A new phylogenetic group of Propionibacterium acnes

Immunofluorescence microscopy-based identification of presumptive Propionibacterium acnes isolates, using the P. acnes-specific mAb QUBPa3, revealed five organisms with an atypical cellular morphology. Unlike the coryneform morphology seen with P. acnes types I and II, these isolates exhibited long slender filaments (which formed large tangled aggregates) not previously described in P. acnes. No reaction with mAbs that label P. acnes types IA (QUBPa1) and II (QUBPa2) was observed. Nucleotide sequencing of the 16S rRNA gene (1484 bp) revealed the isolates to have between 99.8 and 99.9 % identity to the 16S rRNA gene of the P. acnes type IA, IB and II strains NCTC 737, KPA171202 and NCTC 10390, respectively. Analysis of the recA housekeeping gene (1047 bp) did reveal, however, a greater number of conserved nucleotide polymorphisms between the sequences from these isolates and those from NCTC 737 (98.9 % identity), KPA171202 (98.9 % identity) and NCTC 10390 (99.1 % identity). Phylogenetic investigations demonstrated that the isolates belong to a novel recA cluster or lineage distinct from P. acnes types I and II. We now propose this new grouping as P. acnes type III. The prevalence and clinical importance of this novel recA lineage amongst isolates of P. acnes remains to be determined.

Development of a computerised library system in the construction industry

This thesis examines the ways that libraries have employed computers to assist with housekeeping operations. It considers the relevance of such applications to company libraries in the construction industry, and describes more specifically the development of an integrated cataloguing and loan system. A review of the main features in the development of computerised ordering, cataloguing and circulation control systems shows that fully integrated packages are beginning to be completed, and that some libraries are introducing second generation programs. Cataloguing is the most common activity to be computerised, both at national and company level. Results from a sample of libraries in the construction industry suggest that the only computerised housekeeping system is at Taylor Woodrow. Most of the firms have access to an in-house computer, and some of the libraries, particularly those in firms of consulting engineers, might benefit from computerisation, but there are differing attitudes amongst the librarians towards the computer. A detailed study of the library at Taylor Woodrow resulted in a feasibility report covering all the areas of its activities. One of the main suggestions was the possible use of a computerised loans and cataloguing system. An integrated system to cover these two areas was programmed in Fortran and implemented. This new system provides certain benefits and saves staff time, but at the cost of time on the computer. Some improvements could be made by reprogramming, but it provides a general system for small technical libraries. A general equation comparing costs for manual and computerised operations is progressively simplified to a form where the annual saving from the computerised system is expressed in terms of staff and computer costs and the size of the library. This equation gives any library an indication of the savings or extra cost which would result from using the computerised system.

A novel multilocus sequence typing scheme for the opportunistic pathogen Propionibacterium acnes and characterisation of type 1 cell surface-associated antigens

We have developed a novel multilocus sequence typing (MLST) scheme and database (http://pubmlst.org/pacnes/) for Propionibacterium acnes based on the analysis of seven core housekeeping genes. The scheme, which was validated against previously described antibody, single locus and random amplification of polymorphic DNA typing methods, displayed excellent resolution and differentiated 123 isolates into 37 sequence types (STs). An overall clonal population structure was detected with six eBURST groups representing the major clades I, II and III, along with two singletons. Two highly successful and global clonal lineages, ST6 (type IA) and ST10 (type IB1), representing 64?% of this current MLST isolate collection were identified. The ST6 clone and closely related single locus variants, which comprise a large clonal complex CC6, dominated isolates from patients with acne, and were also significantly associated with ophthalmic infections. Our data therefore support an association between acne and P. acnes strains from the type IA cluster and highlight the role of a widely disseminated clonal genotype in this condition. Characterization of type I cell surface-associated antigens that are not detected in ST10 or strains of type II and III identified two dermatan-sulphate-binding proteins with putative phase/antigenic variation signatures. We propose that the expression of these proteins by type IA organisms contributes to their role in the pathophysiology of acne and helps explain the recurrent nature of the disease. The MLST scheme and database described in this study should provide a valuable platform for future epidemiological and evolutionary studies of P. acnes.

Relatório de estágio no The Vintage House Lisboa Hotel

O presente relatório refere-se a um estágio curricular realizado no âmbito do Mestrado em Gestão e Direção Hoteleira. O estágio decorreu no hotel The Vintage House Lisboa, com inicio a 18 de agosto de 2014 e término a 31 de maio de 2015, consistindo num cross-training pelos departamentos: Housekeeping, F&B, Front-Office, “Célula”, Economato e Direção. O principal objetivo deste relatório é descrever as tarefas realizadas ao longo do estágio, bem como as competências adquiridas, as contribuições dadas a cada departamento, e sugestões de melhoria; que juntamente com a caracterização do hotel possibilitam um melhor entendimento de todo o trabalho. Foi através da observação e participação nas várias funções da unidade hoteleira que foi possível realizar uma intensa análise para, posteriormente, descrever os vários departamentos e, por fim, propor a melhoria da análise da satisfação dos clientes do hotel. A análise à satisfação do cliente é realizada através de três questionários, cada um dirigido a um público diferente: clientes externos dos outlets de F&B, clientes MICE, e hóspedes. Através desta análise, a unidade hoteleira poderá obter bastantes vantagens como o acréscimo da qualidade do serviço, o aumento da satisfação dos seus clientes, e a sua retenção e lealdade. Ao terminar este relatório, constatou-se a forte importância que o conhecimento das necessidades, perceções e expectativas dos clientes tem para o desenvolvimento e distinção de uma empresa ou unidade hoteleira; traduzindo-se numa extrema necessidade de uma continua adaptação às transformações do sector hoteleiro e dos seus consumidores, para conseguir um maior destacamento da feroz concorrência.

Relatório de Estágio no Hotel Villa Batalha

O presente relatório diz respeito ao estágio realizado no âmbito do Mestrado em Gestão e Direção Hoteleira. Este foi realizado no Hotel Villa Batalha e teve o seu início a 1 de agosto de 2013 e terminou a 17 de maio de 2014. O objetivo deste relatório é descrever o estágio, o que foi feito e quais os conhecimentos e competências adquiridos. Durante o estágio foi realizado um cross training pelos vários departamentos do hotel, incluindo o departamento de Front Office, o departamento de Food & Beverage (F&B), o departamento de Manutenção e o departamento de Housekeeping. No final deste relatório encontra-se uma análise dos segmentos de mercado em termos de ocupação e receita, que foi realizada através da observação ao longo do estágio e da recolha de dados do programa Protel. Esta análise traduz um desafio proposto durante o estágio, com o objetivo de complementar e colmatar conhecimentos

Un legado beauvoiriano : El trabajo doméstico en la perspectiva del feminismo materialista de Christine Delphy

En la década del 70, Christine Delphy presenta la perspectiva del feminismo materialista focalizándose en el trabajo doméstico no remunerado. El análisis de Delphy pone de manifiesto el legado del pensamiento de Beauvoir, puesto que retoma las críticas al marxismo clásico, en tanto que dicha teoría no explicita las condiciones de opresión y de explotación de las mujeres. Estos temas y su tratamiento desde el feminismo materialista los situamos en algunos estudios latinoamericanos. Nos referimos a la ocupación en el "servicio" y las tareas domésticas, y a la segregación que se produce entre las mujeres. Por último, ampliamos el marco de la recepción del pensamiento de Beauvoir, en particular la cuestión de las mujeres trabajadoras, a partir del análisis de Marcela Nari

Un legado beauvoiriano : El trabajo doméstico en la perspectiva del feminismo materialista de Christine Delphy

En la década del 70, Christine Delphy presenta la perspectiva del feminismo materialista focalizándose en el trabajo doméstico no remunerado. El análisis de Delphy pone de manifiesto el legado del pensamiento de Beauvoir, puesto que retoma las críticas al marxismo clásico, en tanto que dicha teoría no explicita las condiciones de opresión y de explotación de las mujeres. Estos temas y su tratamiento desde el feminismo materialista los situamos en algunos estudios latinoamericanos. Nos referimos a la ocupación en el "servicio" y las tareas domésticas, y a la segregación que se produce entre las mujeres. Por último, ampliamos el marco de la recepción del pensamiento de Beauvoir, en particular la cuestión de las mujeres trabajadoras, a partir del análisis de Marcela Nari

Un legado beauvoiriano : El trabajo doméstico en la perspectiva del feminismo materialista de Christine Delphy

En la década del 70, Christine Delphy presenta la perspectiva del feminismo materialista focalizándose en el trabajo doméstico no remunerado. El análisis de Delphy pone de manifiesto el legado del pensamiento de Beauvoir, puesto que retoma las críticas al marxismo clásico, en tanto que dicha teoría no explicita las condiciones de opresión y de explotación de las mujeres. Estos temas y su tratamiento desde el feminismo materialista los situamos en algunos estudios latinoamericanos. Nos referimos a la ocupación en el "servicio" y las tareas domésticas, y a la segregación que se produce entre las mujeres. Por último, ampliamos el marco de la recepción del pensamiento de Beauvoir, en particular la cuestión de las mujeres trabajadoras, a partir del análisis de Marcela Nari

Unraveling the function of bacterial-type phosphoenolpyruvate carboxylase in vascular plants

Two distinct phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPC) isozymes occur in vascular plants and green algae: plant-type PEPC (PTPC) and bacterial-type PEPC (BTPC). PTPC polypeptides typically form a tightly regulated cytosolic Class-1 PEPC homotetramer. BTPCs, however, appear to be less widely expressed and to exist only as catalytic and regulatory subunits that physically interact with co-expressed PTPC subunits to form hetero-octameric Class-2 PEPC complexes that are highly desensitized to Class-1 PEPC allosteric effectors. Yeast two-hybrid studies indicated that castor plant BTPC (RcPPC4) interacts with all three Arabidopsis thaliana PTPC isozymes, and that it forms stronger interactions with AtPPC2 and AtPPC3, suggesting that specific PTPCs are preferred for Class-2 PEPC formation. In contrast, Arabidopsis BTPC (AtPPC4) appeared to interact very weakly with AtPPC2 and AtPPC3, suggesting that BTPCs from different species may have different physical properties, hypothesized to be due to sequence dissimilarities within their ~10 kDa intrinsically disordered region. Recent RNA-seq and microarray data were analyzed to obtain a better understanding of BTPC expression patterns in different tissues of various monocot and dicot species. High levels of BTPC transcripts, polypeptides and Class-2 PEPC complexes were originally discovered in developing castor seeds, but the analysis revealed a broad range of diverse tissues where abundant BTPC transcripts are also expressed, such as the developing fruits of cucumber, grape, and tomato. Marked BTPC expression correlated well with the presence of ~116 kDa immunoreactive BTPC polypeptides, as well as Class-2 PEPC complexes in the immature fruit of cucumbers and tomatoes. It is therefore hypothesized that in vascular plants BTPC and thus Class-2 PEPC complexes maintain anaplerotic PEP flux in tissues with elevated malate levels that would potently inhibit ‘housekeeping’ Class-1 PEPCs. Elevated levels of malate can be used by biosynthetically active sink tissues such as immature tomatoes and cucumbers for rapid cell expansion, drought or salt stressed roots for osmoregulation, and developing seeds and pollen as a precursor for storage lipid and protein biosynthesis.

Princípios de Construção Enxuta em Empresa de Pequeno Porte em Guarulhos (SP)

O objetivo desta pesquisa é verificar de que maneira os princípios da Construção Enxuta estão sendo empregados em empresa de pequeno porte do segmento de Construção Civil. A pesquisa é de natureza qualitativa e exploratória, sendo o estudo de caso realizado em uma construtora de pequeno porte de edifícios verticais com o apoio do Sindicato das Empresas de Compra, Venda, Locação e Administração de Imóveis Residenciais e Comerciais de São Paulo - SECOVI. Observou-se grande interesse na implantação, sendo um ponto negativo a necessidade de mudança de cultura, visto que muitas atividades tidas como ”vícios” devem ser eliminadas, frente a novo conhecimento. Motivada pelos gestores e alta direção, a filosofia será bem vinda, assim como outras ferramentas de Produção Enxuta, tais como o kanban, housekeeping, 5S, Just in Time e melhorias nos canteiros de obra e processos logísticos. Concluiu-se nesta pesquisa que os princípios da Construção Enxuta são pouco conhecidos pelos profissionais, na prática sendo voltados para gestão da qualidade e produtividade. Constatou-se que, ao mencionar os princípios, estes são de pouco conhecimento, e tem-se uma aceitação imediata quando se fala em redução de tempo e aumento da produtividade com eliminação de tarefas consideradas como de não agregação de valor.

Avaliação transcricional de Glutationas -transferases em PEIXE-ZEBRA (Danio rerio) e alterações causadas pela exposição á Microcistina-LR

As Microcistinas são heptapeptídios cíclicos produzidos como metabólitos secundários por diferentes espécies de cianobactérias, sendo relevantes pelo seu potencial hepatotóxico. Peixes apresentam estratégias bioquímicas para detoxificar contaminantes ambientais, incluindo a ativação de enzimas de fase II de biotransformação, que incluem as isoformas de glutationa S-transferase (GST). As GST catalizam a conjugação de glutationa reduzida (GSH) com uma variedade de xenobióticos, incluindo as microcistinas. O presente estudo avaliou os níveis transcricionais de quinze isoformas de GST a fim de identificar isoformas possivelmente envolvidas na detoxificação de contaminantes ambientais como a microcistina-LR (MC-LR) em Danio rerio. A técnica de PCR em tempo real (RT-qPCR) foi utilizada para avaliação dos níveis transcricionais, permitindo análise das GST em diferentes órgãos, abundância e a ativação/repressão das isoformas de GST pela exposição à MC-LR. Foram avaliados os possíveis efeitos causados em brânquia e fígado após exposição por 24 hs às concentrações de 5 µg.L-1 e 50 µg.L-1 de MC-LR. Baseado nos scores de estabilidade para oito genes normalizadores, foram selecionados glicose-6-fosfato desidrogenase (g6pdh), β-actina1 e beta-2-microglobulina (b2m); b2m, alfa-tubulina 1 (tuba) e β- actin1; e tuba, b2m e g6pdh, para normalização dos níveis trancricionais de GST para distribuição órgão-específica, abundância e efeito da MC-LR em brânquia e fígado, respectivamente. A avaliação transcricional da distribuição órgão-específica revelou níveis significativos de gstal e gstk1.1 no fígado; gstp1 e gstp2 em brânquia; mgst3a, gstr1, gstm2, gstm33, gstp1, gstp2 e gstk1.1 no intestino; gstm2, gstm3 e gstal no olho e gstt1a e gsta2.1 no cérebro. Considerando os níveis de transcritos para um dado órgão, gstk1.1, gstal, gstp1 e gstt2 foram mais abundantes nos órgãos de detoxificação, tais como o fígado, brânquias e intestino, enquanto gstt1a e gsta2.1 foram mais abundantes no rim. Em brânquia, gsta2.1 e gstt1b foram reprimidas por 5 µg.L-1 de MC-LR e mgst1.1 foi reprimida em 50 µg.L-1 de MC-LR. No fígado, as isoformas gst2.2 e gstp2 foram reprimidas em ambas as concentrações, gstal foi reprimida em 5 µg.L-1, e gstt1a e gstk1.1 foram reprimidas em 50 µg.L-1 de MC-LR. As isoformas gstal, gstr1, gstp1, mgst3a, gstm1, gstm2 e gstm3 não foram alteradas pela exposição a MC-LR. Os resultados obtidos fornecem informações para a escolha de isoformas específicas de GST possivelmente envolvidas na detoxificação/toxicidade de MC-LR, a serem melhores caracterizadas ao nível protéico e também contribui para a escolha de genes normalizadores a serem utilizados em outros estudos da mesma natureza

Identification of superior reference genes for data normalisation of expression studies via quantitative PCR in hybrid roses (Rosa hybrida)

Background: Gene expression studies are a prerequisite for understanding the biological function of genes. Because of its high sensitivity and easy use, quantitative PCR (qPCR) has become the gold standard for gene expression quantification. To normalise qPCR measurements between samples, the most prominent technique is the use of stably expressed endogenous control genes, the so called reference genes. However, recent studies show there is no universal reference gene for all biological questions. Roses are important ornamental plants for which there has been no evaluation of useful reference genes for gene expression studies. Results: We used three different algorithms (BestKeeper, geNorm and NormFinder) to validate the expression stability of nine candidate reference genes in different rose tissues from three different genotypes of Rosa hybrida and in leaves treated with various stress factors. The candidate genes comprised the classical "housekeeping genes" (Actin, EF-1α, GAPDH, Tubulin and Ubiquitin), and genes showing stable expression in studies in Arabidopsis (PP2A, SAND, TIP and UBC). The programs identified no single gene that showed stable expression under all of the conditions tested, and the individual rankings of the genes differed between the algorithms. Nevertheless the new candidate genes, specifically, PP2A and UBC, were ranked higher as compared to the other traditional reference genes. In general, Tubulin showed the most variable expression and should be avoided as a reference gene. Conclusions: Reference genes evaluated as suitable in experiments with Arabidopsis thaliana were stably expressed in roses under various experimental conditions. In most cases, these genes outperformed conventional reference genes, such as EF1-α and Tubulin. We identified PP2A, SAND and UBC as suitable reference genes, which in different combinations may be used for normalisation in expression analyses via qPCR for different rose tissues and stress treatments. However, the vast genetic variation found within the genus Rosa, including differences in ploidy levels, might also influence expression stability of reference genes, so that future research should also consider different genotypes and ploidy levels.

The RGBarrier assay: the parallel study of gene regulatory element performance at defined chromosomal locations

Vertebrate genomes are organised into a variety of nuclear environments and chromatin states that have profound effects on the regulation of gene transcription. This variation presents a major challenge to the expression of transgenes for experimental research, genetic therapies and the production of biopharmaceuticals. The majority of transgenes succumb to transcriptional silencing by their chromosomal environment when they are randomly integrated into the genome, a phenomenon known as chromosomal position effect (CPE). It is not always feasible to target transgene integration to transcriptionally permissive “safe harbour” loci that favour transgene expression, so there remains an unmet need to identify gene regulatory elements that can be added to transgenes which protect them against CPE. Dominant regulatory elements (DREs) with chromatin barrier (or boundary) activity have been shown to protect transgenes from CPE. The HS4 element from the chicken beta-globin locus and the A2UCOE element from a human housekeeping gene locus have been shown to function as DRE barriers in a wide variety of cell types and species. Despite rapid advances in the profiling of transcription factor binding, chromatin states and chromosomal looping interactions, progress towards functionally validating the many candidate barrier elements in vertebrates has been very slow. This is largely due to the lack of a tractable and efficient assay for chromatin barrier activity. In this study, I have developed the RGBarrier assay system to test the chromatin barrier activity of candidate DREs at pre-defined isogenic loci in human cells. The RGBarrier assay consists in a Flp-based RMCE reaction for the integration of an expression construct, carrying candidate DREs, in a pre-characterised chromosomal location. The RGBarrier system involves the tracking of red, green and blue fluorescent proteins by flow cytometry to monitor on-target versus off-target integration and transgene expression. The analysis of the reporter (GFP) expression for several weeks gives a measure of the protective ability of each candidate elements from chromosomal silencing. This assay can be scaled up to test tens of new putative barrier elements in the same chromosomal context in parallel. The defined chromosomal contexts of the RGBarrier assays will allow for detailed mechanistic studies of chromosomal silencing and DRE barrier element action. Understanding these mechanisms will be of paramount importance for the design of specific solutions for overcoming chromosomal silencing in specific transgenic applications.

Molecular biology of prolactin and prolactin receptor in a marine teleost: the sea bream(Sparus aurata)

Tese de dout. em Biologia, especialidade de Biologia Molecular, Unidade de Ciências e Tecnologias dos Recursos Aquáticos, Univ. do Algarve

Hotel Vila Galé Lagos

Dissertação de Mestrado, Direção e Gestão Hoteleira, Escola Superior de Gestão, Hotelaria e Turismo, Universidade do Algarve, 2016