Rab23, a negative regulator of hedgehog signaling, localizes to the plasma membrane and the endocytic pathway

The regulation of hedgehog signaling by vesicular trafficking was exemplified by the finding that Rab23, a Rab-GTPase vesicular transport protein, is mutated in open brain mice. In this study, the localization of Rab23 was analyzed by light and immunoelectron microscopy after expression of wild-type (Rab23-GFP), constitutively active Rab23 (Rab23Q68L-GFP), and inactive Rab23 (Rab23S23N-GFP) in a range of mammalian cell types. Rab23-GFP and Rab23Q68L-GFP were predominantly localized to the plasma membrane but were also associated with intracellular vesicular structures, whereas Rab23S23N-GFP was predominantly cytosolic. Vesicular Rab23-GFP colocalized with Rab5Q79L and internalized transferrin-biotin, but not with a marker of the late endosome or the Golgi complex. To investigate Rab23 with respect to members of the hedgehog signaling pathway, Rab23-GFP was coexpressed with either patched or smoothened. Patched colocalized with intracellular Rab23-GFP but smoothened did not. Analysis of patched distribution by light and immunoelectron microscopy revealed it is primarily localized to endosomal elements, including transferrin receptor-positive early endosomes and putative endosome carrier vesicles and, to a lesser extent, with LBPA-positive late endosomes, but was excluded from the plasma membrane. Neither patched or smoothened distribution was altered in the presence of wild-type nor mutant Rab23-GFP, suggesting that despite the endosomal colocalization of Rab23 and patched, it is likely that Rab23 acts more distally in regulating hedgehog signaling.

Screening of human primary melanocytes of defined melanocortin-1 receptor genotype: Pigmentation marker, ultrastructural and UV-survival studies

Recent population studies have demonstrated an association with the red-hair and fair-skin phenotype with variant alleles of the melanocortin-1 receptor (MC1R) which result in amino acid substitutions within the coding region leading to an altered receptor activity. In particular, Arg151Cys, Arg160Trp and Asp294His were the most commonly associated variants seen in the south-east Queensland population with at least one of these alleles found in 93% of those with red hair. In order to study the individual effects of these variants on melanocyte biology and melanocytic pigmentation, we established a series of human melanocyte strains genotyped for the MC1R receptor which included wild-type consensus, variant heterozygotes, compound heterozygotes and homozygotes for Arg151Cys, Arg160Trp, Val60Leu and Val92Met alleles. These strains ranged from darkly pigmented to amelanotic, with all strains of consensus sequence having dark pigmentation. UV sensitivity was found not to be associated with either MC1R genotype or the level of pigmentation with a range of sensitivities seen across all genotypes. Ultrastructural analysis demonstrated that while consensus strains contained stage IV melanosomes in their terminal dendrites, Arg151Cys and Arg160Trp homozygote strains contained only stage II melanosomes. This was despite being able to show expression of tyrosinase and tyrosinase-related protein-1 markers, although at reduced levels and an ability to convert exogenous 3,4-dihydroxyphenyl-alanine (DOPA) to melanin in these strains.

Lipid rafts and caveolae as portals for endocytosis: New insights and common mechanisms

Clathrin-coated pits and caveolae are two of the most recognizable features of the plasma membrane of mammalian cells. While our understanding of the machinery regulating and driving clathrin-coated pit-mediated endocytosis has progressed dramatically, including the elucidation of the structure of individual components and partial in vitro reconstitution, the role of caveolae as alternative endocytic carriers still remains elusive 50 years after their discovery. However, recent work has started to provide new insights into endocytosis by caveolae and into apparently related pathways involving lipid raft domains. These pathways, distinguished by their exquisite sensitivity to cholesterol-sequestering agents, can involve caveolae but also exist in cells devoid of caveolins and caveolae. This review examines the current evidence for the involvement of rafts and caveolae in endocytosis and the molecular players involved in their regulation.

GAIP participates in budding of membrane carriers at the trans-Golgi network

Galpha interacting protein (GAIP) is a regulator of G protein signaling protein that associates dynamically with vesicles and has been implicated in membrane trafficking, although its specific role is not yet known. Using an in vitro budding assay, we show that GAIP is recruited to a specific population of trans-Golgi network-derived vesicles and that these are distinct from coatomer or clathrin-coated vesicles. A truncation mutant (NT-GAIP) encoding only the N-terminal half of GAIP is recruited to trans -Golgi network membranes during the formation of vesicle carriers. Overexpression of NT-GAIP induces the formation of long, coated tubules, which are stabilized by microtubules. Results from the budding assay and from imaging in live cells show that these tubules remain attached to the Golgi stack rather than being released as carrier vesicles. NT-GAIP expression blocks membrane budding and results in the accumulation of tubular carrier intermediates. NT-GAIP-decorated tubules are competent to load vesicular stomatitis virus protein G-green fluorescent protein as post-Golgi, exocytic cargo and in cells expressing NT-GAIP there is reduced surface delivery of vesicular stomatitis virus protein G-green fluorescent protein. We conclude that GAIP functions as an essential part of the membrane budding machinery for a subset of post-Golgi exocytic carriers derived from the trans-Golgi network.

Linfoma de células B localizado na cavidade oral num felídeo – Caso Clínico

Um felídeo de 14 anos europeu comum foi apresentado à consulta com história clínica de 1 mês de diminuição de apetite, halitose e deformação facial. O seu estado imunitário foi negativo para FIV e FELV. Os resultados hematológicos e bioquímicos revelaram apenas um aumento de globulinas séricas e a punção aspirativa de gulha fina revelou linfoma localizado sem sinais de envolvimento sistémico nos exames complementares. A cirurgia foi recomendada e consistiu em maxilectomia rostral unilateral, excisão labial, enxerto labial de avanço e colocação de tubo esofágico. O resultado histopatológico revelou linfoma de baixo índice mitótico e os exames imunohistoquímicos revelaram positividade ao marcador CD79a, um marcador de células B. O tumor foi classificado em Estádio I pelo sistema de estadiamento de linfoma felino. Apesar dos resultados histopatológicos sugerirem uma resposta pobre à quimioterapia, iniciou-se um protocolo terapêutico com ciclofosfamida, vincristina e prednisolona. Dois meses após o diagnóstico e seis semanas após início de quimioterapia o animal revelou anorexia e no exame ecográfico de controlo foram detectadas metástases. O gato foi hospitalizado e morreu uma semana depois. O prognóstico de linfoma localizado no gato é desconhecido devido à sua rara ocorrência. Está recomendado o controlo local do tumor com cirurgia ou radioterapia combinadas ou não com quimioterapia. Apesar da sobrevivência do animal ter sido breve após o tratamento cirúrgico os proprietários ficaram satisfeitos com o aumento de qualidade de vida após cirurgia.

Tratamento endodontico como alternativa à extracção: opções de restauro de dentes endodonciados em medicina veterinária

A dentisteria e a prostodoncia têm sido recentemente abordadas em Medicina Veterinária em alguns textos e artigos dedicados à especialidade de Medicina Dentária Veterinária. A eleição criteriosa e a execução correcta das técnicas de tratamento do canal pulpar (tratamento endodontico), e de restauro dos dentes endodonciados, têm igual importância na manutenção da integridade das peças dentárias. O presente artigo pretende abordar as técnicas de restauro directo e indirecto, suas vantagens e limitações na prática clínica de animais de companhia, tendo o mesmo sido ilustrado com alguns exemplos práticos.

Personalidade e stresse em militares da Força Aérea Portuguesa: diferenças entre género

RESUMO: A organização militar é uma das mais importantes para qualquer , é uma instituição com regras e valores muito bem definidos, em que factores como a personalidade e o stress terão de ser muito bem avaliados para que se possa integrar uma carreira militar. A amostra estudada foi constituída por 200 militares da Força Aérea Portuguesa, com idade compreendidas entre os 19 e os 52 anos sendo a média de idades 26,3 anos (DP= 5,9). Em estudos anteriores verifiou-se que as diferenças entre géneros são uma condicionante no dia-a-dia de um militar (Lorenzi-Cioldi, 1994). Contudo, Eagly (1987), afirma que a diferença entre géneros tem uma pequena percentagem (5%) contra os 95 % de variabilidade explicada por outros factores na vida militar. Com esta investigação pretendeu-se verificar se existem diferenças entre géneros em relação aos factores básicos da personalidade, stress, afectividade e desejabilidade social, para além de outros aspectos relacionados com estes factores. Utilizaram-se as seguintes medidas de avaliação: o Big Five Factory, BFI (Benet-Martínez & John, 1998), a Paulhus Deception Scale, PDS (Paulhus, 1998), a Positive and Negative Affect Shedule, PANAS (Watson, Clark e Tellenger, 1998) e o Daily Stress Inventory, DSI (Brantley e Glenn, 1989). Conclui-se que ao nível da personalidade, nos factores de extroversão e conscienciosidade as mulheres apresentam valores mais elevados que os homens, em relação ao stress, nos factores competências pessoais, factores ambientais e stressores variados as mulheres obtêm valores mais baixos que os homens. ABSTRACT: The military institution is one of the most important in any country, it has very strict rules and values and therefore factors such as personality and stress must be thoroughly evaluated in order to integrate a military career. The sample under study is constituted by 200 militaries of the Portuguese Air Force, with ages between 19 and 52 years old, being the average 26,3 (DP=5,9). From previous studies it is know that differences in gender constitute a special condition in military personnel day to day life (Lorenzi-Cioldi, 1994). On the other hand, Eagly (1987) states that gender differences represents a small percentage (5%) against 95 % of variance explained by other military life factors. The main focus of this investigation was to determine if there were differences in gender in personality, stress, affect, social desirability and also to study other aspects related to these factors. The measures used were: the Big Five Factory, BFI (Benet-Martínez & John, 1998), the Paulhus Deception Scale, PDS (Paulhus, 1998), the Positive and Negative Affect Schedule, PANAS (Watson, Clark e Tellenger, 1998), the Daily Stress Inventory, DSI (Brantley e Glenn, 1998). It was concluded that on the personality level, women present higher scores on factors such as extroversion and consciousness. On the stress level, when considering factors such as personal competences, environmental factors and varied stressors, women present lower scores than men.

Estudo da ocorrência de enteroparasitas em hortaliças comercializadas na região metropolitana de São Paulo, SP, Brasil: I - Pesquisa de helmintos

Hortaliças in natura, comercializadas na região metropolitana de São Paulo, SP (Brasil), foram analisadas através de metodologia própria, visando à pesquisa e à identificação de formas de transmissão de helmintos intestinais de interesse médico. As hortaliças examinadas, constituídas de 50 amostras de cada variedade, foram de: alface (Lactuca sativa), variedades lisa e crespa, escarola (Chichorium sp) e agrião (Nasturtium officinale). Os resultados evidenciaram elevados percentuais de contaminação em todas as variedades analisadas, porém, as freqüências de helmintos foram maiores no agrião. A escarola apresentou valores médios, geralmente situados entre as alfaces e o agrião. Os números médios de ovos e larvas por 100 gramas de amostra, embora elevados, não apresentaram diferenças estatisticamente significantes entre as quatro variedades de hortaliças estudadas. Uma grande variedade de helmintos, de ocorrência freqüente na população residente na Região Metropolitana de São Paulo, foi observada nas amostras. Os mais freqüentes, no entanto, foram: ancilostomídeos e Ascaris sp. Recuperaram-se também ovos de Toxocara sp, Fasciola sp e de tricostrongilídeos, comprovando a ocorrência de contaminação das hortaliças por fezes de animais domésticos. Considerando-se os resultados obtidos, ressalta-se a importância das hortaliças na transmissão de helmintíases intestinais, bem como a necessidade de medidas que propiciem uma melhoria na qualidade higiênico-sanitária destes alimentos.

Estudo da ocorrência de enteroparasitas em hortaliças comercializadas na região metropolitana de São Paulo - SP, Brasil: II - Pesquisa de protozoários intestinais

Foram analisadas hortaliças "in natura", comercializadas na Região Metropolitana de São Paulo, SP-Brasil, visando à pesquisa e à identificação de cistos de protozoários de interesse médico. As hortaliças, constituídas de 50 amostras de cada variedade, consistiram em: alface (Lactuca sativa), variedades lisa e crespa, escarola (Chichorium sp) e agrião (Nasturtium officinale). Os resultados evidenciaram elevados percentuais de contaminação em todas as variedades de hortaliças analisadas, porém as freqüências de protozoários foram maiores no agrião. As amostras de alfaces apresentaram os menores percentuais de contaminação, enquanto que a escarola apresentou valores geralmente situados entre o agrião e as alfaces. Observou-se uma grande variedade de protozoários, cujas freqüências de ocorrência na população residente na Região Metropolitana de São Paulo são igualmente elevadas. Os mais freqüentes foram Entamoeba sp (com 4 e 8 núcleos) e Giardia sp. Foram também isolados cistos de Iodamoeba sp, Endolimax sp e Chilomastix sp. Os elevados níveis de contaminação fecal encontrados nas amostras analisadas apontam para a importância dos alimentos na transmissão de protozoários intestinais.

Estudo das alterações no comportamento catalítico do zeólito MCM-22 por modificação controlada da porosidade

Este trabalho experimental teve como objetivo o estudo da influência dos tratamentos de dessilicação e combinação do tratamento alcalino seguido de tratamento ácido aplicado ao zeólito MCM-22, utilizando duas concentrações diferentes de solução de NaOH. O zeólito MCM-22 sintetizado e todas as amostras modificadas foram caraterizadas por difração de raios-X, RMN de 29Si e 27Al, SEM, TEM e adsorção de azoto a baixa temperatura. O estudo da acidez das amostras foi realizado por adsorção de piridina seguida de espetroscopia de infravermelho e análise da região dos grupos hidroxilo. Para avaliar a influência dos tratamentos pós-síntese na acidez e porosidade recorreu-se à reação catalítica modelo de isomerização de m-xileno. O desenvolvimento de mesoporosidade foi conseguido por meio de tratamento alcalino com a solução de NaOH de 0,05 M, não tendo sido obtido nenhum ganho adicional com o uso da solução de concentração 0,1 M. Observa-se contudo que nestas condições experimentais a extração de Si é realizada juntamente com a de Al da rede que fica depositado, como espécies extra-rede. As amostras submetidas aos tratamentos alcalino e ácido sequenciais apresentam comportamentos distintos. Quando foi usada a solução alcalina de menor concentração não se observou nenhum efeito relevante nas propriedades texturais. Pelo contrário, quando o tratamento ácido foi realizado sobre a estrutura mais fragilizada, devido à dessilicação com a solução alcalina mais concentrada, a extração de Al a partir de ambos os sistemas porosos internos promoveu a sua interligação, evoluindo-se de uma estrutura 2-D para uma estrutura 3-D. Por outro lado, a deposição contínua de espécies de Al extra-rede no interior dos poros leva a um aumento de seletividade de forma, que se traduz na formação preferencial do isómero de xileno mais importante a nível comercial, o p-xileno.

The presence of the sperm whale (Physeter macrocephalus) around the Azores: a study of re-sightings from 2003-2012

27th Annual Conference of the European Cetacean Society. Setúbal, Portugal, 8-10 April 2013.

Satisfação profissional dos profissionais de saúde: comparação entre serviços com e sem sistema de gestão da qualidade

Mestrado em Gestão e Avaliação de Tecnologias da Saúde