Expressão da proteína erbB-2 e dos receptores de hormônios na transição das regiões in situ para invasora de tumores da mama

OBJETIVOS: avaliar a expressão de erbB-2 e dos receptores hormonais para estrógeno e progesterona (RE/RP) nas regiões de transição entre as frações in situ e invasoras de neoplasias ductais da mama (CDIS e CDI, respectivamente). MÉTODOS: oitenta e cinco casos de neoplasias mamárias, contendo regiões contíguas de CDIS e CDI, foram selecionados. Espécimes histológicos das áreas de CDIS e de CDI foram obtidos através da técnica de tissue microarray (TMA). As expressões da erbB-2 e dos RE/RP foram avaliadas por meio de imunoistoquímica convencional. A comparação da expressão da erbB-2 e dos RE/RP nas frações in situ e invasoras da mama foi realizada com emprego do teste de McNemar. Os intervalos de confiança foram determinados em 5% (p=0,05). Foram calculados coeficientes de correlação intraclasse (ICC) para avaliar a concordância na tabulação cruzada da expressão de erbB-2 e RE/RP nas frações de CDIS e CDI. RESULTADOS: a expressão da erbB-2 não diferiu entre as áreas de CDIS e CDI (p=0,38). Comparando caso a caso suas áreas de CDIS e CDI, houve boa concordância na expressão da erbB-2 (coeficiente de correlação intraclasse, ICC=0,64), dos RP (ICC = 0,71) e dos RE (ICC = 0,64). Considerando apenas tumores cujo componente in situ apresentasse áreas de necrose (comedo), o ICC para erbB-2 foi de 0,4, comparado a 0,6 no conjunto completo de casos. Os ICC não diferiram substancialmente daqueles obtidos com o conjunto completo de espécimes em relação aos RE/RP: para RE, ICC=0,7 (versus 0,7 no conjunto completo), e para RP, ICC=0,7 (versus 0,6 no conjunto completo). CONCLUSÕES: nossos achados sugerem que as expressões de erbB-2 e RE/RP não diferem nos componentes contíguos in situ e invasivo em tumores ductais da mama.

Polimorfismo do gene dos receptores de progesterona e o aborto espontâneo de repetição

OBJETIVO: investigar se polimorfismos dos genes que codificam o receptor de progesterona (PROGINS) estão relacionados à ocorrência de aborto espontâneo de repetição (AER). MÉTODOS: em estudo caso-controle, foram selecionados 85 pacientes com antecedente de pelo menos três abortos precoces sem etiologia definida (Grupo Caso) e 157 mulheres com história de pelo menos duas gestações de termo sem intercorrências e sem passado de abortamento (Grupo Controle). Realizada coleta de 10 mL de sangue por punção venosa periférica e extração de DNA pela técnica DTAB/CTAB. As genotipagens foram feitas por reação em cadeia de polimerase (PCR), nas condições de ciclagem específica para o polimorfismo em estudo, seguida de amplificação em gel de agarose a 2%. A visualização das bandas foi feita sob luz ultravioleta e os géis foram fotografados. As diferenças genotípicas e alélicas entre os dois grupos para o polimorfismo PROGINS foram calculadas pelo teste de χ2, adotando-se como nível de significância valores de p<0,05. Calculou-se ainda o Odds Ratio (OR, razão de chances), com intervalos de confiança de 95% (IC95%). RESULTADOS: As frequências genotípicas encontradas para o polimorfismo PROGINS foram de 72,3% T1/T1 e 27,7% T1/T2 no grupo com AER e 76,4% T1/T1, 22,3% T1/T2 e 1,3% T2/T2 no Grupo Controle. Não houve diferenças entre os grupos, analisando-se as frequências genotípicas e alélicas: respectivamente p=0,4 (OR: 0,8) e p=0,6 (OR: 0,9). CONCLUSÕES: os dados do presente estudo sugerem que o polimorfismo PROGINS do gene dos receptores de progesterona não está relacionado ao AER.

Expressão proteica do gene HOXA10 e dos receptores de estrogênio e progesterona no epitélio, estroma e tecido muscular liso perilesional de endometriose do reto-sigmoide

INTRODUÇÃO: A patogênese da endometriose profunda (EPF) é incerta. O fator de transcrição homeoboxA10 (HOXA10) regula a conferência de identidade tecidual de útero ao ducto paramesonéfrico indiferenciado. HOXA10 é expresso em endometriose ovariana, peritoneal, pulmonar e reto-vaginal, relacionando-o à patogênese da endometriose. Estradiol e progesterona ativam a transcrição do gene HOXA10. Nesse estudo, avaliamos a expressão proteica de HOXA10, das isoformas α (ER-α) e β (ER-β) dos receptores de estrogênio, e do receptor de progesterona AB (PR-AB) e sua isoforma B (PR-B) na lesão (LES) e no tecido muscular liso perilesional (TMLP) de endometriose de reto-sigmoide (ERS), durante as fases proliferativa e secretora do ciclo.MÉTODOS: Amostras de LES e TMLP de ERS de 18 pacientes (9 operadas em cada fase) foram agrupadas em blocos de microarranjos de tecidos (tissue microarray). Após preparação imunoistoquímica, avaliamos as amostras por microscopia ótica (MO) e por um softwareespecífico, a análise morfométrica (AM).RESULTADOS: HOXA10 foi expresso no estroma de LES de ERS durante a fase secretora. ER-α e ER-β foram expressos em glândulas e estroma de LES e TMLP de ERS durante ambas as fases do ciclo. PR-AB e PR-B foram expressos em glândulas e estroma de LES de ERS durante ambas as fases do ciclo. A expressão de HOXA10 correlacionou-se diretamente com PR-AB e PR-B na ERS. Não houve correlação entre ER-α e ER-β com HOXA10, PR-AB ou PR-B em nenhuma fase do ciclo ou local de expressão de ERS.CONCLUSÕES: HOXA10 é expresso em ERS, fora do seu eixo espacial de expressão. HOXA10 pode ser necessário para conferir a identidade "de novo" na EPF, incluindo ERS, favorecendo a hipótese da origem embrionária da doença. A progesterona pode ativar o gene HOXA10 e regular esta ação, possivelmente mediada por PR-B. A ação mitógena do estradiol na ERS é mediada por ER-α e ER-β.

Sensibilidade toxicológica e especificidade do teste de microfixação de complemento na detecção de toxinas botulínicas C e D em meio de cultura e fígado de camundongos

No presente estudo pretendeu-se verificar a sensibilidade toxicológica e especificidade do Teste de Microfixação de Complemento (MCF) na detecção de toxinas botulínicas C e D no sobrenadante de cultivos bacterianos e em fígados de camundongos inoculados com doses letais e subletais. As toxinas foram produzidas em meio de cultura Hemoline, tituladas através da determinação da DL50 pelo Bioensaio em Camundongo e diluídas nas concentrações de 10, 1, 0,1, 0,01 e 0,001 DL50. Desta forma, foram utilizadas em dois modelos experimentais, onde foi determinada a sensibilidade toxicológica do MCF no sobrenadante do meio de cultura com as diluições descritas acima e ainda em extratos hepáticos de camundongos com peso corporal de 20g, inoculados com as mesmas diluições. A tentativa de evidenciação das toxinas botulínicas nos extratos hepáticos de camundongos foi realizada através da sua extração após a morte pela administração das doses letais e ainda pelo sacrifício dos animais inoculados com doses subletais, em intervalos de 5 dias. Os resultados evidenciaram uma sensibilidade toxicológica para o MCF de 100% para os dois tipos de toxinas ao nível de 0,01 DL50, quando testados os sobrenadantes de meio de cultura, portanto 100 vezes superior ao Bioensaio em Camundongo. A sensibilidade toxicológica do MCF, quando examinados extratos hepáticos de camundongos inoculados com 1 e 10 DL50 de toxinas botulínicas C e D, foi inferior, com valores de 100, 80, 89 e 72%, respectivamente. Pelo teste foi possível detectar toxinas botulínicas tipos C e D nos extratos hepáticos de camundongos inoculados com doses subletais até 15 dias após a sua inoculação. A especificidade do MCF foi de 88 e 92%, quando testados extratos hepáticos de camundongos sadios, e confrontados com as antitoxinas C e D; e 100% no sobrenadante do meio de cultura. Os resultados apontam para uma possível utilização do teste como importante instrumento de pesquisa e ainda na eventual substituição dos testes in vivo pelas suas implicações éticas e limitações práticas.

Resposta humoral, recuperação bacteriana e lesões histológicas em camundongos geneticamente selecionados para bons e maus produtores de anticorpos e Balb/c, frente à infecção por Leptospira interrogans sorovar icterohaemorrhagiae

O presente trabalho teve por finalidade associar a cinética da resposta humoral à recuperação de leptospiras viáveis e à intensidade das lesões teciduais em camundongos geneticamente selecionados para bons (High) e maus (Low) produtores de anticorpos (seleção IV-A), além de camundongos outbreed, Balb/c, inoculados com amostra patogênica de Leptospira interrogans sorovar icterohaemorrhagiae. As linhagens High e Low (seleção IV-A) apresentam modificações em alguns compartimentos da resposta imune, principalmente em relação à atividade macrofágica, representando fenótipos extremos encontrados em populações naturais heterogêneas. Os camundongos foram sacrificados em oito momentos após a infecção. A análise dos resultados revelou que a partir do 7º dia após a infecção, os camundongos da linhagem High apresentaram elevação nos títulos de anticorpos estatisticamente significantes quando comparados aos camundongos da linhagem Low, mantendo assim o efeito multiespecífico. Os camundongos Balb/c apresentaram resultados intermediários entre as duas linhagens. A produção de anticorpos colaborou como fator limitante à infecção, pois quando obteve-se maior recuperação de leptospiras, na fase inicial da infecção, os títulos de anticorpos encontravam-se em elevação. As lesões observadas nos órgãos de camundongos infectados consistiram basicamente nos mesmos processos inflamatórios e degenerativos, que não se alteraram, variando apenas o grau de comprometimento tecidual, de acordo com a linhagem. A linhagem high apresentou lesões mais extensas que as apresentadas pelas linhagens low e Balb/c, sendo que nesta última as lesões foram moderadas. De forma geral a linhagem High e Balb/c apresentaram um perfil de resposta Th2, com o maior índice de produção de anticorpos e gravidade das lesões, enquanto a linhagem Low apresentou um perfil de resposta Th1.

Potencial envolvimento da adiponectina e seus receptores na modulação da esteroidogênese em corpo lúteo de cadelas ao longo do diestro

No ciclo estral de cadelas a fase luteínica, denominada diestro, compreende um período que varia de 60 a 100 dias em animais não-prenhes, caracterizado pela elevação plasmática de progesterona nos primeiros 20 dias pós ovulação (p.o). A adiponectina é a mais abundante proteína secretada pelo tecido adiposo, porém sua concentração plasmática diminui significativamente em alterações metabólicas como resistência insulínica e Diabetes mellitus tipo2, alterações descritas como relacionadas em algumas cadelas com o período de diestro. O objetivo do estudo foi determinar a expressão e imunolocalização do sistema adiponectina (adiponectina e seus receptores, adipoR1 e adipoR2) no corpo lúteo de cadelas ao longo do diestro, correlacionando-o ao perfil hormonal de 17β-estradiol e progesterona, assim como à expressão de um dos genes alvo do sistema, o PPAR-γ. Para realização do estudo foram coletados corpos lúteos de 28 cadelas durante ovariosalpingohisterectomia de eleição nos dias 10, 20, 30, 40, 50, 60 e 70 pós ovulação (o dia zero da ovulação foi considerado aquele no qual a concentração plasmática de progesterona atingiu 5ng/mL). Os corpos lúteos foram avaliados por imunohistoquímica para adiponectina e seus receptores e a expressão do RNAm do PPAR-γ por PCR em tempo real. A análise estatística da avaliação gênica foi realizada com o teste ANOVA, seguido por comparação múltipla Newman-Keuls. O sinal da adiponectina apresentou-se mais intenso até os primeiros 20 dias p.o, momento de regência da progesterona; houve queda gradativa após este período, coincidindo com a ascensão do 17β-estradiol, cujo pico foi notado próximo do dia 40 p.o. A queda marcante da adiponectina ocorreu após 50 dias p.o. O sinal do adipoR1 mostrou-se bem evidente até os 40 dias p.o e o do adipoR2 até os 50 dias p. o, decaindo posteriormente. Foi observada maior expressão do gene PPAR-γ aos 10, 30 e 70 dias p.o. Estes resultados mostram que a expressão protéica da adiponectina e de seus receptores se altera ao longo do diestro e que estas alterações podem estar relacionados às alterações hormonais e expressão do PPAR- γ, participando do mecanismo fisiológico de desenvolvimento, manutenção, atividade e regressão luteínica em cadelas.

Oxidized LDL and physical fitness in healthy young men: associations with body composition, smoking, metabolic syndrome and androgen status

Background: In the past, oxidized low density lipoprotein (ox-LDL) has been associated with an unbeneficial lipid profile. This atherogenic lipid profile increases the risk of atherosclerotic cardiovascular diseases. Physical fitness has substantial effect on serum lipoprotein concentration as well as body composition and humoral responses, however interrelationships between ox-LDL and physical fitness have not been widely examined in a nationally representative sample. Aims: This thesis evaluates how cardiorespiratory and muscular fitness associate with ox-LDL lipids and how the other known risk factors of atherosclerosis might alter these associations. Subjects and Methods: The study cohort consisted of 846 healthy young males (mean age 25.1, SD 4.6) who were gathered by voluntary nationwide recruitment. Each participant conducted a series of physical fitness tests (cardiorespiratory and muscular fitness) and answered a detailed questionnaire that included lifestyle habits (i.e. smoking and leisuretime physical activity). Venous blood samples including ox-LDL and serum lipids were also collected. Results: Higher levels of ox-LDL were found in overweight and obese men, however, high cardiorespiratory fitness seemed to protect the overweight from high levels of ox-LDL. Young men who smoked and had poor cardiorespiratory or muscular fitness possessed a higher concentration of ox-LDL lipids when compared to comparable levels of cardiorespiratory or muscular fitness non-smoking young men. Metabolic syndrome was associated with increased levels of ox-LDL and high levels of ox-LDL combined with poor cardiorespiratory and abdominal muscle fitness seems to predict metabolic syndrome in young men. Also, participants with poor cardiorespiratory fitness and low levels of testosterone had higher levels of ox-LDL when compared to participants with high cardiorespiratory fitness / low testosterone as well as those with poor cardiorespiratory fitness / high testosterone. Conclusions: Good cardiorespiratory and muscular fitness protects young men from increased levels of ox-LDL lipids. This association was discovered in young men who were categorized as being overweight, smokers, metabolic syndrome or with low levels of testosterone. Being fit seems to prevent higher levels of ox-LDL, even in young healthy

Avaliação clínica e hematológica de equinos submetidos ao modelo de laminite por oligofructose, tratados ou não com um agente antagonista de receptores CXCR1/2

O recrutamento de leucócitos aos tecidos é uma parte essencial da resposta imune inata e esse processo de forma desregulada pode resultar em lesões aos tecidos. Assim, a infiltração de leucócitos tem sido implicada na patogênese de laminite aguda em equinos. Os objetivos dessa pesquisa foram verificar a ação da ICXCR1/2 sobre os sinais clínicos e parâmetros hematológicos de cavalos com laminite induzida por oligofrutose. Doze equinos receberam oligofrutose (10g/kg de peso vivo PO) no tempo 0 e foram divididos em 2 grupos: tratados (30mg/kg p.v. ICXCR1/2 IV, nos tempos 6, 12, 18 e 24 h) e não tratados. As frequências cardíaca e respiratória, temperatura retal, coloração de membranas mucosas, presença e intensidade de pulso digital, sensibilidade ao exame com pinça de casco e grau de claudicação segundo Obel, bem como parâmetros hematológicos e bioquímicos (hemograma e as concentrações sanguíneas de glicose, uréia, creatinina, ALT, AST, FA, GGT, bilirrubina total e proteína total) foram aferidos nos tempos 0, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 60 e 72 horas . O modelo usando oligofructose foi adequado para induzir sinais de laminite e de sinais de endotoxemia, como diarreia, febre e leucocitose em cavalos sem raça definida de origem nacional. Também, não foram observadas quaisquer reações adversas clínicas ou hematológicas relacionadas ao uso intravenoso do antagonista de CXCR1/2, contudo essa substância, quando administrada na dose de 30mg/kg de peso vivo, 4 vezes ao dia, por 4 aplicações, não foi capaz de prevenir os sinais clínicos e as alterações hematológicas causadas pela administração de oligofructose nos equinos deste estudo.

Seleção, caracterização e clonagem dos genes fljB e groEL agonistas dos receptores de reconhecimento de padrão do sistema imune inato das aves

A produção recombinante de agonistas dos receptores do reconhecimento de padrão do sistema imune inato tem fornecido uma nova ferramenta para a produção de imunoestimulantes para animais. O padrão molecular associado ao patógeno (PAMP), flagelina, codificado pelo gene fljB de Salmonella Typhimurium e o padrão molecular associado ao dano (DAMP) HSP60, codificado pelo gene groEL da S. Typhimurium e S. Enteritidis, são reconhecidos por receptores de reconhecimento de padrões (RRPs) do sistema imune inato das aves. No presente estudo, foi feita a clonagem de fragmentos genéticos dos genes fljB de S. Typhimurium e groEL de S. Typhimurium e S. Enteritidis inseridos no vetor de expressão pET100/D-TOPO e transformados em células de E. coli TOP10. Os clones foram avaliados pela PCR de colônia, PCR de DNA plasmidial e sequenciamento genômico para a confirmação da presença desses genes. Na PCR de colônia, foram identificadas em 80%, 60% e 80% das colônias transformadas, a presença dos genes groEL (S. Enteritidis), groEL (S. Typhimurium) e fljB (S. Typhimurium) respectivamente. O sistema de clonagem adotado possibilitou a produção de clones dos fragmentos genéticos da HSP60 e flagelina das cepas de Salmonella, permitindo a utilização posterior desses clones em ensaios de expressão gênica, com potencial futuro de serem utilizados como imunoestimulante inespecífico das aves.

Oxidized LDL lipids as a risk factor for atherosclerosis

University of Turku, Faculty of Medicine, Department of Clinical Medicine, Department of Physical Activity and Health, Paavo Nurmi Centre, Doctoral Programme of Clinical Investigation, University of Turku, Turku, Finland. Annales Universitatis Turkuensis. Medica – Odontologica, Turku, Finland, 2014. Background: Atherosclerosis progression spans an entire lifetime and has a wide pool of risk factors. Oxidized LDL (oxLDL) is a crucial element in the progression of atherosclerosis. As a rather new member in the atherosclerosis risk factor family, its interaction with the traditional pro-atherogenic contributors that occur at different ages is poorly known. Aims: The aim of this study was to investigate oxLDL and its relation to major contributing risk factors in estimating atherosclerosis risk in data consisting mostly of adult men. The study subjects of this study consisted of four different sets of data, one of which contained also women. The age range of participants was 18-100 years and totaled 2337 participants (of whom 69% were men). Data on anthropometric and hormonal parameters, laboratory measures and medical records were assessed during 1998-2009. Results: Obesity was paralleled with high concentrations of oxLDL, which consequentially was reduced by weight reduction. Importantly, successful weight maintenance preserveed this benefit. A shift from insulin sensitivity to insulin resistance increased oxLDL. Smokers had more oxLDL than non-smokers. A combination of obesity and smoking, or smoking and low serum total testosterone,resulted in even higher levels of oxLDL than any of the three conditions alone. Proportioning oxLDL to HDL-c or apoA1 stood out as a risk factor of all-cause mortality in the elderly. Conclusions: OxLDL was associated with aging, androgens, smoking, obesity, insulin metabolism, weight balance and other circulating lipid classes. Through this variety of metabolic environments containing both constant conditions (aging and gender) as well as lifestyle issues, these findings supported an essential and multidimensional role that oxLDL plays in atherosclerosis pathogenesis.

Etofibrate but not controlled-release niacin decreases LDL cholesterol and lipoprotein (a) in type IIb dyslipidemic subjects

Etofibrate is a hybrid drug which combines niacin with clofibrate. After contact with plasma hydrolases, both constituents are gradually released in a controlled-release manner. In this study, we compared the effects of etofibrate and controlled-release niacin on lipid profile and plasma lipoprotein (a) (Lp(a)) levels of patients with triglyceride levels of 200 to 400 mg/dl, total cholesterol above 240 mg/dl and Lp(a) above 40 mg/dl. These patients were randomly assigned to a double-blind 16-week treatment period with etofibrate (500 mg twice daily, N = 14) or niacin (500 mg twice daily, N = 11). In both treatment groups total cholesterol, VLDL cholesterol and triglycerides were equally reduced and high-density lipoprotein cholesterol was increased. Etofibrate, but not niacin, reduced Lp(a) by 26% and low-density lipoprotein (LDL) cholesterol by 23%. The hybrid compound etofibrate produced a more effective reduction in plasma LDL cholesterol and Lp(a) levels than controlled-release niacin in type IIb dyslipidemic subjects.

High baseline serum total and LDL cholesterol levels are associated with MDR1 haplotypes in Brazilian hypercholesterolemic individuals of European descent

The MDR1 gene encodes the P-glycoprotein, an efflux transporter with broad substrate specificity. P-glycoprotein has raised great interest in pharmacogenetics because it transports a variety of structurally divergent drugs, including lipid-lowering drugs. The synonymous single-nucleotide polymorphism C3435T and the nonsynonymous single-nucleotide polymorphism G2677T/A in MDR1 have been indicated as potential determinants of variability in drug disposition and efficacy. In order to evaluate the effect of G2677T/A and C3435T MDR1 polymorphisms on serum levels of lipids before and after atorvastatin administration, 69 unrelated hypercholesterolemic individuals from São Paulo city, Brazil, were selected and treated with 10 mg atorvastatin orally once daily for four weeks. MDR1 polymorphisms were analyzed by PCR-RFLP. C3435T and G2677T polymorphisms were found to be linked. The allelic frequencies for C3435T polymorphism were 0.536 and 0.464 for the 3435C and 3435T alleles, respectively, while for G2677T/A polymorphism allele frequencies were 0.580 for the 2677G allele, 0.384 for the 2677T allele and 0.036 for the 2677A allele. There was no significant relation between atorvastatin response and MDR1 polymorphisms (repeated measures ANOVA; P > 0.05). However, haplotype analysis revealed an association between T/T carriers and higher basal serum total (TC) and LDL cholesterol levels (TC: 303 ± 56, LDL-C: 216 ± 57 mg/dl, respectively) compared with non-T/T carriers (TC: 278 ± 28, LDL-C: 189 ± 24 mg/dl; repeated measures ANOVA/Tukey test; P < 0.05). These data indicate that MDR1 polymorphism may have an important contribution to the control of basal serum cholesterol levels in Brazilian hypercholesterolemic individuals of European descent.

Antibodies against electronegative LDL inhibit atherosclerosis in LDLr-/- mice

In order to determine the effect of antibodies against electronegative low-density lipoprotein LDL(-) on atherogenesis, five groups of LDL low receptor-deficient (LDLr-/-) mice (6 per group) were immunized with the following antibodies (100 µg each): mouse anti-LDL(-) monoclonal IgG2b, rabbit anti-LDL(-) polyclonal IgG or its Fab fragments and mouse irrelevant monoclonal IgG and non-immunized controls. Antibodies were administered intravenously one week before starting the hypercholesterolemic diet (1.25% cholesterol) and then every week for 21 days. The passive immunization with anti-LDL(-) monoclonal IgG2b, polyclonal antibody and its derived Fab significantly reduced the cross-sectional area of atherosclerotic lesions at the aortic root of LDLr-/- mice (28.8 ± 9.7, 67.3 ± 17.02, 56.9 ± 8.02 µm² (mean ± SD), respectively) compared to control (124.9 ± 13.2 µm²). Vascular cell adhesion molecule-1 protein expression, quantified by the KS300 image-analyzing software, on endothelium and the number of macrophages in the intima was also decreased in aortas of mice treated with anti-LDL(-) monoclonal antibody (3.5 ± 0.70 per field x 10) compared to controls (21.5 ± 3.5 per field x 10). Furthermore, immunization with the monoclonal antibody decreased the concentration of LDL(-) in blood plasma (immunized: 1.0 ± 1.4; control: 20.5 ± 3.5 RLU), the amount of cholesterol oxides in plasma (immunized: 4.7 ± 2.7; control: 15.0 ± 2.0 pg COx/mg cholesterol) and liver (immunized: 2.3 ± 1.5; control: 30.0 ± 26.0 pg COx/mg cholesterol), and the hepatic content of lipid hydroperoxides (immunized: 0.30 ± 0.020; control: 0.38 ± 0.15 ng/mg protein). In conclusion, antibodies against electronegative LDL administered intravenously may play a protective role in atherosclerosis.

Effect of a cholesterol-rich diet on the metabolism of the free and esterified cholesterol components of a nanoemulsion that resembles LDL in rabbits

We have shown that the free cholesterol (FC) and the cholesteryl ester (CE) moieties of a nanoemulsion with lipidic structure resembling low-density lipoproteins show distinct metabolic fate in subjects and that this may be related to the presence of dyslipidemia and atherosclerosis. The question was raised whether induction of hyperlipidemia and atherosclerosis in rabbits would affect the metabolic behavior of the two cholesterol forms. Male New Zealand rabbits aged 4-5 months were allocated to a control group (N = 17) fed regular chow and to a 1% cholesterol-fed group (N = 13) during a 2-month period. Subsequently, the nanoemulsion labeled with ³H-FC and 14C-CE was injected intravenously for the determination of plasma kinetics and tissue uptake of the radioactive labels. In controls, FC and CE had similar plasma kinetics (fractional clearance rate, FCR = 0.234 ± 0.056 and 0.170 ± 0.038 h-1, respectively; P = 0.065). In cholesterol-fed rabbits, the clearance of both labels was delayed and, as a remarkable feature, FC-FCR (0.089 ± 0.033 h-1) was considerably greater than CE-FCR (0.046 ± 0.010 h-1; P = 0.026). In the liver, the major nanoemulsion uptake site, uptake of the labels was similar in control animals (FC = 0.2256 ± 0.1475 and CE = 0.2135 ± 0.1580%/g) but in cholesterol-fed animals FC uptake (0.0890 ± 0.0319%/g) was greater than CE uptake (0.0595 ± 0.0207%/g; P < 0.05). Therefore, whereas in controls, FC and CE have similar metabolism, the induction of dyslipidemia and atherosclerosis resulted in dissociation of the two forms of cholesterol.

Effect of neoadjuvant chemotherapy on low-density lipoprotein (LDL) receptor and LDL receptor-related protein 1 (LRP-1) receptor in locally advanced breast cancer

Low-density lipoprotein (LDL) receptors are overexpressed in most neoplastic cell lines and provide a mechanism for the internalization and concentration of drug-laden nanoemulsions that bind to these receptors. The aim of the present study was to determine whether the administration of standard chemotherapeutic schemes can alter the expression of LDL and LDL receptor-related protein 1 (LRP-1) receptors in breast carcinoma. Fragments of tumoral and normal breast tissue from 16 consecutive volunteer women with breast cancer in stage II or III were obtained from biopsies before the beginning of neoadjuvant chemotherapy and after chemotherapy, from fragments excised during mastectomy. Tissues were analyzed by immunohistochemistry for both receptors. Because complete response to treatment was achieved in 4 patients, only the tumors from 12 were analyzed. Before chemotherapy, there was overexpression of LDL receptor in the tumoral tissue compared to normal breast tissue in 8 of these patients. LRP-1 receptor overexpression was observed in tumors of 4 patients. After chemotherapy, expression of both receptors decreased in the tumors of 6 patients, increased in 4 and was unchanged in 2. Nonetheless, even when chemotherapy reduced receptors expression, the expression was still above normal. The fact that chemotherapy does not impair LDL receptors expression supports the use of drug carrier systems that target neoplastic cells by the LDL receptor endocytic pathway in patients on conventional chemotherapy.