Kainic acid induces 14-3-3 zeta expression in distinct regions of rat brain

Areas of the limbic system of adult male Wistar rats were screened for kainic-acid-induced gene expression. Polymerase-chain-reactionbased differential display identified a 147-bp cDNA fragment, which represented an mRNA that was upregulated in the entorhinal cortex and hippocampus in the kainic-acid-treated animals. The sequence was 97.8% homologous to rat 14-3-3 zeta isoform mRNA. Detailed Northern analysis revealed increased mRNA levels in the entorhinal cortex I h after kainic acid exposure and continued elevation 24 h post-injection in both the entorhinal cortex and hippocampus. Western blot analyses confirmed that the protein product of this gene was also present in increased amounts over the same time period. Immunohistochemistry and terminal transferase-mediated dUTP nick end labelling (TUNEL) detected expression of 14-3-3 protein exclusively in the entorhinal cortex and hippocampus, and only in TUNEL-positive neuronal cells. Expression of the tumor suppressor protein, p53 was also induced by kainate injection, and was co-localized with 14-3-3 zeta protein in selected cells only in the affected brain regions. The increase gene expression of 14-3-3 represents a transcription-mediated response associated with region selective neuronal damage induced by kainic acid. (C) 2002 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

Cyclosporin A pretreatment in a rat model of warm ischaemia/reperfusion injury

Background/Aims: These studies investigated the role of apoptosis following ischaemia/reperfusion (I/R) injury to the liver and the effect of pretreatment with Cyclosporin A. Methods: Male Sprague-Dawley rats received 30 min of warm ischaemia followed by a period of reperfusion of 6 h. Rats were given olive oil or Cyclosporin A (30 mg/kg p.o.) the day before surgery. Neutrophil numbers were assessed in haematoxylin-eosin-stained sections of liver. In situ staining of sections using TdT-mediated dUTP-fluoreseein nick-end labelling was carried out to determine the extent of apoptosis, followed by electron microscopy. Semi-quantitative polymerase chain reaction (PCR) analysis of the transcript for Fas antigen was performed. Results and Conclusions: High levels of apoptosis were observed in I/R injury, which were greatly ameliorated in Cyclosporin A-pretreated groups. PCR analysis indicated a reduction in the level of expression of Fas transcript in Cyclosporin A-treated rats. Histological analysis showed a significant increase in the number of neutrophils infiltrating I/R-injured tissue (62 +/- 10.69, it = 16), which was markedly reduced by Cyclosporin A pretreatment (16 +/- 7, n = 6, P < 0.05). These results indicate a role of parenchymal apoptosis in the pathogenesis of I/R injury, which occurs in association with neutrophil infiltration, both of which can be significantly reduced by Cyclosporin A pretreatment. (C) 2002 European Association for the Study of the Liver. Published by Elsevier Science B.V. All rights reserved.

Distribution of two splice variants of the glutamate transporter GLT1 in the retinas of humans, monkeys, rabbits, rats, cats, and chickens

Antibodies have been generated against two carboxyl-terminal splice variants of the glutamate transporter GLT1, namely, the originally described version of GLT1 and GLT1-B, and labelling has been examined in multiple species, including chickens and humans. Although strong specific labelling was observed in each species, divergent patterns of expression were noted. Moreover, each antibody was sensitive to the phosphorylation state of the appropriate protein, because chemical removal of phosphates using alkaline phosphatase revealed a broader range of labelled elements in most cases. In general, GLT1-B was present in cone photoreceptors and in rod and cone bipolar cells in the retinas of rabbits, rats, and cats. In the cone-dominated retinas of chickens and in marmosets, GLT1-B was associated only with cone photoreceptors, whereas, in macaque and human retinas, GLT1-B was associated with bipolar cells and terminals of photoreceptors. In some species, such as cats, GLT-B was also present in horizontal cells. By contrast, GLT1 distribution varied. GLT1 was associated with amacrine cells in chickens, rats, cats, and rabbits and with bipolar cells in marmosets and macaques. In the rat retina, rod photoreceptor terminals also contained GLT1, but this was evident only in enzymatically dephosphorylated tissues. We conclude that the two variants of GLT1 are present in all species examined but are differentially distributed in a species-specific manner. Moreover, each cell type generally expresses only one splice variant of GLT1. J. Comp. Neurol. 445:1-12, 2002. (C) 2002 Wiley-Liss, Inc.

Distribution of two splice variants of the glutamate transporter GLT-1 in the developing rat retina

The distributions of a carboxyl terminal splice variant of the glutamate transporter GLT-1, referred to as GLT-1B, and the carboxyl terminus of the originally described variant of GLT-1, referred to hereafter as GLT-1alpha, were examined using specific antisera. GLT-1B was present in the retina at very early developmental stages. Labelling was demonstrable at embryonic day 14, and strong labelling was evident by embryonic day 18. Such labelling was initially restricted to populations of cone photoreceptors, the processes of which extended through the entire thickness of the retina and appeared to make contact with the retinal ganglion cells. During postnatal development the GLT-1B-positive photoreceptor processes retracted to form the outer plexiform layer, and around postnatal day 7, GLT-1B-immunoreactive bipolar cells appeared. The pattern of labelling of bipolar cell processes within the inner plexiform layer changed during postnatal development. Two strata of strongly immunoreactive terminals were initially evident in the inner plexiform layer, but by adulthood these two bands were no longer evident and labelling was restricted to the somata and processes (but not synaptic terminals) of the bipolar cells, as well as the somata, processes, and terminals of cone photoreceptors. By contrast, GLT-1alpha appeared late in postnatal development and was restricted mainly to a population of amacrine cells, although transient labelling was also associated with punctate elements in the outer plexiform layer, which may represent photoreceptor terminals, (C) 2002 Wiley-Liss, Inc.

Localization of the Epstein-Barr virus protein LMP 1 to exosomes

The Epstein-Barr virus latent membrane protein (LMP 1) functions as a constitutively active signalling molecule and associates in lipid rafts clustered with other signalling molecules. Using immunofluorescent confocal microscopy, LMP 1 was shown to have an heterogeneous distribution among individual cells which was not related to the cell cycle stage. LMP 1 was shown to localize to intracellular compartments in cells other than the plasma membrane, Co-labelling of cells with both an LIMP 1 antibody and an antibody to the Golgi protein GS15 revealed that the intracellular LMP 1 partly co-localized with the Golgi apparatus. Further confirmation of intracellular LMP 1 localization was obtained by immunoelectron microscopy with rabbit polyclonal LIMP 1 antibodies and cryosectioning. As well as being present in intracellular foci, LMP 1 co-localized in part with MHC-II and was present on exosomes derived from a lymphoblastoid cell line. Preparations of LMP 1 containing exosomes were shown to inhibit the proliferation of peripheral blood mononuclear cells, suggesting that LIMP 1 could be involved in immune regulation. This may be of particular relevance in EBV-associated tumours such as nasopharyngeal carcinoma and Hodgkin's disease, as LMP 1-containing exosomes may be taken up by infiltrating T-lymphocytes, where LMP 1 could exert an anti-proliferative effect, allowing the tumour cells to evade the immune system.

Revestimentos comestíveis na conservação pós-colheita de morangos cultivar Camarosa produzidos em sistema orgânico e convencional

As perdas pós-colheita de frutas promovem a elevação do custo dos produtos e diminuem a oferta ao consumidor. Suas principais causas estão na colheita, transporte e armazenamento inadequados. A aplicação de revestimentos comestíveis juntamente com a redução da temperatura de armazenamento constitui um dos métodos empregados para a conservação pós-colheita de produtos com vida útil curta, como frutas e hortaliças. O morango é um fruto consumido preferencialmente in natura. Desta forma, torna-se promissora a utilização de revestimento comestível para aumentar seu período de armazenamento e comercialização, sem alteração do sabor, da cor e do aroma dos frutos. A produção orgânica frente a convencional de frutos podem apresentar diferenças, sendo interessante o estudo envolvendo as formas de cultivo. Este estudo teve como objetivo avaliar a conservação pós-colheita de morangos cv. Camarosa, oriundos de cultivo orgânico e convencional revestidos com coberturas comestíveis. Os morangos foram revestidos com fécula de mandioca, gelatina e cera de carnaúba, armazenados durante 10 dias a 10 ºC. A cada 2 dias de armazenamento foram determinados perda de massa, sólidos solúveis, pH, acidez titulável, firmeza, antocianinas totais e podridão fúngica. Análise sensorial foi realizada para verificar a aceitação dos morangos e para avaliar a influência da informação nesta aceitação. A perda de massa foi maior no cultivo orgânico a partir do 8º dia de armazenamento, chegando a 11,47% contra 8,88% do cultivo convencional no final do 10º dia de armazenamento. O revestimento que possibilitou menor perda de massa foi o de cera de carnaúba em relação ao controle. A contaminação fúngica iniciou-se no 4º dia de armazenamento em ambos os tipos de cultivo. No 8º dia de armazenamento observou-se diferenças na podridão entre os tipos de cultivo, sendo o orgânico visualmente mais contaminado. O revestimento de cera de carnaúba apresentou menor podridão fúngica em relação aos outros revestimentos, porém não diferiu da amostra controle. Das variáveis físico-químicas avaliadas, apenas o teor de sólidos solúveis apresentou diferenças entre os tipos de cultivo, sendo o morango convencional o que obteve maiores valores. O teor de antocianinas dos morangos revestidos com fécula de mandioca diferiu do controle, porém o revestimento com fécula não diferiu dos revestidos com gelatina e cera de carnaúba. Foram verificadas diferenças na firmeza dos frutos em relação aos revestimentos. Ao longo do tempo foi observado diferenças no pH, teor de antocianinas e firmeza. O revestimento com cera de carnaúba se mostrou mais adequado em relação aos demais revestimentos, porém sua aparência mostrou-se com pouco brilho e esbranquiçado. Os frutos avaliados apresentaram vida útil pós-colheita de aproximadamente 6 dias. Os morangos, do ponto de vista microbiológico, se mostraram aptos para consumo. A aceitação dos morangos foi boa, não tendo ix diferenças significativas entre morango orgânico e convencional. O fornecimento da informação de “morango orgânico” e a apresentação de um texto adicional informativo não influenciaram na aceitação dos morangos. Entre os revestimentos testados o de cera de carnaúba se mostrou mais aplicável, os demais nas condições testadas não mostraram bons resultados.

Síntese, aplicação e avaliação da toxicidade aguda de complexo orgânico à base de európio proposto como marcador fotoluminescente para a Identificação de resíduos de tiro

Um complexo de alta fotoluminescência é proposto como marcador óptico para a identificação de resíduos de tiro (GSR). O marcador é o complexo [Eu(PIC)3(NMK)3], de fórmula molecular Eu(C6H2N3O7)3.(C7H13NO)3, que apresenta o íon Eu3+ e os ligantes ácido pícrico (PIC) e n-metil-Ɛ-caprolactama (NMK). Foi realizada a caracterização quimicamente através de espectroscopia de emissão, espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier (FTIR), termogravimetria e análise térmica diferencial (TG/DTA), e espectrometria de massas com ionização por eletrospray e ressonância ciclotrônica de íons por transformada de Fourier (ESI-FT-ICR MS), e, em seguida, foram adicionadas diferentes massas do complexo a munições convencionais (de 2 a 50 mg por cartucho). Após os tiros, o GSR marcado foi visualmente e quimicamente detectado por irradiação UV (ʎ = 395 nm) e ESI-FT-ICR MS, respectivamente. Os resultados mostraram uma fotoluminescência eficiente e duradoura, sendo facilmente visível sobre a superfície do alvo, no ambiente, no cartucho deflagrado, na arma de fogo, e sobre as mãos e braços do atirador quando utilizada massa a partir de 25 mg do marcador em cartuchos .38 e 50 mg em cartuchos .40. Sua toxicidade aguda também foi avaliada empregando-se o Protocolo 423 da Organização para a Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OECD) e apresentou DL50 de 1000 mg.kg-1, sendo classificado como de categoria 4 na escala do Sistema Globalmente Harmonizado de Classificação e Rotulagem de Produtos Químicos (GHS), considerado, portanto, de média toxicidade. O composto mostrou ser menos tóxico do que os componentes inorgânicos de munições convencionais (em especial o Pb), justificando o seu emprego como marcador de GSR.

Utilidade do PET/CT na caracterização do nódulo solitário pulmonar

Introdução – O cancro de pulmão/traqueia e brônquios é a principal causa de morte por neoplasia na União Europeia. A técnica de duas aquisições de imagem em tempos diferentes no Positron Emission Tomography/Computed Tomography (PET/CT) tem sido referenciada em alguns artigos como uma mais-valia no diagnóstico do cancro do pulmão. O objectivo deste estudo consiste em avaliar a eficiência diagnóstica do PET/CT com a aquisição das duas imagens em tempos diferentes na caracterização do nódulo solitário pulmonar (NSP), tendo em conta a histologia e o tamanho do nódulo. Metodologia – Foram analisados 115 NSP, num total de 110 pacientes, dos quais 65 nódulos eram malignos. Adquiriram-se duas imagens, a primeira a um tempo médio de 52 minutos e a segunda a um tempo médio de 125 minutos após administração do 18F-2-fluoro-2-deoxi-D-glucose (18F-FDG). Para a análise das imagens obteve-se o standard uptake value máximo (SUVmax) e a percentagem de variação dos SUVmax (%variação). Resultados – A %variação apresenta valores de eficiência diagnóstica superiores à análise dos SUVmax em separado. Existem também diferenças significativas na histologia e no SUVmax, registando-se um aumento do SUVmax2 comparativamente ao SUVmax1 nas patologias malignas. Conclusão – A técnica da aquisição de duas imagens em tempos diferentes mostrou ser mais eficaz na caracterização do NSP do que a análise de apenas uma imagem.

Deportação e criminalidade nos Açores

Dissertação de Mestrado em Ciências Sociais.

Relatório de estágio de natureza profissional em PET/CT: Clinical Imaging Sciences Centre, Sussex

Mestrado em Medicina Nuclear - Ramo de especialização: Tomografia por Emissão de Positrões

Avaliação da viabilidade miocárdica pós-enfarte: Gated-SPECT versus Gated-PET

Mestrado em Medicina Nuclear - Ramo de especialização: Tomografia por Emissão de Positrões

PET/TC no planeamento em radioterapia

A delimitação precisa é crucial na RT. TC: informação anatómica, pobre na definição do envolvimento ganglionar; alguns tumores são praticamente invisíveis (p.e., esófago, fígado, baço e glândulas salivares), mapa de densidades electrónicas essencial para o cálculo. 18F-FDG PET: 1) mapeamento metabólico que permite alterar volumes alvo: BTV, elimina incertezas no GTV; 2) vantagens: estadiamento tumoral, predição da resposta tumoral, avaliação da resposta tumoral, detecção precoce da doença recorrente. PET/TC: maior precisão, menor variabilidade inter e intra-observador, menor erro no reposicionamento, adaptação à RT, ainda em Investigação Clínica.

PET/CT com 18-fluor-fluorodeoxiglucose no seguimento do melanoma maligno cutâneo

Introdução – O melanoma maligno cutâneo (MMC) é considerado uma das mais letais neoplasias e no seu seguimento recorre-se, para além dos exames clínicos e da análise de marcadores tumorais, a diversos métodos imagiológicos, como é o exame Tomografia por Emissão de Positrões/Tomografia Computorizada (PET/CT, do acrónimo inglês Positron Emission Tomography/Computed Tomography) com 18fluor-fluorodeoxiglucose (18F-FDG). O presente estudo tem como objetivo avaliar a utilidade da PET/CT relativamente à análise da extensão e à suspeita de recidiva do MMC, comparando os achados imagiológicos com os descritos em estudos CT. Metodologia – Estudo retrospetivo de 62 estudos PET/CT realizados em 50 pacientes diagnosticados com MMC. Excluiu-se um estudo cujo resultado era duvidoso (nódulo pulmonar). As informações relativas aos resultados dos estudos anatomopatológicos e dos exames imagiológicos foram obtidas através da história clínica e dos relatórios médicos dos estudos CT e PET/CT. Foi criada uma base de dados com os dados recolhidos através do software Excel e foi efetuada uma análise estatística descritiva. Resultados – Dos estudos PET/CT analisados, 31 foram considerados verdadeiros positivos (VP), 28 verdadeiros negativos (VN), um falso positivo (FP) e um falso negativo (FN). A sensibilidade, especificidade, o valor preditivo positivo (VPP), o valor preditivo negativo (VPN) e a exatidão da PET/CT para o estadiamento e avaliação de suspeita de recidiva no MMC são, respetivamente, 96,9%, 96,6%, 96,9%, 96,6% e 96,7%. Dos resultados da CT considerados na análise estatística, 14 corresponderam a VP, 12 a VN, três a FP e cinco a FN. A sensibilidade, especificidade, o VPP e o VPN e a exatidão da CT para o estadiamento e avaliação de suspeita de recidiva no MMC são, respetivamente, 73,7%, 80,0%, 82,4%, 70,6% e 76,5%. Comparativamente aos resultados CT, a PET/CT permitiu uma mudança na atitude terapêutica em 23% dos estudos. Conclusão – A PET/CT é um exame útil na avaliação do MMC, caracterizando-se por uma maior acuidade diagnóstica no estadiamento e na avaliação de suspeita de recidiva do MMC comparativamente à CT isoladamente.

A new approach to assess defragmentation strategies in dynamically reconfigurable FPGAs

Fragmentation on dynamically reconfigurable FPGAs is a major obstacle to the efficient management of the logic space in reconfigurable systems. When resource allocation decisions have to be made at run-time a rearrangement may be necessary to release enough contiguous resources to implement incoming functions. The feasibility of run-time relocation depends on the processing time required to set up rearrangements. Moreover, the performance of the relocated functions should not be affected by this process or otherwise the whole system performance, and even its operation, may be at risk. Relocation should take into account not only specific functional issues, but also the FPGA architecture, since these two aspects are normally intertwined. A simple and fast method to assess performance degradation of a function during relocation and to speed up the defragmentation process, based on previous function labelling and on the application of the Euclidian distance concept, is proposed in this paper.

Relatório de estágio

Resumo I (Prática Pedagógica) - O Estágio do Ensino Especializado realizado no presente ano lectivo foi elaborado na Academia de Música de Lisboa em três turmas. Vários foram os desafios encontrados no decorrer do ano lectivo, como por exemplo a instabilidade das turmas, a falta do quadro na sala em algumas aulas e a pouca experiência anterior na área de docência. A realização deste estágio permitiu experimentar actividades e estratégias aprendidas nas disciplinas do mestrado e estimulou uma atitude de reflexão regular sobre as escolhas pedagógicas elaboradas e sobre a resposta dos alunos. Também o feedback dos professores da Unidade Curricular de Didáctica do Ensino Especializado foi essencial na consciencialização de aspectos que teriam que ser mudados na minha abordagem do ensino: fazer actividades mais formativas e menos avaliativas, dar mais feedback, não avançar para outro nível enquanto uma tarefa ainda não estiver consolidada, não modificar as instruções tão rapidamente, ter cuidado com a apresentação visual das células rítmicas e pensar em soluções para quando os alunos estão cansados. Foi também importante reflectir sobre os planos de aula realizados ao longo do ano e sobre o que não seria realizado da mesma forma, nomeadamente na introdução de células rítmicas, introdução de funções harmónicas e cadências. Durante este ano foi feito um esforço para melhorar estes aspectos, no entanto ainda não foi possível implementar todas as mudanças. De qualquer modo, esta reflexão é um bom ponto de partida para o planeamento do próximo ano e um exemplo da atitude que deve acompanhar-me durante toda a minha actividade enquanto docente.