SEA的基因克隆及高效表达工程菌的构建

Staphylococcal enterotoxin A(SEA）是由金黄色葡萄球菌分泌至胞外的一种单亚基蛋白质。它能与抗原递呈细胞上的MHC II受体结合，激发大量T细胞活化，释放多种细胞因子。正是由于SEA是一种强的T细胞激活剂，近年来，它在肿瘤的免疫治疗中显示出巨大的应用潜力。本文总结了国内外近十几年来在SEA治疗肿瘤方面的研究成果，指出，SEA靶向药物及低毒性SEA分子改造是SEA类药物研究的方向。利用PCR方法从金葡菌基因组DNA中扩增出seap基因（即SEA前体基因，含信号肤编码区），采用重叠PCR技术突变了694佩714碱基之间的所有稀有密码子，得到seap，。基因表达结果证实，改造seap基因中稀有密码子对提高基因表达水平非常有效。对seap基因中关键稀有密码子的突变在国内外尚属首次。以seapm为模板采用PCR方法扩增出seam (SEA成熟蛋白基因）。自行设计，自行构建成功一个新型原核表达载体7ZTS。它具有克隆，测序和表达在同一载体上进行，并可依据蓝白反应挑选重组子的特征。7ZTS表达载体将多种功能集于一体的独特优点是目前已知表达载体所不具备的，其大大简化了分子生物学操作步骤，提高了工作效率。利用7ZTS表达载体，在大肠杆菌JM109（DE3)中表达了mseap和seam基因。前者以包含体形式表达出SEA前体蛋白，后者以包含体和可溶性两种形式存在。通过均匀设计方法，摸索出'0sea基因表达的最佳条件为：诱导前生物量ODEo。为0. 8，装液量为28%，诱导温度为37'C，诱导时间为8小时。在此条件下，SEA表达量占细胞总蛋白的37%，可溶性SEA约占70%o SEA如此高效的表达为国内一外首次报道。质粒稳定性实验表明，7ZTS一msea重组质粒具有极好的稳定性，连续培养72小时或IPTG诱导48小时后，质粒基本不丢失。以上实验结果为SEA的大规模制备和SEA导向药物的研究开发奠定了基础。

产SEB金黄色葡萄球菌α-溶血毒素基因缺失菌株的构建

构建产肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)的金黄色葡萄球菌α-溶血毒素(α-hemolysin,α-HL)缺失菌株。首先构建用于α-HL基因敲除的同源重组质粒pMHL-α,经金黄色葡萄球菌RN4220修饰后再通过原生质体转入金黄色葡萄球菌SM-01。含重组质粒pMHL-α的金黄色葡萄球菌SM-01在42℃诱导条件下培养多代,最终筛选出α-溶血毒素基因缺失菌株。经序列分析和血平板溶血实验结果证明最终获得产SEB金黄色葡萄球菌α-HL缺失菌株。为野生型金黄色葡萄球菌的体内遗传操作及构建产超抗原药物金黄色葡萄球菌基因工程菌株提供了一定的理论基础和方法。

Detection of Emerging and Re-Emerging Pathogens in Surface Waters Close to an Urban Area

Current knowledge about the spread of pathogens in aquatic environments is scarce probably because bacteria, viruses, algae and their toxins tend to occur at low concentrations in water, making them very difficult to measure directly. The purpose of this study was the development and validation of tools to detect pathogens in freshwater systems close to an urban area. In order to evaluate anthropogenic impacts on water microbiological quality, a phylogenetic microarray was developed in the context of the EU project µAQUA to detect simultaneously numerous pathogens and applied to samples from two different locations close to an urban area located upstream and downstream of Rome in the Tiber River. Furthermore, human enteric viruses were also detected. Fifty liters of water were collected and concentrated using a hollow-fiber ultrafiltration approach. The resultant concentrate was further size-fractionated through a series of decreasing pore size filters. RNA was extracted from pooled filters and hybridized to the newly designed microarray to detect pathogenic bacteria, protozoa and toxic cyanobacteria. Diatoms as indicators of the water quality status, were also included in the microarray to evaluate water quality. The microarray results gave positive signals for bacteria, diatoms, cyanobacteria and protozoa. Cross validation of the microarray was performed using standard microbiological methods for the bacteria. The presence of oral-fecal transmitted human enteric-viruses were detected using q-PCR. Significant concentrations of Salmonella, Clostridium, Campylobacter and Staphylococcus as well as Hepatitis E Virus (HEV), noroviruses GI (NoGGI) and GII (NoGII) and human adenovirus 41 (ADV 41) were found in the Mezzocammino site, whereas lower concentrations of other bacteria and only the ADV41 virus was recovered at the Castel Giubileo site. This study revealed that the pollution level in the Tiber River was considerably higher downstream rather than upstream of Rome and the downstream location was contaminated by emerging and re-emerging pathogens.

A microbiological survey of a constructed wetland system supplied by dairy 'dirty water' effluent

A constructed wetland at Greenmount College, Co. Antrim, N. Ireland was built in 2004 to study the treatment of ‘dirty water’ effluent from the Greenmount dairy unit. The effluent has a mean BOD5 of c.1000 mg/L and contains milking parlour wash-water and runoff from silage clamps and yard areas lightly contaminated with cattle manure. The nominal water retention time of this wetland is 100 days. The primary purposes of the wetland are to eliminate organic pollution and eutrophication risk from nitrogen and phosphorus compounds. However the wetland should also effectively remove any zoonotic pathogens present in manure and milk. Accordingly, a 12-month microbiological survey of water in the five ponds of the wetland commenced in August 2007. The aims of the survey are to determine changes, as effluent passes through the wetland system, in a broad range of indicator organisms (faecal coliforms, Escherichia coli, Enterococcus faecalis and Clostridium perfringens) and the occurrence of several pathogens - Salmonella, Campylobacter, Cryptosporidium and Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). The highest indicator organism counts - E. coli and faecal coliforms, 103-104 CFU/ml - are observed in pond 1, and a significant reduction (1-3 log10) in all indicator organisms occurs as water passes through the wetland from pond 1 to pond 5. Hence the wetland is efficient at reducing levels of indicator organisms in the dairy effluent. Salmonella and Campylobacter spp. are being detected intermittently in all the ponds, whilst Cryptosporidium and Map have yet to be detected, and so the ability of the wetland to reduce/eliminate specific pathogens is less clear at present.

Bead array for Listeria monocytogenes detection using specific monoclonal antibodies

To develop a detection method for human pathogenic Listeria monocytogenes, novel specific antibodies were obtained from hybridoma libraries generated by using formalin-killed and heat-killed L. monocytogenes as immunogens. Several monoclonal antibodies found to be specific to Listeria spp or L. monocytogenes were evaluated for their applicability as binders for bead array and sandwichELISA for detection of L. monocytogenes in buffer and in 11 different food types. The bead array format consistently demonstrated lower detection limits and was less affected by interference from food matrices than the sandwich ELISA format. However, the obtained detection limits were not sufficient to satisfy the required standard for L. monocytogenes testing. Therefore, the international organizationfor standardization (ISO 11290-1:1996) methods for pre-enrichment and enrichment were employed to increase the bacteria numbers. When compared to the standard plating method, the bead array was able to detect the bacteria with the same accuracy even at the 1 CFU level after only 24 hours of the enrichment period. In addition, Listeria-specific 3C3 and L. monocytogenes-specific 7G4 antibodies were successfully employed to construct a multiplex detection for Listeria, Salmonella and Campylobacter in a bead array format by combining with commercial Salmonella-specific and available Campylobacter-specific antibodies.

ArnT proteins that catalyse the glycosylation of lipopolysaccharide share common features with bacterial N-oligosaccharyltransferases

ArnT is a glycosyltransferase that catalyses the addition of 4-amino-4-deoxy-L-arabinose (L-Ara4N) to the lipid A moiety of the lipopolysaccharide. This is a critical modification enabling bacteria to resist killing by antimicrobial peptides. ArnT is an integral inner membrane protein consisting of 13 predicted transmembrane helices and a large periplasmic C-terminal domain. We report here the identification of a functional motif with a canonical consensus sequence DEXRYAX(5)MX(3)GXWX(9)YFEKPX(4)W spanning the first periplasmic loop, which is highly conserved in all ArnT proteins examined. Site-directed mutagenesis demonstrated the contribution of this motif in ArnT function, suggesting that these proteins have a common mechanism. We also demonstrate that the Burkholderia cenocepacia and Salmonella enterica serovar Typhimurium ArnT C-terminal domain is required for polymyxin B resistance in vivo. Deletion of the C-terminal domain in B. cenocepacia ArnT resulted in a protein with significantly reduced in vitro binding to a lipid A fluorescent substrate and unable to catalyse lipid A modification with L-Ara4N. An in silico predicted structural model of ArnT strongly resembled the tertiary structure of Campylobacter lari PglB, a bacterial oligosaccharyltransferase involved in protein N-glycosylation. Therefore, distantly related oligosaccharyltransferases from ArnT and PglB families operating on lipid and polypeptide substrates, respectively, share unexpected structural similarity that could not be predicted from direct amino acid sequence comparisons. We propose that lipid A and protein glycosylation enzymes share a conserved catalytic mechanism despite their evolutionary divergence.

Campilobacteriose em bovinos de carne no Alentejo – avaliação preliminar

The aim of this study was to assess the prevalence of infection by Campylobacter fetus in beef cattle reared in extensive systems in Alentejo region by direct fluorescent antibody test (DFAT), a technique widely used for determining the prevalence of this disease.

Effect of photodynamic therapy on the virulence factors of Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus are Gram-positive bacteria who integrate the human microbiota. Nevertheless, these bacteria can be pathogenic to the humans. Due to the increasing occurrence of antibiotic-resistant S. aureus new approaches to control this pathogen are necessary. The antimicrobial photodynamic inactivation process (PDI) is based in the combined use of a light source, an oxidizing agent like oxygen and an intermediary agent (a photosensitizer). These three components interact to form cytotoxic reactive oxygen species that irreversibly damage vital constituents of the microbial cells and ultimately lead to cell death. In fact, PDI is being shown to be a promising alternative to the antibiotic approach in the inactivation of pathogenic microorganisms. However, information on effects of photosensitization on particular virulence factors is strikingly scarce. The objective of this work was to evaluate the effect of PDI on virulence factors of S. aureus. For this, as photosensitizer the 5,10,15,20-tetrakis(1-methylpyridinium-4-yl)porphyrin tetra-iodide (Tetra-Py+-Me) and six strains of S. aureus (one reference strain, one strain with 1 enterotoxin, two strains with 3 enterotoxins and two strains resistant to methicillin, MRSA – one with 5 enterotoxins and the other without enterotoxins) were used. The effect of photosensitization on catalase activity, beta hemolysis, lipases, thermonuclease, enterotoxins, coagulase production and resistance to methicillin was assessed. The results indicate that the expression of some virulence factors in the cells subjected to this therapy is affected. Additionally the susceptibility of the strains to PDI did not decrease upon successive treatments.

Electrochemical immunosensor for multiplexed detection of food-borne pathogens using nanocrystal bioconjugates and MWCNT screen-printed electrode

Bacterial food poisoning is an ever-present threat that can be prevented with proper care and handling of food products. A disposable electrochemical immunosensor for the simultaneous measurements of common food pathogenic bacteria namely Escherichia coli O157:H7 (E. coli), campylobacter and salmonella were developed. The immunosensor was fabricated by immobilizing the mixture of anti-E. coli, anticampylobacter and anti-salmonella antibodies with a ratio of 1:1:1 on the surface of the multiwall carbon nanotube-polyallylamine modified screen printed electrode (MWCNT-PAH/SPE). Bacteria suspension became attached to the immobilized antibodies when the immunosensor was incubated in liquid samples. The sandwich immunoassay was performed with three antibodies conjugated with specific nanocrystal ( -E. coli-CdS, -campylobacter-PbS and -salmonella-CuS) which has releasable metal ions for electrochemical measurements. The square wave anodic stripping voltammetry (SWASV) was employed to measure released metal ions from bound antibody nanocrystal conjugates. The calibration curves for three selected bacteria were found in the range of 1 × 103 – 5 × 105 cells mL−1 with the limit of detection (LOD) 400 cells mL−1 for salmonella, 400 cells mL−1 for campylobacter and 800 cells mL−1 for E. coli. The precision and sensitivity of this method show the feasibility of multiplexed determination of bacteria in milk samples.

Étude d'un variant de la toxine STb produite par Escherichia coli

Les E. coli entérotoxinogènes (ETEC) sont souvent la cause de diarrhée post-sevrage chez le porc. Deux types d’entérotoxines sont retrouvées chez les ETEC, soit les thermolabiles, comme la toxine LT, et les thermostables, comme EAST-1, STa et STb. Cette dernière est composée de 48 acides aminés et est impliquée dans la pathologie causée par les ETEC. Pour la première fois un variant de la toxine STb fut découvert dans une étude. Nous avons alors émis l’hypothèse qu’il y a présence de variants dans la population de souches ETEC du Québec. Dans les 100 souches STb+ analysées, 23 possédaient le gène de la toxine avec une variation dans la séquence génétique : l’asparagine était présente en position 12 remplaçant ainsi l’histidine. Une corrélation entre la présence du variant et la présence de facteurs de virulence retrouvés dans ces 100 souches ETEC étudiées a été effectuée. Ce variant semble fortement associé à la toxine STa puisque toutes les souches variantes ont hybridé avec le gène codant pour cette dernière. Étant donné sa présence répandue dans la population de souches ETEC du Québec, nous avons de plus émis l’hypothèse que ce variant a des caractéristiques biologiques altérées par rapport à la toxine sauvage. L’analyse par dichroïsme circulaire a montré que le variant et la toxine sauvage ont une structure secondaire ainsi qu’une stabilité similaires. Par la suite, l’attachement au récepteur de la toxine, le sulfatide, a été étudié par résonnance plasmonique de surface (biacore). Le variant a une affinité au sulfatide légèrement réduite comparativement à la toxine sauvage. Puisque l’internalisation de la toxine fut observée dans une étude précédente et qu’elle semble liée à la toxicité, nous avons comparé l’internalisation du variant et de la toxine sauvage à l’intérieur des cellules IPEC-J2. L’internalisation du variant dans les cellules est légèrement supérieure à l’internalisation de la toxine sauvage. Ces résultats suggèrent que le variant est biochimiquement et structurellement comparable à la toxine sauvage.

Étude des voies d’internalisation de l’entérotoxine STb d’Escherichia coli dans des lignées cellulaires

L’entérotoxine stable à la chaleur STb est produite par les Escherichia coli entérotoxinogènes (ETEC). Son rôle dans la diarrhée post-sevrage porcine est établi. L’internalisation de STb a été observée dans des cellules épithéliales intestinales humaines et de rat. Cependant, le mécanisme d’internalisation n’est pas totalement compris, particulièrement dans le jéjunum porcin, la cible in vivo de STb. Par la cytométrie en flux, nous avons examiné l’internalisation de STb couplée à un marqueur fluorescent dans les cellules épithéliales intestinales porcines IPEC-J2 et les fibroblastes murins NIH3T3. Nos résultats révèlent que l’internalisation de STb est températureindépendante dans les IPEC-J2 tandis qu’elle est température-dépendante dans les NIH3T3, où la réorganisation de l’actine est aussi nécessaire. Toutefois, les niveaux de sulfatide, le récepteur de STb, sont semblables à la surface des deux lignées. Le sulfatide est internalisé à 37°C de façon similaire entre les deux types cellulaires. La rupture des lipid rafts, les microdomaines membranaires contenant le sulfatide, par la méthyl-βcyclodextrine ou la génistéine, n’affecte pas l’internalisation de STb dans les deux lignées. Notre étude indique que le mécanisme d’internalisation de STb est dépendant du type cellulaire. L’activité de la cellule hôte peut être requise ou non. Le récepteur de STb, le sulfatide, n’est pas directement impliqué dans ces mécanismes. L’internalisation activité cellulaire-dépendante suggère une endocytose, nécessitant la réorganisation de l’actine mais pas les lipid rafts. L’internalisation de STb est donc un processus complexe dépendant du type cellulaire, qu’il apparait plus relevant d’étudier dans des modèles cellulaires représentatifs des conditions in vivo.

Épidémiologie spatiale de la campylobactériose au Québec

La campylobactériose représente la principale cause de gastro-entérite bactérienne dans les pays industrialisés. L’épidémiologie de la maladie est complexe, impliquant plusieurs sources et voies de transmission. L’objectif principal de ce projet était d’étudier les facteurs environnementaux impliqués dans le risque de campylobactériose et les aspects méthodologiques pertinents à cette problématique à partir des cas humains déclarés au Québec (Canada) entre 1996 et 2006. Un schéma conceptuel des sources et voies de transmission de Campylobacter a d’abord été proposé suivant une synthèse des connaissances épidémiologiques tirées d’une revue de littérature extensive. Le risque d’une récurrence de campylobactériose a ensuite été décrit selon les caractéristiques des patients à partir de tables de survie et de modèles de régression logistique. Comparativement au risque de campylobactériose dans la population générale, le risque d’un épisode récurrent était plus élevé pour les quatre années suivant un épisode. Ce risque était similaire entre les genres, mais plus élevé pour les personnes de régions rurales et plus faible pour les enfants de moins de quatre ans. Ces résultats suggèrent une absence d’immunité durable ou de résilience clinique suivant un épisode déclaré et/ou une ré-exposition périodique. L’objectif suivant portait sur le choix de l’unité géographique dans les études écologiques. Neuf critères mesurables ont été proposés, couvrant la pertinence biologique, la communicabilité, l’accès aux données, la distribution des variables d’exposition, des cas et de la population, ainsi que la forme de l’unité. Ces critères ont été appliqués à des unités géographiques dérivées de cadre administratif, sanitaire ou naturel. La municipalité affichait la meilleure performance, étant donné les objectifs spécifiques considérés. Les associations entre l’incidence de campylobactériose et diverses variables (densité de volailles, densité de ruminants, abattoirs, température, précipitations, densité de population, pourcentage de diplomation) ont ensuite été comparées pour sept unités géographiques différentes en utilisant des modèles conditionnels autorégressifs. Le nombre de variables statistiquement significatives variait selon le degré d’agrégation, mais la direction des associations était constante. Les unités plus agrégées tendaient à démontrer des forces d’association plus élevées, mais plus variables, à l’exception de l’abattoir. Cette étude a souligné l’importance du choix de l’unité géographique d’analyse lors d’une utilisation d’un devis d’étude écologique. Finalement, les associations entre l’incidence de campylobactériose et des caractéristiques environnementales ont été décrites selon quatre groupes d’âge et deux périodes saisonnières d’après une étude écologique. Un modèle de Poisson multi-niveau a été utilisé pour la modélisation, avec la municipalité comme unité. Une densité de ruminant élevée était positivement associée avec l’incidence de campylobactériose, avec une force d’association diminuant selon l’âge. Une densité de volailles élevée et la présence d’un abattoir de volailles à fort volume d’abattage étaient également associées à une incidence plus élevée, mais seulement pour les personnes de 16 à 34 ans. Des associations ont également été détectées avec la densité de population et les précipitations. À l’exception de la densité de population, les associations étaient constantes entre les périodes saisonnières. Un contact étroit avec les animaux de ferme explique le plus vraisemblablement les associations trouvées. La spécificité d’âge et de saison devrait être considérée dans les études futures sur la campylobactériose et dans l’élaboration de mesures préventives.

Caractérisation de l'activité biologique de l'entérotoxine STb d'Escherichia coli à l'aide de membranes lipidiques artificielles et de cellules en culture

Thèse numérisée par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal

Étude descriptive de la consommation et de la contamination bactérienne de gibier en zone urbaine au Gabon

Une exposition aux viandes comporte un risque pour la santé, et les maladies transmises par ces viandes causent un fardeau important mondialement. En Afrique centrale, le gibier est une viande communément consommée en zone urbaine. L’absence d’information sur le niveau de consommation de gibier, ainsi que sur sa contamination, limite l’évaluation des risques sanitaires associés au gibier. Une étude transversale a visé la description du niveau de consommation des viandes parmi 205 ménages de Port-Gentil (Gabon), ainsi que certains déterminants de la consommation de ces viandes. Une seconde étude transversale a quantifié la contamination musculaire de gibier vendu à Port-Gentil par Salmonella, Campylobacter et Shigella. Sur une base de trois jours, 86% des ménages ont consommé de la volaille, 84% du poisson, 44% du bœuf, 25% du porc et 24% du gibier. La consommation de gibier fut plus fréquente le dimanche et parmi les ménages à revenu élevé. Le gibier fut principalement acquis en carcasse entière sans conservation particulière, mais toujours consommé bouilli. Des trois bactéries ciblées, seule Salmonella a été isolée parmi un de 128 échantillons de gibier. Ces études fournissent des informations utiles pour mieux comprendre les facteurs de risque pour la santé associés à la consommation de viandes au Gabon. Des études sur la contamination des viandes, notamment celles des carcasses de gibier, seront nécessaires pour mieux apprécier les risques spécifiques à chaque différente bactérie pathogène.

Rôle de l'autophagie dans la dissémination du VIH-1 par les cellules dendritiques dérivées des monocytes circulants

Les cellules myéloïdes incluant les monocytes, les macrophages et les cellules dendritiques (DCs, dendritic cells) contribuent à la pathogénèse de l’infection à VIH-1 en participant à la dissémination du virus, mais également en représentant des réservoirs viraux potentiels. Leurs fonctions sont exploitées par le VIH-1 afin d’assurer sa propagation à travers l’organisme. Notamment, une infection à VIH-1 est associée à une altération de la présentation antigénique et la perte de lymphocytes T CD4+ spécifiques à des antigènes. L’autophagie est un processus catabolique universel impliqué dans la régulation de la présentation antigénique subséquente à la neutralisation/destruction du pathogène. Des études récentes suggèrent que le VIH-1 altère le mécanisme d’autophagie afin d’assurer sa survie. Le premier volet de ce projet de maîtrise a visé la caractérisation des effets du VIH-1 sur l’autophagie dans les DCs dérivées de monocytes circulants (MDDC, monocyte-derived dendritic cells) et l’identification des stratégies thérapeutiques pour contrecarrer ces effets. Les objectifs spécifiques ont été de : (i) caractériser l’expression de marqueurs de maturation sur des MDDC exposées au VIH-1 in vitro, (ii) quantifier l’expression des protéines liées à la régulation positive (i.e., ATG5, LC3, p62) et négative (i.e., mTOR) de l’autophagie dans les MDDC exposées au VIH, (iii) déterminer le rôle de l’autophagie dans la trans infection du VIH-1 aux lymphocytes T CD4+ et (iv) explorer l’impact de l’autophagie sur la présentation antigénique par les MDDC infectées à VIH-1 in vitro. Nos résultats démontrent qu’une exposition des MDDC au VIH-1 in vitro altère dramatiquement leur maturation et leur habileté à induire la prolifération des cellules T autologues en réponse à Staphylococcus aureus et Cytomegalovirus (CMV) mais pas la réponse induite par Staphylococcal enterotoxin B (SEB). Nous démontrons que l’exposition des MDDC au VIH s’associe à une augmentation de l’expression de la protéine mTOR totale et de sa forme phosphorylée (phospho-mTOR) et de la protéine p62. Le traitement des MDDC à la rapamycine diminue l’expression de mTOR et réduit la capacité de trans infection du VIH-1 par les MDDC, sans toutefois restaurer leur potentiel immunogène. En effet, nous observons que la rapamycine réduit l’expression de CD83 par les MDDC et augmente l’expression de CCR7, indiquant ainsi que l’effet immunosuppresseur documenté de la rapamycine est associé à une défaillance de maturation des MDDC. Le second volet de ce projet de recherche s’est intéressé à la contribution des cellules myéloïdes à la persistance virale chez les sujets infectés par le VIH-1 sous thérapie antirétrovirale. Les objectifs spécifiques ont été : (i) d’évaluer la présence de différentes formes d’ADN viral dans les monocytes circulants de patients infectés par le VIH-1 et (ii) de mesurer l’intégration et la réplication virale dans des macrophages dérivés de monocytes (MDM) de patients infectés sous ART. Nos résultats indiquent que les monocytes portent des formes précoces de transcription virale inverse (ADN du VIH RU5) et que, malgré une charge virale plasmatique indétectable sous ART, les MDM supportent la réplication virale. Ces données très préliminaires apportent des évidences en faveur de la contribution des cellules myéloïdes à la persistance virale sous ART et représentent une ouverture pour un projet de recherche plus complexe dans le futur. En somme, nos résultats démontrent que le VIH-1 altère le potentiel immunogène des MDDC et que la rapamycine peut être employée pour limiter la trans infection des lymphocytes T CD4+ par les MDDC. Néanmoins, l’incapacité de la rapamycine à rétablir le potentiel immunogène des MDDC incite à identifier de nouvelles stratégies manipulant l’autophagie pour une restauration optimale de la compétence immunitaire chez les sujets infectés à VIH-1. Les cellules myéloïdes jouent un rôle primordial dans la dissémination et la persistance virale et doivent donc être ciblées par les stratégies actuelles d’éradication des réservoirs du VIH sous ART.