Expression, Purification, Bioactivity, and Partial Characterization of a Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-7 Produced in Human 293T Cells

Bone morphogenetic protein-7 (BMP-7) is a secreted multifunctional growth factor of the TGF-beta superfamily, which is predominantly known for its osteoinductive properties and emerging potential for treatment of kidney diseases. The mature 34-38 kDa disulfide-linked homodimer protein plays a key role in the differentiation of mesenchymal cells into bone and cartilage. In this study, the full-length sequence of hBMP-7 was amplified and, then, cloned, expressed, and purified from the conditioned medium of 293T cells stably transfected with a lentiviral vector. The mature protein dimer form was properly secreted and recognized by anti-BMP-7 antibodies, and the protein was shown to be glycosilated by treatment with exoglycosidase, followed by western blotting. Moreover, the activity of the purified protein was demonstrated both in vitro, by alkaline phosphatase activity in C2C12 cells, and in vivo by induction of ectopic bone formation in Balb/c Nude mice after 21 days, respectively. This recombinant protein platform may be very useful for expression of different human cytokines and other proteins for medical applications.

Development of secondary palate requires strict regulation of ECM remodeling: sequential distribution of RECK, MMP-2, MMP-3, and MMP-9

We have evaluated RECK (reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs), MMP-2 (matrix metalloproteinase-2), MMP-3, and MMP-9 involvement during palate development in mice by using various techniques. Immunohistochemical features revealed the distribution of RECK, MMP-2, and MMP-3 in the mesenchymal tissue and in the midline epithelial seam at embryonic day 13 (E13), MMPs-2, -3, and -9 being particularly expressed at E14 and E14.5. In contrast, RECK was weakly immunostained at these times. Involvement of MMPs was validated by measuring not only their protein expression, but also their activity (zymograms). In situ hybridization signal (ISH) for RECK transcript was distributed in mesenchymal and epithelial regions within palatal shelves at all periods evaluated. Importantly, the results from ISH analysis were in accord with those obtained by real-time polymerase chain reaction. The expression of RECK was found to be temporally regulated, which suggested possible roles in palatal ontogeny. Taken together, our results clearly show that remodeling of the extracellular matrix is finely modulated during secondary palate development and occurs in a sequential manner.

Movimento dos sentidos : o discurso do jornal Zero Hora sobre o Partido dos Trabalhadores, durante a Comissão Parlamentar de Inquérito da Segurança Pública, realizada pela Assembléia Legislativa do Rio Grande do Sul, em 2001

Esta pesquisa de mestrado analisa o discurso do jornal Zero Hora sobre o Partido dos Trabalhadores, durante a Comissão Parlamentar de Inquérito da Segurança Pública, realizada pela Assembléia Legislativa do Rio Grande do Sul, de 18 de abril a 10 de novembro de 2001. Para compreender o funcionamento destes discursos nos amparamos em fundamentos teóricos e em procedimentos metodológicos consagrados pela Escola Francesa da Análise do Discurso e, também, nos cercamos de conceitos de comunicação, política e jornalismo. 7 RESUMO Construímos o corpus de nossa pesquisa, partindo das 48 edições do jornal Zero Hora subseqüentes às audiências da Comissão Parlamentar de Inquérito e mais a edição relativa à leitura do relatório final dos trabalhos desta Comissão, totalizando 49 exemplares, nas quais foram publicadas 110 matérias informativas sobre a Comissão Parlamentar de Inquérito. Deste total, subdividimos e classificamos as matérias exclusivas sobre o Partido dos Trabalhadores. Verificamos que o jornal Zero Hora, no período estudado, construiu um discurso de resistência e de oposição ao Partido dos Trabalhadores e ao poder político instituído no Estado, visando desestabilizar o capital simbólico deste partido - a sua credibilidade. Articulado com veículos da RBS, o jornal interferiu na pauta da CPI da Segurança Pública, fiscalizou as ações do PT, sugeriu rumos ao partido e usou ironias da oposição, no seu discurso jornalístico. A repetição e a disputa política pelas eleições de 2002 também estiveram presentes na discursividade do jornal. Partimos da perspectiva de que o discurso jornalístico não é um discurso da realidade, mas um discurso sobre a realidade. Assim, contestamos o mito da objetividade jornalística, embora esta visão ainda domine no campo da comunicação. E nos contrapomos ao argumento da neutralidade no discurso do jornal Zero Hora, utilizando o paradigma de Gaye Tuchman, segundo o qual os jornais e os jornalistas, em busca da imparcialidade jornalística, recorrem a determinados rituais estratégicos para se protegerem das críticas - como ouvir os dois lados, apresentar provas complementares, usar aspas e a pirâmide invertida, na elaboração das matérias jornalísticas. Identificamos no discurso do jornal Zero Hora sobre o Partido dos Trabalhadores, no período estudado, a existência de pelo menos duas formações discursivas: uma FD-petista e outra FD-antipetista, que em alguns momentos aparecem isoladas e, em outros se misturam e se mesclam. As principais marcas observadas em ambas linhas discursivas são relativas à ética e à democracia. Embora os enunciadores tenham sido múltiplos, o fio condutor destes discursos apontou para uma mesma direção de sentidos e a FD-antipetista se revelou com uma presença mais marcante.

Estruturação de um sistema de medidas de desempenho : um estudo de múltiplos casos em empresas do setor de distribuição

A mensuração do desempenho organizacional é um assunto que tem sido muito estudado nos anos mais recentes, sendo esta uma preocupação tanto acadêmica quanto dos executivos de negócio. Foram feitos diversos estudos sobre o tema, uma vez que tais estudos foram elaborados obedecendo aos critérios exigidos no contexto. Desta forma, a presente pesquisa buscou encontrar elementos de apoio à estruturação de um Sistema de Medidas de Desempenho que seja reconhecido como de vital importância enquanto ferramenta auxiliar para a tomada de decisões. Estes elementos surgiram através da análise do processo de planejamento estratégico, uma vez que é a partir deste processo que se baseia a estruturação do sistema. Através do método de estudo de múltiplos casos, a presente pesquisa estudou duas empresas do setor de distribuição. A primeira destas estava em uma etapa inicial do processo de estruturação, onde, durante esta formulação, predomina o empirismo; e a segunda, em sua etapa final, o que permitiu a realização da pesquisa com uma visão deste processo de estruturação em suas diferentes etapas. Os resultados da pesquisa trazem à luz a relevância dos elementos culturais e ambientais para a estruturação de um Sistema de Medidas de Desempenho. Do mesmo modo, estes resultados destacam a importância de se executar os princípios de gestão estratégica durante a operacionalização deste sistema. Como produto final desta pesquisa, é apresentado um modelo de estruturação de um Sistema de Medidas de Desempenho para empresas do setor de distribuição, cujos principais elementos são os de Política e Cultura Organizacional, de Ambientes Externo e Interno, de Estratégia, de Objetivos Estratégicos e de Princípios de Gestão.

Gene discovery in Boophilus microplus, the cattle tick - the transcriptomes of ovaries, salivary glands, and hemocytes

The quest for new control strategies for ticks can profit from high throughput genomics. In order to identify genes that are involved in oogenesis and development, in defense, and in hematophagy, the transcriptomes of ovaries, hemocytes, and salivary glands from rapidly ingurgitating females, and of salivary glands from males of Boophilus microplus were PCR amplified, and the expressed sequence tags (EST) of random clones were mass sequenced. So far, more than 1,344 EST have been generated for these tissues, with approximately 30% novelty, depending on the the tissue studied. To date approximately 760 nucleotide sequences from B. microplus are deposited in the NCBI database. Mass sequencing of partial cDNAs of parasite genes can build up this scant database and rapidly generate a large quantity of useful information about potential targets for immunobiological or chemical control.

Anesthesia of fish with benzocaine does not interfere with comet assay results

Fish blood erythrocytes are frequently used as sentinels in biomonitoring studies. Usually, fish blood is collected by painful cardiac or caudal vein punctures. Previous anesthesia could decrease animal suffering but it is not known at present whether anesthesia can cause confounding effects. Therefore, using the alkaline single cell gel (SCG)/comet assay with blood erythrocytes of the cichlid fish Nile tilapia, we tested for a possible modulation of induced DNA damage (methyl methanesulfonate; MMS) by the anesthetic benzocaine administered by bath exposure (80mg/l for ∼10min). Furthermore, benzocaine (80-600mg/l) was tested for its genotoxic potential on fish erythrocytes in vitro and for potential interactions with two known genotoxins (MMS and hydrogen peroxide). Our results did neither indicate a significant increase in the amount of DNA damage (even after a 48h follow-up), nor indicated interactions with MMS-induced DNA damage when fish were exposed to benzocaine in vivo. There was also no increase in DNA damage after in vitro exposure of fish erythrocytes to benzocaine. Clear concentration-related effects were observed for the two genotoxins in vitro, which were not significantly altered by the presence of benzocaine. These results suggest that anesthesia of fish does not confound comet assay results and the use of blood samples from anesthetized fish can be recommended with regard to animal welfare. © 2002 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

Molecular typing of IberoAmerican Cryptococcus neoformans isolates

A network was established to acquire basic knowledge of Cryptococcus neoformans in IberoAmerican countries. To this effect, 340 clinical, veterinary, and environmental isolates from Argentina, Brazil, Chile, Colombia, Mexico, Peru, Venezuela, Guatemala, and Spain were typed by using M13 polymerase chain reaction-fingerprinting and orotidine monophosphate pyrophosphorylase (URA5) gene restriction fragment length polymorphsm analysis with Hhal and Sau961 in a double digest. Both techniques grouped all isolates into eight previously established molecular types. The majority of the isolates, 68.2% (n=232), were VNI (var. grubii, serotype A), which accords with the fact that this variety causes most human cryptococcal infections worldwide. A smaller proportion, 5.6% (n=19), were VNII (var. grubii, serotype A); 4.1% (n=14), VNIII (AD hybrid), with 9 isolates having a polymorphism in the URA5 gene; 1.8% (n=6), VNIV (var. neoformans, serotype D); 3.5% (n=12), VGI; 6.2% (n=21), VGII; 9.1% (n=31), VGIII, and 1.5% (n=5) VGIV, with all four VG types containing var. gattii serotypes B and C isolates.

Trabajo y responsabilidades familiares en el contexto del envejecimiento: ¿quién se encarga del cuidado?

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Inequidad, ciudadanía y pueblos indígenas en Chile

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Inequidad, ciudadanía y pueblos indígenas

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Servicios urbanos de agua potable y alcantarillado en Chile: factores determinantes del desempeño

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Latin-American Society Of Forensic Genetics (SLAGF) results of the Interlaboratory Quality Control Exercise 2010-2011

Latin-American Society of Forensic Genetics (SLAGF) Interlaboratory Quality Control Exercise (2010-2011) included the analysis of three bloodstain samples in FTA Classic Card (three persons, biologically unrelated) and one theoretical exercise. There were 56 participating laboratories from 13 Latin-American countries that belong to society, were reported 70 STRs, including autosomal and sex chromosome markers with consensus in 53 STRs with a rate in reporting errors of 2.3%. Fifty-six laboratories reported results in theoretical exercise with mistakes in calculation of IP for each marker. It is necessary to hold meetings to discuss the results of this exercise to reach conclusions and recommendations on all aspects of DNA forensics analysis and paternity test, to improve results and quality in the results of each laboratory. © 2011 Elsevier B.V.

Análisis comparativo regional e intercomunal de la variación del déficit habitacional: región de O'Higgins, 1992-2002

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