552 resultados para E3
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The construction of adenovirus vectors for cloning and foreign gene expression requires packaging cell lines that can complement missing viral functions caused by sequence deletions and/or replacement with foreign DNA sequences. In this study, packaging cell lines were designed to provide in trans the missing bovine adenovirus functions, so that recombinant viruses could be generated. Fetal bovine kidney and lUng cells, acquired at the trimester term from a pregnant cow, were tranfected with both digested wild type BAV2 genomic DNA and pCMV-EI. The plasmid pCMV-EI was specifically constructed to express El of BAV2 under the control of the cytomegalovirus enhancer/promoter (CMV). Selection for "true" transformants by continuous passaging showed no success in isolating immortalised cells, since the cells underwent crisis resulting in complete cell death. Moreover, selection for G418 resistance, using the same cells, also did not result in the isolation of an immortalised cell line and the same culture-collapse event was observed. The lack of success in establishing an immortalised cell line from fetal tissue prompted us to transfect a pre-established cell line. We began by transfecting MDBK (Mardin-Dardy bovine kidney) cells with pCMV-El-neo, which contain the bacterial selectable marker neo gene. A series of MDBK-derived cell lines, that constitutively express bovine adenoviral (BAV) early region 1 (El), were then isolated. Cells selected for resistance to the drug G418 were isolated collectively for full characterisation to assess their suitability as packaging cell lines. Individual colonies were isolated by limiting dilution and further tested for El expression and efficiency of DNA uptake. Two cell lines, L-23 and L-24, out of 48 generated foci tested positive for 1 expression using Northern Blot analysis. DNA uptake studies, using both lipofectamine and calcium phosphate methods, were performed to compare these cells, their parental MDBK cells, 8 and the unrelated human 293 cells as a benchmark. The results revealed that the new MDBKderived clones were no more efficient than MDBK cells in the transient expression of transfected DNA and that they were inferior to 293 cells, when using lacZ as the reporter gene. In view of the inherently poor transfection efficiency of MDBK cells and their derivatives, a number of other bovine cells were investigated for their potential as packaging cells. The cell line CCL40 was chosen for its high efficiency in DNA uptake and subsequently transfected with the plasmid vector pCMV El-neo. By selection with the drug G418, two cell lines were isolated, ProCell 1 and ProCell 2. These cell lines were tested for El expression, permissivity to BAV2 and DNA uptake efficiency, revealing a DNA uptake efficiency of 37 % , comparable to that of CCL40. Attempts to rescue BAV2 mutants carrying the lacZ gene in place of 1 or 3 were carried out by co-transfecting wild type viral DNA with either the plasmid pdlElE-Z (which contains BAV2 sequences from 0% to 40.4% with the lacZ gene in place of the 1 region from 1.1% to 8.25%) or with the plasmid pdlE3-5-Z (which contains BAV2 sequences from 64.8% to 100% with the lacZ gene in place of the E3 region from 75.8% to 81.4%). These cotransfections did not result in the generation of a viral mutant. The lack of mutant generation was thought to be caused by the relative inefficiency ofDNA uptake. Consequently, cosBAV2, a cosmid vector carrying the BAV2 genome, was modified to carry the neo reporter gene in place of the 3 region from 75.8% to 81.4%. The use of a single cosmid vector earring the whole genome would eliminate the need for homologous recombination in order to generate a viral vector. Unfortunately, the transfection of cosBAV2- neo also did not result in the generation of a viral mutant. This may have been caused by the size of the 3 deletion, where excess sequences that are essential to the virus' survival might have been deleted. As an extension to this study, the spontaneous E3 deletion, accidently discovered in our viral stock, could be used as site of foreign gene insertion.
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This paper constructs and estimates a sticky-price, Dynamic Stochastic General Equilibrium model with heterogenous production sectors. Sectors differ in price stickiness, capital-adjustment costs and production technology, and use output from each other as material and investment inputs following an Input-Output Matrix and Capital Flow Table that represent the U.S. economy. By relaxing the standard assumption of symmetry, this model allows different sectoral dynamics in response to monetary policy shocks. The model is estimated by Simulated Method of Moments using sectoral and aggregate U.S. time series. Results indicate 1) substantial heterogeneity in price stickiness across sectors, with quantitatively larger differences between services and goods than previously found in micro studies that focus on final goods alone, 2) a strong sensitivity to monetary policy shocks on the part of construction and durable manufacturing, and 3) similar quantitative predictions at the aggregate level by the multi-sector model and a standard model that assumes symmetry across sectors.
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In this paper, we use identification-robust methods to assess the empirical adequacy of a New Keynesian Phillips Curve (NKPC) equation. We focus on the Gali and Gertlers (1999) specification, on both U.S. and Canadian data. Two variants of the model are studied: one based on a rationalexpectations assumption, and a modification to the latter which consists in using survey data on inflation expectations. The results based on these two specifications exhibit sharp differences concerning: (i) identification difficulties, (ii) backward-looking behavior, and (ii) the frequency of price adjustments. Overall, we find that there is some support for the hybrid NKPC for the U.S., whereas the model is not suited to Canada. Our findings underscore the need for employing identificationrobust inference methods in the estimation of expectations-based dynamic macroeconomic relations.
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BACKGROUND: HIV-1 Vpu targets newly synthesized CD4 receptor for rapid degradation by a process reminiscent of endoplasmic reticulum (ER)-associated protein degradation (ERAD). Vpu is thought to act as an adaptor protein, connecting CD4 to the ubiquitin (Ub)-proteasome degradative system through an interaction with beta-TrCP, a component of the SCFbeta-TrCP E3 Ub ligase complex. RESULTS: Here, we provide direct evidence indicating that Vpu promotes trans-ubiquitination of CD4 through recruitment of SCFbeta-TrCP in human cells. To examine whether Ub conjugation occurs on the cytosolic tail of CD4, we substituted all four Ub acceptor lysine residues for arginines. Replacement of cytosolic lysine residues reduced but did not prevent Vpu-mediated CD4 degradation and ubiquitination, suggesting that Vpu-mediated CD4 degradation is not entirely dependent on the ubiquitination of cytosolic lysines and as such might also involve ubiquitination of other sites. Cell fractionation studies revealed that Vpu enhanced the levels of ubiquitinated forms of CD4 detected in association with not only the ER membrane but also the cytosol. Interestingly, significant amounts of membrane-associated ubiquitinated CD4 appeared to be fully dislocated since they could be recovered following sodium carbonate salt treatment. Finally, expression of a transdominant negative mutant of the AAA ATPase Cdc48/p97 involved in the extraction of ERAD substrates from the ER membrane inhibited Vpu-mediated CD4 degradation. CONCLUSION: Taken together, these results are consistent with a model whereby HIV-1 Vpu targets CD4 for degradation by an ERAD-like process involving most likely poly-ubiquitination of the CD4 cytosolic tail by SCFbeta-TrCP prior to dislocation of receptor molecules across the ER membrane by a process that depends on the AAA ATPase Cdc48/p97.
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Recent empirical evidence from vector autoregressions (VARs) suggests that public spending shocks increase (crowd in) private consumption. Standard general equilibrium models predict the opposite. We show that a standard real business cycle (RBC) model in which public spending is chosen optimally can rationalize the crowding-in effect documented in the VAR literature. When such a model is used as a data-generating process, a VAR estimated using the artificial data yields a positive consumption response to an increase in public spending, consistent with the empirical findings. This result holds regardless of whether private and public purchases are complements or substitutes.
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Trois protines de la famille TRIM (Motif TRIpartite), TIF1, (Transcriptional Intermediary Factor 1) et PML (ProMyelocytic Leukaemia), font lobjet de cette tude. TIF1 est connu comme un coactivateur des rcepteurs nuclaires et TIF1 comme le corpresseur universel des protines KRAB-multidoigt de zinc dont le prototype tudi ici est ZNF74. PML possde divers rles dont le plus caractris est celui dtre lorganisateur principal et essentiel des PML-NBs (PML-Nuclear Bodies), des macrostructures nuclaires trs dynamiques regroupant et coordonnant plus de 40 protines. Il est noter que la fonction de TIF1, et PML est rgule par une modification post-traductionnelle, la sumoylation, qui implique le couplage covalent de la petite protine SUMO (Small Ubiquitin like MOdifier) des lysines de ces trois protines cibles. Cette thse propose de dvelopper des mthodes utilisant le BRET (Bioluminescence Resonance Energy Transfert) afin de dtecter dans des cellules vivantes et en temps rel des interactions non-covalentes de protines nuclaires mais aussi leur couplage covalent SUMO. En effet, le BRET na jamais t explor jusqualors pour tudier les interactions non-covalentes et covalentes de protines nuclaires. Ltude de linteraction de protines transcriptionnellement actives est parfois difficile par des mthodes classiques du fait de leur grande propension agrger (famille TRIM) ou de leur association la matrice nuclaire (ZNF74). Lhomo et lhtrodimrisation de TIF1, ainsi que leur interaction avec ZNF74 sont ici testes sur des protines entires dans des cellules vivantes de mammifres rpondant aux rsultats conflictuels de la littrature et dmontrant que le BRET peut tre avantageusement utilis comme alternative aux essais plus classiques bass sur la transcription. Du fait de lhtrodimrisation confirme de TIF1 et , le premier article prsent ouvre la possibilit dune relation troite entre les rcepteurs nuclaires et les protines KRAB- multidoigt de zinc. Des tudes prcdentes ont dmontr que la sumoylation de PML est implique dans sa dgradation induite par lAs2O3 et dpendante de RNF4, une E3 ubiquitine ligase ayant pour substrat des chanes de SUMO (polySUMO). Dans le second article, grce au dveloppement dune nouvelle application du BRET pour la dtection dinteractions covalentes et non-covalentes avec SUMO (BRETSUMO), nous tablissons un nouveau lien entre la sumoylation de PML et sa dgradation. Nous confirmons que le recrutement de RNF4 dpend de SUMO mais dmontrons galement limplication du SBD (Sumo Binding Domain) de PML dans sa dgradation induite par lAs2O3 et/ou RNF4. De plus, nous dmontrons que des srines, au sein du SBD de PML, qui sont connues comme des cibles de phosphorylation par la voie de la kinase CK2, rgulent les interactions non-covalentes de ce SBD mettant en vidence, pour la premire fois, que les interactions avec un SBD peuvent dpendre dun vnement de phosphorylation (SBD phospho-switch). Nos rsultats nous amnent proposer lhypothse que le recrutement de PML sumoyl au niveau des PML-NBs via son SBD, favorise le recrutement dune autre activit E3 ubiquitine ligase, outre celle de RNF4, PML tant lui-mme un potentiel candidat. Ceci suggre lexistence dune nouvelle relation dynamique entre phosphorylation, sumoylation et ubiquitination de PML. Finalement, il est suggr que PML est dgrad par deux voies diffrentes dpendantes de lubiquitine et du protasome; la voie de CK2 et la voie de RNF4. Enfin une tude sur la sumoylation de TIF1 est galement prsente en annexe. Cette tude caractrise les 6 lysines cibles de SUMO sur TIF1 et dmontre que la sumoylation est ncessaire lactivit rpressive de TIF1 mais nest pas implique dans son homodimrisation ou son interaction avec la bote KRAB. La sumoylation est cependant ncessaire au recrutement dhistones dactylases, dpendante de son homodimrisation et de lintgrit du domaine PHD. Alors que lon ne connat pas de rgulateur physiologique de la sumoylation outre les enzymes directement impliques dans la machinerie de sumoylation, nous mettons en vidence que la sumoylation de TIF1 est positivement rgule par son interaction avec le domaine KRAB et suggrons que ces facteurs transcriptionnels recrutent TIF1 lADN au niveau de promoteur et augmentent son activit rpressive en favorisant sa sumoylation.
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In this paper, we study the macroeconomic implications of sectoral heterogeneity and, in particular, heterogeneity in price setting, through the lens of a highly disaggregated multi-sector model. The model incorporates several realistic features and is estimated using a mix of aggregate and sectoral U.S. data. The frequencies of price changes implied by our estimates are remarkably consistent with those reported in micro-based studies, especially for non-sale prices. The model is used to study (i) the contribution of sectoral characteristics to the observed cross sectional heterogeneity in sectoral output and inflation responses to a monetary policy shock, (ii) the implications of sectoral price rigidity for aggregate output and inflation dynamics and for cost pass-through, and (iii) the role of sectoral shocks in explaining sectoral prices and quantities.
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La chane invariante forme un complexe nonamrique avec les molcules classiques du CMH de classe II. HLA-DM et HLA-DO, des molcules non-classiques de classe II, sont aussi impliques dans la prsentation des peptides antigniques aux lymphocytes T. Ces molcules chaperones de la prsentation antignique modulent la capacit dune cellule prsenter des antignes par les molocules classiques du CMH de classe II. La rgulation transcriptionnelle des molcules chaperones, tout comme celle des autres molcules du CMH de classe II, est assure par le transactivateur CIITA. La molcule HLA-DR peut tre rgule ngativement de manire post-traductionnelle par ubiquitination grce lenzyme E3 ubiquitine ligase MARCH1. Celle-ci est induite par linterleukine-10 dans les monocytes. Lobjectif de ce projet tait de dterminer si lubiquitination par MARCH1 peut aussi rguler lexpression des molcules chaperones de la prsentation antignique. Les expriences furent ralises dans le contexte de co-transfections en cellules HEK293T. Lexpression des molcules fut value par immunomarquages et cytomtrie de flux. Il a t montr que lisoforme p33 de la chane invariante est rgul ngativement en prsence de MARCH1 partir de la surface cellulaire, causant ainsi sa dgradation. Tel que dmontr par lutilisation dun mutant dpourvu de queue cytoplasmique, cette dernire rgion nest pas indispensable ce phnomne. Une hypothse est quune molcule non-identifie, associe Ii, serait ubiquitine par MARCH1, lentranant dans sa rgulation ngative. Il fut dterminer que cette molcule ntait pas CXCR2, un rcepteur pouvant tre impliqu, avec la chane invariante et CD44, en tant que rcepteur de MIF (Macrophage Inhibitory Factor). Il fut aussi montr que HLA-DO peut tre cibl par MARCH1 mais ceci ne semble pas tre un phnomne dominant; lexpression des complexes DO/DM ntant pas affecte bien quils entrent en interaction avec MARCH1. Lexpression de HLA-DM nest pas affecte par MARCH1. Il na toutefois pas t dtermin hors de tout doute si MARCH1 peut modifier DM; des rsultats obtenus avec une queue cytoplasmique de DM possdant une lysine laissant suggrer quil est possible que MARCH1 interagisse avec DM. Dans lensemble, les travaux dmontrent que lubiquitination par MARCH1 joue un rle dans la rgulation post-transcriptionnelle de la chane invariante p33 mais pas HLA-DO et HLA-DM.
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Le virus de limmunodficience humaine de type 1 (VIH-1), lagent tiologique du SIDA, est un rtrovirus complexe arborant plusieurs protines accessoires : Nef, Vif, Vpr, et Vpu. Celles-ci sont impliques dans la modulation de la rplication virale, dans lvasion immunitaire et dans la progression de la pathogense du SIDA. Dans ce contexte, il a t dmontr que la protine virale R (Vpr) induit un arrt de cycle cellulaire en phase G2. Le mcanisme par lequel Vpr exerce cette fonction est lactivation, ATR (Ataxia telangiectasia and Rad3 related)-dpendante, du point de contrle de dommage lADN, mais les facteurs et mcanismes molculaires directement impliqus dans cette activit demeurent inconnus. Afin didentifier de nouveaux facteurs cellulaires interagissant avec Vpr, nous avons utilis une purification daffinit en tandem (TAP) pour isoler des complexes protiques natifs contenant Vpr. Nous avons dcouvert que Vpr sassociait avec CRL4A(VprBP), un complexe cellulaire dE3 ubiquitine ligase, comprenant les protines Cullin 4A, DDB1 (DNA damage-binding protein 1) et VprBP (Vpr-binding protein). Nos tudes ont mis en vidence que le recrutement de la E3 ligase par Vpr tait ncessaire mais non suffisant pour linduction de larrt de cycle cellulaire en G2, suggrant ainsi que des vnements additionnels seraient impliqus dans ce processus. cet gard, nous apportons des preuves directes que Vpr dtourne les fonctions de CRL4A(VprBP) pour induire la polyubiquitination de type K48 et la dgradation protosomale de protines cellulaires encore inconnues. Ces vnements dubiquitination induits par Vpr ont t dmontrs comme tant ncessaire lactivation dATR. Finalement, nous montrons que Vpr forme des foyers ancrs la chromatine co-localisant avec VprBP ainsi quavec des facteurs impliqus dans la rparation de lADN. La formation de ces foyers reprsente un vnement essentiel et prcoce dans linduction de larrt de cycle cellulaire en G2. Enfin, nous dmontrons que Vpr est capable de recruter CRL4A(VprBP) au niveau de la chromatine et nous apportons des preuves indiquant que le substrat inconnu cibl par Vpr est une protine associe la chromatine. Globalement, nos rsultats rvlent certains des mnanismes par lesquels Vpr induit des perturbations du cycle cellulaire. En outre, cette tude contribue notre comprhension de la modulation du systme ubiquitine-protasome par le VIH-1 et son implication fonctionnelle dans la manipulation de lenvironnement cellulaire de lhte.
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This paper reports graphical and statistical evidence that the inflation targeting regimes in Canada and the UK - but not in Australia, New Zealand, or Sweden - actually resemble price-level targeting. In particular, the price level closely tracks the path implied by the inflation target, and the time-series predictions of the "bygones-are-bygones" version of inflation targeting are rejected by the data in favor of those implied by price-level targeting. These results indicate heterogeneity in the actual application of inflation targeting across countries and, for Canada and the UK, imply that the characterization of inflation targeting as a policy where shocks are accommodated is at odds with the data. Moreover, up to extent that their current policies already resemble price-level targeting, the welfare gains of replacing inflation with (explicit) price-level targeting are likely to be small.
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We study the workings of the factor analysis of high-dimensional data using artificial series generated from a large, multi-sector dynamic stochastic general equilibrium (DSGE) model. The objective is to use the DSGE model as a laboratory that allow us to shed some light on the practical benefits and limitations of using factor analysis techniques on economic data. We explain in what sense the artificial data can be thought of having a factor structure, study the theoretical and finite sample properties of the principal components estimates of the factor space, investigate the substantive reason(s) for the good performance of diusion index forecasts, and assess the quality of the factor analysis of highly dissagregated data. In all our exercises, we explain the precise relationship between the factors and the basic macroeconomic shocks postulated by the model.
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HIV-1 viral protein R (Vpr) induces a cell cycle arrest at the G2/M phase by a mechanism involving the activation of the DNA damage sensor ATR. We and others recently showed that Vpr performs this function by subverting the activity of the DDB1-CUL4A (VPRBP) E3 ubiquitin ligase. Vpr could thus act as a connector between the E3 ligase and an unknown cellular factor whose ubiquitination would induce G2 arrest. While attractive, this model is solely based on the indirect observation that some mutants of Vpr retain their interaction with the E3 ligase but fail to induce G2 arrest. Using a tandem affinity purification approach, we observed that Vpr interacts with ubiquitinated cellular proteins and that this association requires the recruitment of an active E3 ligase given that depletion of VPRBP by RNA interference or overexpression of a dominant-negative mutant of CUL4A decreased this association. Importantly, G2-arrest-defective mutants of Vpr in the C-terminal putative substrate-interacting domain displayed decreased association with ubiquitinated proteins. We also found that inhibition of proteasomal activity increased this association and that the ubiquitin chains were at least in part constituted of classical K48 linkages. Interestingly, inhibition of K48 polyubiquitination specifically impaired Vpr-induced phosphorylation of H2AX, an early target of ATR, but did not affect UV-induced H2AX phosphorylation. Overall, our results provide direct evidence that association of Vpr with the DDB1-CUL4A (VPRBP) E3 ubiquitin ligase induces the K48-linked polyubiquitination of yet-unknown cellular proteins resulting in their proteasomal degradation and ultimately leading to activation of ATR and G2 arrest.
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Les systmes sensoriels encodent linformation sur notre environnement sous la forme dimpulsions lectriques qui se propagent dans des rseaux de neurones. lucider le code neuronal les principes par lesquels linformation est reprsente dans lactivit des neurones est une question fondamentale des neurosciences. Cette thse constitue de 3 tudes (E) sintresse deux types de codes, la synchronisation et ladaptation, dans les neurones du cortex visuel primaire (V1) du chat. Au niveau de V1, les neurones sont slectifs pour des proprits comme lorientation des contours, la direction et la vitesse du mouvement. Chaque neurone ayant une combinaison de proprits pour laquelle sa rponse est maximale, linformation se retrouve distribue dans diffrents neurones situs dans diverses colonnes et aires corticales. Un mcanisme potentiel pour relier lactivit de neurones rpondant des items eux-mmes relis (e.g. deux contours appartenant au mme objet) est la synchronisation de leur activit. Cependant, le type de relations potentiellement encodes par la synchronisation nest pas entirement clair (E1). Une autre stratgie de codage consiste en des changements transitoires des proprits de rponse des neurones en fonction de lenvironnement (adaptation). Cette plasticit est prsente chez le chat adulte, les neurones de V1 changeant dorientation prfre aprs exposition une orientation non prfre. Cependant, on ignore si des neurones spatialement proches exhibent une plasticit comparable (E2). Finalement, nous avons tudi la dynamique de la relation entre synchronisation et plasticit des proprits de rponse (E3). Rsultats principaux (E1) Nous avons montr que deux stimuli en mouvement soit convergent soit divergent licitent plus de synchronisation entre les neurones de V1 que deux stimuli avec la mme direction. La frquence de dcharge ntait en revanche pas diffrente en fonction du type de stimulus. Dans ce cas, la synchronisation semble coder pour la relation de cocircularit dont le mouvement convergent (centripte) et divergent (centrifuge) sont deux cas particuliers, et ainsi pourrait jouer un rle dans lintgration des contours. Cela indique que la synchronisation code pour une information qui nest pas prsente dans la frquence de dcharge des neurones. (E2) Aprs exposition une orientation non prfre, les neurones changent dorientation prfre dans la mme direction que leurs voisins dans 75% des cas. Plusieurs proprits de rponse des neurones de V1 dpendent de leur localisation dans la carte fonctionnelle corticale pour lorientation. Les comportements plus diversifis des 25% de neurones restants sont le fait de diffrences fonctionnelles que nous avons observ et qui suggrent une localisation corticale particulire, les singularits, tandis que la majorit des neurones semblent situs dans les domaines diso-orientation. (E3) Aprs adaptation, les paires de neurones dont les proprits de rponse deviennent plus similaires montrent une synchronisation accrue. Aprs rcupration, la synchronisation retourne son niveau initial. Par consquent, la synchronisation semble reflter de faon dynamique la similarit des proprits de rponse des neurones. Conclusions Cette thse contribue notre connaissance des capacits dadaptation de notre systme visuel un environnement changeant. Nous proposons galement des donnes originales lies au rle potentiel de la synchronisation. En particulier, la synchronisation semble capable de coder des relations entre objets similaires ou dissimilaires, suggrant lexistence dassembles neuronales superposes.
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Grce un grand nombre dtudes biochimiques, gntiques et structurales effectues dans les dernires annes, des avancements considrables ont t raliss et une nouvelle vision du processus par lequel la machinerie transcriptionnelle de lARN polymrase II (Pol II) dcode linformation gntique a merg. De nouveaux indices ont t apports sur la diversit des mcanismes de rgulation de la transcription, ainsi que sur le rle des facteurs gnraux de transcription (GTFs) dans cette diversification. Les travaux prsents dans cette thse amnent de nouvelles connaissances sur le rle des GTFs humains dans la rgulation des diffrentes tapes de la transcription. Dans la premire partie de la thse, nous avons analys la fonction de la Pol II et des GTFs humains, en examinant de faon systmatique leur localisation gnomique. Les patrons obtenus par immunoprcipitation de la chromatine (ChIP) des versions de GTFs portant une tiquette TAP (Tandem-Affinity Purification) indiquent de nouvelles fonctions in vivo pour certains composants de cette machinerie et pour des lments structuraux de la Pol II. Nos rsultats suggrent que TFIIF et lhtrodimre Rpb4Rpb7 ont une fonction spcifique pendant ltape dlongation transcriptionnelle in vivo. De plus, notre tude amne une premire image globale de la fonction des GTFs pendant la raction transcriptionnelle dans des cellules mammifres vivantes. Deuximement, nous avons identifi une nouvelle fonction de TFIIS dans la rgulation de CDK9, la sous-unit kinase du facteur P-TEFb (Positive Transcription Elongation Factor b). Nous avons identifi deux nouveaux partenaires dinteraction pour TFIIS, soit CDK9 et la E3 ubiquitine ligase UBR5. Nous montrons que UBR5 catalyse lubiquitination de CDK9 in vitro. De plus, la polyubiquitination de CDK9 dans des cellules humaines est dpendante de UBR5 et TFIIS. Nous montrons aussi que UBR5, CDK9 and TFIIS co-localisent le long du gne fibrinogen (FBG) et que la surexpression de TFIIS augmente les niveaux doccupation par CDK9 de rgions spcifiques de ce gne, de faon dpendante de UBR5. Nous proposons que TFIIS a une nouvelle fonction dans la transition entre les tapes dinitiation et dlongation transcriptionnelle, en rgulant la stabilit des complexes CDK9-Pol II pendant les tapes prcoces de la transcription.
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Rsum Langiogense est lun des processus les plus importants pour le maintien de lhomostasie de loxygne dans les tissus. Le facteur de croissance de lendothlium vasculaire, VEGF, joue un rle primordial dans la rponse angiognique. Ce facteur de croissance mne lactivation du rcepteur de type 2 du facteur de croissance de lendothlium vasculaire, VEGFR-2. Suite une activation du VEGFR-2, plusieurs cascades de signalisation sont actives dans les cellules endothliales. Afin dattnuer cette signalisation, le VEGFR-2 est multi-ubiquitin sur des rsidus lysine et de cette manire, il est amen aux voies de dgradation, principalement dans les lysosomes. Cette ubiquitination est induite par lassociation de lubiquitine ligase (E3) c-Cbl un rsidu tyrosine phosphoryl du domaine C-terminal du rcepteur. Dans cette tude, nous avons identifi la tyrosine 1319 comme tant ncessaire pour lassociation de c-Cbl au VEGFR-2 et son ubiquitination. Nos rsultats dmontrent aussi que dans des cellules endothliales aortiques bovines, BAEC, la surexpression du rcepteur mutant Y1319F ralentit la dgradation du VEGFR-2 et induit une activation plus forte et prolonge de la synthtase endothliale du monoxyde dazote (eNOS). Ces rsultats nous permettent de mieux comprendre le droulement de la rgulation de la signalisation du VEGFR-2 au niveau intracellulaire. Mots-cls: [Angiogense, VEGFR-2, VEGF, c-Cbl, Ubiquitination, Tyrosine 1319, Dgradation]
