UMA ABORDAGEM YEAST TWO-HYBRID PARA O ESTUDO DA REPLICAÇÃO E PATOGÉNESE DO VÍRUS DA HEPATITE DELTA

O vírus da hepatite delta (HDV) é o agente etiológico de uma das formas mais graves de hepatite viral e é ainda endémico em diversas regiões do globo, nomeadamente em África, na Amazónia e no Extremo Oriente. O HDV co-infecta ou super-infecta hepatócitos infectados com o vírus da hepatite B (HBV) aumentando em cerca de 10 vezes o risco de cirrose e hepatite fulminante. A associação clínica entre os dois vírus deve-se ao facto do invólucro do HDV ser constituído pelos antigénios de superfície do HBV (HBsAgs) que são necessários para a propagação da infecção. O genoma do HDV é constituído por uma molécula de RNA de cadeia simples, circular, com cerca de 1.7 Kb, que possui cerca de 70% de emparelhamento interno. Foi identificada uma única grelha de leitura aberta (ORF) no RNA viral que codifica para o antigénio delta (HDAg). A ocorrência de um mecanismo de editing do RNA, resulta na expressão de duas formas do HDAg, a pequena (S-HDAg) e a grande (L-HDAg). Várias funções essenciais para a replicação do HDV têm sido atribuídas a ambas as formas do HDAg, sendo a S-HDAg essencial para a acumulação de RNA viral e a L-HDAg responsável pela interacção com os HBsAgs para formar partículas virais. No entanto, dada a simplicidade dos seus componentes, admite-se que a replicação viral depende das interacções estabelecidas entre os HDAgs e factores celulares do hospedeiro. Apesar do número considerável de factores celulares descritos como interactores dos HDAgs ou RNA virais, a importância de muitas destas interacções não foi elucidada e muitas etapas do ciclo de replicação do HDV permanecem pouco claras. Para além disso, dado o número limitado de factores do hospedeiro que estão envolvidos na sua replicação, é muito provável que um número elevado de interactores do HDV permaneça por identificar. Este trabalho teve como objectivo a identificação de proteínas de fígado humano capazes de interagir com os HDAgs, utilizando o sistema yeast Two-Hybrid (YTH). Identificaram-se trinta proteínas com capacidade de interagir com a S-HDAg no sistema YTH, sendo que estas proteínas se encontram envolvidas em diferentes processos celulares. Com base nas características funcionais, foram seleccionadas três destas proteínas e as suas interacções com a S-HDAg foram investigadas com maior detalhe. As três proteínas seleccionadas foram a ribonucleoproteína nuclear heterogénea C (hnRNPC), a embryonic lethal abnormal vision like1 (ELAVL1/HuR) e a proteína 2 de ligação a EBNA1 (EBP2). As duas primeiras são proteínas de ligação a RNA, previamente descritas como envolvidas em processos de replicações de outros vírus com genoma RNA, enquanto a EBP2, é uma proteína de localização preferencialmente nucleolar, tal como por vezes acontece com os HDAgs. As interacções foram analisadas recorrendo a vários ensaios bioquímicos. No caso da hnRNPC e da HuR, após validação no sistema YTH, a capacidade de interacção com a S-HDAg foi confirmada quer in vitro por blot overlay quer in vivo por co-imunoprecipitação em células de hepatoma humano. Nas mesmas células, observou-se uma co-localização considerável entre os HDAgs e os RNAs virais. Finalmente, de modo a investigar a contribuição das proteínas hnRNPC e HuR na replicação do HDV, procedeu-se ao silenciamento destas proteínas pela utilização de short hairpin RNAs (shRNAs) específicos para os mRNAs correspondentes Observou-se que o silenciamento de ambas as proteínas hnRNPC e HuR endógenas, individualmente resultou numa diminuição acentuada nos níveis de expressão dos HDAgs. No que respeita à EBP2, a interacção com a S-HDAg foi confirmada em condições in vitro com recurso a ensaios de blot overlay e de cromatografia de afinidade. A análise por imunofluorescência indirecta e microscopia confocal revelou co-localização elevada entre os HDAgs e a EBP2, principalmente nos nucléolos de células de hepatoma humano. Finalmente, foi ainda utilizado o sistema YTH para estudar os mecanismos de importação dos HDAgs. Assim, este sistema foi utilizado com o propósito de identificar proteínas celulares capazes de interagir com um domínio específico dos HDAgs, o sinal de localização nuclear (NLS). Na pesquisa YTH realizada obtiveram-se 161 clones positivos, sendo que um deles mostrou codificar para a carioferina α4 (KPNA4). A interacção da KPNA4 com a S-HDAg foi reproduzida em condições in vitro através de um ensaio de cromatografia de afinidade tendo sido utilizadas formas recombinantes das duas proteínas. Este trabalho permitiu identificar várias proteínas celulares que interagem com a S-HDAg. Obtiveram-se evidências sugestivas de que algumas das proteínas identificadas podem desempenhar funções importantes no ciclo de replicação do HDV e que abrem novas perspectivas para o estudo do ciclo de replicação do vírus.

The perception, beliefs and practices toward genitourinary schistosomiasis by inhabitants of selected endemic areas (Edo/Delta States) in south-eastern Nigeria

Well-structured questionnaire on the perception, impression and response to genitourinary bilharziasis (Genitourinary schistosomiasis) was administered and explained in local languages: 'Igbo' 'Esan' 'Ezon' Itshekiri and Bini to 33815 inhabitants of selected endemic areas in south-eastern Nigeria from January, 1999 to December, 2001. Out of this number, 3815 (11.3%) were properly filled and returned. About 42.0% of the inhabitants admitted knowledge of the disease, while 14 (0.4%) knew about the aetiologic agent. About 181 (5.0%) who responded, admitted procuring treatment, while 100 (5.0%) declined to seek treatment of any sort. The relationships between water-bodies and human activities, and infection were well discussed. Amongst those who admitted knowledge of the disease but no knowledge of its etiologic agent, declined seeking treatment of any kind, but believe the disease is a natural phenomenon in ones developmental stage and therefore of no morbidity and mortality. Laboratory analysis of urine, faeces, semen and HVS was employed to assess questionnaire responses, and in some cases, physical examination was utilized to augment laboratory analysis in confirming urinal diagnosis. Haematuria was only directly related to egg count in the early part of life. Females were significantly haematuric and excreted more ova than males (p < 0.05). Headache (43.0%) and fever (31.0%) were major clinical signs while sexual pains (22.0%) were the least.

Impact of boiling on phytochemicals and antioxidant activity of green vegetables consumed in the Mediterranean diet

The effect of boiling (10 minutes) on eleven green vegetables frequently consumed in the Mediterranean diet was evaluated. For that, some physicochemical parameters and the contents of vitamin C, phenolics and carotenoids, as well as the antioxidant activity, were determined in raw and boiled samples. The raw vegetables analysed in this study were good sources of vitamin C, carotenoids and phenolic compounds, with contents ranging from 10.6 to 255.1 mg/100 g, 0.03 to 3.29 mg/100 g and 202.9 to 1010.7 mg/100 g, respectively. Boiling promoted losses in different extensions considering both the different bioactive compounds and the distinct vegetables analysed. Contrary to phenolics (more resistant), vitamin C was the most affected compound. Boiling also originated significant losses in the antioxidant activity of the vegetables. Considering all the parameters analysed, the vegetables most affected by boiling were broccoli and lettuce. The least affected ones were collard and tronchuda cabbage.

A comparison between thin film solar cells made from co-evaporated CuIn1-xGaxSe2using a one-stage process versus a three-stage process

Until this day, the most efficient Cu(In,Ga)Se2 thin film solar cells have been prepared using a rather complex growth process often referred to as three-stage or multistage. This family of processes is mainly characterized by a first step deposited with only In, Ga and Se flux to form a first layer. Cu is added in a second step until the film becomes slightly Cu-rich, where-after the film is converted to its final Cu-poor composition by a third stage, again with no or very little addition of Cu. In this paper, a comparison between solar cells prepared with the three-stage process and a one-stage/in-line process with the same composition, thickness, and solar cell stack is made. The one-stage process is easier to be used in an industrial scale and do not have Cu-rich transitions. The samples were analyzed using glow discharge optical emission spectroscopy, scanning electron microscopy, X-ray diffraction, current–voltage-temperature, capacitance-voltage, external quantum efficiency, transmission/reflection, and photoluminescence. It was concluded that in spite of differences in the texturing, morphology and Ga gradient, the electrical performance of the two types of samples is quite similar as demonstrated by the similar J–V behavior, quantum spectral response, and the estimated recombination losses.

Caracterização de sacos Tedlar® e Flex Film de recolha de ar exalado

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Engenharia Biomédica

SEROPOSITIVITY FOR ASCARIOSIS AND TOXOCARIOSIS AND CYTOKINE EXPRESSION AMONG THE INDIGENOUS PEOPLE IN THE VENEZUELAN DELTA REGION

The present study aimed at measuring seropositivities for infection by Ascaris suum and Toxocara canis using the excretory/secretory (E/S) antigens from Ascaris suum (AES) and Toxocara canis (TES) within an indigenous population. In addition, quantification of cytokine expressions in peripheral blood cells was determined. A total of 50 Warao indigenous were included; of which 43 were adults and seven children. In adults, 44.1% were seropositive for both parasites; whereas children had only seropositivity to one or the other helminth. For ascariosis, the percentage of AES seropositivity in adults and children was high; 23.3% and 57.1%, respectively. While that for toxocariosis, the percentage of TES seropositivity in adults and children was low; 9.3% and 14.3%, respectively. The percentage of seronegativity was comparable for AES and TES antigens in adults (27.9%) and children (28.6%). When positive sera were analyzed by Western blotting technique using AES antigens; three bands of 97.2, 193.6 and 200.2 kDas were mostly recognized. When the TES antigens were used, nine major bands were mostly identified; 47.4, 52.2, 84.9, 98.2, 119.1, 131.3, 175.6, 184.4 and 193.6 kDas. Stool examinations showed that Blastocystis hominis, Hymenolepis nana and Entamoeba coli were the most commonly observed intestinal parasites. Quantification of cytokines IFN-γ, IL-2, IL-6, TGF-β, TNF-α, IL-10 and IL-4 expressions showed that there was only a significant increased expression of IL-4 in indigenous with TES seropositivity (p < 0.002). Ascaris and Toxocara seropositivity was prevalent among Warao indigenous.

Pulmonar Vascular Changes in the Plain Chest Film of Cardiac Patients

The correct interpretation of chest film on cardiac patients is very important. The most important feature is the radiographic appearance of the pulmonary vascularity. Four different patterns of pulmonary vascularity are considered: normal, decreased, increased and uneven. The different diseases associated with each type are mentioned. From the pulmonary vascular pattern one can deduct hemodynamic data which are important for the diagnosis, grade of severity and follow-up.

Development of copper and nickel based oxide thin-films: design and fabrication of thin-film transistors

Dissertação para obtenção do Grau de Doutor em Nanotecnologia e Nanociência

Implementation of a sigma delta modulator for a class D audio power amplifier

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Engenharia Electrotécnica e de Computadores

Study of membrane emulsification process as a pre-step for the microencapsulation of lipid compounds by spray drying

Dissertation presented to Faculdade de Ciências e Tecnologia, Universidade Nova de Lisboa for obtaining the master degree in Membrane Engineering

Hepatite Delta no Estado de Mato Grosso: apresentação de cinco casos

Cinco casos graves de infecção pelos vírus das hepatites B e D foram diagnosticados em jovens oriundos do norte do Mato Grosso, onde é comum a ocorrência de hepatite B, mas não de hepatite D. A proximidade com os Estados do Acre e do Amazonas e a migração interna podem explicar a introdução do vírus da hepatite D na região. Os autores salientam a necessidade de manter vigilância epidemiológica para casos de hepatite D na região.

Ocorrência da infecção pelo vírus da hepatite B (VHB) e delta (VHD) em sete grupos indígenas do Estado do Amazonas

A infecção pelo VHB e VHD são importantes problemas de saúde na Amazônia. Este estudo avalia a prevalência da infecção por esses agentes em sete grupos indígenas do Estado do Amazonas. A taxa de infecção passada pelo VHB encontrada foi de 54,5% e a de portadores do AgHBs de 9,7%. Observa-se variação importante destes marcadores entre as aldeias, inclusive da mesma etnia. Não evidenciamos marcador de infecção aguda, os quatro AgHBe reativos eram todos Apurinã, da mesma aldeia, e três da mesma família. O VHD foi encontrado em 13,4% dos AgHBs reativos. O padrão de infecção pelo VHB e VHD encontrado possui as seguintes características: endemicidade elevada, baixo potencial de infectividade, transmissão marcada em idade precoce, provável transmissão familiar, e pouca importância da transmissão vertical. Entretanto, também sugere que esses vírus não tenham sido ainda introduzidos efetivamente em algumas das etnias estudadas.

Design of a Continuous-Time (CT) Sigma-Delta modulator for class D audio power amplifiers

Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do Grau de Mestre em Engenharia Electrotécnica e de Computadores

Um sistema de avaliação de desempenho logístico na Delta Cafés: caso de estudo

As necessidades e as exigências do mercado implicam uma elevada diferenciação das empresas por forma a conseguir satisfazer os requisitos dos clientes. A logística pode representar para as organi-zações elevados custos, no entanto, o consequente aumento da eficiência e da capacidade de resposta podem representar vantagens competitivas face à concorrência. A presente dissertação visa a análise dos serviços logísticos prestados pela Novadelta – Comércio e Indústria de Cafés, S.A. e das estratégias implementadas na gestão das atividades que lhe estão associadas, e termina com o desenvolvimento de medidas de desempenho que permitam avaliar o desempenho de cada uma dessas atividades. Como se trata do primeiro estudo desenvolvido na empresa no âmbito mencionado, é necessário identificar os aspetos mensuráveis do desempenho logístico, fundamentais para o estudo, e definir me-didas de desempenho e respetivas métricas. As medidas de desempenho identificadas e selecionadas pretendem avaliar as estratégias de gestão implementadas e o desempenho operacional de diferentes atividades logísticas, tais como: i) armazenagem, ii) transporte, iii) gestão de stocks, iv) previsão de vendas, v) gestão de relações com clientes. O registo e recolha de dados relativos à quantificação das medidas de desempenho tornam possí-vel a análise da evolução ao longo do tempo dos respetivos valores e a avaliação do desempenho logís-tico. O sucesso da avaliação do desempenho logístico depende da qualidade dos dados recolhidos, de forma a garantir uma avaliação correta e com base em resultados fidedignos.