyi as well as some strains of Corynebacterium pyogenes were isolated.

Use of Pyrosequencing and Denaturing Gradient Gel Electrophoresis to Examine the Effects of Probiotics and Essential Oil Blends on Digestive Microflora in Broilers Under Mixed Eimeria Infection

A protective digestive microflora helps prevent and reduce broiler infection and colonization by enteropathogens. In the current experiment, broilers fed diets supplemented with probiotics and essential oil (EO) blends were infected with a standard mixed Eimeria spp. to determine effects of performance enhancers on ileal and cecal microbial communities (MCs). Eight treatment groups included four controls (uninfected-unmedicated [UU], unmedicated-infected, the antibiotic BMD plus the ionophore Coban as positive control, and the ionophore as negative control), and four treatments (probiotics BC-30 and Calsporin; and EO, Crina Poultry Plus, and Crina PoultryAF). Day-old broilers were raised to 14 days in floor pens on used litter and then were moved to Petersime batteries and inoculated at 15 days with mixed Eimeria spp. Ileal and cecal samples were collected at 14 days and 7 days postinfection. Digesta DNA was subjected to pyrosequencing for sequencing of individual cecal bacteria and denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) for determination of changes in ileal and cecal MC according to percentage similarity coefficient (%SC). Pyrosequencing is very sensitive detecting shifts in individual bacterial sequences, whereas DGGE is able to detect gross shifts in entire MC. These combined techniques offer versatility toward identifying feed additive and mild Eimeria infection modulation of broiler MC. Pyrosequencing detected 147 bacterial species sequences. Additionally, pyrosequencing revealed the presence of relatively low levels of the potential human enteropathogens Campylobacter sp. and four Shigella spp. as well as the potential poultry pathogen Clostridiun perfringens. Pre- and postinfection changes in ileal (56%SC) and cecal (78.5%SC) DGGE profiles resulted from the coccidia infection and with increased broiler age. Probiotics and EO changed MC from those seen in UU ilea and ceca. Results potentially reflect the performance enhancement above expectations in comparison to broilers not given the probiotics or the specific EO blends as feed supplements.