Production and characterization of monoclonal antibodies to a Brazilian bovine herpesvirus type 5

Antigens of a bovine herpesvirus type 5 (BHV-5), isolated from a cow with a neurological infection in Rio Grande do Sul State, Brazil, were used to immunize BALB/c mice to produce monoclonal antibodies (mAbs). Eleven hybridomas secreting mAbs directed at BHV-5 antigens were obtained after two fusions and screening of 356 hypoxanthine-aminopterin-thymidine-resistant clones. The mAbs reacted at dilutions up to 1:500 (hybridoma culture supernatant) and up to >1:10,000 (ascitic fluid) in an indirect fluorescent antibody assay (IFA) and in immunoperoxidase staining of BHV-5-infected cells. Four mAbs (1D12, 2E2, 2G10 and 4E4) showed virus-neutralizing activity against the parental BHV-5 isolate. Five mAbs (1F3, 2A6, 2F9, 2G10 and HB24L) reacted in Western immunoblotting with a protein of approximately 90 kDa. Three other mAbs (2E2, 3D6 and 4E4) reacted in IFA with antigens of a BHV-1 mutant glycoprotein C- negative strain, demonstrating that they are directed at a viral antigen other than glycoprotein C. The eleven mAbs tested reacted with 20 BHV-5 field isolates and nine mAbs reacted with 10 BHV-1 isolates. Two mAbs (1F3 and 2F9) failed to react with BHV-1 field isolates, although they displayed a weak and nonreproducible reaction with the BHV-1 reference strain Los Angeles. These mAbs may be very useful in distinguishing between BHV-1 and BHV-5 infections since most of the traditional reagents and techniques are unable to do so. One mAb (2F9) was shown to bind to viral antigens by immunohistochemistry of histological sections of the brain of a BHV-5-infected calf. These results demonstrate that the mAbs produced here are suitable for use in a variety of immunological techniques and therefore may be useful for diagnostic and research purposes.

Seroprevalence of and risk factors for Toxoplasma gondii in sheep raised in the Jaboticabal microregion, São Paulo State, Brazil

Seroprevalence of and risk factors for toxoplasmosis in sheep from different properties in the Jaboticabal microregion, São Paulo State, Brazil were determined. Antibodies to Toxoplasma gondii were found in sera of 52.0% of 488 sheep tested by indirect fluorescent antibody test (IFAT >= 64). T gondii seropositivity in sheep was significantly associated with gender of the sheep, pasturing system, contact with cats, and the use of mineral supplements and the type of feed. (C) 2009 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Comparison between a soluble antigen-based ELISA and IFAT in detecting antibodies against Babesia canis in dogs

O presente trabalho estudou um ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto para a detecção de anticorpos anti-Babesia canis no soro de cães, tendo a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), como teste de referência O antígeno utilizado no ELISA do presente estudo consistiu em uma preparação antigênica solúvel de merozoítas B. canis e as diluições ótimas do antígeno, soros e conjugado foram determinadas por titulação em bloco, utilizando soros de referência positivos e negativos. A preparação antigênica solúvel de B. canis ótima foi de 10 µg.mL-1, com soros de referência positivos e negativos em uma única diluição de 1:100, e conjugado a 1:4.000. Um total de 246 amostras séricas foram colhidas em cães, durante a campanha de vacinação anti-rábica em Jaboticabal, São Paulo, Brasil e a presença de anticorpos anti-B. canis foi avaliada pelo ELISA e RIFI. Nestas condições, a média de absorbância dos soros de referência negativos foi de 0,129 ± 0,025, resultando em um ponto de corte de 0,323 (Nível de ELISA 3) e a média da absorbância dos soros de referência positivos foi de 2,156 ± 1,187. As amostras com sorologia positiva para B. canis por ELISA e RIFI foram 67,89% (n = 167) e 59,35% (n = 146), respectivamente. Os resultados obtidos sugerem que o ELISA descrito revelou-se um teste sorológico eficaz no diagnóstico da babesiose canina.

Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos leiteiros, cães e trabalhadores rurais da região Sudoeste do Estado de Mato Grosso

Considerando a importância da neosporose interferindo na produtividade animal, avaliou-se a frequência de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras de soros de bovinos leiteiros da Região Sudoeste do Estado de Mato Grosso, Brasil, complementando-se com amostras sorológicas colhidas de cães e de humanos que conviviam nas mesmas propriedades rurais amostradas. Um total de 1.036 amostras de soros foram analisadas, sendo 932 de fêmeas bovinas leiteiras, 37 de cães e 67 de humanos, provenientes de 24 propriedades e examinados por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). As amostras de soros humanos reagentes foram testadas novamente por Western-blotting para confirmação dos resultados. Anticorpos anti-N. caninum foram encontrados em 499 bovinos (53,5%), em pelo menos um animal positivo por propriedade, em 25 caninos (67,6%) e em sete humanos (10,5%). Não houve diferença significativa no número de bovinos positivos por faixa etária. Os resultados obtidos indicam uma ampla disseminação de N. caninum na região estudada.

Molecular and serological detection of Leishmania spp. in captive wild animals from Ilha Solteira, SP, Brazil

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Serologic evidence of equine granulocytic anaplasmosis in horses from central West Brazil

A Erliquiose é uma doença zoonótica causada por bactérias gram-negativas e intracelulares obrigatórias. A Anaplasmose Granulocítica Equina - AGE (anteriormente denominada Erliquiose Granulocítica Equina, EGE) é uma enfermidade sazonal, normalmente auto-limitante em equinos. No Brasil, existem poucos relatos deste agente erliquial, bem como de seus vetores naturais. Atualmente, veterinários têm levantado a suspeita de casos de AGE em equinos com sinais clínicos sugestivos de erliquiose e não responsivos ao tratamento para a piroplasmose equina. O objetivo do presente estudo foi identificar equinos expostos a A. phagocytophilum por meio de técnicas sorológicas e moleculares. Vinte amostras de sangue e soro de equinos da região Centro-oeste do Brasil foram avaliados por meio do exame microscópico de capa leucocitária, ensaio imunoenzimático indireto (ELISA), reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e reação em cadeia da polimerase (nested PCR). Adicionalmente, o diagnóstico sorológico de Theileria equi pela RIFI e ELISA foram realizados, assim como o diagnóstico molecular pelo nPCR. Treze (65%) amostras de soro foram positivas para A. phagocytophilum pelo teste de ELISA, entretanto nenhum equino foi positivo pelo exame microscópico da capa leucocitária ou nPCR. Anticorpos IgG anti-T. equi foram detectados em 18 (90%) e 17 (85%) equinos pela RIFI e ELISA, respectivamente e o agente foi detectado em 9 (45%) animais pelo nPCR. Estes dados sugerem importante informação para o entendimento da ocorrência da AGE e piroplasmose equina no Centro-oeste do Brasil.

Clinical, parasitological and immunological aspects of experimental infection with Trypanosoma evansi in dogs

This research investigated the pattern of antibody response by means of enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) and indirect fluorescent antibody test (IFAT) through the course of experimental Trypanosoma evansi infection in dogs. Clinical and parasitological features were also studied. The average prepatent period was 11.2 days and parasitaemia showed an undulating course. Biometrical study of parasites revealed a mean total length of 21.68mm. The disease was characterized by intermittent fever closely related to the degree of parasitaemia and main clinical signs consisted of pallor of mucous membrane, edema, progressive emaciation and enlargement of palpable lymph nodes. Diagnostic antibody was detected within 12 to 15 days and 15 to 19 days of infection by IFAT and Elisa, respectively. High and persistent antibody levels were detected by both tests and appeared not to correlate with control of parasitaemia

MOLECULAR and SEROLOGICAL DETECTION of BABESIA SPP. IN NEOTROPICAL and EXOTIC CARNIVORES IN BRAZILIAN ZOOS

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Detection of Toxoplasma gondii oocysts in environmental samples from public schools

The number of Toxoplasma gondii oocysts that can be found in random environmental samples is probably low; in addition, these cysts may be confused with Hammondia spp. and Neospora spp. oocysts. The aim of the present work was to evaluate the presence of T. gondii oocysts in the soil of public elementary schools in the northwest area of the state of São Paulo, Brazil using mouse bioassays. A comparison was made between the different available bioassay techniques, such as squash, histopathology, immunohistochemistry and indirect fluorescent antibody test (IFAT). T. gondii was isolated by bioassay in mice (squash brain samples) from 22.58%(7/31) of the school playgrounds. Immunohistochemistry and IFAT showed positive results in 32.26% (10/31) and 25.80% (8/31) of samples, respectively. The sensitivity and specificity of the immunohistochemistry method were 85.71% and 83.33%, respectively. The IFAT results showed 100% sensitivity and 95.83% specificity. The presence of T. gondii was not detected in histopathological examinations. The results of the present study strongly suggest that T. gondii oocysts are widely distributed in elementary public schools in the region that was evaluated, likely constituting the main contamination source for these children. Educational programs directed at reducing environmental contamination with T. gondii would eventually lower the cost of treating humans for clinical toxoplasmosis. It is also possible to conclude that the use of IFAT in mouse bioassays can be recommended without the need for brain cysts research, which is extremely difficult and laborious. (C) 2010 Elsevier B.V. All rights reserved.

Estudo comparativo dos métodos diagnósticos para Leishmaniose Visceral em cães oriundos de Ilha Solteira, SP

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Serodiagnosis of Babesia equi in horses submitted to exercise stress

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Occurrence of Theileria equi in horses raised in the Jaboticabal microregion, São Paulo State, Brazil

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Factors associated to Theileria equi in equids of two microregions from Rio de Janeiro, Brazil

Amostras de soro de 714 equídeos das microrregiões de Itaguaí e Serrana, Rio de Janeiro, Brasil, foram submetidas ao teste de imunofluorescência indireta (título 1:80) para Theileria equi. A prevalência entre as microrregiões e os fatores associados à soropositividade foram avaliados e a razão de prevalência (RP) calculada. A prevalência geral para T. equi foi de 81,09% (n = 579), com maior prevalência (p < 0,05) para microrregião de Itaguaí (85,43%), quando comparado a Serrana (76,92%). A região, altitude, nível da propriedade e origem dos equídeos foram associados (p < 0,05) com a soropositividade para T. equi. Equídeos criados na microrregião de Itaguaí (RP = 1,11; p = 0,003) e em altitudes abaixo de 500 m (RP = 1.10; p = 0,014) apresentaram maior chance de se tornarem soropositivos para T. equi. Além disso, quando são criados em propriedades de nível ruim (RP = 1,13; p = 0,018) e nascidos na propriedade (RP = 1,10; p = 0,008) apresentaram mais chance de terem contato com T. equi. As principais espécies de carrapatos encontradas parasitando os equídeos foram Amblyomma cajennense e Dermacentor (Anocentor) nitens. As microrregiões estudadas são endêmicas para theileriose equina e de estabilidade enzoótica para T. equi. Apenas os fatores relacionados à área de coleta das amostras de soro influenciaram a soropositividade dos equídeos para T. equi naquela região.

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of IgM antibodies against Leishmania chagasi in dogs

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Occurrence of anti-Neospora caninum antibodies in Brazilian cervids kept in captivity

Neospora caninum is a coccidian parasite that causes disease in captive and domesticated animals and has been found in wild animals such as cervids. Sera from 150 cervids of the genus Mazama, were collected from 31 captive herds and 16 zoos from different Brazilian regions and analyzed by indirect fluorescent antibody test for anti-N. caninum antibodies. Positive reactions were found in 42% (63) of the samples and the titers varied from 50 to 51,200. of the 86 cervids from the captive herds, 38 (44.2%) had anti N. caninum antibodies and of the 64 samples from the zoo, 25 (39.1%) were positive. No significant difference (p > 0.05) was found for the occurrence values observed between the animals from captive herds and zoos as well as within the values documented for each one of the species analyzed. Therefore, the results indicate that the agent is prevalent from cervids in captivity in Brazil. (c) 2005 Elsevier B.V. All rights reserved.