Sequence specific complexation of b DNA at sites containing g,c base pairs

A series of eight related analogs of distamycin A has been synthesized. Footprinting and affinity cleaving reveal that only two of the analogs, pyridine-2- car box amide-netropsin (2-Py N) and 1-methylimidazole-2-carboxamide-netrops in (2-ImN), bind to DNA with a specificity different from that of the parent compound. A new class of sites, represented by a TGACT sequence, is a strong site for 2-PyN binding, and the major recognition site for 2-ImN on DNA. Both compounds recognize the G•C bp specifically, although A's and T's in the site may be interchanged without penalty. Additional A•T bp outside the binding site increase the binding affinity. The compounds bind in the minor groove of the DNA sequence, but protect both grooves from dimethylsulfate. The binding evidence suggests that 2-PyN or 2-ImN binding induces a DNA conformational change.

In order to understand this sequence specific complexation better, the Ackers quantitative footprinting method for measuring individual site affinity constants has been extended to small molecules. MPE•Fe(II) cleavage reactions over a 10^5 range of free ligand concentrations are analyzed by gel electrophoresis. The decrease in cleavage is calculated by densitometry of a gel autoradiogram. The apparent fraction of DNA bound is then calculated from the amount of cleavage protection. The data is fitted to a theoretical curve using non-linear least squares techniques. Affinity constants at four individual sites are determined simultaneously. The distamycin A analog binds solely at A•T rich sites. Affinities range from 10^(6)- 10^(7)M^(-1) The data for parent compound D fit closely to a monomeric binding curve. 2-PyN binds both A•T sites and the TGTCA site with an apparent affinity constant of 10^(5) M^(-1). 2-ImN binds A•T sites with affinities less than 5 x 10^(4) M^(-1). The affinity of 2-ImN for the TGTCA site does not change significantly from the 2-PyN value. At the TGTCA site, the experimental data fit a dimeric binding curve better than a monomeric curve. Both 2-PyN and 2-ImN have substantially lower DNA affinities than closely related compounds.

In order to probe the requirements of this new binding site, fourteen other derivatives have been synthesized and tested. All compounds that recognize the TGTCA site have a heterocyclic aromatic nitrogen ortho to the N or C-terminal amide of the netropsin subunit. Specificity is strongly affected by the overall length of the small molecule. Only compounds that consist of at least three aromatic rings linked by amides exhibit TGTCA site binding. Specificity is only weakly altered by substitution on the pyridine ring, which correlates best with steric factors. A model is proposed for TGTCA site binding that has as its key feature hydrogen bonding to both G's by the small molecule. The specificity is determined by the sequence dependence of the distance between G's.

One derivative of 2-PyN exhibits pH dependent sequence specificity. At low pH, 4-dimethylaminopyridine-2-carboxamide-netropsin binds tightly to A•T sites. At high pH, 4-Me_(2)NPyN binds most tightly to the TGTCA site. In aqueous solution, this compound protonates at the pyridine nitrogen at pH 6. Thus presence of the protonated form correlates with A•T specificity.

The binding site of a class of eukaryotic transcriptional activators typified by yeast protein GCN4 and the mammalian oncogene Jun contains a strong 2-ImN binding site. Specificity requirements for the protein and small molecule are similar. GCN4 and 2-lmN bind simultaneously to the same binding site. GCN4 alters the cleavage pattern of 2-ImN-EDTA derivative at only one of its binding sites. The details of the interaction suggest that GCN4 alters the conformation of an AAAAAAA sequence adjacent to its binding site. The presence of a yeast counterpart to Jun partially blocks 2-lmN binding. The differences do not appear to be caused by direct interactions between 2-lmN and the proteins, but by induced conformational changes in the DNA protein complex. It is likely that the observed differences in complexation are involved in the varying sequence specificity of these proteins.

A Detailed Analysis of Transcriptional Regulators Affecting the Saccharomyces cerevisiae Heat-shock Gene SSA1

The yeast Saccharomyces cerevisiae contains a family of hsp70 related genes. One member of this family, SSA1, encodes a 70kD heat-shock protein which in addition to its heat inducible expression has a significant basal level of expression. The first 500 bp upstream of the SSA1 start point of transcription was examined by DNAse I protection analysis. The results reveal the presence of at least 14 factor binding sites throughout the upstream promoter region. The function of these binding sites has been examined using a series of 5' promoter deletions fused to the recorder gene lacZ in a centromere-containing yeast shuttle vector. The following sites have been identified in the promoter and their activity in yeast determined individually with a centromere-based recorder plasmid containing a truncated CYC1 /lacZ fusion: a heat-shock element or HSE which is sufficient to convey heat-shock response on the recorder plasmid; a homology to the SV40 'core' sequence which can repress the GCN4 recognition element (GCRE) and the yAP1 recognition element (ARE), and has been designated a upstream repression element or URE; a 'G'-rich region named G-box which can also convey heatshock response on the recorder plasmid; and a purine-pyrimidine alternating sequence name GT-box which is an activator of transcription. A series of fusion constructs were made to identify a putative silencer-like element upstream of SSA1. This element is position dependent and has been localized to a region containing both an ABF1 binding site and a RAP1 binding site. Five site-specific DNA-binding factors are identified and their purification is presented: the heat-shock transcription factor or HSTF, which recognizes the HSE; the G-box binding factor or GBF; the URE recognition factor or URF; the GT-box binding factor; and the GC-box binding factor or yeast Sp1.

Estudio comparativo de diferentes soluciones de unión en estructuras de madera.

[ES]El encargado como redactor del estudio de este proyecto es el alumno de la Escuela Técnica Superior de Ingeniería de Bilbao, Pello Intxausti Rodriguez. Dicho proyecto, se encargará del análisis de diferentes tipos de juntas de madera laminada disponibles para una misma dificultad. Para ello, se diseñará una cercha tipo Warren (Figura 3) con el fin de hacer un estudio de esfuerzos del sistema y posteriormente se diseñarán distintas uniones para poder adoptar la solución más adecuada. Se empezará por la descripción del conflicto. La situación de la cercha en cuestión, el estudio climatológico y topográfico forman parte de este apartado. Se continuará con el estudio de diferentes soluciones de unión adoptables y la metodología que se va a seguir en el curso del proyecto, con objeto de poder encontrar una solución satisfactoria.

O direito de comunicar, por que não? Comunicação alternativa aplicada à pessoas com necessidades educacionais especiais no contexto de sala de aula

Uma criança que não desenvolve a linguagem oral é privada de um dos instrumentos mais fundamentais para atingir o amadurecimento completo como ser humano. O emprego dos recursos da Comunicação Alternativa, envolvendo gestos manuais, expressões faciais e corporais, símbolos gráficos e voz digitalizada ou sintetizada, possibilita a comunicação face a face desta criança. O presente trabalho teve como objetivo geral verificar os efeitos da introdução da Comunicação Alternativa nas interações entre alunos, professores e profissionais de uma escola especial destinada a indivíduos com deficiência mental e deficiência múltipla. A pesquisa, com duração de um ano letivo, composta por três estudos, teve como participantes oito alunos, a professora da turma, que era também a pesquisadora, e uma merendeira. Foram utilizados os sistemas gráficos de Comunicação Alternativa, fundamentados nos procedimentos do ensino naturalístico de Warren e Rogers-Warren. Os três estudos, conduzidos por um delineamento quase experimental de sujeito como seu próprio controle, foram compostos por três fases cada um: linha de base, ensino e follow-up. Todas as sessões foram gravadas em vídeo tape para posterior transcrição. No primeiro estudo, conduzido em 11 sessões experimentais, os alunos foram ensinados a empregar os cartões pictográficos para solicitar permissão para satisfazer necessidades básicas, como ir ao refeitório, ao banheiro, beber água, ouvir música, etc., ou para desempenhar determinadas atividades na sala de aula. No segundo, desenvolvido em 56 sessões experimentais, eles foram ensinados a usar o sistema pictográfico para selecionar os itens de sua refeição, que, anteriormente, eram-lhes oferecidos sem possibilidade de escolha. Neste estudo, a merendeira também foi ensinada a favorecer o uso do sistema pelos alunos. Finalmente, no terceiro estudo, conduzido em 10 sessões experimentais, o sistema pictográfico foi utilizado pelos alunos para favorecer a participação ativa na contagem de histórias pela professora, assim como responder perguntas de compreensão destas histórias. Com efeito, os alunos passaram a fazer uso do sistema de Comunicação Alternativa Ampliada (CAA) para comunicar seus desejos e pensamentos a seus próprios colegas, assim como aos professores, diretores e funcionários da instituição escolar. A possibilidade de se comunicar por meio do sistema pareceu encorajá-los a se expressarem intencionalmente também com vocalizações e verbalizações. A análise dos dados indicou a eficácia do ensino naturalístico para instalação e manutenção do emprego do sistema pictográfico associado a outras modalidades de comunicação a gestual, a vocal e a verbal nas atividades propostas.

Aplicación del método de series de Uranio al grafismo rupestre de estilo paleolítico: el caso de la cavidad de Covalanas (Ramales de la Victoria, Cantabria)

[EN] Se ensaya la aplicación del procedimiento analítico de series de Uranio para el conocimiento de la seriación artística de obras parietales de estilo paleolítico. El resultado obtenido muestra la validez del método y abre nuevas vías para la obtención de fechas absolutas "ante quem" y "post quem" que sirvan para enmarcar momentos de ejecución de obras rupestres.

Effect of towing speed on retention of zooplankton in bongo nets

Long-term time series of zooplankton data provide invaluable information about the fluctuations of species abundance and the stability of marine community structure. These data have demonstrated that environmental variability have a profound effect on zooplankton communities across the Atlantic basin (Beaugrand et al., 2002; Frank et al., 2005; Pershing et al., 2005). The value of these time series increases as they lengthen, but so does the likelihood of changes in sampling or processing methods. Sam-pling zooplankton with nylon nets is highly selective and biased because of mesh selectivity, net avoidance, and damage to fragile organisms. One sampling parameter that must be standardized and closely monitored is the speed of the net through the water column. Tow speed should be as fast as possible to minimize net avoid-ance by the organisms, but not so fast as to damage soft bodied zooplankters or extrude them through the mesh (Tranter et al., 1968; Anderson and Warren, 1991).

Catching and rearing postlarval cleaner shrimp for the aquarium trade: results from a WorldFish Center project in Solomon Islands

Between 1999 and 2003, the WorldFish Center in Solomon Islands conducted research into the feasibility of a new fishery based on the capture and culture of postlarval coral reef fish for the live fish trade. The work was carried out in two phases: a research phase from late 1999 to the end of 2002; and a “finetuning” phase in 2003. Most of the species were of value to the marine aquarium trade, with very few live reef food fish recorded. The most valuable ornamentals were the banded cleaner shrimp, Stenopus species. Cleaner shrimp were harvested using crest nets, the method being modified with the addition of a solid, water-retaining cod-end designed to increase survival at capture. Grow-out techniques were improved by rearing the shrimp separately in jars to prevent aggression. The jars were painted black to protect the shrimp from sunlight. An economic model using experimental catch data and farm gate prices indicates that the fishery based on shrimp, supplemented with small numbers of lobster and fish is economically viable. The next step will be setting up a demonstration farm in a village in the Western Province of Solomon Islands.

Uso de Comunicação Alternativa e Ampliada e as possibilidades de interação com seus pares: brincar, comunicar, interagir

Para muitas crianças a impossibilidade de se comunicar através da linguagem oral torna-se um impedimento para sua efetiva interação no grupo social a qual pertencem, deixando-as à margem de experiências propulsoras para o seu desenvolvimento. Segundo Gumpezz (1986), Heat (1989), Luckmann (1990) apud (Capovilla, 1993), converter-se em membro da comunidade lingüística implica que a pessoa domine as regras gramaticais e pragmáticas da linguagem de sua comunidade. O presente estudo teve como objetivos utilizar o brinquedo como propulsor do desenvolvimento da linguagem, através da implementação de um sistema de Comunicação Alternativa e Ampliada (CAA), em uma criança com paralisia cerebral. O procedimento envolveu o uso de um sistema pictório de comunicação e a avaliação das intenções comunicativas da criança, utilizando o sistema de CAA; avaliação das produções lingüísticas e descrição das diferentes formas de interação propiciadas pelo uso do sistema de CAA, em ambiente escolar. O estudo foi dividido em duas etapas: o primeiro estudo foi desenvolvido numa abordagem do ensino naturalístico (Warren and Rogers-Warren, 1985), que demonstrou sua eficácia na implantação do sistema, mudança nas formas de comunicação, construção de sentenças de uma ou mais palavras com as funções de solicitação, pergunta e relato. No segundo estudo foram realizadas observações no contexto escolar, onde a criança encontra-se integrada em classe de alfabetização, sendo possível verificar os tipos de interação realizados pelo sujeito com e sem o uso do sistema de CAA. O estudo indica que o uso de CAA e a possibilidade de interação com outras crianças e adultos falantes auxiliam a construção de uma estrutura lingüística quando assumida no seu papel de uma outra linguagem