Die Verbindung von Kleinwinkelstreuung und in silico-Methodik zur Aufklärung von Konformationswechseln großer Proteinkomplexe

In dieser Dissertation wurden die Methoden Homologiemodellierung und Molekulardynamik genutzt, um die Struktur und das Verhalten von Proteinen in Lösung zu beschreiben. Mit Hilfe der Röntgenkleinwinkelstreuung wurden die mit den Computermethoden erzeugten Vorhersagen verifiziert. Für das alpha-Hämolysin, ein Toxin von Staphylococcus aureus, das eine heptamere Pore formen kann, wurde erstmalig die monomere Struktur des Protein in Lösung beschrieben. Homologiemodellierung auf Basis verwandter Proteine, deren monomere Struktur bekannt war, wurde verwendet, um die monomere Struktur des Toxins vorherzusagen. Flexibilität von Strukturelementen in einer Molekulardynamiksimulation konnte mit der Funktionalität des Proteines korreliert werden: Intrinsische Flexibilität versetzt das Protein in die Lage den Konformationswechsel zur Pore nach Assemblierung zu vollziehen. Röntgenkleinwinkelstreuung bewies die Unterschiede der monomeren Struktur zu den Strukturen der verwandten Proteine und belegt den eigenen Vorschlag zur Struktur. Überdies konnten Arbeiten an einer Mutante, die in einer sogenannten Präporenkonformation arretiert und nicht in der Lage ist eine Pore zu formen, zeigen, dass dieser Übergangszustand mit der Rotationsachse senkrecht zur Membran gelagert ist. Eine geometrische Analyse beweist, dass es sterisch möglich ist ausgehend von dieser Konformation die Konformation der Pore zu erreichen. Eine energetische und kinetische Analyse dieses Konformationswechsels steht noch aus. Ein weiterer Teil der Arbeit befasst sich mit den Konformationswechseln von Hämocyaninen. Diese wurden experimentell mittels Röntgenkleinwinkelstreuung verfolgt. Konformationswechsel im Zusammenhang mit der Oxygenierung konnten für die 24meren Hämocyanine von Eurypelma californicum und Pandinus imperator beschrieben werden. Für eine Reihe von Hämocyaninen ist nachgewiesen, dass sie unter Einfluss des Agenz SDS Tyrosinaseaktivität entfalten können. Der Konformationswechsel der Hämocyanine von E. californicum und P. imperator bei der Aktivierung zur Tyrosinase mittels SDS wurde experimentell bestätigt und die Stellung der Dodekamere der Hämocyanine als wesentlich bei der Aktivierung festgestellt. Im Zusammenhang mit anderen Arbeiten gilt damit die Relaxierung der Struktur unter SDS-Einfluss und der sterische Einfluss auf die verbindenden Untereinheiten b & c als wahrscheinliche Ursache für die Aktivierung zur Tyrosinase. Eigene Software zum sogenannten rigid body-Modellierung auf der Basis von Röntgenkleinwinkelstreudaten wurde erstellt, um die Streudaten des hexameren Hämocyanins von Palinurus elephas und Palinurus argus unter Einfluss der Effektoren Urat und Koffein strukturell zu interpretieren. Die Software ist die erste Implementierung eines Monte Carlo-Algorithmus zum rigid body-Modelling. Sie beherrscht zwei Varianten des Algorithmus: In Verbindung mit simulated annealing können wahrscheinliche Konformationen ausgefiltert werden und in einer anschließenden systematischen Analyse kann eine Konformation geometrisch beschrieben werden. Andererseits ist ein weiterer, reiner Monte Carlo-Algorithmus in der Lage die Konformation als Dichteverteilung zu beschreiben.

Commentary on "Child Welfare Waivers: The Stakes for Families"

The purpose of this piece is to provide commentary of an article, Child Welfare Waivers: The Stakes for Your State, that discusses the recent reauthorization of the Title IV-E Child Welfare Waivers. The article provides an overview of funds available to the states for child welfare programs and their intended purpose and restrictions placed on use. As structured, the present system rewards states monetarily for maintaining foster care. Research from waiver programs shows promising results for improved outcomes at the same or lower financial cost by utilizing safe, proven alternatives to the current foster care system. Waiver funds also protect the financial commitment to child welfare because state legislative budget slashing in this area will result in the loss of Federal funding. The independent analysis required with the grant of a waiver must be maintained to provide ongoing analysis and oversight of the increase spending flexibility. Stakeholders must be aware of the program and its results and use these funds as an opportunity to assess new concepts and apply programs best suited to the needs of children in their state. Allowing those “on the ground” to determine appropriate programming and careful result assessment may be the best means for protecting children, preserving families and doing both in a manner that makes the most efficient use of available resources.

Translation of cytochrome f is autoregulated through the 5′ untranslated region of petA mRNA in Chlamydomonas chloroplasts

A process that we refer to as control by epistasy of synthesis (CES process) occurs during chloroplast protein biogenesis in Chlamydomonas reinhardtii: the synthesis of some chloroplast-encoded subunits, the CES subunits, is strongly attenuated when some other subunits from the same complex, the dominant subunits, are missing. Herein we investigate the molecular basis of the CES process for the biogenesis of the cytochrome b6f complex and show that negative autoregulation of cytochrome f translation occurs in the absence of other complex subunits. This autoregulation is mediated by an interaction, either direct or indirect, between the 5′ untranslated region of petA mRNA, which encodes cytochrome f, and the C-terminal domain of the unassembled protein. This model for the regulation of cytochrome f translation explains both the decreased rate of cytochrome f synthesis in vivo in the absence of its assembly partners and its increase in synthesis when significant accumulation of the C-terminal domain of the protein is prevented. When expressed from a chimeric mRNA containing the atpA 5′ untranslated region, cytochrome f no longer showed an assembly-dependent regulation of translation. Conversely, the level of antibiotic resistance conferred by a chimeric petA-aadA-rbcL gene was shown to depend on the state of assembly of cytochrome b6f complexes and on the accumulation of the C-terminal domain of cytochrome f. We discuss the possible ubiquity of the CES process in organellar protein biogenesis.

Report of progress - Geological Survey of Canada.

Contents of each report may be found in "List of publications of the Geological survey of Canada. 1906."

Public accounts of the Province of Ontario.

Estimates for 1907-1909 (Oct.), 1910/1911 (separately paged and with separate t.p.) issued with 1907-1908, 1909/1910.

Report.

None issued for 1907 or 1921-1927.

Report of Special Committee on the Game Situation.

Disbound Original Held in Oak Street Library Facility.

[Messages to the Legislature]

Includes annual, biennial and special messages, inaugural addresses, etc. before the Legislative Assembly.

Report of the Royal commission investigating the fruit industry (and interrelated conditions) of the districts territorially known as the Okanagan, Kootenay, and Kettle river of the Province of British Columbia,

Mode of access: Internet.

Report on water resources studies, presented by Water Resources Advisory Committee to the Subcommittee on Agriculture and Natural Resources.

Mode of access: Internet.

Report of the Bureau of Archives for the Province of Ontario.

Edited by: <1909>- , A. Fraser.

The "crise" Metcalfe and the Lafontaine-Baldwin cabinet defended;

Mode of access: Internet.

Report of trustees for year ended 30th June .

Title from caption.

Votes and proceedings.

"With the various documents connected therewith."

Return of the recent survey and report of the engineers on the Ottawa ship canal.

Return to an address from the Legislative assembly to the governor general.