水稻菠菜紫黄质脱环氧化酶基因的克隆遗传转化及其特性的研究

自发现叶黄素循环具有热耗散的作用后它被引起广泛的关注目前普遍认为叶黄素循环的色素定位于天线色素蛋白复合体上在跨膜质子梯度pH形成后玉米黄质Z和环氧玉米黄质A能够从叶绿素中吸收过多的激发能并以热能的形式耗散到体外从而保护光合器官免受强光的破坏紫黄质脱环氧化酶VDE是叶黄素循环的关键酶在较低的pH条件下它能在数分钟内将紫黄质V转变为Z和A本论文从水稻和菠菜中克隆了编码VDE酶的基因并通过转基因植物进一步研究了叶黄素循环在热耗散方面的作用主要获得了以下结果 首次从两个水稻亚种籼稻和粳稻中克隆了Rvde基因分别命名为iRvde和jRvde的全长cDNA序列分别长1647bp和1887bp两者开放阅读框的同源性为98%与其它已知vde基因的同源性在60以上推导两者均编码446个氨基酸其中转运肽序列长98个氨基酸两者成熟蛋白的氨基酸序列完全相同与已知VDE成熟蛋白的同源性在75%以上其中与小麦的同源性最高达87.4 通过PCR扩增获得了Rvde基因的核基因组DNA序列在它们的编码区中含有4个内含子其长度在jRvde中分别为105bp327bp81bp和69bp而iRvde基因的第2个内含子长425bp与jRvde的第2个内含子差别较大内含子的AT含量为6063%其两端为典型的GT/AG结构 构建了Rvde基因的原核表达载体pET-Rvde在0.4mmol/L IPTG的诱导下该基因能在大肠杆菌BL21(DE3)中大量表达SDS-PAGE和Western杂交表明表达蛋白的分子量约为 43 kDa随着IPTG诱导时间的延长蛋白量逐渐增加诱导4h后它占大肠杆菌总蛋白的25左右吸收光谱差值A502-540随反应的进行逐渐增大反应体系总色素的HPLC分析表明V逐渐降低而Z刚好相反说明表达的蛋白具有与活体VDE酶相同的功能能在体外将V转变为A和Z 从菠菜中克隆了Svde基因并构建了该基因的反义抑制植物表达载体pCB-antiSvde用根癌农杆菌介导法转化烟草获得了大量的转基因植株再生的愈伤组织经GUS染色后呈蓝色PCR扩增潮霉素抗性基因hpt和Svde基因结果显示在转基因植株T0和T1代中都分别扩增出1.0 kb和1.4 kb的目的片段而在未转化的对照植株中没有扩增转基因植株的T0代种子在潮霉素培养基上的萌发数与未萌发数的比值为3:1符合单基因的孟德尔分离规律从T1代转基因植株中筛选出抑制程度较强的一个株系A29Southern杂交结果表明外源Svde基因已整合到烟草的基因组中并且只有一个插入位点通过冻融法从该植株的类囊体中提取VDE酶其酶活性为3.2是对照植株的45.7表明VDE酶受到了抑制荧光动力学及HPLC测定结果显示强光处理后在转基因植株中Z和A的形成较少非光化学淬灭NPQ值较对照低Fv/Fm的下降较对照快表明转基因植株的热耗散能力下降进而说明叶黄素循环具有热耗散的功能 同时还建立了根癌农杆菌介导的水稻遗传转化体系并初步作了转化Svde基因的试验另外还建立了一种适合于筛选转基因植株的DNA微量提取法此方法操作快捷方便一个人在一天内能制备50多个样品100mg的植物鲜样平均可获得40µg的DNA提取的DNA可直接用于PCR反应酶切分析及Southern分析

What are the closest relatives of the hot-spring snakes (Colubridae, Thermophis), the relict species endemic to the Tibetan Plateau?

We conducted phylogenetic analyses to identify the closest related living relatives of the Xizang and Sichuan hot-spring snakes (T baileyi and T. zhaoermii) endemic to the Tibetan Plateau, using mitochondrial DNA sequences (cyt b, ND4) from eight specimen

牛胚胎在BRL/mTCM199和HECM-6/mTCM199培养体系中发育潜能的探讨

将受精卵置于下列两种培养体系中进行体外培养:(1)Buffalo rat liver细胞与改进的TCM199培养液共同培养系统(BRL/mTCM199);(2)半确定培养液两步培养系统[无血清的金黄地鼠培养液与改进的TCM199培养液(HECM-6/mTCM199]。结果表明:后者的囊胚率(50%)明显高于前者的囊胚率(41%,P<0.01)。表明牛胚胎早期分裂可在无蛋白培养条件下进行,并且在此培养条件下有良好的后续发育能力。这可能与两步培养体系中葡萄糖和氨基酸浓度不同有关。

中国西南部明纹花鼠三个亚种的分化

明纹花鼠是东南亚地区的特有种, 在中国有3 亚种(阿萨姆亚种、滇西亚种、滇南亚种) , 分布于 藏东南、云南西南部和南部。以往主要根据外部形态特征进行分类。为探讨3 亚种头骨性状的差异, 在测量15 个性状的基础上, 运用统计分析软件SPSS 1110 对其可测量性状进行多变量分析。结果及推测如下: ①明纹花 鼠3 个亚种的地位是确定的。②在头骨15 个性状中, 两两亚种之间具有显著差异的性状: 阿萨姆亚种与滇西亚 种有8 个(枕鼻长、吻宽、颧宽、眶间宽、后头宽、鼻骨宽、下齿列、下颌骨高) ; 阿萨姆亚种与滇西亚种有7 个(颅全长、枕鼻长、颧宽、眶间宽、后头宽、下颌高、下颌骨高) ; 滇西亚种与滇南亚种有4 个(吻宽、后头 宽、鼻骨宽、下颌高) 。③滇南亚种与滇西亚种之间的亲缘关系近于两者各自与阿萨姆亚种之间的亲缘关系。

三链DNA结构研究的新进展

该文详细总结了近年来三螺旋DNA的结构和应用研究方面的进展, 分析了各种因素(例如pH、抗衡离子、温度等)对三螺旋稳定性的影响, 并提出了一些在三螺旋DNA中富有挑战性的需进一步研究的问题。

Sequence context analysis of 8.2 million single nucleotide polymorphisms in the human genome

We analyzed n-mers (n=3-8) in the local environment of 8,249,446 human SNPs and compared their distribution with that in the genome reference sequences. The results revealed that the short sequences, which contained at least one CpG dinucleotide, occurred

武汉月湖和莲花湖表层沉积物中持久性有机物的污染状况

采用气-质联用技术分析了武汉汉阳月湖和莲花湖的4个表层沉积物样品中的有机污染物,探讨了两湖沉积物受持久性有机物污染的程度。月湖中共检测出124种有机物,其中属环境优先控制污染物和美国EPA筛选的内分泌干扰物19种;莲花湖中共检测出186种有机物,环境优先控制污染物和美国EPA筛选的内分泌干扰物34种。主要污染物包括:酞酸酯、酯类、酚类、杂环和苯及其衍生物等。污染物浓度顺序为L1>L2>Y2>Y1,莲花湖中有机物浓度明显高于月湖。两湖邻苯二甲酸酯的含量最高,占了污染物总量的96%～98%,邻苯二甲酸乙基己基