Antibody-targeted horseradish peroxidase associated with indole-3-acetic acid induces apoptosis in vitro in hematological malignancies

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Are poor responders patients at higher risk for producing aneuploid embryos in vitro?

Purpose To test the hypothesis that aged women with poor ovarian response express an increase on embryo chromosomal alterations when compared to aged women who presented normal response.Methods Couples undergoing intracytoplasmic sperm injection cycles with preimplantation genetic screening, were subdivided into two groups: Poor Responder group (n = 34), patients who produced a parts per thousand currency sign4 oocytes; and Normoresponder group (n = 50), patients who produced a parts per thousand yen5 oocytes. Groups were compared regarding cycles' outcomes and aneuploidy frequency.Results There were no significant differences between and groups regarding the fertilization rate (p = 0.6861), clinical pregnancy (p = 0.9208), implantation (p = 0.6863), miscarriage (p = 0.6788) and the percentage of aneuploid embryos (p = 0.270). Embryo transfer rate was significantly lower on poor responder group (p = 0.0128) and logistic regression confirmed the influence of poor response on the chance of embryo transfer (p = 0.016).Conclusions Aged females responding poorly to gonadotrophins are not at a higher risk for producing aneuploid embryos in vitro.

Variation of the antimutagenicity effects of water extracts of Agaricus blazei Murrill in vitro

Agaricus blazei Murill, popularly known as Sun Mushroom or Himematsutake, is native to Brazil. Nowadays, this mushroom has been target of great scientific interest due to its medical power and because it has shown antitumoral and immune modulatory properties. This work evaluated the mutagenic and antimutagenic potential from aqueous extracts prepared in different temperatures (4 degreesC, 25 degreesC and 60 degreesC) from the lineage AB 97/29 in two basidiocarp phases (young and sporulated) and from A. blazei commercialized in Londrina- PR - Brazil, named here as AB PR, and in Piedade- SP- Brazil, named as AB SP. Both micronucleus (MN) as comet assays were used. Chinese hamster lung V79 cells were treated in three antimutagenic experimental protocols: pre-, post- and simultaneous treatments, with the aqueous extracts of the A. blazei Murill and methyl methanesulfonate (MMS). The results suggested that under these circumstances of treatment, aqueous extracts of the A. blazei in both assays did not show any genotoxic potential. However, by the MN test, an antigenotoxic effect was shown against mutagenicity inducted by MMS for aqueous extracts at 60 degreesC of mushroom commercialized in Piedade- SP, in pre-, post- and simultaneous treatments and for AB PR only when used in pre-treatment. on the other hand, with comet assay, the results showed no protective effect in any case. The numbers indicated that different results can be get from A. blazei teas, and that not all of them seemed to be an efficient antimutagen against the induction of micronuclei by MMS. (C) 2003 Elsevier Ltd. All rights reserved.

The use of transmission electron microscopy and oocyte transfer to evaluate in vitro maturation of equine oocytes in different culture conditions

The current study evaluates the ability of equine oocytes matured in different conditions to undergo nuclear and cytoplasmic maturation.. After oocyte transfer, embryonic development was diagnosed at 1.5 and 90 days of gestation. For each group, immature oocytes obtained from slaughterhouse ovaries were matured in vitro (5 replicates). In experiment I, three different media were tested. HTF:BME, SOFaa, and TCM 199. In experiment 11, the HTF:BME was chosen as maturation medium containing pFSH, eFSH, or eFSH + eGH. Nuclear maturation was estimated after stripping the oocytes and staining with Hoechst 33342. The evaluation of cytoplasmic maturation was performed by transmission electron microscopy. For oocyte transfer, six non-cycling recipient mares were used, and 8 to 15 oocytes were transferred in each mare. In experiment I, the results showed no differences (P > .05) in nuclear maturation (MII) among experimental groups. The percentage of MII was 29.3 ( +/- 9.6), 23.4 ( +/- 8.4), and 13.5 ( +/- 12.4) for HTF:BME, SOF, and TCM, respectively. In experiment II, all media tested were efficient in inducing metaphase II. Also, no statistical differences (P > .05) were observed in percentages of nuclear maturation rates when porcine (37.1 +/- 22.4) or equine (25.8 +/- 8.2) FSH were used, or when eFSH + eGH was added to HTF:BME (29.4 +/- 12.3). The analysis of cytoplasmic morphology of oocytes cultured in TCM 199 and SOFaa showed signs of incomplete cytoplasmic maturation and premature cortical reaction. Meanwhile, oocytes cultured in HTF:BME medium presented cytoplasmic characteristics similar to those described by others for in vivo-matured oocytes. The addition of eFSH to the HTF:BME medium resulted in an improvement of cytoplasmic morphology. After oocyte transfer, two mares became pregnant, one from pFSH group and one from eFSH+eGH group. These results indicate that although in vitro matured equine oocytes are capable of fertilization and embryonic development, the percentage of competent oocytes is still low.

Diferenciação in vitro de células-tronco mesenquimais da medula óssea de cães em precursores osteogênicos

O objetivo principal da nossa pesquisa foi avaliar o potencial de diferenciação osteogênica de células-tronco mesenquimais (MSC) obtidas da medula óssea do cão. As MSC foram separadas pelo método Ficoll e cultivadas sob duas condições distintas: DMEM baixa glicose ou DMEM/F12, ambos contendo L-glutamina, 20% de SFB e antibióticos. Marcadores de MSC foram testados, confirmando células CD44+ e CD34- através da citometria de fluxo. Para a diferenciação osteogênica, as células foram submetidas a quatro diferentes condições: Grupo 1, as mesmas condições utilizadas para a cultura de células primárias com os meios DMEM baixa glicose suplementado; Grupo 2, as mesmas condições do Grupo 1, mais os indutores de diferenciação dexametasona, ácido ascórbico e b-glicerolfosfato; Grupo 3, células cultivadas com meios DMEM/F12 suplementado; e Grupo 4, nas mesmas condições que no Grupo 3, mais indutores de diferenciação de dexametasona, ácido ascórbico e b-glicerolfosfato. A diferenciação celular foi confirmada através da coloração com alizarin red e da imunomarcação com o anticorpo SP7/Osterix. Nós observamos através da coloração com alizarin red que o depósito de cálcio foi mais evidente nas células cultivadas em DMEM/F12. Além disso, usando a imunomarcação com o anticorpo SP/7Osterix obtivemos positividade em 1:6 células para o Meio DMEM/F12 comparada com 1:12 para o meio DMEM-baixa glicose. Com base nos nossos resultados concluímos que o meio DMEM/F12 é mais eficiente para a indução da diferenciação de células-tronco mesenquimais caninas em promotores osteogênicos. Este efeito provavelmente ocorre em decorrência da maior quantidade de glicose neste meio, bem como da presença de diversos aminoácidos.

Lipid content and apoptosis of in vitro-produced bovine embryos as determinants of susceptibility to vitrification

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

In vitro effect of low-level laser on odontoblast-like cells

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

The Efficacy of Laser Fluorescence to Detect in Vitro Demineralization and Remineralization of Smooth Enamel Surfaces

Objective: The purpose of this study was to evaluate the efficacy of the laser fluorescence (LF) device in detecting in vitro demineralization and remineralization of smooth surface caries-like lesions. Background Data: The early detection of smooth surface caries-like lesions is important to provide proper management of carious lesions, and allows monitoring of them over time. Also, some authors suggest that LF could be useful in monitoring the caries pathological process. Materials and Methods: Seventy-eight blocks of bovine teeth were obtained, and then submitted to artificial caries lesion induction and to a pH-cycling process. Superficial microhardness (SMH) and laser fluorescence analysis were performed at baseline, after induction of caries-like lesions, and after the pH-cycling regimen to promote remineralization. Results: Friedman's and multiple comparison tests were performed for all variables. SMH analysis showed significant differences (p < 0.05) between baseline (286.77 +/- 1.49 Vickers hardness number [VHN] units), before (38.48 +/- 0.85 VHN), and after remineralization (131.93 +/- 2.63 VHN). Baseline values for LF were extremely low (2.71 +/- 0.05), and a statistically significant difference was observed only after remineralization (3.61 +/- 0.08), as demonstrated by the increase in LF values. Conclusion: The LF device did not show efficacy for monitoring in vitro demineralization and remineralization of smooth enamel surfaces.

Estudo in vivo e in vitro com e sem termociclagem, da resistência ao cisalhamento de braquetes colados com fonte de luz halógena

OBJETIVO: avaliar a resistência de braquetes metálicos colados em dentes humanos com resina polimerizada com luz halógena por meio de ensaios mecânicos de cisalhamento. METODOLOGIA: para este estudo foram realizados ensaios in vivo com dinamômetro portátil digital e in vitro com máquina de ensaios mecânicos universal com e sem termociclagem, complementado pelo Índice de Adesivo Remanescente (IAR). Braquetes Edgewise Standard (Abzil) foram colados utilizando adesivo Transbond Plus Self Etching Primer (SEP) e Resina Transbond XT. Foram formados 3 grupos com 10 dentes em cada um deles. No GI os braquetes foram colados nos segundos pré-molares dos pacientes. Nos GII e GIII utilizaram-se primeiros pré-molares extraídos por motivos ortodônticos. Os ensaios mecânicos do GI foram realizados 24 horas após a polimerização diretamente na boca dos pacientes com dinamômetro portátil digital. No GII os corpos-de-prova foram armazenados em água destilada e levados à estufa a 37ºC durante 24 horas e, posteriormente, submetidos à termociclagem, com 1000 ciclos a 5 e 55ºC. No GIII os corpos-de-prova foram armazenados em água destilada em temperatura ambiente por 24 horas e posteriormente submetidos aos ensaios mecânicos. RESULTADOS: os valores médios da resistência ao cisalhamento em Megapascal foram de: GI = 4,39; GII = 7,11 e GIII = 7,35. Após a descolagem foram realizadas fotografias das áreas de colagem, tanto dos dentes submetidos a testes in vivo quanto in vitro e ampliadas 5x para facilitar a visualização. As imagens obtidas foram analisadas, classificadas de acordo com o IAR e, por meio de gráficos de dispersão, foi verificada a relação entre a resistência ao cisalhamento e este índice. CONCLUSÃO: a média dos ensaios mecânicos realizados in vivo foi estatisticamente menor em relação aos ensaios in vitro. Não houve diferenças na resistência ao cisalhamento in vitro entre o grupo termociclado e o não-termociclado. Não houve relação entre tensão de ruptura e tipo de falha.

Effect of the surface treatment of plain carbon fiber posts on the retention of the composite core: an in vitro evaluation

Foi avaliado o possível efeito de tratamentos superficiais em pinos de fibra de carbono lisos, quando comparados aos pinos serrilhados, na retenção à resina composta empregada na confecção de núcleos de preenchimento. Foram utilizados cinqüenta pinos de fibra de carbono, divididos em cinco grupos: os quatro primeiros grupos eram constituídos por pinos do tipo liso, cujas superfícies foram tratadas, e o último grupo por dez pinos do tipo serrilhado. Foram desenvolvidas matrizes de resina acrílica com um leito ajustado para conter o pino, com um alargamento na porção coronária para posterior preenchimento com resina composta. Após o tratamento superficial, todos os pinos receberam camadas de primer, foram secos e então ajustados à matriz de resina, colocando-se a resina composta autopolimerizável na porção coronária para um núcleo de preenchimento de 3 mm. As amostras foram submetidas a termociclagem e armazenadas em água destilada por uma semana. Os espécimes foram testados por meio de ensaios mecânicos de tração, à velocidade de 0,5 mm/min, até o deslocamento do conjunto ou a fratura da resina do núcleo. As conclusões foram as seguintes: a) o tratamento superficial nos grupos tratados por meio de jateamento (Grupo A), pontas diamantadas marcadoras de profundidade para facetas laminadas (Grupo C) e alteração da morfologia da extremidade coronária (Grupo D) conferiu aos pinos lisos valores de retenção comparáveis aos dos pinos serrilhados (Grupo E) nos ensaios de tração, porém sem diferença estatisticamente significativa entre estes grupos; b) os pinos tratados por meio de pontas diamantadas de granulação média (Grupo B) obtiveram valores de retenção menores que os demais grupos.

In Vitro Antibacterial Activity of Adhesive Systems on Streptococcus Mutans

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Influência do diâmetro e da fase folicular sobre a competência in vitro de oócitos obtidos de novilhas da raça Nelore

Avaliou-se o efeito do diâmetro e da fase do desenvolvimento folicular sobre a competência de oócitos para a produção in vitro de embriões bovinos. A primeira onda folicular foi sincronizada com progestógeno por nove dias e 24 horas após a sua retirada aplicou-se LH. Os ovários foram recuperados 60h (G-60), 96h (G-96) e 108h (G-108) após a ovulação induzida pelo LH. Os folículos foram dissecados ou aspirados e medidos e os oócitos recuperados e submetidos à maturação, fecundação e cultivo in vitro. Os ovários do G-60 apresentaram mais oócitos viáveis (graus I, II e III) (96,6%). A taxa de clivagem teve efeito significativo sobre o diâmetro folicular, sendo maior nos oócitos oriundos de folículos classe 3 (>7mm). Na taxa de produção de blastocisto observou-se interação diâmetro versus fase de desenvolvimento folicular. A taxa de produção de blastocisto foi maior em oócitos obtidos de folículos com diâmetros <5mm (classe 1) no G-60 (64,5%), de 5-7mm (classe 2) no G-96 (33,3%) e >7mm (classe 3) no G-108 (50%). Conclui-se que o diâmetro e a fase de desenvolvimento folicular influenciam a competência oocitária para o desenvolvimento in vitro. Nos estádios iniciais da onda folicular a produção de blastocisto foi maior em oócitos de folículos pequenos; com o avanço da onda, a produção de blastocistos foi maior em oócitos obtidos de folículos maiores.

Estudo das poliaminas na morfogênese in vitro de Hemerocallis sp.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Effect of doses of fungicides and plant resistance activators on the control of Rhizoctonia foliar blight of soybean, and on Rhizoctonia solani AG1-IA in vitro development

Rhizoctonia foliar blight (RFB) of soybean [Glycine max (L.) Merrill] occurs in many tropical and subtropical regions, causing yield reductions of up to 70% and in Brazil, up to 60%. The disease is caused by Rhizoetonia solani AG1-IA and AG1-IB, and by AG2-3 in Japan. RFB occurs in the North, Northeast and Mid-west regions of Brazil. Chemical control remains the only effective method of controlling RFB, but its efficiency depends upon environmental conditions. In this study, 18 fungicides, salicylic acid (SA) and acibenzolar-s-methyl (ASM) were evaluated on R. solani AG1-IA in vitro, by mycelial growth rating and estimating effective concentration for 50% (EC 50) and 90% (EC 90) inhibition of mycelial growth, and in vivo by reduction of disease severity on soybean plants in greenhouse conditions. Mycelial growth was strongly inhibited by the fungicides pyraclostrobin + boscalid and fludioxonil. Preventive fungicide applications were the most effective. Strobilurins were more efficient both in preventive and curative applications. Best results with plant resistance activators were obtained with SA (2.5 mM) sprayed at 20 d before inoculation and with ASM (12.5 mg a.i. l(-1)) 10 d before inoculation. (c) 2005 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Variação na estrutura da vegetação de duas cultivares de Panicum maximum jacq. (colonião e tabiatã) submetidas a diferentes tipos de manejo. Composição em proteína bruta e digestibilidade In vitro da matéria seca

This work was carried out at FCAV-UNESP, Campus of Jaboticabal, Brazil, to study the effects of nitrogen fertilization (0 and 50 kg N/ha/cut), three sucessive periods of growth (December 21st 1987, January 25th 1988 and February 29th 1988)) and three cutting ages (28, 35 and 42 days) on composition in crude protein and in vitro dry matter digestibility of two cultivars of Panicum maximum Jacq. i.e., Coloniao and Tobiata. Plants were harvested in five vertical layers above soil level (0-20, 20-40, 40-60, 60-80 and over 80 cm). The samples were divided in: green leaves, green stems and dry material. Generally, values of in vitro dry matter digestibility and the levels of crude protein of both cultivars were greater in the higher layers of the vegetation, with a decrease, however, for the other layers and more advanced phases of plants development, mainly with no N fertilization.