'Iron-saturated' lactoferrin is a potent natural adjuvant for augmenting cancer chemotherapy

Bovine lactoferrin (bLf), an iron-containing natural defence protein found in bodily secretions, has been reported to inhibit carcinogenesis and the growth of tumours. Here, we investigated whether natural bLf and iron-saturated forms of bLf differ in their ability to augment cancer chemotherapy. bLf was supplemented into the diet of C57BL/6 mice that were subsequently challenged subcutaneously with tumour cells, and treated by chemotherapy. Chemotherapy eradicated large (0.6 cm diameter) EL-4 lymphomas in mice that had been fed iron-saturated bLf (here designated Lf(+)) for 6 weeks prior to chemotherapy, but surprisingly not in mice that were fed lesser iron-saturated forms of bLf, including apo-bLf (4% iron saturated), natural bLf (approximately 15% iron saturated) and 50% iron-saturated bLf. Lf(+)-fed mice bearing either EL-4, Lewis lung carcinoma or B16 melanoma tumours completely rejected their tumours within 3 weeks following a single injection of either paclitaxel, doxorubicin, epirubicin or fluorouracil, whereas mice fed the control diet were resistant to chemotherapy. Lf(+) had to be fed to mice for more than 2 weeks prior to chemotherapy to be wholly effective in eradicating tumours from all mice, suggesting that it acts as a competence factor. It significantly reduced tumour vascularity and blood flow, and increased antitumour cytotoxicity, tumour apoptosis and the infiltration of tumours by leukocytes. Lf(+) bound to the intestinal epithelium and was preferentially taken up within Peyer's patches. It increased the production of Th1 and Th2 cytokines within the intestine and tumour, including TNF, IFN-gamma, as well as nitric oxide that have been reported to sensitize tumours to chemotherapy. Importantly, it restored both red and white peripheral blood cell numbers depleted by chemotherapy, potentially fortifying the mice against cancer. In summary, bLf is a potent natural adjuvant and fortifying agent for augmenting cancer chemotherapy, but needs to be saturated with iron to be effective.

Nutrition, growth and production of Cherax Destructor Clark, 1936 (Decapoda, Parastacidae)

In this study the nutrition, growth and production of C. destructor was examined. Selected nutritional requirements of juvenile animals were determined under controlled conditions with the aim of developing a pelleted diet for use in hatcheries, nurseries and growout situations. The best developed diet was assessed for its potential as a supplementary feed for animals cultured in earthen environments. The protein requirements were first determined simultaneously with an evaluation of the effect of replacing animal protein (fishmeal) by soybean meal. Juveniles were reared communally for 59 d on isoenergetic diets containing 15-30% protein and graded levels of soybean meal (0-60%, of protein). When soybean meal was included at a level of 40-60%, growth was reduced relative to that achieved with control diets containing 15% and 20% protein, but this was not the case at a 20% soybean meal substitution level. A two-way interaction occurred between dietary protein and soybean meal content. Higher protein feeds enabled higher soybean meal inclusion levels without significantly affecting growth. Protein increases of 5% produced better growth at the 40% and 60% soybean meal substitution levels. This effect was less pronounced in the control and the 20% soybean meal diets. Carcass %protein increased and %lipid decreased as dietary protein increased. A similar effect occurred by increasing the soybean meal level to 60%. No obvious trend in carcass moisture, energy, and ash occurred. A protein requirement of 30% was apparent when fish meal and soybean meal were included in diets at levels of 20% and 24% (dry matter) respectively. Alternative protein sources to soybean meal were subsequently identified. Juveniles were maintained for 12 weeks on isoenergetic diets containing 30% protein and differing in the primary source of protein used, with meat, snail, soybean, yabby, and zooplankton meals comprising the major protein ingredient. No significant difference occurred in mean weight (MW), percentage weight gain (%WG), SGR or survival among diets. Food conversion ratios (FCR) were low, with a minimum value of 0.95 for the snail-based diet. The apparent net protein utilisation (ANPU) varied from 29.6% (zooplankton-based diet) to 41.2% (snail-based diet). Carcass composition varied with diet, with the greatest difference occurring in carapace colour. Animals fed the zooplankton-based diet developed the strongest, most natural pigmentation. A new combination of previously used protein-based ingredients was subsequently tested with reference to two yabby species, Cherax albidus and Cherax destructor, that were grown simultaneously in identical conditions. Juvenile male animals were reared individually for 20 weeks on isoenergetic diets containing 15% or 30% protein with fish meal, soybean meal, yabby meal and wheat products forming the basis of the diets. C albidus grew the fastest and utilised the food the most effectively. Carcass composition was influenced by diet with the 30% protein diet resulting in an increase in carcass protein and ash and a decrease in carcass lipid and energy relative to the low protein diet. Carcass moisture and calcium were not affected by diet. The intermoult period (IP) was highly dependent on the premoult weight (W) but the mean moult increment (WI, as weight) was independent of the PM. The orbital carapace length (OCL) and the abdominal length (ABL) %moult increments generally declined with an increase in PM whereas the propus length (PL) %moult increment generally increased. The IP, WI, %OCL, %ABL, and %PL moult increments varied according to diet and to species. Elevated dietary protein caused a reduction to the IP (for similar sized animals) by 11 d and 7 d and an increase to the WI by 85% and 81% in C. albidus and C destructor respectively. Dietary induced morphological changes also occurred. Animals of a standard OCL (both species) had significantly larger abdomens when fed the higher protein diet. Growth on the best developed diet was compared to the growth obtained on a natural diet of freshwater zooplankton. Juveniles were reared individually for 12 weeks on the two diets. The MW, %WG and SGR were higher for the zooplankton diet. Carcass composition was influenced by diet and the zooplankton fed animals had a higher carcass %protein, %lipid, %ash and %fibre content and were more richly pigmented than animals fed pellets. The IP and the WI were highly dependent on the PM and varied according to diet; feeding with zooplankton reduced the IP by 1.2 days and increased the WI by 13.7% compared to pellets. Nutrient digestibility was determined for the pelleted diets evaluated in the growth trials. Protein digestibility (PD) and dry matter digestibility (DMD), using chromic oxide (Cr2O3) as an exogenous marker, were high for all diets, at around 93% and 83% respectively. Ash digestibility varied considerably from 17% to 73% for the snail and yabby meal diets respectively. Crude fibre digestibility was around 50% and probably indicates cellulase activity. Alternative markers to Cr2O3 were evaluated. Ash was considered to be the most suitable alternative to Cr2O3, providing a reasonable, albeit lower, estimate of nutrient digestibility. Cr2O3 and ash were preferentially excreted whereas fibre was retained in the digestive system for a longer period, consequently, the collection of a particular fraction of the deposited faeces (late or early) substantially affected the digestibility coefficients. In earthen-based environments, animals fed the best developed diet were compared to animals cultured using a forage crop of clover (Trifolium repens). Three supplementary feeding strategies representing varying levels of management intensity were evaluated in a series of trials conducted in ponds and pond microcosms. Growth on pellets consistently exceeded that obtained with the forage crop, with final MW being 67-159% higher than that using clover and appeared to be the result of direct pellet consumption and from a pellet fertiliser effect (on the sediment). Within-pond DMD and PD were high and similar for each treatment (DMD = 51-58%; PD = 89-92%). In the control pond, DMD and PD increased with each successive flood. The faecal egestion rate (PER) decreased with each successive flood in all ponds, and is negatively related to animal weight and to foregut fullness (FF) according to power curves. FF was consistently lowest in the control pond. Mean FF was 48.5%, 62.3%, and 26.7% for the pellet, crop and control ponds respectively. FF increased to the third flood in each pond. The foregut protein content was high in all samples and the mean values were 33.9%, 32.7% and 35.6% for the pellet, crop and control ponds respectively. Foregut ash was highly variable within each pond and is inversely related to the foregut protein content. In the control and pellet ponds the highest foregut ash content occurred during flood 1. The culture system (aquaria or pond) strongly influenced the composition of the foregut content. The foregut of animals fed the manufactured diet (B2) in ponds contained approximately 176% more ash and 5% more protein than the foregut of animals fed in bare-bottom tanks. The FF of the tank fed animals was approximately 45% higher than the FF of pond fed animals after a similar feeding period. Base-line yields for extensive production systems appeared to be around 400kg ha-1. The supplementary addition of T. repens produced yields of approximately 635kg ha-1 (in ponds) to around 1086kg ha-1 (in tanks). The sequential addition of cut-clover to tanks stimulated growth to levels approaching those achieved on pellets. Yabbies stocked into ponds at 15-20 m-2 with a mean weight of 2.67g and fed a 30% protein pelleted diet for 100 d, resulted in a yield of approximately 1117kg ha-1, but only 2% of the population were above a marketable size of 50g. The feed utilisation indices were better for animals reared on pellets in bare-bottom tanks than in earthen environments, indicating some degree of pellet wastage when natural feeds are simultaneously present. High apparent food conversion ratios and low protein efficiency ratios occurred when the forage crop was provided. A considerable quantity of the dry matter and protein content of the forage crop was either inefficiently utilised or directed into other production pathways. Sowing a forage crop into pond microcosms to which a pelleted diet was also provided, did not enhance growth performance. Pelleted feed inputs at a rate of approximately 129g m-2 to 198g m-2 (dry matter) and 38g -2 to 64g m-2 (protein) over 70-100 d resulted in acceptable growth and feed utilisation indices for animals reared in ponds and pond microcosms. Forage crop inputs of approximately 533g m-2 to 680g m-2 (as dry matter) or 84g m-2 to 177g m-2 (as protein) over a 70-100 d period produced reasonable growth rates but poor feed utilisation indices. Low inputs of dry matter (from 113-296g m-2) and protein (from 24-54g m-2) from clover were sufficient to maintain high growth rates in pond microcosms for around 28 d. In ponds, a very low level of 21g m-2 (dry matter) and 4.3g m-2 (protein) was sufficient for around 3 weeks. Forage depletion appeared to occur beyond week 3-4 and was probably a major growth limiting factor. The mean hepatosomatic index (HSI) was 9.44, 7.68, and 6.79 for the pellet, crop, and control ponds respectively. The relationship between hepatopancreas weight and overall animal weight was significantly different between treatments. The hepatopancreas of pellet-fed animals had the highest %lipid and lowest %ash, %protein, %carbohydrate and %moisture content. In terms of absolute quantities, the only major difference in hepatopancreas composition between treatments occurred for lipid and dry matter content. The hepatopancreas of the pellet-fed animals was a cream/cream-yellow colour and was very fragile, whereas in the other ponds it was a more ‘natural’ bright yellow colour and was structurally more robust. C. destructor has a capacious foregut, being approximately 5 times the volume of similar sized Penaeids. The foregut volume (V, ml) of the yabby is related to animal weight (W, g) according to V = 0.048 W0.9543. Animals that were starved for 96 h and then fed diet B2 were almost completely foil after 30 min. The ‘apparent enzymatic response’ of animals fed various natural and artificial diets in tanks was evaluated. Nutrient processing time and the enzymatic response following ingestion appeared to be regulated by the chemical and physical properties of the diet. For the natural feeds, foregut protein was 1.2% higher (for zooplankton) and up to 300% higher (for detritus) than dietary protein, whereas ash was 7.5% higher (zooplankton) and 46-63% lower (detritus) than dietary ash. For animals fed diet B2 after 48 h without food, FF was approximately half that of 96 h starved animals after a similar feeding period but foregut protein and ash contents were similar. Finally, the physiological and morphological attributes elucidated in this study are discussed with reference to the ecology of the yabby. High growth rates, excellent feed utilisation indices and high digestibility coefficients for a wide range of diet-types illustrate nutritional flexibility. A capacious foregut, a large hepatopancreas with a high energy storage capacity, the ability to partition and preferentially excrete the low nutrient value inorganic component of the diet, the capacity to alter body form, nutrient processing time and enzymatic secretions in relation to diet-type, and modified behaviour according to feed availability also demonstrate plasticity/adaptability/flexibility. The combined effect of these important characteristics ensures survival in environments that may be adverse and highly variable in terms of nutrient availability. Collectively the morphological and digestive traits elucidated in this study reflect the generalist-type nature of C destructor and indicate that a polytrophic classification still seems appropriate. Several priority areas for further nutrition research are identified and recommendations are made regarding the best-practices to use in the commercial culture of the yabby. Of paramount importance is the further clarification of the nutritional requirements and feeding preferences of animals in various phases of development.

Recent advances of metal binding protein lactoferrin as an anti-microbial agent

Lactoferrin (Lf) is present in milk and gland secretions and serve as an antimicrobial function. Insufficient amounts of Lf in some secretions also appear to correlate with certain health problems. Protection against gastroenteritis is the most likely biologically relevant activity of lactoferrin. Multiple in vitro and animal studies have shown a protective effect of lactoferrin on infections with enteric microorganisms, including rotavirus, Giardia, Shigella, Salmonella and the diarrheagenic Escherichia coli. Lactoferrin has two major effects on enteric pathogens: it inhibits growth and it impairs function of surface expressed virulence factors thereby decreasing their ability to adhere or to invade mammalian cells. Lf also inhibits several species of fungi and certain parasites. This review covers the role of Lf in clearing the parasitic infections. The mechanism by which lactoferrin inhibits some parasites may be via stimulation of the process of phagocytosis, whereby immune cells engulf and digest foreign organisms. Trichomonas vaginalis is a protozoan responsible for the number one, non-viral sexually transmitted disease. In this review, we also discussed the role of Lf in cervical infections.

Oxidised mannan as a novel adjuvant inducing mucosal IgA production.

Mannan, oxidatively coupled to recombinant protein antigens, has here been tested as a possible adjuvant for the production of antibody on the mucosa. Given intranasally, but not intraperitoneally, mannan markedly enhanced the production of IgA, IgG1 and IgG2a in the serum, and IgA locally in the lung and at remote mucosal sites, including tears, vaginal and salivary secretions. Oxidative coupling was critical to its action, since neither mannan simply mixed with protein nor mannan–protein conjugates which had been reduced by treatment with sodium borohydride, acted as adjuvants. Oxidatively coupled mannan was compared with the widely studied mucosal adjuvant, cholera toxin (CT). The use of oxidised mannan as an adjuvant induced better responses than CT judged by the induction of IgA in serum, vaginal washings and saliva. Thus, oxidised mannan, which is non-toxic and can be administered without injection, is a suitable adjuvant coupled with protective antigens for vaccinating against a number of infections that occur via the mucous membranes.

Spermatogenesis in the blue swimming crab, Portunus pelagicus, and evidence for histones in mature sperm nuclei

Spermatogenesis in the blue swimming crab, Portunus pelagicus, is described by light and electron microscopy. The testis is composed of anterior (AT) and posterior (PT) lobes, that are partitioned into lobules by connective tissue trabecula, and further divided into zones (germinal, transformation and evacuation), each with various stages of cellular differentiation. The vas deferens is classified into three distinct regions: anterior (AVD), median (MVD), and posterior (PVD), on the presence of spermatophores and two secretions, termed substance I and II. Based on the degree and patterns of heterochromatin, spermatogenesis is classified into 13 stages: two spermatogonia (SgA and SgB), six primary spermatocytes (leptotene, zygotene, pachytene, diplotene, diakinesis, and metaphase), a secondary spermatocyte (SSc), three spermatids (St 1–3), and a mature spermatozoon. Spermatid stages are differentiated by chromatin decondensation and the formation of an acrosomal complex, which is unique to brachyurans. Mature spermatozoa are aflagellated, and have a nuclear projection and a spherical acrosome. AUT-PAGE and Western blots show that, during chromatin decondensation, there is a reduction of most histones, with only small amounts of H2B and H3 remaining in mature spermatozoa.

Source of Bet v 1 loaded inhalable particles from birch revealed

Allergenic proteins present in pollen grains, when inhaled, interact with the airways to cause an attack of asthma in susceptible humans. In one system, grass pollen grains rupture osmotically in rainfall, releasing allergen-containing inhalable particles into the atmosphere. In contrast, birch tree pollen grains do not rupture under these conditions, yet the major allergen, Bet v 1, has been detected in the atmosphere in inhalable particles of unknown origin. It is possible that Bet v 1 may diffuse from intact settled pollen grains and the allergenic material may again become airborne, interacting with settled fine particles from other sources prior to resuspension. This study investigates the mechanism for the release of birch pollen allergen-containing inhalable particles from pollen grains. We propose the hypothesis that (1) airborne birch pollen grains settle on nearby leaf surfaces; (2) then, following light rainfall, the grains germinate and, (3) later, pollen tubes burst, releasing inhalable particles carrying Bet v 1 into the atmospheric aerosol.   We used microscopic analyses of pollen behaviour following anther opening, a Burkard volumetric trap for pollen counts and a high volume air sampler with a two-stage cascade impactor for quantitative immunochemical analyses of Bet v 1. On dry days of high birch pollen count (48 grains/m3, 1.5 ng/m3 of Bet v 1), we found that the surfaces of birch leaves became coated with pollen. This ”pollen rain” is a source of secondary emission of allergens into the atmosphere. We observed that following light rainfall (<1 mm per day), about 80% of the birch pollen grains germinated, producing pollen tubes, especially in the sticky surface secretions of leaf glands. These pollen tubes may grow up to 300 μm in length prior to rupturing, each releasing about 400 starch granules coated with allergen molecules that may, after drying, be dispersed into the aerosol. On these days following light rainfall, the highest atmospheric levels of Bet v 1 (1.18 ng/m3) are associated with inhalable particles. Following heavy rainfall, both pollen and inhalable particles are washed from the atmosphere. Immunoprinting studies show that Bet v 1 is associated with starch granules rather than the smaller orbicules. Bet v 1 is present in the atmosphere in large particles, i.e. in particular pollen grains and in inhalable particles, i.e. in particular starch granules.

Immunomodulatory lactoferrin in the regulation of apoptosis modulatory proteins in cancer

Lactoferrin (Lf), an iron binding ~80 kDa glycoprotein is a well characterized multifunctional protein found to be present in mammalian milk and in most exocrine secretions. Besides Lf’s important physiological roles in the process of iron homeostasis, iron transportation and sequestration, it is well known for its properties such as anti-microbial, antiviral anti-inflammatory and immunomodulatory functions. In the recent decade, Lf has gained significant attention for its future potential use as a safer natural food (bovine milk) derived anti-cancer therapeutic. With regards to Lf’s chemopreventive effects in targeting carcinogenesis, both animal and human studies have widely reported its immunomodulatory properties to play a significant role. The deregulation of apoptosis (programmed cell death) mechanisms has not only major implications for the development of uncontrolled tumour growth but evasion of apoptosis is also an important factor affecting drug resistance and radioresistance in cancer. With the exception of few studies, the molecular basis by Lf treatment remains unclear. In this review, by addressing the main features of Lf’s structure and function we discuss the recent developments in delineating the therapeutic mechanisms of Lf and its effects on the proteins and receptors modulating apoptosis.

The effect of plant tissue and vaccine formulation on the oral immunogenicity of a model plant-made antigen in sheep

Antigen-specific antibody responses against a model antigen (the B subunit of the heat labile toxin of enterotoxigenic Escherichia coli, LTB) were studied in sheep following oral immunisation with plant-made and delivered vaccines. Delivery from a root-based vehicle resulted in antigen-specific immune responses in mucosal secretions of the abomasum and small intestine and mesenteric lymph nodes. Immune responses from the corresponding leaf-based vaccine were more robust and included stimulation of antigen-specific antibodies in mucosal secretions of the abomasum. These findings suggest that oral delivery of a plant bioencapsulated antigen can survive passage through the rumen to elicit mucosal and systemic immune responses in sheep. Moreover, the plant tissue used as the vaccine delivery vehicle affects the magnitude of these responses.

Analgesia em pós-operatório de toratomias : estudo prospectivo e randomizado

Introdução: A dor é um importante fator de incremento da morbidade e mortalidade em pacientes submetidos a procedimentos cirúrgicos que incluem toracotomias. Diversos fatores contribuem para que esses pacientes apresentem um alto grau de dor no pós-operatório, entre os quais a secção da pele, músculos e pleura, retração dos músculos e ligamentos pelo afastador de Finochietto, irritação da pleura e nervos intercostais pelos drenos tubulares torácicos e fraturas ocasionais dos arcos costais. O aumento das taxas de morbidade e mortalidade é dado principalmente à respiração superficial decorrente da pouca mobilidade da parede torácica e conseqüente à dor e pela perda da efetividade do principal mecanismo de eliminação de secreções da árvore traqueobrônquica (tosse), resultando em atelectasias, inadequado gradiente ventilação / perfusão, hipoxemia e pneumonia. Uma vez caracterizada a necessidade de atenuação da dor como fator primordial na melhora dos índices de morbidade e mortalidade no período pós-operatório de cirurgia torácica, torna-se imperiosa uma análise das terapêuticas disponíveis na atualidade para tanto. Objetivos: Avaliar a utilização de três diferentes métodos de analgesia: 1. bloqueio peridural com morfina (BPM); 2. morfina parenteral (MP); e 3. bloqueio intercostal extrapleural contínuo com lidocaína” (BIC), em pacientes submetidos a procedimentos que incluíram toracotomias em sua execução, além de analisar o custo financeiro desses métodos. Materiais e métodos: Trata-se de um estudo prospectivo, randomizado, no qual foram analisados 79 pacientes, submetidos a toracotomias, subdivididos de forma aleatória em três grupos, de acordo com a modalidade terapêutica instituída: 25 pacientes no grupo BIC, 29 pacientes no grupo BPM e 25 pacientes no grupo MP. Cada paciente foi observado e analisado por profissionais de enfermagem previamente treinados. As variáveis analisadas foram a dor e a sedação. (quantificadas através de escores e analisadas através do método de Kruskal-Wallis com correção pelo teste de Dunn), além do custo financeiro de cada método e da necessidade de administração de opióides adicionais. Resultados: As variáveis dor e sedação foram obtidas através das seguintes medianas, respectivamente: grupos BIC (2,5 e 0); BPM (4 e 0) e MP (3,5 e 0). O custo financeiro foi de US$ 78,69 para o grupo BIC; US$ 28,61 para o grupo BPM e US$ 11,98 para o grupo MP. A necessidade adicional de opióide foi de 4,2 mg/dia para o grupo BIC; 5,7 mg/dia para o grupo BPM e 10,7 mg/dia para o grupo MP. Conclusões: A intensidade da dor foi significativamente menor no grupo BIC, quando comparado ao grupo MP. Não foram identificadas diferenças significativas de intensidade da dor quando comparados os grupos BIC versus BPM e BPM versus MP. A intensidade de sedação foi significativamente maior no grupo MP quando comparado aos grupos BIC e BPM. Não foram evidenciadas diferenças significativas quanto à sedação entre os grupos BIC e BPM. O custo financeiro do grupo MP foi sensivelmente menor quando comparado aos grupos BIC e BPM. A necessidade adicional de morfina foi significativamente maior no grupo MP, quando comparados aos grupos BIC e BPM.

Estudo da resposta inflamatória em lactentes com sibilância : análise de IL-10 e celularidade no aspirado nasofaríngeo

Episódios de sibilância secundários a infecções respiratórias virais são comuns nos primeiros anos de vida. Contudo, sua patogênese e relação com o posterior surgimento de asma permanecem ainda pouco esclarecidos. Com o objetivo de analisar a resposta celular e da IL-10 em lactentes com sibilância, foram analisadas amostras de aspirado nasofaríngeo de 71 lactentes. Os pacientes foram classificados em três grupos: primeiro episódio de sibilância (n=36), sibilância recorrente (n=18) e infecção de vias aéreas superiores (n=17). O exame citológico da secreção nasofaríngea demonstrou uma predominância de neutrófilos em todos os grupos. Não foi evidenciada a presença de eosinófilos na secreção nasofaríngea de nenhum paciente, exceto em um caso do grupo de sibilância recorrente, cujo percentual dessas células foi de 1%. Foram encontrados níveis de IL-10 significativamente aumentados no aspirado nasofaríngeo do grupo com primeiro episódio de sibilância, quando comparados ao grupo de infecção de vias aéreas superiores (p=0,017). Não foi encontrada correlação significativa entre os níveis de IL-10 em secreção nasofaríngea e gravidade do episódio de sibilância. Conclui-se que os neutrófilos são as células que predominam na resposta inflamatória em lactentes com sibilância secundária à infecção respiratória viral e que a IL-10 pode ser uma citocina com participação importante na predisposição à doença obstrutiva brônquica do lactente.

Incidência de infecção por Legionella pneumophila em pacientes que internaram no HCPA com pneumonia adquirida na comunidade

Introdução: O diagnóstico microbiológico da infecção por Legionella é complexo, pois a bactéria não é visualizada à coloração de Gram no escarro, e sua cultura não é realizada na maioria dos laboratórios clínicos. A imunofluorescência direta nas secreções respiratórias tem baixa sensibilidade, em torno de 40% e a técnica da “PCR” não é ainda recomendada para o diagnóstico clínico (CDC, 1997). A detecção de anticorpos no soro é a técnica mais utilizada, e o critério definitivo é a soroconversão para no mínimo 1:128, cuja sensibilidade é de 70 a 80% (Edelstein, 1993). Como critérios diagnósticos de possível pneumonia por Legionella, eram utilizados: título único de anticorpos a L pneumophila positivo na diluição 1:256, em paciente com quadro clínico compatível (CDC, 1990) e o achado de antígeno a Legionella na urina (WHO, 1990). Nos últimos anos, porém, com o uso crescente do teste de antigenúria, foram detectados casos de pneumonia por Legionella, que não eram diagnosticados por cultura ou sorologia, tornando-o método diagnóstico de certeza para o diagnóstico de pneumonia por Legionella (CDC, 1997). Por sua fácil execução, resultado imediato, e alta sensibilidade - de 86% a 98% (Kashuba & Ballow, 1986; Harrison & Doshi, 2001), tem sido recomendado para o diagnóstico das PAC que necessitam internação hospitalar (Mulazimoglu & Yu, 2001; Gupta et al., 2001; Marrie, 2001), especialmente em UTI (ATS, 2001). Vários estudos documentaram baixo valor preditivo positivo do título único positivo de 1:256, tornando-o sem valor para o diagnóstico da pneumonia por Legionella, exceto, talvez, em surtos (Plouffe et al., 1995). Outros detectaram alta prevalência de anticorpos positivos na diluição 1:256 na população, em pessoas normais (Wilkinson et al., 1983; Nichol et al., 1991). A partir de 1996, o CDC de Atlanta recomendou que não seja mais utilizado o critério de caso provável de infecção por Legionella pneumophila por título único de fase convalescente ≥1:256, por falta de especificidade(CDC, 1997). A pneumonia por Legionella é raramente diagnosticada, e sua incidência é subestimada. Em estudos de PAC, a incidência da pneumonia por Legionella nos EUA, Europa, Israel e Austrália, foi estimada entre 1% a 16% (Muder & Yu, 2000). Nos EUA, foi estimado que cerca de 8 000 a 23 000 casos de PAC por Legionella ocorrem anualmente, em pacientes que requerem hospitalização (Marston et al., 1994 e 1977). No Brasil, a incidência de PAC causadas por Legionella em pacientes hospitalizados é tema de investigação pertinente, ainda não relatado na literatura. Objetivo: detectar a incidência de pneumonias causadas por Legionella pneumophila sorogrupos 1 a 6, em pacientes que internaram no Hospital de Clínicas de Porto Alegre por PAC, por um ano. Material e Métodos: o delineamento escolhido foi um estudo de coorte (de incidência), constituída por casos consecutivos de pneumonia adquirida na comunidade que internaram no HCPA de 19 de julho de 2000 a 18 de julho de 2001. Para a identificação dos casos, foram examinados diariamente o registro computadorizado das internações hospitalares, exceto as internações da pediatria e da obstetrícia, sendo selecionados todos os pacientes internados com o diagnóstico de pneumonia e de insuficiência respiratória aguda. Foram excluídos aqueles com menos de 18 anos ou mais de 80 anos; os procedentes de instituições, HIV-positivos, gestantes, pacientes restritos ao leito; e portadores de doença estrutural pulmonar ou traqueostomias. Foram excluídos os pacientes que tivessem tido alta hospitalar nos últimos 15 dias, e aqueles já incluídos no decorrer do estudo. Os pacientes selecionados foram examinados por um pesquisador, e incluídos para estudo se apresentassem infiltrado ao RX de tórax compatível com pneumonia, associado a pelo menos um dos sintomas respiratórios maiores (temperatura axilar > 37,8ºC, tosse ou escarro; ou dois sintomas menores (pleurisia, dispnéia, alteração do estado mental, sinais de consolidação à ausculta pulmonar, mais de 12 000 leucócitos/mm3). O estudo foi previamente aprovado pela Comissão de Ética em Pesquisa do HCPA. Os pacientes eram entrevistados por um pesquisador, dando seu consentimento por escrito, e então seus dados clínicos e laboratoriais eram registrados em protocolo individual. Não houve interferência do pesquisador, durante a internação, exceto pela coleta de urina e de sangue para exame laboratoriais específicos da pesquisa. Os pacientes eram agendados, no ambulatório de pesquisa, num prazo de 4 a 12 semanas após sua inclusão no estudo, quando realizavam nova coleta de sangue, RX de tórax de controle, e outros exames que se fizessem necessários para esclarecimento diagnóstico.Todos os pacientes foram acompanhados por 1 ano, após sua inclusão no estudo.Foram utilizadas a técnica de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos das classes IgG, IgM e IgA a Legionella pneumophila sorogrupos 1 a 6 no soro, em duas amostras, colhidas, respectivamente, na 1ª semana de internação e depois de 4 a 12 semanas; e a técnica imunológica por teste ELISA para a detecção do antígeno de Legionella pneumophila sorogrupo 1 na urina, colhida na primeira semana de internação. As urinas eram armazenadas, imediatamente após sua coleta, em freezer a –70ºC, e depois descongeladas e processadas em grupos de cerca de 20 amostras. A imunofluorescência foi feita no laboratório de doenças Infecciosas da Universidade de Louisville (KY, EUA), em amostras de soro da fase aguda e convalescente, a partir da diluição 1:8; e a detecção do antígeno de Legionella pneumophila sorogrupo 1, nas amostras de urina, foi realizada no laboratório de pesquisa do HCPA, pelos investigadores, utilizando um kit comercial de teste ELISA fabricado por Binax (Binax Legionella Urinary Enzyme Assay, Raritan, EUA). As urinas positivas eram recongeladas novamente, para serem enviadas para confirmação no mesmo laboratório americano, ao fim do estudo. Foram adotados como critérios definitivos de infecção por Legionella pneumophila sorogrupos 1 a 6, a soroconversão (elevação de 4 vezes no título de anticorpos séricos entre o soro da fase aguda e da fase convalescente para no mínimo 1:128); ou o achado de antígeno de L pneumophila sorogrupo 1 na urina não concentrada, numa razão superior a 3, conforme instruções do fabricante e da literatura.Os pacientes foram classificados, de acordo com suas características clínicas, em 1º) portadores de doenças crônicas (doenças pulmonares, cardíacas, diabete mellitus, hepatopatias e insuficiência renal); 2º) portadores de doenças subjacentes com imunossupressão; 3º) pacientes hígidos ou com outras doenças que não determinassem insuficiência orgânica. Imunossupressão foi definida como esplenectomia, ser portador de neoplasia hematológica, portador de doença auto-imune, ou de transplante; ou uso de medicação imunossupressora nas 4 semanas anteriores ao diagnóstico (Yu et al., 2002b); ou uso de prednisolona 10 mg/dia ou equivalente nos últimos 3 meses (Lim et al., 2001). As características clínicas e laboratoriais dos pacientes que evoluíram ao óbito por pneumonia foram comparados àquelas dos pacientes que obtiveram cura. Para a análise das variáveis categóricas, utilizou-se o teste qui-quadrado de Pearson ou teste exato de Fisher. Para as variáveis numéricas contínuas, utilizou-se o teste “t“ de Student. Um valor de p< 0,05 foi considerado como resultado estatisticamente significativo (programas SPSS, versão 10). Foi calculada a freqüência de mortes por pneumonia na população estudada, adotando-se a alta hospitalar como critério de cura. Foi calculada a incidência cumulativa para pneumonia por Legionella pneumophila sorogrupos 1 a 6, em um hospital geral, no período de 1 ano. Resultados: durante um ano de estudo foram examinados 645 registros de internação, nos quais constavam, como motivo de baixa hospitalar, o diagnóstico de pneumonia ou de insuficiência respiratória aguda; a maioria desses diagnósticos iniciais não foram confirmados. Desses 645 pacientes, foram incluídos no estudo 82 pacientes, nos quais os critérios clínicos ou radiológicos de pneumonia foram confirmados pelos pesquisadores. Durante o acompanhamento desses pacientes, porém, foram excluídos 23 pacientes por apresentarem outras patologias que mimetizavam pneumonia: DPOC agudizado (5), insuficiência cardíaca (3), tuberculose pulmonar (2), colagenose (1), fibrose pulmonar idiopática (1), edema pulmonar em paciente com cirrose (1), somente infecçâo respiratória em paciente com sequelas pulmonares (4); ou por apresentarem critérios de exclusão: bronquiectasias (4), HIV positivo (1), pneumatocele prévia (1). Ao final, foram estudados 59 pacientes com pneumonia adquirida na comunidade, sendo 20 do sexo feminino e 39 do sexo masculino, com idade entre 24 e 80 anos (média de 57,6 anos e desvio padrão de ±10,6). Tivemos 36 pacientes com doenças subjacentes classificadas como “doenças crônicas”, dos quais 18 pacientes apresentavam mais de uma co-morbidade, por ordem de prevalência: doenças pulmonares, cardíacas, diabete mellitus, hepatopatias e insuficiência renal; neoplasias ocorreram em 9 pacientes, sendo sólidas em 7 pacientes e hematológicas em 2. Dos 59 pacientes, 61% eram tabagistas e 16,9%, alcoolistas. Do total, 10 pacientes apresentavam imunossupressão. Dos demais 13 pacientes, somente um era previamente hígido, enquanto os outros apresentavam tabagismo, sinusite, anemia, HAS, gota, ou arterite de Takayasu. A apresentação radiológica inicial foi broncopneumonia em 59,3% dos casos; pneumonia alveolar ocorreu em 23,7% dos casos, enquanto ambos padrões ocorreram em 15,2% dos pacientes. Pneumonia intersticial ocorreu em somente um caso, enquanto broncopneumonia obstrutiva ocorreu em 5 pacientes (8,5%). Derrame pleural ocorreu em 22% dos casos, e em 21 pacientes (35%) houve comprometimento de mais de um lobo ao RX de tórax. Foram usados beta-lactâmicos para o tratamento da maioria dos pacientes (72,9%9). A segunda classe de antibióticos mais usados foi a das fluoroquinolonas respiratórias, que foram receitadas para 23 pacientes (39,0%), e em 3º lugar, os macrolídeos, usados por 11 pacientes (18,6%). Apenas 16 pacientes não usaram beta-lactâmicos, em sua maioria recebendo quinolonas ou macrolídeos. Dos 43 pacientes que usaram beta-lactâmicos, 25 não usaram nem macrolídeos, nem quinolonas. Em 13 pacientes as fluoroquinolonas respiratórias foram as únicas drogas usadas para o tratamento da pneumonia. Do total, 8 pacientes foram a óbito por pneumonia; em outros 3 pacientes, o óbito foi atribuído a neoplasia em estágio avançado. Dos 48 pacientes que obtiveram cura, 33 (68,7%) estavam vivos após 12 meses. Os resultados da comparação realizada evidenciaram tendência a maior mortalidade no sexo masculino e em pacientes com imunossupressão, porém essa associação não alcançou significância estatística. Os pacientes que usaram somente beta-lactâmicos não apresentaram maior mortalidade do que os pacientes que usaram beta-lactâmicos associados a outras classes de antibióticos ou somente outras classes de antibióticos. Examinando-se os pacientes que utiizaram macrolídeos ou quinolonas em seu regime de tratamento, isoladamente ou combinados a outros antibióticos, observou-se que também não houve diferença dos outros pacientes, quanto à mortalidade. Os pacientes com padrão radiológico de pneumonia alveolar tiveram maior mortalidade, e essa diferença apresentou uma significância limítrofe (p= 0,05). Nossa mortalidade (11,9%) foi similar à de Fang et al. (1990), em estudo clássico de 1991 (13,7%); foi também similar à média de mortalidade das PAC internadas não em UTI (12%), relatada pela ATS, no seu último consenso para o tratamento empírico das PAC (ATS, 2001). Foram detectados 3 pacientes com pneumonia por Legionella pneumophila sorogrupo 1 na população estudada: 2 foram diagnosticados por soroconversão e por antigenúria positiva, e o 3º foi diagnosticado somente pelo critério de antigenúria positiva, tendo sorologia negativa, como alguns autores (McWhinney et al., 2000). Dois pacientes com PAC por Legionella não responderam ao tratamento inicial com beta-lactâmicos, obtendo cura com levofloxacina; o 3º paciente foi tratado somente com betalactâmicos, obtendo cura. Conclusões: A incidência anual de PAC por Legionella pneumophila sorogrupos 1 a 6, no HCPA, foi de 5,1%, que representa a incidência anual de PAC por Legionella pneumophila sorogrupos 1 a 6 em um hospital geral universitário. Comentários e Perspectivas: Há necessidade de se empregar métodos diagnósticos específicos para o diagnóstico das pneumonias por Legionella em nosso meio, como a cultura, a sorologia com detecção de todas as classes de anticorpos, e a detecção do antígeno urinário, pois somente com o uso simultâneo de técnicas complementares pode-se detectar a incidência real de pneumonias causadas tanto por Legionella pneumophila, como por outras espécies. A detecção do antígeno de Legionella na urina é o teste diagnóstico de maior rendimento, sendo recomendado seu uso em todas as PAC que necessitarem internação hospitalar (Mulazimoglu & Yu, 2001; Gupta et al., 2001); em todos os pacientes com PAC que apresentarem fatores de risco potenciais para legionelose (Marrie, 2001); e para o diagnóstico etiológico das pneumonias graves (ATS, 2001). Seu uso é indicado, com unanimidade na literatura, para a pesquisa de legionelose nosocomial e de surtos de legionelose na comunidade.

Abscesso pulmonar de aspiração : dados diagnósticos e resultados terapêuticos em 241 casos

O abscesso de pulmão continua sendo hoje, em plena era dos antibióticos, um importante problema médico. O presente trabalho se propõe mostrar aspectos diagnósticos e terapêuticos da doença em uma série de pacientes coletada nos últimos 34 anos em um hospital universitário especializado em doenças pulmonares. No período de 1968 a 2002 foram reunidos e estudados 241 casos de abscesso pulmonar de aspiração - 199 em homens e 42 em mulheres, com média de idade de 41,3 anos. Em 69,0% dos pacientes esteve presente a ingestão de álcool e em 64,0% o hábito tabágico. Tosse, expectoração, febre e comprometimento do estado geral foram os achados clínicos mais freqüentes, encontrados na quase totalidade dos casos; 62,5% tinham dor torácica e 30,0% hipocratismo digital. Verificaram-se dentes em mau estado de conservação em 81,7 % dos pacientes, episódio de perda de consciência em 78,0% e presença de odor fétido em 66,0%. Em 85,5% das vezes as lesões localizaram-se em segmento posterior de lobo superior ou segmento superior de lobo inferior, 97,1% delas unilaterais, ocorrendo com igual freqüência tanto no pulmão direito como no esquerdo. A maioria das lesões (66,0%) mediram entre 4,0 e 8,0 cm de diâmetro. Em 25 pacientes (10,4%) houve a associação de empiema pleural. Flora mista, indicativa da presença de germes anaeróbios, foi identificada em secreções broncopulmonares ou pleurais em 172 pacientes (71,4 %). Estreptococos e Gram negativos aeróbios foram também algumas vezes encontrados. Todos os pacientes foram inicialmente tratados com antibióticos (penicilina em 78,0% das vezes) e submetidos a sessões de drenagem postural. Em 51 (21,2%) acabou sendo necessário algum procedimento cirúrgico (24 drenagens de empiema, 21 ressecções pulmonares e 6 pneumostomias). Cura foi obtida em 231 pacientes (95,8%) e 10 (4,2%) foram ao óbito, estes em geral com grandes abscessos, três dos quais também com empiema.

Spermathecae of the mangrove crab Ucides cordatus: a histological and histochemical view

Ucides cordatus is the most commercially, important mangrove crab in Brazil. In spite of its economic importance, there are few studies of its reproduction, in particular the female reproductive system. The present study describes the histology and histochemistry of the spermathecae of U. cordatus. Adult females were can lit monthly from July 2004 through June 2005, at Iguape, State of São Paulo. The crabs were anaesthetized, and their spermathecae removed and fixed in Davidson's fluid, following the histological routine for paraffin. The slides were stained with HE, xylidine Ponceau, PAS, alcian blue (pH 1.0 and 2.5), Sudan black B and picrosirius-haematoxylin. Histologically, the spermathecae possesses a capsule of conjunctive tissue, rich in collalgen fibres, which surrounds the secretory columnar epithelium. In the lumen, individual sperm packets are not observed; the spermatophores are intermixed with the seminal fluid and secretions of the spermathecae itself. A large proportion of the free spermatozoids and spermatophores are arranged in homogeneous masses in the proximal part of the spermathecae. The secretion produced by the columnar epithelium appears to promote the movement of the gametes to the fertilization chamber, in a ventral position, allowing fertilization of the oocytes. Histochemically, the secretion produced by the columnar epithelium was strongly positive for neutral polysaccharides, positive for acid polysaccharides, and weakly positive for proteins and lipids. Tills secretion forms a glycoprotein matrix which is associated with maintenance of the spermatophores, which can remain stored for long periods.

Infecção por C. psittaci: uma revisão com ênfase em psitacídeos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Systemic and local antibodies induced by an experimental inactivated vaccine against bovine herpesvirus type 1

Uma vacina experimental inativada contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) foi produzida com o objetivo de se avaliar a resposta imune humoral local e sistêmica contra o BoHV-1, em 12 novilhas soronegativas, após a vacinação e a revacinação. Os soros foram submetidos à prova de vírus-neutralização para quantificação do título de anticorpos neutralizantes e a um ELISA para detecção de IgG1 e IgG2. Os swabs nasais também foram submetidos ao ELISA para detecção de IgG1 e IgG2 na secreção nasal. Os resultados demonstraram que títulos de anticorpos neutralizantes foram induzidos após a revacinação, em níveis moderados a altos, permanecendo em níveis significativos no soro sanguíneo e na secreção nasal até o dia 114 pós-vacinação. O IgG2 foi o isótipo predominante na maior parte do período pós-vacinação, tanto na secreção nasal, como no compartimento sistêmico. A vacina experimental inativada contra o BoHV-1 estimulou níveis de anticorpos potencialmente protetores dos isótipos IgG1 e IgG2, tanto no compartimento sistêmico, como nas mucosas.