cDNA sequence and molecular modeling of a nerve growth factor from Bothrops jararacussu venomous gland

The complete nucleotide sequence of a nerve growth factor precursor from Bothrops jararacussu snake (Bj-NGF) was determined by DNA sequencing of a clone from cDNA library prepared from the poly(A) + RNA of the venom gland of B.jararacussu. cDNA encoding Bj-NGF precursor contained 723 bp in length, which encoded a prepro-NGF molecule with 241 amino acid residues. The mature Bj-NGF molecule was composed of I 18 amino acid residues with theoretical pI and molecular weight of 8.31 and 13,537, respectively. Its amino acid sequence showed 97%, 96%, 93%, 86%, 78%, 74%, 76%, 76% and 55% sequential similarities with NGFs from Crotalus durissus terrificus, Agkistrodon halys pallas, Daboia (Vipera) russelli russelli, Bungarus multicinctus, Naja sp., mouse, human, bovine and cat, respectively. Phylogenetic analyses based on the amino acid sequences of 15 NGFs separate the Elapidae family (Naja and Bungarus) from those Crotalidae snakes (Bothrops, Crotalus and Agkistrodon). The three-dimensional structure of mature Bj-NGF was modeled based on the crystal structure of the human NGF. The model reveals that the core of NGF, formed by a pair of P-sheets, is highly conserved and the major mutations are both at the three beta-hairpin loops and at the reverse turn. (C) 2002 Societe francaise de biochimie et biologic moleculaire/Editions scientifiques et medicales Elsevier SAS. All rights reserved.

Molecular approaches for structural characterization of Bothrops L-amino acid oxidases with antiprotozoal activity: cDNA cloning, comparative sequence analysis, and molecular modeling

Two L-amino acid oxidases (LAAOs) were identified by random sequencing of cDNA libraries from the venom glands of Bothrops moojeni (BmooLAAO) and Bothrops jararacussu (Bjussu LAAO). Phylogenetic analysis involving other SV-LAAOs showed sequence identities within the range 83-87% being closely related to those from Agkistrodon and Trimeresurus. Molecular modeling experiments indicated the FAD-binding, substrate-binding, and helical domains of Bmoo and Bjussu LAAOs. The RMS deviations obtained by the superposition of those domains and that from Calloselasma rhodostoma LAAO crystal structure confirm the high degree of structural similarity between these enzymes. Purified BjussuLAAO-I and BmooLAAO-I exhibited antiprotozoal activities which were demonstrated to be hydrogen-peroxide mediated. This is the first report on the isolation and identification of cDNAs encoding LAAOs from Bothrops venom. The findings here reported contribute to the overall structural elucidation of SV-LAAOs and will advance the understanding on their mode of action. (c) 2006 Elsevier B.V. All rights reserved.

Comparative structural studies on Lys49-phospholipases A(2) from Bothrops genus reveal their myotoxic site

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Crystallization and preliminary X-ray diffraction analysis of a Lys49-PLA(2) homologue from Cerrophidion godmani venom.

Lys49-phospholipase A(2) (Lys49-PLA(2)) homologues damage membranes by a Ca2+-independent mechanism which does not involve catalytic activity. The myotoxic Lys-49 phospholipase myotoxin II from Cerrophidion (Bothrops) godmani has been crystallized, and X-ray diffraction data were collected to 2.8 Angstrom resolution. Preliminary analysis reveals the presence of one molecule in the asymmetric unit.

The Venomics of Bothrops alternatus is a Pool of Acidic Proteins with Predominant Hemorrhagic and Coagulopathic Activities

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Neo-clerodane diterpenoid, a new metalloprotease snake venom inhibitor from Baccharis trimera (Asteraceae): anti-proteolytic and anti-hemorrhagic properties

Many plants are used in traditional medicine as active agents against various effects induced by snakebite. Few attempts have been made however to identify the nature of plain natural products with anti-ophidian properties. Baccharis trimera (Less) DC (Asteraceae), known in Brazil as carqueja. has been popularly used to treat liver diseases. rheumatism. diabetes, as well as digestive, hepatic and renal disorders. The active component was identified as 7alpha-hydroxy-3,13-clerodadiene-16,15:18,19-diolide, C20H28O5, (clerodane diterpenoid, Bt-CD). We report now the anti-proteolytic and anti-hemorrhagic propenies against snake venoms of a Bt-CD inhibitor from B. trimera. Bt-CD exhibited full inhibition of hemorrhage and proteolytic activity caused by Bothrops snake venoms. The inhibitor was able to neutralize the hemorrhagic, fibrinogenolytic and caseinolytic activities of class P-I and III metalloproteases isolated from B. neuwiedi and B. jararacussu venoms. No inhibition of the coagulant activity was observed. Bt-CD also partially inhibited the edema induced by other crude venoms, metallopronteases, basic and acidic phospholipases A(2). To further elucidate the inhibitory specificity of Bt-CD against metalloproteases isolated from snake venoms, a deeper understanding of its Structure and function is necessary. Furthermore, the potential use of these inhibitors to complement anti-venom as an alternative treatment of snakebite envenomations needs to be evaluated in future Studies. (C) 2004 Elsevier B.V.. All rights reserved.

Understanding the in vitro neuromuscular activity of snake venom Lys49 phospholipase A(2) homologues

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Caracterização biofísica e estrutural da metaloproteinase não-hemorrágica do veneno de Bothrops moojeni e da endo-β-glicanase do Bacillus subtilis

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Efeito do extrato aquoso de Casearia sylvestris sobre a neutralização e regeneração da mionecrose induzida pelo veneno da Bothrops jaracussu em camundongos: estudo morfológico e funcional

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Purification and structural characterization of snake venom proteins

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Estudos estruturais com miotoxinas do tipo fosfolipases A2 homólogas do veneno de serpentes do gênero Bothrops: avanços no entendimento da relação estrutura-função

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Estudos estruturais experimentais e teóricos com proteínas do veneno da serpente Bothrops jararacussu

Pós-graduação em Ciências Biológicas (Genética) - IBB

Aspectos clínico-patológicos do envenenamento botrópico experimental em equinos

Estudou-se as alterações clínico-patológicas e laboratoriais em equinos, inoculados experimentalmente com a peçonha de Bothropoides jararaca, Bothrops jararacussu, Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi, com a finalidade de fornecer subsídios para o diagnóstico do envenenamento pela picada dessas. Os venenos liofilizados foram diluídos em 1ml de solução fisiológica e administrados a seis equinos, por via subcutânea, nas doses de 0,5 e 1mg/kg (B. jararaca), 0,8 e 1,6mg/kg (B. jararacussu), 0,205mg/kg (B. moojeni) e 1mg/kg (B. neuwiedi). Todos os equinos, menos os que receberam o veneno de B. jararacussu, morreram. Os sinais clínicos iniciaram-se entre 8min e 2h10min após a inoculação. O período de evolução variou, nos quatro casos de êxito letal, de 24h41min a 70h41min, e nos dois equinos que se recuperaram foi de 16 dias. O quadro clínico, independente do tipo de veneno e das doses, caracterizou-se por aumento de volume no local da inoculação, arrastar da pinça do membro inoculado no solo, inquietação, apatia, diminuição da resposta aos estímulos externos, mucosas pálidas e hemorragias. Os exames laboratoriais revelaram anemia normocítica normocrômica com progressiva diminuição no número de hemácias, da hemoglobina e do hematócrito, e leucocitose por neutrofilia. Houve aumento de alamina aminotransferase, creatinaquinase, dehidrogenase láctica, ureia e glicose, bem como aumento do tempo de ativação da protrombina e do tempo de tromboplastina parcial ativada. Os achados de necropsia foram extensas hemorragias no tecido subcutâneo, com presença de sangue não coagulado e em boa parte associadas a edema (edema hemorrágico), que se estendia desde o local da inoculação até as regiões cervical, torácica, escapular e membro. Na periferia das áreas hemorrágicas havia predominantemente edema gelatinoso. Havia ainda presença de grande quantidade de líquido sanguinolento nas cavidades torácica, pericárdica e abdominal. Não foram encontradas alterações histológicas significativas.

Aspectos clínico-patológicos e laboratoriais do envenenamento botrópico em equinos

Estudou-se as alterações clínico-patológicas e laboratoriais em equinos, inoculados experimentalmente com a peçonha de Bothropoides jararaca, Bothrops jararacussu, Bothrops moojeni e Bothropoides neuwiedi, com a finalidade de fornecer subsídios para o diagnóstico do envenenamento pela picada dessas. Os venenos liofilizados foram diluídos em 1ml de solução fisiológica e administrados a seis equinos, por via subcutânea, nas doses de 0,5 e 1mg/kg (B. jararaca), 0,8 e 1,6mg/kg (B. jararacussu), 0,205mg/kg (B. moojeni) e 1mg/kg (B. neuwiedi). Todos os equinos, menos os que receberam o veneno de B. jararacussu, morreram Os sinais clínicos iniciaram-se entre 8min e 2h10min após a inoculação. O período de evolução variou, nos quatro casos de êxito letal, de 24h41min a 70h41min, e nos dois equinos que se recuperaram foi de 16 dias. O quadro clínico, independente do tipo de veneno e das doses, caracterizou-se por aumento de volume no local da inoculação, arrastar da pinça do membro inoculado no solo, inquietação, apatia, diminuição da resposta aos estímulos externos, mucosas pálidas e hemorragias. Os exames laboratoriais revelaram anemia normocítica normocrômica com progressiva diminuição no número de hemácias, da hemoglobina e do hematócrito, e leucocitose por neutrofilia. Houve aumento de alamina aminotransferase, creatinaquinase, dehidrogenase láctica, ureia e glicose, bem como aumento do tempo de ativação da protrombina e do tempo de tromboplastina parcial ativada. Os achados de necropsia foram extensas hemorragias no tecido subcutâneo, com presença de sangue não coagulado e em boa parte associadas a edema (edema hemorrágico), que se estendia desde o local da inoculação até as regiões cervical, torácica, escapular e membro. Na periferia das áreas hemorrágicas havia predominantemente edema gelatinoso. Havia ainda presença de grande quantidade de líquido sanguinolento nas cavidades torácica, pericárdica e abdominal. Não foram encontradas alterações histológicas significativas.